膀胱尿路上皮癌中PTEN表达与其基因甲基化的关系

探讨膀胱尿路上皮癌（BUCC）中第10号染色体同源丢失性磷酸酶-张力蛋白基因（ PTEN）表达与其基因启动子甲基化的关系。方法应用Western blot、甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）,检测41 例BUCC和18 例正常膀胱组织中PTEN蛋白的表达水平及其基因启动子甲基化状态,并分析两者的相关性。结果BUCC 中PTEN 蛋白表达低于正常膀胱组织（p <0.05）,而BUCC 中基因启动子甲基化率为53.66%（22/41）,高于正常膀胱组织的0.00%（0/18）（ p<0.05）;与甲基化阴性组的BUCC 组织相比,22 例甲基化阳性 组的PTEN 表达水平降低（ p<0.05）。结论BUCC 中PTEN 蛋白的表达水平下调,这与其基因启动子高甲基化密切相关。     

膀胱移行细胞癌中PTEN基因启动子甲基化及其表达的研究

目的 检测膀胱移行细胞癌中PTEN基因启动子甲基化状态及其蛋白表达水平,并探讨它们与该肿瘤临床及病理特征的关系.方法 应用免疫组织化学(S-P)法检测PTEN蛋白的表达,甲基化特异性PCK(MSP)法检测PTEN基因启动子的甲基化状态.结果 PTEN蛋白在膀胱癌组织和正常膀胱组织中的阳性表达率分别是54.0%(27/50)和100.0%(10/10),两组间差异有显著性(P＜0.01),且其表达水平在不同病理分级、临床分期间差异也存在显著性(P＜0.01);在膀胱癌组织中PTEN基因启动子甲基化率为14.0%(7/50),而在正常膀胱组织中未检测到其启动子的甲基化(0/10),两组间差异有显著性(P＜0.05),且PTEN基因启动子甲基化与其蛋白表达水平呈负相关(P＜0.05).结论 PTEN基因启动子的甲基化可导致基因的沉默,是PTEN蛋白表达缺失的重要原因.PTEN基因启动子甲基化及其蛋白的表达缺失可能在膀胱移行细胞癌的发生及进展过程中起着重要作用,并对该肿瘤的生物学行为产生较大影响.     

膀胱尿路上皮癌及尿沉淀细胞P16基因甲基化检测

目的探讨膀胱尿路上皮癌组织及尿沉淀细胞中P16基因启动子的甲基化状况及其临床意义。方法采用甲基化特异性PCR（methylation specific PCR,MSP）的方法检测55例膀胱癌组织及尿沉淀细胞P16基因启动子异常甲基化频率。分析其甲基化程度与膀胱尿路上皮癌临床病理参数之间的关系。结果膀胱尿路上皮癌组织及尿沉淀细胞P16基因甲基化阳性率分别为27.3%（15/55）和21.8%（12/55）;癌组织及尿沉淀细胞P16基因甲基化阳性率差异无统计学意义（P〉0.05）。浸润性和浅表性膀胱尿路上皮癌组织及尿沉淀细胞P16基因甲基化阳性率的差异有统计学意义（P〈0.05）。P16基因甲基化在不同病理分级和不同性别间其差异无统计学意义（P〉0.05）。结论 P16基因甲基化是膀胱尿路上皮癌发生的早期事件,与膀胱尿路上皮癌的浸润性发展相关。尿沉淀细胞P16基因启动子异常甲基化状态可作为无创性诊断膀胱尿路上皮癌并且判断其预后的分子标志物。     

膀胱移行细胞癌DBCCR1基因启动子甲基化分析

目的探讨膀胱移行细胞癌DBCCR1基因启动子甲基化状态及其临床意义。方法应用甲基化特异性PCR方法检测40例膀胱移行细胞癌和8例正常膀胱粘膜组织中DBCCRI基因甲基化程度,x^2检验分析其甲基化程度与膀胱癌病理分级分期之间的关系。结果正常膀胱组织未检测到DBCCR1基因启动子甲基化,在膀胱移行细胞癌启动子甲基化扩增阳性化率达42．5％,与膀胱癌病理分级分期没有相关性（P〉0．05）。结论DBCCR1基因启动子异常高甲基化是其失活的主要机制之一,也是膀胱移行细胞癌中一早期事件。     

