瘦素对大鼠肝细胞瘦素受体蛋白、基因表达及酪氨酸磷酸化的影响

目的观察瘦素对大鼠肝细胞瘦素受体蛋白、基因表达及酪氨酸磷酸化的影响。方法分离、培养新生Sprague-Dawley大鼠肝脏细胞,与瘦素共同孵育12 h、24 h及36 h,提取蛋白后用Western blot法检测瘦素受体的蛋白水平的变化,用RT-PCR法检测大鼠肝细胞瘦素受体的mRNA水平,用免疫共沉淀法检测瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度。结果大鼠肝细胞的瘦素受体的蛋白水平在与瘦素共同孵育12 h、24 h和36 h后与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05)。大鼠肝细胞瘦素受体的mRNA表达在孵育12 h后与对照组相比差异无统计学意义(P>0.05),孵育24 h及36 h后,与对照组及孵育12 h时相比,mRNA水平明显升高,差异有统计学意义(P<0.05)。经瘦素作用12 h后,对大鼠肝脏细胞瘦素受体酪氨酸磷酸化无显著影响(P>0.05),但孵育24 h及36 h后,大鼠肝脏细胞瘦素受体的酪氨酸磷酸化程度与对照组及瘦素作用12 h后相比均显著升高,差异有统计学意义(P<0.05)。结论瘦素可促进大鼠肝细胞瘦素受体的mRNA表达并增强其酪氨酸磷酸化程度。     

含短胞内段的SD大鼠全长瘦素受体的cDNA克隆

肥胖是现代社会的常见病 ,是胰岛素抵抗综合症的组成部分 ,它的分子发病机制多年来一直不清楚 ,1994年瘦素基因 (ＯＢ基因 )和 1995年瘦素受体基因 (ＯＢＲ基因 )的克隆成功[1,2 ] ,使肥胖症的分子发病机制研究进入了新的时代。目前已知瘦素是由脂肪细胞分泌 ,具有降低食欲、增     

保肝宁对肝纤维化大鼠瘦素及瘦素受体的影响

目的 探讨保肝宁抗肝纤维化的作用机制.方法 采用复合因素建立肝纤维化大鼠模型,采用同位素放射免疫分析法检测血清瘦素水平.用免疫组化方法观察保肝宁对肝纤维化大鼠肝组织瘦素、瘦素受体表达的影响.结果 与正常组比较,模型组及各药物组血清瘦素水平均明显升高(P＜0.01).与模型组比较,保肝宁药物组血清瘦素水平明显下降,差异有显著性意义(P＜0.01),保肝宁明显抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达.与模型组比较,差异有显著性意义(P＜0.01).结论 保肝宁可有效防治大鼠肝纤维化,其作用机制可能与通过降低血清瘦素水平,抑制模型大鼠肝组织瘦素、瘦素受体的表达密切相关.     

IN-1重组单链抗体表达载体的构建与融合表达

目的：设计并人工合成IN-1重组单链抗体（recombinant IN-1 single-chain antibody）的cDNA克隆，构建其表达载体，在原核系统中实现初步表达。方法：根据gene bank中发表的IN-1抗体的轻链重链序列，重新设计适于在大肠杆菌中表达的基因片段，该基因双链分35个小片段合成，经退火、复性连接成目的片段后，克隆到克隆载体pUC-18中，经全自动序列分析仪测序证实后，再亚克隆至表达载体pET-28a（ ），转化大肠杆菌BL21，诱导表达。结果：测序结果合成的基因序列与设计的仅差一个碱基；SDS-PAGE检测显示，表达出相对分子量31kd的融合蛋白。结论：IN-1重组单链抗体基因表达载体的构建和表达，为深入研究其生物活性奠定了基础。     

小鼠血管内皮生长因子受体2胞外片段重组蛋白的制备及其初步应用

目的 :用基因工程方法获得小鼠VEGFR - 2 (Flk - 1)胞外段与配体结合区域的重组蛋白 ,并对其应用进行初步的探讨。方法 :将经PT -PCR扩增的目的序列组建到原核表达载体并诱导目的蛋白的表达 ,经纯化后的重组蛋白制备成疫苗 ,免疫兔 ,获得抗血清 ,用ELISA和Westernblot方法对抗血清进行分析。结果 :目的蛋白在原核表达系统中得到了高效的表达 ,该疫苗能刺激兔产生抗重组蛋白和天然Flk - 1的抗体。结论 :该抗血清可用于Flk - 1的免疫学检测 ,也为该疫苗用于抗肿瘤血管生成治疗奠定了基础。     

