可溶性鸟苷酸环化酶激活剂Cinaciguat对高糖环境下人脐静脉内皮细胞的保护作用

目的:研究可溶性鸟苷酸环化酶激活剂Cinaciguat(以下简称CIN)对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用。方法:以33.3 mmol/L的葡萄糖作用于HUVECs细胞复制氧化应激损伤模型。将HUVECs细胞分为正常组、高糖组和高糖+CIN 0.01、0.1、1、10μmol/L组,采用MTT法检测细胞活力,计算细胞存活率;另将HUVECs细胞分为正常组、正常+CIN 1μmol/L组、高糖组、高糖+CIN 1μmol/L组,采用硫代巴比妥酯法、黄嘌呤氧化酶法检测细胞中丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性,采用实时荧光定量聚合酶链反应法检测细胞中细胞间黏附分子1(ICAM-1)、血管细胞黏附分子1(VCAM-1)m RNA的表达。结果:与正常组比较,高糖组细胞存活率降低(P<0.05);与高糖组比较,高糖+CIN 0.01、0.1、1、10μmol/L组细胞存活率升高(P<0.05),且呈浓度依赖性,但高糖+CIN 1μmol/L组与高糖+CIN 10μmol/L组间细胞存活率差异无统计学意义(P>0.05)。与正常组比较,高糖组细胞中MDA含量增加、SOD活性降低、ICAM-1和VCAM-1 m RNA表达增强(P<0.05),但正常+CIN 1μmol/L组细胞上述指标无明显变化(P>0.05);与高糖组比较,高糖组+CIN 1μmol/L组细胞中MDA含量降低、SOD活性增强、ICAM-1和VCAM-1 m RNA表达减弱(P<0.05)。结论:CIN对体外高糖诱导的HUVECs细胞损伤具有保护作用,其机制可能与抑制氧化应激和炎症反应有关。     

高糖对原代人脐静脉内皮细胞的损伤作用及机制研究

目的 观察高浓度葡萄糖对原代人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cell,HUVECs)的损伤作用,并探讨其损伤机制.方法 分别用低浓度葡萄糖(LG组,5.5 mmol/L)和高浓度葡萄糖(HG组,35 mmol/L)培养基培养HUVECs 24、72、120 h,胆囊收缩素八肽(CCK-8)检测高糖对HUVECs存活率影响,荧光探针检测细胞活性氧(ROS)、一氧化氮(NO)水平,蛋白免疫印迹检测Bax、Bcl-2、沉默信息调节因子1(silent mating type informationregulation 2 homolog 1,SIRT1)和一氧化氮合酶(eNOS)的表达.结果 HG组处理72、120 h细胞存活率、Bcl-2均低于LG组,ROS水平、Bax和Bax/Bcl-2高于LG组,差异有统计学意义(P＜0.05).HG组处理HUVECs 24、72、120 hSIRT1和NO相对含量低于LG组,处理72、120 h eNOS低于LG组(P＜0.05).结论 高糖可使HUVECs存活率下降,增强细胞内氧化应激反应,提高Bax/Bcl-2比值,可能与抑制SIRT1-eNOS通路使NO生成减少有关.     

PPARγ介导卡托普利改善高糖诱导血管内皮细胞胰岛素抵抗的作用

目的研究卡托普利(captopril,Cap)对高糖(high glucose,HG,33 mmol·L-1)诱导的人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelium cells,HUVECs)胰岛素抵抗(insulin resistance,IR)的作用及机制。方法首先观察Cap对HG(33 mmol·L-1)诱导的HUVECs IR的改善作用。实验随机分为5组,即正常对照(Control)组、IR组、IR+CapⅠ(1×10-6mol·L-1)组、IR+CapⅡ(1×10-5mol·L-1)组、IR+CapⅢ(1×10-4mol·L-1)组。其次证实Cap改善HG(33mmol·L-1)诱导HUVECs IR的作用是由PPARγ介导。实验随机分为6组,即Control组、IR组、IR+Cap(1×10-5mol·L-1)组、PPARγ抑制剂GW9662(PI,1.0μmol·L-1)组、IR+PPARγ抑制剂(IR+PI,1.0μmol·L-1)组、IR+Cap+PPARγ抑制剂(IR+Cap+PI,1.0μmol·L-1)组,除Control组和PI组外,所有各组先用含33 mmol·L-1葡萄糖的DMEM培养48 h,Cap各组再加不同浓度的Cap处理4 h,最后胰岛素(100 nmol·L-1)处理30 min,抑制剂组再加抑制剂(1.0μmol·L-1)处理1 h,最后进行指标检测。结果 IR组NO水平明显降低、ET-1含量明显升高,提示细胞已产生IR,但PPARγmRNA和蛋白表达水平与Control组相比差异无统计学意义(P>0.05);Cap呈浓度依赖性逆转HG诱导NO和ET-1水平的改变,明显增加磷酸化PPARγ(PPPARγ)水平,说明其可明显改善HG诱导的IR,但对PPARγmRNA和蛋白表达水平无明显影响(vs IR,P>0.05);加PI处理后,Cap改善IR的作用完全取消,提示Cap改善IR的作用是由PPARγ介导。结论Cap可通过PPARγ介导改善高糖所致血管内皮细胞IR,其机制可能与PPARγ表达水平无关,而与PPARγ激活有关。     