膀胱移行细胞癌中金属蛋白酶组织抑制因子3 的表达及其启动子甲基化的研究

目的检测膀胱移行细胞癌中金属蛋白酶组织抑制因子3(TIMP-3)启动子甲基化及其蛋白表达,探讨TIMP-3在该肿瘤中的作用及临床意义。方法采用免疫组化SP法和高清晰度彩色医学图文分析系统对38例膀胱移行细胞癌和10例正常膀胱黏膜中TIMP-3的表达进行检测分析,用甲基化特异的PCR(MSP)法检测TIMP-3基因启动子的甲基化状态。结果TIMP-3在膀胱癌中呈高表达,且与分级呈正相关,但不与分期相关,其启动子甲基化发生率为5.3%(2/38)。结论TIMP-3参与膀胱癌侵袭转移,其启动子甲基化发生率不高,检测其表达水平对膀胱移行细胞癌预后判断具有一定的参考价值。     

抗菌肽LL-37 与膀胱尿路上皮癌关系的初步探讨

目的 检测抗菌肽LL-37 在膀胱尿路上皮癌中的表达,同时体外研究LL-37 对膀胱肿瘤细胞株T24、EJ 的作用。方法 ELISA 检测30 例膀胱尿路上皮癌患者和30 例健康体检者新鲜晨尿中LL-37 的表达,同时检测T24、EJ 细胞和尿路上皮SV-HUC-1 细胞经不同浓度LPS 刺激后细胞培养液上清中LL-37水平。免疫组织化学和逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）分别检测30 例膀胱癌患者的肿瘤组织标本、肿瘤基底及周围组织标本中LL-37 的表达。在体外将不同浓度的LL-37 作用于T24、EJ 和SV-HUC-1 细胞,MTT 检测细胞的增殖。结果 健康体检者和膀胱癌患者尿液中LL-37 的水平分别为（2.02±0.06）和（24.32±0.02）ng/ml,差异有统计学意义（P <0.05）。免疫组织化学结果显示,LL-37 在癌组织中表达阴性,而在癌组织周围的炎症细胞、血管壁及平滑肌内却呈阳性表达。RT-PCR 结果表明,癌周围组织中LL-37的表达水平比癌组织高约30 倍。T24、EJ 和SV-HUC-1 细胞经LPS 刺激后培养液上清中LL-37 浓度均升高。在体外,LL-37 呈剂量依赖性地抑制T24、EJ 细胞的增殖,而其对SV-HUC-1 细胞的抑制需更高的浓度。结论 LL-37 与膀胱癌的发生可能有着一定的关联,体外高浓度的LL-37 可抑制膀胱癌T24、EJ 细胞的生长。     

荧光定量PCR检测膀胱癌患者尿沉淀细胞TWIST1基因启动子甲基化状态的临床价值

目的:评估尿沉淀细胞TWIST1基因启动子甲基化状态在膀胱癌诊断中的价值?方法:用实时荧光定量PCR的方法,对50例临床确诊的膀胱癌患者?13例非肿瘤性尿路疾病患者?7例健康志愿者检测了尿沉淀细胞TWIST1基因启动子的甲基化状态;同时行尿脱落细胞学检查?结果:50例膀胱癌患者中尿脱落细胞TWIST1基因启动子甲基化阳性率为64.0%(32/50),对照组均未发现甲基化改变,两者比较差异有统计学意义(P < 0.01)?TWIST1基因启动子甲基化率有随组织分期升高的趋势,但在不同分级?分期膀胱癌中的差异无显著性?实时荧光定量PCR法检测尿液中TWIST1基因启动子甲基化的敏感性和特异性分别为64.0%?100.0%?而尿脱落细胞学检查阳性率为48.0%(24/50),其敏感性和特异性分别为48.0%和100.0%?结论:尿脱落细胞TWIST1基因启动子的甲基化检测诊断膀胱癌敏感性和特异性均较高,且无创?无痛苦,可作为早期诊断膀胱癌的敏感指标?     

宫颈癌及宫颈上皮内瘤变MGMT基因甲基化及其相关性研究

目的：探讨宫颈癌和宫颈上皮内瘤变（CIN）患者宫颈脱落细胞中O6-甲基鸟嘌呤- DNA甲基转移酶（MGMT）基因启动子区甲基化状态在宫颈癌临床早期诊断和筛查中的作用。方法选取对照组20例,CINI、CINII、CINIII期患者各50例和宫颈癌患者50例,采用甲基化特异性PCR检测宫颈脱落细胞中MGMT基因启动子区甲基化状态并进行比较。结果宫颈癌和CINI、II、III期患者MGMT基因启动子区甲基化阳性率分别为82.0%（41/50）、24.0%（12/50）、50.0%（25/50）和80.0%（40/50）,而对照组未检测到MGMT基因启动子区甲基化。与对照组比,宫颈癌组和CINI、II、III期组MGMT基因启动子区甲基化阳性率的差异均有统计学意义（均P＜0.05）。宫颈癌组中MGMT基因启动子甲基化与其临床分期及组织分化程度有显著相关性（均P＜0.05）。结论 MGMT基因启动子区甲基化可能参与宫颈癌的发生、发展,有助于宫颈癌的早期辅助诊断和筛查。     