GRα-GST融合表达载体的构建及重组蛋白的表达

[目的]构建GRα-GST融合表达载体并获得重组蛋白,以期为筛选类糖皮质激素样中药提供工具.[方法]运用RT-PCR扩增得到包含CDS的GRα基因序列后,经T-A克隆插入PMD-18载体.以此重组载体为模板扩增含有BamH I与Xho I酶切位点的GRαORF,插入pGEX-4T-1载体后形成了重组载体,并使其在大肠杆菌BL21中经IPTG诱导表达融合蛋白,再用SDS-PAGE检测融合蛋白的表达.[结果]成功的将GRα-全基因构建入原核表达载体pGEX-4T-1中.测序结果表明载体构建成功,无插入和移码突变.经IPTG诱导后获得与预测大小(112kDa)完全一致的目的蛋白即GRα-GST融合蛋白.[结论]成功获得了含重组载体的大肠杆菌,并在IPTG诱导下较好的表达,得到了GRα-GST融合蛋白.     

重组瘦素对早期糖尿病大鼠视网膜氧化应激的影响

目的 探讨重组瘦素对早期高血糖诱导的大鼠视网膜氧化损伤的影响.方法腹腔注射STZ建立糖尿病大鼠模型,腹腔注射重组瘦素干预治疗5 d.ELISA法检测血浆瘦素水平.于2、4、8 w处死动物检测糖尿病大鼠视网膜组织GSH,MDA含量.结果 重组瘦素治疗后实验组动物体重,血糖无明显变化.ELISA法检测血浆瘦素发现糖尿病非治疗组瘦素明显降低.经瘦素治疗后瘦素水平无明显变化.糖尿病大鼠模型视网膜GSH降低和MDA含量升高.给予瘦素治疗GSH水平升高,MDA水平下降,统计学有显著性差异(P＜0.05).结论 重组瘦素能够通过抗氧化应激途径对早期糖尿病造成的视网膜病变起到保护作用.     

游离脂肪酸对大鼠骨骼肌细胞瘦素受体基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化的影响

目的　探讨游离脂肪酸是否会对大鼠骨骼肌细胞L eptin受体的基因、蛋白表达及酪氨酸磷酸化产生一定的影响 ,进而导致胰岛素抵抗及葡萄糖代谢的异常 .方法　分离、培养新生 Sprague- Dawley大鼠骨骼肌细胞 ,分别与软脂酸(0 .2 5 m mol· L- 1 )或油酸 (0 .12 5 mmol· L- 1 )孵育 12 ,2 4和36 h,提取蛋白后用 Western印迹法检测 L eptin受体的蛋白水平 .用 RT- PCR检测胰岛细胞内 L eptin受体 RNA含量的变化 .应用免疫沉淀法检测 L eptin受体的酪氨酸磷酸化程度 .结果　软脂酸和油酸孵育后大鼠骨骼肌细胞 L eptin受体的蛋白表达水平在孵育 12和 2 4h后同对照组相比无显著变化 ,在孵育 36 h后同对照组相比显著下调 [软脂酸 (0 .36±0 .0 3)和油酸 (0 .35± 0 .0 4) vs对照 (0 . 39± 0 .0 5 ) ,P<0 .0 5 ];L eptin受体的 RNA水平在孵育 12 h后同对照组相比无显著变化 ,孵育 2 4和 36 h 后显著下调 [2 4h:软脂酸(0 .2 6± 0 .0 3)和油酸 (0 .2 6± 0 .0 4) vs对照 (0 .31± 0 .0 3) ,P<0 .0 5 ;36 h:软脂酸 (0 .2 5± 0 .0 4)和油酸 (0 .2 3± 0 .0 3) vs对照 (0 .2 9± 0 .0 1) ,P<0 .0 5 ];L eptin受体的酪氨酸磷酸化程度在在孵育 12 h后同对照组相比无显著变化 ,孵育 2 4和36 h后显著下调 [2 4h:软脂酸     

瘦素与绿色荧光蛋白融合基因的合成及其高效表达

目的: 为了便于追踪瘦素(Leptin)在体内的去向,对其进行体内定位,设计合成Leptin荧光分子蛋白探针.方法:用PCR技术将Leptin cDNA与绿色荧光蛋白cDNA构建成融合基因LG,然后将其克隆进原核表达载体pET3c中,构建成原核表达工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG.用Western-blot杂交检测重组蛋白的免疫原性,用荧光显微镜观察融合蛋白及其诱导菌休的发光活性.结果:DNA测序结果证实设计合成的融合基因与预期一致;构建的工程菌BL21(DE3)/pET3c-LG获得了表达,融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的40%以上;Western-blot杂交检测表明重组蛋白具有Leptin的免疫原性;经IPTG诱导后的菌体及蛋白粗提液在荧光显微镜下可观察到其能发射出强烈的绿色荧光.结论:融合基因在大肠杆菌中实现了高效表达,表达的融合蛋白具Leptin的免疫原性和GFP的发光特性.为利用绿色荧光蛋白标记Leptin在动物体内的药物治疗的研究提供了一种新的途径.     

