甘露聚糖结合凝集素的生物学功能及其临床意义

甘露聚糖结合凝集素 (MBL)是一种肝源性的血清蛋白 ,属Ca2 依赖型凝集素家族成员 ,在天然免疫中起重要作用。MBL具有调理功能 ,可选择性结合表面富含甘露寡糖的病原体 ,既可通过MBL途径活化补体 ,也可特异性结合细胞表面受体活化巨噬细胞。已发现MBL基因突变可致血清MBL水平低下和功能缺损。MBL缺损使个体易患某些感染性疾病和自身免疫病。     

甘露聚糖结合凝集素阻遏人巨细胞病毒感染MD-DC细胞的研究

目的 探讨不同来源、不同浓度的甘露聚糖结合凝集素( MBL)阻遏人巨细胞病毒(HCMV)感染人外周血单个核细胞衍生出的DC细胞(MD-DC)的作用.方法 通过载体构建得到重组MBL(rMBL),通过血浆分离得到天然MBL(hMBL),先以不同浓度的hMBL/rMBL预处理MD-DC 0.5h,再以HCMV感染MD-DC...     

甘露聚糖结合凝集素基因多态性与毛细支气管炎的相关性研究

目的 探讨甘露聚糖结合凝集素(MBL)与毛细支气管炎是否具有相关性.方法 用ELISA法定量检测50例病例组与50例对照组MBL的血浆水平(ng/ml),并用聚合酶链反应、DNA序列测定法分析其MBL基因第1外显子第52、54、57位密码子的碱基序列.结果 (1)甘露聚糖结合凝集素GTC等位基因频率约为0.135,未见52和57位密码子的点突变;(2)比较病例组、对照组的GTC等位基因频率、血浆水平差异均无统计学意义.结论 未发现MBL的基因多态性与毛细支气管炎的易感性有相关性.     

甘露聚糖结合凝集素(MBL)的临床研究进展

1968年Miller等首次发现1例反复感染的病例：患儿表现为持续腹泻，反复皮肤感染，最终因严重败血症而死亡。实验室检查发现，患儿的血浆不能调理热灭活的酵母菌。此后，人们注意到某些儿童或成人不明原因反复感染，如慢性腹泻、中耳炎、皮肤脓肿以及带状疱疹等的感染的发生与机体缺乏某些不依赖抗体的调理因素有关。经进一步研究，先后从鼠和兔的肝、血浆以及人血清中分离出特异性结合酵母甘露聚糖的蛋白质（MBP），也称甘露聚糖结合凝集素（MBL）。     

抗中性粒细胞胞浆抗体在转氨酶升高的乙肝患者中的检测

目的探究抗中性粒细胞胞浆抗体(ANCA)在乙肝转氨酶升高患者中检测阳性率。方法应用间接免疫荧光法(IIF)和酶联免疫吸附法针对临床上乙肝并转氨酶升高的213例患者ANCA用MPO、PR3检测,其中肝硬化39例,肝癌31例,乙肝DNA>103者84例。结果本组患者中ANCA阳性31例,阳性率为14.5%,为抗中性粒细胞胞浆抗体的胞质型(C-ANCA)。结论乙肝并转氨酶升高患者ANCA阳性率相对较高。提示ANCA与乙肝活动期关系密切,HBV感染或引发机体自身免疫紊乱,产生自身抗体。     

甘露聚糖结合凝集素诱导人白血病细胞系U937细胞凋亡

目的研究甘露聚糖结合凝集素(MBL)对白血病细胞系U937凋亡的影响。方法不同浓度MBL处理U937细胞后,应用CCK-8法分析细胞增殖情况,Hoechst33258染色观察细胞核及染色质,AnnexinV/PI双染流式细胞术分析细胞凋亡率,real-timePCR和免疫印迹分析凋亡相关基因及蛋白表达。结果 30～50μg/mlMBL培养72h,U937细胞增殖明显受抑,出现不同程度核固缩、核碎裂;随MBL浓度升高或作用时间延长,凋亡细胞数逐渐增多;Fas、Caspase-3mRNA、Fas和FasL蛋白表达量升高,Caspase-3和多腺苷二磷酸多聚酶(PARP)蛋白被剪切激活或失活。结论 MBL可诱导白血病细胞U937细胞凋亡,其机制与上调Fas表达、剪切Caspase-3和PAPR有关。     