可溶性E钙蛋白与膀胱尿路上皮癌的相关性

目的 检测膀胱尿路上皮癌组织中E钙蛋白(E-cadherin)的表达和尿液中可溶性E钙蛋白(sE-cadherin)的浓度,明确E-cadherin、sE-cadherin与膀胱尿路上皮癌临床病理特征的关系.方法 采用免疫组织化学法检测45例膀胱尿路上皮癌组织和16例正常膀胱组织中E-cadherin的表达,于术前取膀胱尿路上皮癌患者尿液样本及12例正常人尿液样本采用ELISA法检测sE-cadherin浓度,结合临床资料进行统计分析.结果 ①45例膀胱尿路上皮癌组织中20例E-cadherin阳性表达(44.4％),膀胱尿路上皮癌G1组与G2～G3组E-cadherin阳性表达率分别为57.7％和26.3％,在Tis～T1组和T2～T4组分别为55.2％和25.0％,表达差异均有统计学意义(P＜0.05);②45例膀胱尿路上皮癌患者尿液中sE-cadherin浓度明显高于正常人组[(8.243±1.682)mg/molCr vs(1.628±0.462)mg/molCr](P＜0.05),且与肿瘤的病理分级、临床分期密切相关.结论 膀胱尿路上皮癌组织中E-cadherin的表达和尿液中sE-cadherin的浓度与膀胱尿路上皮癌临床病理特征有显著相关.     

Relationship between the Expression of RASSF1A Protein and Promoter Hypermethylation of RASSF1A Gene in Bladder Tumor

To investigate the relationship between the expression of RASSF1A protein and promoter hypermethylation of RASSF1A gene, RASSF1A protein expression was measured by Western blotting in 10 specimens of normal bladder tissues and 23 specimens of bladder transitional cell carcinoma （BTCC）. The promoter methylation in BTCC and normal bladder tissues was detected by methylation-specific PCR （MSP）. The results showed that the expression level of RASSF1A protein was significantly lower in BTCC tissues than that in normal bladder tissues. However, it was not correlated with its clinical stages and pathological grades. The frequency of promoter methylation of RASSF1A gene was higher in BTCC tissues than that in normal bladder tissues. In 14 patients with the aberrant promoter methylation, 13 showed loss or low expression of RASSF 1A protein. It is concluded that RASSF1A gene promoter methylation may contribute to the low level or loss of RASSF1A protein expression, the inactivation of RASSF1A gene and the genesis of BTCC. But, it may bear no correlation with its clinical stages and pathological grades.     

cyclinD1甲基化程度降低与大肠癌的关系

目的探讨cyclinD1基因启动子区甲基化改变在大肠癌发生发展过程中的作用及意义。方法采用MSP法检测大肠癌标本中cyclinD1的甲基化状态,并与大肠癌病理学特征比较。结果在大肠癌发生发展过程中,cyclinD1甲基化率呈逐渐下降趋势,其在癌旁、腺瘤、癌组织中的甲基化率与切缘上皮相比均有显著性差异(P<0.01)。在各病变阶段cyclinD1甲基化程度与其蛋白表达呈明显负相关。癌组织中cyclinD1甲基化率还与肿瘤的分化程度、浸润深度及淋巴结转移密切相关(P<0.01)。结论cyclinD1甲基化程度降低致cyclinD1过表达在大肠癌的发生发展中可能起重要作用,其在大肠癌的早期诊断和恶性程度及预后判断上可能是一个有用的分子指标。     

膀胱癌中eya4基因启动子区甲基化状态及其临床意义

目的 探讨膀胱癌细胞系和膀胱移行细胞癌组织中EYA转录共激活磷酸酶4(eya4)基因启动子区CpG岛甲基化状态及在临床病理特征中的意义.方法 应用甲基化特异性聚合酶链反应(MSP)检测eya4基因在5株膀胱癌细胞系、1株膀胱永生化上皮细胞系和75例膀胱移行细胞癌组织及癌旁组织,并结合临床病理特征行统计学分析.结果 eya4基因启动子区在5株膀胱癌细胞系中,有4株出现甲基化,其甲基化率为80%;在人正常膀胱细胞系中甲基化阴性.eya4在膀胱癌组织中的甲基化率为70.7%(53/75),显著高于癌旁组织(24%,18/75),差异有统计学意义(x2=32.760,P<0.01).eya4基因启动子区CpG岛甲基化在临床病理特征中如单发膀胱肿瘤与多发膀胱肿瘤相比,直径≤3 cm的膀胱肿瘤与＞3 cm的膀胱肿瘤相比,低级别膀胱肿瘤与高级别膀胱肿瘤相比,浅表性膀胱肿瘤与浸润性膀胱肿瘤相比,差异均有统计学意义(P<0.05),但与年龄和性别无关.结论 基因eya4启动子区甲基化与膀胱癌的发生发展有关,可能作为膀胱移行细胞癌诊断的一个新的标志物.     