ULBP3胞外段分子伴侣10融合蛋白的构建与表达

[目的] 研究ULBP3基因的功能,构建、表达ULBP3胞外段分子伴侣10重组融合蛋白。[方法] 将ULBP3胞外段cDNA连接在重组原核表达质粒pET28a-chaperonin 10中chaperonin 10基因的下游,构建chaperonin10-ULBP3融合基因的pET28a原核表达载体,转化大肠杆菌BL21(DE3),以IPTG诱导表达,Western blot鉴定。[结果] 酶切鉴定证实,chaperonin10-ULBP3融合基因的pET28a原核表达载体构建正确,该原核表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)后,经筛选获得的阳性重组菌稳定表达chaperonin10-ULBP3重组融合蛋白。[结论] 成功表达了ULBP3胞外段重组融合蛋白,可进一步用于ULBP3功能实验研究。     

Effects of Extracellular ATP and Its Receptors on Peripheral Nerve Regeneration in SD Rats

Peripheral nerve injury is a common disease andthe effectiveness is poor after microsurgery repair.The main factors influencing the effectiveness of theperipheral nerve injury are the axon regeneration af-ter the nerve repair.It is believed that axonal guid-ance is mainly regulated through interactions of theaxons with attractive,repulsive,and trophic cuesduring development of the nervous systems.Similarmechanisms regulate axonal regeneration after pe-ripheral nerve injury[1] .There is evidenc…     

重组人脂联素对SD大鼠胫骨骨折愈合过程的影响

背景 脂联素是血清中最普遍的脂肪因子,可以影响骨形成和骨吸收.而脂联素能否促进骨折愈合仍未确定.目的 研究重组人脂联素对SD大鼠胫骨闭合性骨折愈合的影响.方法 使用2月龄SD雄性大鼠24只,体质量约200?g,采用骨折造模器制作SD大鼠胫骨骨折模型.造模成功后,将大鼠随机分为3组(每组n=8),并即刻局部注射0.5?m...     

用合成受体肽段长期免疫大鼠对其心脏结构和功能的影响

用合成的β1-受体功能表位肽段以及M2受体功能表位肽段肽连续18个月免疫大鼠,结果发现①外周血T淋巴细胞亚群的改变T细胞亚群测定结果发现,在两免疫组免疫24h后CD4+/CD8+即开始升高,到第7d时达到一个较高的水平,3个月时开始下降但仍高于同期对照组,第9个月时降至对照组水平,18个月时明显降低;对照组的CD4+/CD8     

ＥＢ病毒潜伏膜蛋白１胞外区融合蛋白的表达及纯化

目的:在大肠杆菌中表达EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)胞外肽段与谷胱甘肽S-转移酶(GST)融合蛋白,并用该融合表达蛋白检测EB病毒相关鼻咽癌(NPC)患者血清中的特异性抗体.方法:用BamH I和EcoR I将含LMP1胞外区重组基因的质粒pMD18-LMPI双酶切后,克隆到pGEx4T-2中.重组质粒经酶切鉴定、核酸序列分析后转化大肠杆菌BL21(DE3),以异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达融合蛋白,表达的蛋白经谷胱甘肽S-转移酶柱亲和层析纯化,纯化的蛋白经Westemblot法检测鉴定.结果:重组表达质粒经酶切鉴定为阳性,核酸序列分析正确.SDS-PAGE和Western blot结果显示表达的重组蛋白分子质量约为32.2 ku,此抗原能够与鼻咽癌患者血清中抗体特异性结合.结论:成功获得了LMP1胞外区重组基因表达的蛋白,并证明原核表达的LMP1胞外肽段保持了原有的抗原性,能够与EBV相关鼻咽癌患者血清中的抗体特异性结合.     

绿茶预防大鼠脂肪肝的效果

用综合法复制脂肪肝动物模型，给予５％绿茶以观察其预防高胆固醇高脂肪低蛋白饲料致ＳＤ大鼠脂肪肝的作用。实验期间正常组（ＮＣ组）大鼠体重持续增长，给予４０％四氯化碳溶液注射的预防组（ＴＰ组）和高脂组（ＨＣ组）均明显下降；ＴＰ组体重自第５天后较ＨＣ组为高，在第１０天后即有显著性。用药后大鼠活动减少、皮毛凌乱。甘油三酯和总胆固醇均增高，ＴＰ组高密度脂蛋白比ＨＣ组高，而ＨＣ组低密度脂蛋白和极低密度脂蛋白均升     