重组人甘露聚糖结合凝集素三肽链亚单位的制备及其活性分析

目的制备具有生物学活性的重组人甘露聚糖结合凝集素三肽链亚单位（trhMBL）。方法我们先前已构建了N端缺失的
重组人甘露聚糖结合凝集素（rhMBL△N）基因的原核表达载体并在大肠杆菌中高效表达rhMBL△N融合蛋白。本实验利用胶
原蛋白的3条肽链依其自身性质而相互缠绕成三股螺旋、装配成三级结构的原理,首先以凝血酶酶切rhMBL融合蛋白,将获得
的单链rhMBL蛋白在50mmol/L PBS（pH7.2）和ddH2O中交替反复透析使之自动装配成trhMBL,最后以配体结合试验和C4d
沉淀试验对终产物trhMBL进行生物学活性分析。结果rhMBL融合蛋白经凝血酶酶切,获得相对分子质量约20000的
rhMBL单链蛋白;将其反复透析后得到相对分子质量约50000的rhMBL三肽链亚单位trhMBL;活性分析表明,该MBL亚单位
的配体结合活性比rhMBL△N肽链高,并获得了激活补体凝集素途径的活性,但这些活性比天然MBL低。结论成功获得了具
有生物学活性的重组人MBL三肽链亚单位;这种三肽链组织形式不仅是MBL的结构亚单位,而且是其功能亚单位。
     

甘露聚糖结合凝集素-A在早期糖尿病大鼠肾脏中的表达及意义

[摘要] 目的　探讨甘露聚糖结合凝集素-A（Mannose-binding Lectin A,MBL-A）在早期糖尿病大鼠肾脏中表达的变化规律及其与糖尿病肾病(DN)发生发展的关系。 方法　实验分为糖尿病模型组和正常对照组。采用链脲佐菌素(STZ)诱导大鼠DN模型,分别于造模成功后2、4、6、8周,用免疫组织化学、TUNEL染色分析和计算机图像分析技术连续多时点观察肾脏MBL-A的表达变化和细胞凋亡情况,并分析两者之间的关系及其与肾脏病理变化指标的相关性。 结果 糖尿病组2、4、6、8周MBL-A蛋白表达均强于对照组,各时点间也有差异;糖尿病组4、6、8周肾小球细胞凋亡指数（AI）均高于对照组, 各时点间差异也有统计学意义。糖尿病组MBL-A与尿蛋白、肾重/体重（KI）正相关;肾小球细胞AI与尿蛋白、KI正相关;MBL-A与细胞AI呈正相关。 结论 MBL-A在早期糖尿病大鼠肾脏中表达上调,以肾小球表达上调为主, 并随病程延长逐渐增强,其表达变化与糖尿病肾脏病变相关。细胞凋亡也参与了糖尿病早期肾脏病变的变化,激活甘露聚糖结合凝集素,两者相互作用,从而促进糖尿病肾病的发展。     

甘露聚糖结合凝集素补体途径与糖尿病肾病发病关系的研究进展

糖尿病肾病（Diabetic Nephropathy,DN）是糖尿病重要的晚期并发症,可单独发生在15-40％的所有1型和2型糖尿病患者中。近年来许多证据阐明了甘露聚糖结合凝集素（mannose-binding lectin,MBL）及其补体激活与疾病的重要关系,尤其是与糖尿病以及糖尿病肾病的关系。本文综述了MBL的结构、功能、与各种疾病的联系,以及MBL补体途径激活与糖尿病肾病关系的研究进展。     

Balb/C小鼠甘露聚糖结合凝集素-A糖识别域的原核表达

目的 获取具有生物学活性的Balb/C小鼠血清型甘露聚糖结合凝集素(MBL-A)糖识别域(CRD)蛋白.方法 应用PCR从含Balb/C小鼠MBL广A基因的质粒pmMBL-A中扩增目的 基因片段,将其克隆至原核表达载体pET41a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的 蛋白.表达产物(包涵体)经洗涤和复性处理后,利用GST柱纯化,以SDS-PAGE、Western blotting和ELISA进行分析鉴定.结果 从pmMBL-A中扩增到约450 bp的DNA片段,构建重组载体pET41a-mMBL-A-CRD,经酶切和测序鉴定后,将其导人大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物主要以包涵体形式存在,其相对分子质量约47 000.包涵体经洗涤及复性处理,GST柱纯化后,融合蛋白的纯度达90%以上.Westemblotting显示重组融合蛋白与抗GST抗体特异性反应,糖结合试验表明表达产物具有生物学活性.结论 成功获得了具有生物学活性的Balb/C小鼠MBL-A CRD蛋白,为MBL-A分子的研究奠定了一定基础.     

