维A酸诱导人类恶性黑色素瘤细胞株A375凋亡的受体机制研究

目的研究维A酸诱导人类恶性黑素瘤细胞株A375凋亡的受体机制。方法通过Bax／Bcl-2免疫细胞化学染色、TUNEL法、Annexin V／PI染色以及活性Caspase-3检测3种维A酸（9-cis-RA、at-RA and 13-cis-RA）、维A酸A受体（RAR）激动剂TTNPB和维A酸X受体（RXR）激动剂Ma对A375细胞凋亡的影响。结果维A酸和TTNPB均不同程度的上调Bax表达并下调Bcl-2表达．Annexin V／PI和TUNEL检测结果均显示维A酸和TTNPB可诱导A375细胞凋亡,同对照相比均差异有统计学意义（P〈0．05）,而Ma与对照组相比,差异无统计学意义（P〉0．05）。活性Caspase-3分析显示,除了Ma外,所有试剂均不同程度的上调Caspase-3的表达,以TTNPB的作用最强（P〈0．05）。结论维A酸诱导A375细胞凋亡的作用涉及到Caspase-3途径。维A酸诱导A375细胞凋亡与RAR的激活可能有关,而与RXR的激活无关。     

维A酸抑制人类舌鳞癌Tca8113细胞增殖及诱导凋亡的受体机制研究

目的 研究维A酸抑制人类舌鳞癌Tca8113细胞株的增殖和诱导凋亡的受体机制。方法 用MTT法和细胞周期分析法研究3种维A酸(9-cis-RA、at-RA和13-cis-RA)、TTNPB(RAR激动剂)和甲氧普烯酸(Ma,RXR激动剂)对Tca8113细胞增殖的影响。通过Bax/Bcl-2免疫细胞化学染色、TUNEL法及活性caspase-3检测,研究维A酸诱导Tca8113细胞凋亡的作用。结果 维A酸和TTNPB对Tca8113细胞均有不同程度的抑制增殖作用,其中TTNPB的抑制作用最强,而Ma无此作用。细胞周期分析结果显示,维A酸和TTNPB均可增加G₁/G₀期细胞百分比,其中以TTNPB的作用最强,而Ma无此作用。维A酸和TTNPB均可上调Bax表达并下调Bcl-2表达,TUNEL检测显示,维A酸和TTNPB均可诱导Tca8113细胞凋亡,同对照相比均有显著性差异(P<0.05),而Ma与对照组相比,无显著性差异(P>0.05)。活性caspase-3分析显示,除了Ma外,所有试剂均不同程度地上调caspase-3的表达,以TTNPB的作用最强(P<0.05)。结论 维A酸能够抑制Tca8113细胞的增殖,并诱导凋亡。RXR的活化与这些作用无关,而RAR的活化则与这些作用可能有关。此外,维A酸诱导Tca8113细胞凋亡涉及到caspase-3途径。     

维A酸抑制人类舌鳞癌Tca8113细胞增殖及诱导凋亡的受体机制研究

目的研究维A酸抑制人类舌鳞癌Tca8113细胞株的增殖和诱导凋亡的受体机制。方法用MTT法和细胞周期分析法研究3种维A酸（9-cis—RA、at—RA和13-cis—RA）、TTNPB（RAR激动剂）和甲氧普烯酸（Ma，RXR激动剂）对Tca8113细胞增殖的影响。通过Bax／Bcl．2免疫细胞化学染色、TUNEL法及活性caspase-3检测，研究维A酸诱导Tca8113细胞凋亡的作用。结果维A酸和TTNPB对Tca8113细胞均有不同程度的抑制增殖作用，其中TTNPB的抑制作用最强，而Ma无此作用。细胞周期分析结果显示，维A酸和TTNPB均可增加G1／G0期细胞百分比，其中以TTNPB的作用最强，而Ma无此作用。维A酸和TTNPB均可上调Bax表达并下调Bcl-2表达，TUNEL检测显示．维A酸和TTNPB均可诱导Tca8113细胞凋亡，同对照相比均有显著性差异（P〈0．05），而Ma与对照组相比，无显著性差异（P〉0．05）。活性caspase-3分析显示，除了Ma外，所有试剂均不同程度地上调caspase-3的表达，以TTNPB的作用最强（P〈0．05）。结论维A酸能够抑制Tca8113细胞的增殖，并诱导凋广-RXR的活化与这些作用无关，而RAR的活化则与这些作用可能有关。此外，维A酸诱导Tca8113细胞凋广涉及到caspase-3途径。     