OPN及VEGF在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的 研究骨桥蛋白(OPN)及血管内皮生长因子(VEGF)在膀胱尿路上皮癌(简称膀胱癌)组织中的表达,探讨其相互关系及临床病理意义.方法 采用免疫组织化学方法检测OPN及VEGF蛋白在61例膀胱癌和11例膀胱正常黏膜中的表达.结果 膀胱癌组织中OPN蛋白阳性率为59.0％,显著高于膀胱正常黏膜组织(18.2％)(P＜0.05).VEGF在膀胱癌组织中蛋白阳性率为65.6％,显著高于膀胱正常黏膜组织(9.1％)(P＜0.05).结论 OPN蛋白表达增高与膀胱癌的临床分期及复发密切相关,并与VEGF相关.联合检测OPN和VEGF有助于膀胱癌的侵袭转移能力的评估,并可判断膀胱癌生物学行为.     

Livin和MDR1在膀胱尿路上皮癌中的表达及临床意义

目的 探讨Livin基因与MDR1基因在膀胱尿路上皮癌中的表达及两者的相关性.方法 应用Western blot法检测65例膀胱尿路上皮癌及20例正常膀胱组织中Livin基因与MDR1基因的表达.结果 Livin基因和MDK1基因在初发膀胱尿路上皮癌患者与复发膀胱尿路上皮癌患者中的表达均差异有显著性(P<0.05),Livin的表达与MDR1的表达具有正相关性.结论 Livin基因的表达与MDR1基因的表达可能具有协同耐药作用,Livin和MDR1可以作为检测肿瘤多药耐药的联合指标.     

大肠癌组织MALmRNA、蛋白表达及其启动子甲基化状态研究

目的探讨MAL基因对大肠癌筛查及早期诊断的价值。方法选取10例正常大肠组织作为对照,应用RT-PCR、甲基化特异性PCR、Westernblot方法分别检测并比较大肠癌组织（40例）及相应癌旁组织（40例）中MALmRNA、蛋白的表达情况以及MAL基因启动子甲基化状态。结果大肠癌组织中MALmRNA、蛋白的表达阳性率（10.0%、20.0%）均低于其在癌旁组织（75.0%、85.0%）和正常大肠组织（100.0%、100.0%）中的表达阳性率（均P＜0.05）,而大肠癌组织中MAL基因启动子甲基化率（90.0%）均高于其在癌旁组织（40.0%）和正常大肠组织（0.0%）中的甲基化率（均P＜0.05）。结论大肠癌组织中MAL基因或可作为大肠癌筛查及早期诊断的高潜力分子标志物。     

性激素结合球蛋白在膀胱尿路上皮癌中的表达及意义

目的 探讨性激素结合球蛋白( SHBG)在膀胱尿路上皮癌(UC)中的表达及意义.方法 采用免疫组织化学EnVision法检测SHBG在121例膀胱UC中的表达,分析SHBG表达与临床病理特征间的关系.结果 121例UC中,SHBG阳性57例(47.1％).低级别UC 87例,其中50例阳性(57.5％),高级别UC 34例,其中7例阳性(20.6％),差异具有显著性(x2=13.347,P=0.000),20例伴有淋巴结转移患者中5例SHBG阳性( 25.0％),其阳性率显著低于不伴有淋巴结转移者(x2=4.700,P=0.030),其他临床病理特征比较差异无显著性.结论 SHBG表达缺失可能与膀胱UC的进展相关.     

性激素结合球蛋白的表达与膀胱尿路上皮癌发病率的相关性

目的探讨性激素结合球蛋白（SHBG）在膀胱尿路上皮癌（UC）中的表达及意义。方法采用免疫组织化学EnVision法检测SHBG在121例膀胱UC中的表达,分析SHBG表达与临床病理特征间的关系。结果 121例UC中,SHBG阳性57例（47.11%）。低级别UC 87例,其中50例SHBG阳性（57.47%）;高级别UC 34例,其中7例SHBG阳性（20.59%）,差异有统计学意义（χ2=13.347,P=0.000）,20例伴有淋巴结转移患者中5例SHBG阳性（25.00%）,其阳性率显著低于不伴有淋巴结转移者（χ2=4.700,P=0.030）,其他临床病理特征比较差异无统计学意义。结论 SHBG在膀胱UC中阳性率较高,可能是重要的肿瘤增殖负调控因子。