Balb/Cdx鼠甘露聚糖结合凝集素-A糖识别域的原核表达

目的 获取具有生物学活性的Balb/C小鼠血清型甘露聚糖结合凝集素(MBL-A)糖识别域(CRD)蛋白.方法 应用PCR从含Balb/C小鼠MBL广A基因的质粒pmMBL-A中扩增目的 基因片段,将其克隆至原核表达载体pET41a(+),在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达目的 蛋白.表达产物(包涵体)经洗涤和复性处理后,利用GST柱纯化,以SDS-PAGE、Western blotting和ELISA进行分析鉴定.结果 从pmMBL-A中扩增到约450 bp的DNA片段,构建重组载体pET41a-mMBL-A-CRD,经酶切和测序鉴定后,将其导人大肠杆菌BL21(DE3)中表达,表达产物主要以包涵体形式存在,其相对分子质量约47 000.包涵体经洗涤及复性处理,GST柱纯化后,融合蛋白的纯度达90%以上.Westemblotting显示重组融合蛋白与抗GST抗体特异性反应,糖结合试验表明表达产物具有生物学活性.结论 成功获得了具有生物学活性的Balb/C小鼠MBL-A CRD蛋白,为MBL-A分子的研究奠定了一定基础.     

甘露聚糖结合凝集素对人中性粒细胞功能的影响

目的研究甘露聚糖结合凝集素（MBL）对人中性粒细胞（PMN）功能的影响。方法采用ELISA和Dot blot检测MBL与微
生物的结合;应用流式细胞术检测及荧光显微镜观察MBL对PMN吞噬功能的影响;用qPCR分析MBL对PMN表达IL-1β、
TNF-α和CD11b mRNA的影响,以ELISA检测MBL对PMN分泌TNF-α和IL-6的影响;应用NBT还原法检测MBL对PMN呼
吸爆发的影响。结果MBL与微生物结合并呈浓度依赖关系。无人血清时,MBL对PMN吞噬C. albicans 和E.coli 无明显影
响。存在MBL缺陷人混合血清时,MBL可促进PMN对C. albicans的吞噬且这种作用可被甘露聚糖所阻断,上调PMN IL-1β、
TNF-α、IL-6及CD11b表达水平,刺激PMN呼吸爆发。结论MBL以补体凝集素途径依赖方式增强PMN吞噬功能,并促进炎性
细胞因子分泌。
     

甘露聚糖结合凝集素与HBV感染及肝功能损伤的相关性研究

目的探讨甘露聚糖结合凝集素(MBL)在乙肝病毒不同感染程度的患者中的表达及其临床意义。方法乙肝患者共140例,依据血清中HBeAg和丙氨酸转氨酶(ALT)的水平分为6组:A组(HBeAg阳性,ALT正常),B组(HBeAg阴性,ALT正常),C组(HBeAg阳性,ALT轻度/中度升高),D组(HBeAg阳性,ALT高度/重度升高),E组(HBeAg阴性,ALT轻度/中度升高),F组(HBeAg阴性,ALT高度/重度升高);健康体检人员20例为正常对照组(即G组)。采用ELISA检测血清中甘露聚糖结合凝集素水平,并与ALT,HBeAg,HBV-DNA进行相关性分析。结果 A组的MBL水平显著高于C组和D组(P<0.05);G组的MBL水平高于A组、C组和E组(P<0.05);G组的MBL水平显著高于C组(P<0.05);E组和F组的MBL水平显著低于G组(P<0.05);而B组与G组MBL水平差异无统计学意义(P>0.05);同时C组的HBeAg值显著高于G组和B组(P<0.05),D组的HBeAg值显著高于G组和B组(P<0.05);C组的HBV-DNA值显著高于A组和B组(P<0.05),D组的HBV-DNA值显著高于A组和B组(P<0.05);MBL与ALT、HBeAg和HBV-DNA的水平均呈负相关(P<0.05)。结论 MBL的水平可能与机体清除乙肝病毒有关,其异常低水平表达可能会提高病毒复制,增加乙肝病毒感染的严重性,且提示MBL与肝功能异常及ALT升高有关。     