芦笋提取液抑制恶性黑色素瘤A375细胞增殖的研究

目的:探讨芦笋提取液对人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用以及对其凋亡的诱导作用.方法:用四甲基噻唑氮蓝比色法测定A375细胞活力;流式细胞术(FCM)检测A375细胞的凋亡诱导及杀伤作用(P＜0.01).结果:芦笋提取液与人恶性黑色素瘤细胞株A375细胞生长抑制率之间有明显的浓度依赖关系,浓度分别为200 mg/ml、400 mg/ml、600 mg/ml和800 mg/ml时,A375细胞的凋亡率及坏死率分别为2.39%、8.85%、8.71%、5.16%和1.65%、1.51%、22.10%、82.80%.结论:芦笋提取液能显著抑制恶性黑色素瘤A375细胞的增殖,且诱导A375细胞总的凋亡率和坏死率与其浓度之间存在着依赖关系.     

三氧化二砷对恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用

目的:研究三氧化二砷(As2O3)对人恶性黑色素瘤A375细胞株凋亡的诱导作用.方法:采用流式细胞术(FCM)检测不同浓度的三氧化二砷诱导A375细胞的早期凋亡率和晚期凋亡率.结果:As2O3浓度分别为5 μmol/L、10μmol/L、20 μmol/L时,A375细胞的早期凋亡率分别为9.75%、50.9%和43.7%,晚期凋亡率分别为2.10%、4.61%和11.2%,总凋亡率分别为11.85%、55.51%和54.9%.结论:As2O3可诱导A375细胞早期凋亡和晚期凋亡,10 μmol/L和20μmol/L的As2O3可明显增加A375细胞总凋亡率.     

苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响

目的 研究苦参碱对人恶性黑色素瘤A375细胞株增殖和凋亡的影响.方法 用MTT法观察不同浓度苦参碱对培养的人恶性黑色素瘤A375细胞增殖的抑制作用,采用Annexin-V-FIFT/PI双染色法检测其凋亡细胞,并用倒置显微镜和透射电镜观察细胞形态学的改变.结果苦参碱明显抑制A375细胞增殖,其抑制率与药物浓度和作用时间呈正相关.凋亡细胞的比例与药物浓度呈剂量依赖性.光镜和电镜观察证实随着苦参碱浓度的增加,A375凋亡细胞增多.结论 苦参碱对人恶性黑色素瘤细胞的增殖具有明显的抑制作用,并能诱导其发生凋亡.     

全反式维甲酸对恶性黑素瘤A375细胞增殖及Fas蛋白表达的影响

目的 观察全反式维甲酸(ATRA)对体外培养恶性黑素瘤A375细胞增殖的抑制作用并探讨其作用机制.方法 设置溶剂对照及ATRA不同浓度组,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测ATRA不同浓度、作用不同时间各组细胞存活和生长情况,分析量效、时效关系;Western blot检测10 μmol/L ATRA作用不同时间Fas蛋白的表达.结果 ATRA在0.01～0.1 μmol/L浓度对A375细胞增殖抑制作用不明显;在1～100 μmol/L浓度有抑制作用;药物作用72 h时各浓度组的细胞抑制率均达到高峰,以100 μmol/L浓度组抑制率最高;10 μmol/L ATRA可上调A375细胞Fas蛋白的表达.结论 ATRA对A375细胞增殖的抑制作用呈时间和剂量依赖关系.ATRA可能通过Fas信号转导途径诱导A375细胞凋亡.     

去甲斑蝥素对人黑色素瘤A375细胞周期、活性氧自由基及细胞凋亡的影响

［摘要］ 目的探讨去甲斑蝥素（Norcantharidin,NCTD）对人黑色素瘤A375细胞周期、ROS自由基及细胞凋亡的影响及其机制。 方法培养人A375黑素瘤细胞,分别采用10,20,40 μmol/L NCTD预处理,培养48 h后,采用流式细胞术测定NCTD对人A375黑素瘤细胞周期的影响,采用免疫印迹法检测NCTD对人A375黑素瘤细胞蛋白Cyclin D1和P21表达的影响,采用流式细胞术测定NCTD对人A375黑素瘤细胞ROS及凋亡水平的影响。 结果10,20,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于对照组,S期和G2期细胞比例低于对照组,20,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于10 μmol/L NCTD组,S期和G2期细胞比例低于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组G1期细胞比例高于20 μmol/L NCTD组,S期和G2期细胞比例低于20 μmol/L NCTD组（P＜0.05）。40 μmol/L NCTD组处理人A375黑色素瘤细胞48 h后,细胞周期蛋白Cyclin D1、Cyclin A和CDK2低于对照组,P21蛋白高于对照组（P＜0.05）。10,20,40 μmo/L NCTD组细胞内ROS水平高于对照组,20,40 μmol/L NCTD组细胞内ROS水平高于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组细胞内ROS水平高于20 μmol/L NCTD组（P＜0.05）。10,20,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于对照组,20,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于10 μmol/L NCTD组,40 μmol/L NCTD组细胞凋亡率高于20 μmol/L NCTD组（P＜0.05）。NAC组细胞凋亡率低于对照组,NCTD组和NAC+NCTD组细胞凋亡率高于对照组,NAC+NCTD组细胞凋亡率低于NCTD组,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论NCTD通过阻滞细胞G1周期、减少S期抑制人A375黑色素瘤细胞的增殖,通过诱导ROS水平升高诱导细胞凋亡。     