重组Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白对野百合碱诱导的大鼠肺动脉高压的作用及机制研究

目的:观察早期应用重组Ⅱ型肿瘤坏死因子受体抗体融合蛋白(rhTNFR-Fc)对野百合碱(monocrotaline,MCT)诱导的大鼠肺动脉高压(pulmonary arterial hypertension,PAH)的作用,并探讨其机制?方法: 成年雄性SD大鼠24只, 随机分为正常对照组(C组)?rhTNFR-Fc组(R组)?MCT模型组(M组)?MCT+rhTNFR-Fc组(M+R组)?建立MCT诱导的PAH模型,测定各组平均肺动脉压 (mPAP)?右心肥厚指数,检测各组肺小动脉血管管壁厚度占血管外径的百分比(WT%),应用ELISA法测定各组肺组织匀浆白介素-6(interleukin-6,IL-6)?肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-alpha,TNF-α)水平,Western blot法测定肺组织核因子-κB(NF-κB)蛋白水平?结果:①M组大鼠mPAP?右心肥厚指数及WT%值较C组显著升高,差异具有统计学意义(P < 0.05),rhTNFR-Fc可抑制MCT诱导的大鼠mPAP的升高(P < 0.05)及肺小动脉管壁的增厚(P < 0.05);②M组大鼠肺组织匀浆中IL-6?TNF-α水平与C组比较明显增高,差异有显著性(P < 0.05),rhTNFR-Fc可抑制MCT诱导的PAH大鼠肺组织中IL-6?TNF-α的表达(P < 0.05);③M组大鼠肺组织中NF-κB表达与C组比较显著增加(P < 0.05),rhTNFR-Fc可抑制MCT诱导的PAH大鼠肺组织中NF-κB的表达增加(P < 0.05)?结论: rhTNFR-Fc可能通过抑制NF-κB信号通路的激活及IL-6?TNF-α等炎症因子的表达防治MCT诱导的大鼠PAH?     

塞来昔布对大鼠骨组织的影响

目的探讨塞来昔布对大鼠骨组织的影响。方法 16只3月龄雌性SD大鼠随机分为两组：正常对照组和塞来昔布给药组,每组8只。塞来昔布组大鼠每天灌胃给予塞来昔布50 mg·kg^-1,正常对照组给予等量生理盐水。给药时间为8周,每周记录大鼠体重。实验结束时取大鼠左侧股骨用双能X线骨密度仪（DXA）测定骨密度,用三点弯曲法测定股骨生物力学特性,然后再用离子发射光谱仪测定股骨中的Ca、P、Mg的含量。另取大鼠胫骨中段皮质骨做不脱钙骨磨片测定骨形态计量学参数。结果塞来昔布50 mg·kg^-1用药8周与对照组相比,明显降低大鼠股骨骨密度,但是对皮质骨骨量、骨形成率、矿化沉积率、股骨最大载荷和断裂载荷等均未产生显著性损害,也并未降低股骨中Ca、P、Mg的含量。结论塞来昔布用药8周明显降低股骨骨密度,但并未进一步损害皮质骨骨量、骨形成、骨矿无机质含量和骨生物力学特性。     

转基因番茄可食防龋疫苗免疫大鼠的实验研究?

目的用表达变异链球菌表面蛋白PAcP和霍乱毒素B亚单位融合蛋白的转基因番茄免疫SD大鼠,检测其免疫原性,探索研制安全、有效的可食用防龋疫苗的可能性。方法选择雌性 SD 大鼠18只,建立龋齿模型,随机分成3组(n=6),分别为转基因番茄组(实验组)、变异链球菌灭活全菌免疫组(阳性对照组)、非转基因番茄组(阴性对照组),免疫方式为灌胃免疫,每周免疫1次,连续免疫4周。分别于首次免疫前1 d 和每次免疫1周后采集血液、唾液样品,用酶联免疫吸附实验法检测血清中免疫球蛋白 G(IgG)、唾液中分泌型免疫球蛋白 A(SIgA)抗体水平;鼠龄70 d 时处死动物,并取上下颌骨进行龋齿计分。结果免疫后,实验组和阳性对照组大鼠血清中 IgG、唾液中 SIgA 抗体水平与阴性对照组比较差异有统计学意义(P <0.05);实验组和阴性对照组在 Dx 级外的各级差异有统计学意义(P <0.05)。结论转基因番茄防龋疫苗具有免疫原性,能够诱导实验动物产生有效的免疫应答,降低龋齿的发生。     

雌激素对卵巢切除大鼠血脂和血清瘦素、抵抗素表达的影响

目的:探讨雌激素对卵巢切除大鼠血脂和血清瘦素、抵抗素表达的影响.方法:12周SD大鼠分成3组,假手术(Sham)组、卵巢切除(OVX)组和雌激素(OVX+E2)组,每组7只,术后10 d,Sham组和OVX组大鼠每天腹腔注射生理盐水0.1 ml/只,OVX+E2组每天注射苯甲酸雌二醇0.2 mg/只,连续注射30 d后...