IL-2对人中性粒细胞吞噬功能的影响

目的观察IL-2对人中性粒细胞吞噬功能的影响。方法用新鲜健康成人外周血分别加入不同浓度IL-2(20,40,80,160 U/ml)孵育2 h后,与金黄色葡萄球菌混合,孵育5 min后,瑞特染色,观察并计算中性粒细胞吞噬百分率和吞噬指数。结果正常中性粒细胞吞噬百分率和吞噬指数为(38.71±2.37)%和0.35±0.032;加入IL-2 20,40,80,160 U/ml,中性粒细胞吞噬百分率和吞噬指数分别为(45.38±1.94)%和0.49±0.084,(51.12±2.06)%和0.61±0.054,(56.73±1.32)%和0.67±0.028,(59.46±1.72)%和0.71±0.039。结论IL-2能提高人中性粒细胞吞噬功能,具有增强人非特异性免疫功能的作用。     

人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋酶—2基因的克隆与鉴定

目的：获得人甘露聚糖结合凝集素相关丝氨酸蛋白酶-2（MASP-2）编码区基因。方法：采用RT-巢式PCR技术从人胎肝组织总RNA扩增目的cDNA片段,克隆入pGEM-T载体,酶切图谱分析和测序鉴定。结果：获得了编码含信号顺序的MASP-2肽链全长cDNA,将其与pGEM-T载体连接,转化大肠杆菌TG1,建立了MASP-2的重组克隆。酶切图谱与微机分析结果无异序列分析表明,与报道的人MASP-2cDNA序列一致。结论：成功克隆了人MASP-2基因,为深入研究补体凝集素途径的激活机制和甘露聚糖结合凝集素基因突变引起免疫缺损的发病机制奠定了基础。     

甘露聚糖结合凝集素（MBL）的临床研究进展

1968年Miller等首次发现1例反复感染的病例：患儿发现为持续腹泻，反复皮肤感染、最终因严重败血症而死亡。实验室检查发现，患儿的血浆不能调理热灭活的酵母菌。此后，人们注意到某些儿童或成人不明原因反复感染，如慢性腹泻、中耳炎、皮肤脓肿以及带状疱疹等的感染的发生与机体缺乏某些不依赖抗体的调理因素有关。     

构建以Th17应答为主致气道中性粒细胞增高的小鼠哮喘模型

目的建立一种Th17应答增强致气道炎症以中性粒细胞浸润为主的哮喘动物模型。方法卵蛋白(ovalbumin,OVA)和内毒素(lipopolysaccharide,LPS)联合致敏构建新哮喘模型。末次激发24 h后行肺功能测定,评估气道高反应性(airway hyperresponsiveness,AHR)。肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)分类计数气道炎症细胞比例,肺组织切片HE染色观察病理改变。Q-PCR检测肺组织Th1、Th2和Th17细胞偏移情况。结果 OVA和LPS联合致敏可以诱发更剧烈的AHR。BALF分类计数显示嗜酸性粒细胞(EOS)和中性粒细胞(NEU)比例分别为(16.09±4.42)%和(28.63±8.89)%。病理学观察可见明显的哮喘样炎症改变。Q-PCR结果显示单独OVA致敏肺内T细胞主要向Th2方向偏移,联合致敏以向Th17方向偏移为主。结论成功构建以Th17应答占优势、肺内炎症以中性粒细胞浸润为主的哮喘动物模型。     

正常人红细胞对肺心病病人中性粒细胞吞噬功能的影响

我们对20例肺心病病人进行了中性粒细胞吞噬功能的测定,同时观察正常人红细胞对其吞噬功能的影响及与血气变化的关系。结果表明,病人中性粒细胞吞噬功能明显低下,正常人红细胞可提高其吞噬率,但达不到正常人水平。     

中西医结合治疗异位妊娠

异位妊娠是指孕卵在子宫腔以外着床发育。目前,伴随着超声诊断技术在医学界中逐渐提高并被广泛的使用,β-HCG放射对免疫敏感性测定的逐渐提高,及相关工作人员提高孕妇出现异位妊娠状况的警惕性,在早期可以有效地诊断出大部分患有异位妊娠疾病的患者,进而对异位妊娠患者实施保守治疗提供一定的基础,也为患者减轻了病痛和经济负担[1]。因此,药物