激活视黄醇类X受体抑制轻度氧化低密度脂蛋白诱导的小鼠巨噬细胞系RAW264.7增殖

目的 探讨激活视黄醇类X受体(RXR)对轻度氧化低密度脂蛋白(LoxLDL)诱导巨噬细胞增殖的影响及其作用机制.方法 饥饿处理后的小鼠巨噬细胞系RAW264.7经LoxLDL(20μg/ml)刺激24 h诱导细胞增殖,干预组同时给予不同浓度的RXR特异性激动剂顺式维甲酸9(9-cisRA),四甲基偶氮唑蓝方法检测细胞活力,脱氧尿嘧啶核苷免疫组化方法检测细胞DNA合成,流式细胞仪PI单染法检测细胞凋亡,Western印迹方法检测Nur77和RARB蛋白表达.结果 LoxLDL诱导24 h后,细胞活力和DNA合成(A值)分别升高0.79±0.12和1.81±0.31,RXR的特异性配体9-cisRA能够显著抑制LoxLDL的作用,在10-8mol/L和10-7mol/L浓度分别使细胞活力下降到0.43±0.10和0.26±0.07(P＜0.05),DNA合成升高为1.14±0.43和0.72±0.06(P＜0.05),且对细胞凋亡没有影响.Western印迹检测表明,孤儿核受体Nur77蛋白表达在LoxLDL刺激后显著升高5倍以上,9-cisRA显著下调Nur77表达,同时上调下游靶基因RARB蛋白表达.结论 激活核受体RXR能够显著抑制LoxLDL刺激引起的巨噬细胞增殖,其机制可能与调控RXR/Nur77异源二聚体及其下游靶基因RARβ有关.     

窄谱中波紫外线和/或阿维A对角质形成细胞异维A酸受体α mRNA表达的影响

目的研究阿维A和/或窄谱中波紫外线(NB-UVB)对培养的正常人角质形成细胞异维A酸受体α(RXRα)mRNA表达的影响。方法用10-7~10-6mol/L阿维A和/或50~100mJ/cm2NB-UVB处理正常人角质形成细胞后,继续培养12h,用RT-PCR和实时荧光定量RT-PCR法检测角质形成细胞RXRα mRNA表达的改变。结果50~100mJ/cm2NB-UVB单独照射角质形成细胞后,可抑制RXRα mRNA的表达;10-7~10-6mol/L阿维A单独处理后,RXRα mRNA的表达无明显降低,二者联合作用时,对RXRα mRNA的表达抑制作用更强。结论NB-UVB单独作用可明显抑制RXRα mRNA的表达,阿维A单独处理对RXRα mRNA的表达无明显影响,但二者联合作用时对RXRα mRNA的表达存在协同抑制作用。     

三氧化二砷联合维A酸对恶性黑色素瘤细胞株A375的增殖、迁移能力影响及其可能分子机制的探讨简

目的 研究三氧化二砷（As2O3）联合维A酸对恶性黑色素瘤细胞株A375的增殖、迁移能力影响及其可能的分子机制.方法 常规培养黑色素瘤细胞株A375,分为空白对照组（不含药物的DMEM处理）、As2O3组（10μmol/LAs2O3）、全反式维A酸（at-RA）组（10 μmol/L at-RA）、As2O3＋at-RA组（10.μmol/LAs2O3联合10 μmol/L at-RA）.MTT法检测细胞活力,划痕试验检测细胞迁移能力,Western-blot法检测MMP-2、Caspase-2的蛋白水平.结果 ①As2O3＋at-RA组的细胞活力为（35.8±7.3）％,低于As2O3组的（62.4±10.3）％和at-RA组的（59.3±11.3）％,差异有统计学意义（P＜ 0.05）;②As2O3＋at-RA组的迁移能力相对值为（21.3±6.3）％,低于As2O3组的（55.4±9.5）％和at-RA组的（57.1±10.4）％,差异有统计学意义（P＜ 0.05）;③As2O3＋at-RA组的Caspase-2蛋白含量为（274.1±42.4）％,高于As2O3组（175.2±29.4）％和at-RA组（181.4±23.8）％;As2O3＋at-RA组的MMP-2蛋白含量为（36.2±8.2）％,低于As2O3组（64.2±10.4）％和at-RA组（62.7±9.4）％.结论 As2O3和at-RA联合应用能够抑制黑色素瘤细胞株A375的增殖和迁移能力,这一作用可能是通过上调Caspase-2、下调MMP-2来发挥的.     

Comparison between synthetic retinoid CD437 and acitretin inhibiting melanoma A375 cell in vitro

Objective:To investigate the effects of synthetic retinoid CD437 and acitretin on cell proliferation,apoptosis,cycle arrest and Bax/Bcl-2 protein expression of melanoma A375 cell.Methods:MTT assay was used to determine the anti-proliferative effects of CD437 and acitretin on melanoma A375 cell.Flow cytometry was performed to investigate the influence of CD437 and acitretin on cell cycle and cell apoptosis.SABC immunocytochemistry was employed for detection of Bax/bcl-2 protein expressions.Results:10-5 mol/L CD437 was more effective than acitretin in inhibiting proliferation and inducing apoptosis of A375 cell after 24 h treatment,growth inhibiting ratio and apoptosis ratio(58.6%vs43.25% and 28.03%vs17.13%,P < 0.05 respectively).CD437 promoted G0/G1 arrest in melanoma A375 cell,however acitretin could not.CD437 and acitretin could up-regulate the expression of Bax protein and down-regulate the expression of bcl-2 protein(P < 0.05).Conclusion:CD437 is more effective than acitretin in inhibiting proliferation and inducing apoptosis and cycle arrest on A375 cell.CD437 may have more potentialities than acitretin for subsidiary treatment of melanoma.Mitochondrial apoptosis pathway is partially involved in two drugs inducing apoptosis on A375 cell.     

视黄醇受体与肺癌变

一些体外、体内试验证实了类视黄醇(维生素A类似物)在癌变前和癌变中的正面和负面作用。由于在细胞分化、生长、增殖和凋亡方面的多种调节作用,类视黄醇已被用作化学预防剂和抗癌剂。其调节作用是通过两种核受体的相互作用实现的:视黄酸受体和类视黄醇X受体。最新研究逐渐阐明了类视黄醇的功能、信号通路及早期化学预防失败的原因。本文将阐述视黄醇受体在肺癌变方面作用的基本和最新的认识。     

毛蕊异黄酮对人黑色素瘤细胞A375增殖、迁移及侵袭的影响

目的：研究毛蕊异黄酮对人黑色素瘤细胞A375增殖、迁移及侵袭的影响.方法：以人黑色素瘤细胞A375为研究对象,MTT法检测不同浓度的毛蕊异黄酮对A375细胞活性的影响,划痕实验检测A375细胞的迁移,Transwell小室检测A375细胞的侵袭作用;qPCR检测A375细胞中基质金属蛋白酶2（MMP-2）及基质金属蛋白酶9（MMP-9）表达水平.结果：毛蕊异黄酮在6.25 ～ 100 μmol/L浓度内不能抑制A375细胞的增殖,划痕实验及Transwell检测结果显示毛蕊异黄酮可显著抑制A375细胞的迁移及侵袭（P＜0.01）,qPCR结果显示毛蕊异黄酮能抑制A375细胞MMP-2及MMP-9的表达.结论：毛蕊异黄酮在小于100 μmol/L浓度时抑制A375细胞的迁移及侵袭,其机制可能与抑制MMP-2及MMP-9表达有关.     

维甲酸和干扰素联合应用诱导膀胱癌细胞凋亡的实验研究

目的 :研究维甲酸和干扰素联合应用对膀胱癌细胞的生长抑制和诱导凋亡的作用及其可能分子机制。方法 :应用全反式维甲酸 (ATRA)和 9-顺式维甲酸 (9cRA)联合干扰素α 2a(IFNα 2a)作用于 4组膀胱癌细胞 ,运用TUN NEL、FCM、RT PCR及Western等技术观察维甲酸、干扰素单独或联合应用对不同膀胱癌细胞株的生长抑制、诱导凋亡的影响以及核维甲酸类受体、STAT1蛋白等方面的改变。结果 :ATRA和 9cRA对所有膀胱癌细胞的抑制生长和诱导凋亡作用均不明显 ,而IFNα 2a能增强ATRA和 9cRA对膀胱癌的这种作用 ,且联合应用ATRA和IFNα 2a能诱导膀胱癌细胞RARβ和Stat1的表达。结论 :IFNα 2a能协同ATRA和9cRA对膀胱癌细胞生长抑制和凋亡诱导效应 ,上调STAT1基因表达可能是其主要分子机制 ,实验显示了维甲酸和干扰素联合应用治疗膀胱移行细胞癌的协同作用。