芍药内酯苷对高糖诱导的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 研究芍药内酯苷对高糖损伤的人脐静脉内皮细胞（HUVECs）的保护作用及机制.方法 采用33mmol·L-1的高糖培养基建立HUVECs损伤模型,并在造模前给予不同浓度的芍药内酯苷进行预保护,采用MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,采用试剂盒检测细胞中内源性一氧化氮合酶（eNOS）和半胱天冬酶-3（Caspase-3）活性以及培养液中一氧化氮（NO）和乳酸脱氢酶（LDH）含量.结果 芍药内酯苷能够剂量依赖性增强细胞活力,降低Caspase-3活性和细胞凋亡率（P＜0.05）,并能增强eNOS的活性和NO的释放量（P＜0.05）.结论 芍药内酯苷对高糖诱导的HUVEs损伤具有保护作用,其机制可能与促进eNOS活性提高、NO释放量增加和抑制Caspase-3活性有关.     

蛹虫草提取物对高糖诱导内皮细胞衰老的影响

目的：探讨蛹虫草乙酸乙酯提取物（CME）对高糖诱导人脐静脉内皮细胞（HUVECs）衰老的影响。方法：用高糖（40mmol／L）诱导建立HUVECs衰老体外模型,以冬虫夏草提取物（CSE）（50μg／mL）为阳性对照,观察CME（12．5～100μg／mL）对内皮细胞衰老的干预作用。四甲基偶氮唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;SA—β-半乳糖酐酶（SA—β—gal）染色法检测细胞衰老特异性的SA—β—gal活性;流式细胞术检测细胞周期分布和细胞内活性氧（ROS）含量。结果：经高糖干预24、48、72h后,HUVECs增殖活性OD值明显低于对照组;而且在高糖孵育96h后,SA—β-gal染色阳性细胞率明显增加;孵育48h后,处于G0／G1期细胞的百分率和ROS相对水平明显增加（P〈0．01）。与高糖组相比,CME（25～50μg／mL）孵育48和72h后细胞OD值显著提高（P〈0．05）;CME（12．5～100μg／mL）孵育96h后SA-β-gal染色阳性细胞率显著降低（P〈0．01）;孵育48h后Go／G1期的细胞百分率（P〈0．01）、细胞内ROS水平显著降低（P〈0．05）;CME25、50／μg／mL效果优于CME12．5、100〉g／mL（P〈0．05）,且与CSE50ptg／mL作用相近（P〉0．05）。结论：蛹虫草乙酸乙酯提取物可促进内皮细胞生长增殖,可能与其降低细胞内ROS水平,减轻细胞氧化应激损伤有关,从而减轻内皮细胞衰老。     

虫草素对高糖诱导脐静脉内皮细胞凋亡的保护作用研究

目的探讨虫草素对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)的保护作用及其机制。方法原代培养HUVECs,实验分为空白对照组、模型组、对照组、抑制剂A组、抑制剂B组、干预A组、干预B组和低、中、高浓度虫草素组。空白对照组给予正常糖浓度(5.5 mmol·L^-1);模型组给予40 mmol·L^-1高糖孵育48 h;对照组给予10μmol·L^-1白藜芦醇+高糖;低、中、高浓度虫草素组分别给予1,10,20μmol·L^-1虫草素+高糖;抑制剂A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+高糖;抑制剂B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+高糖;干预A组给予1μmol·L^-1 CLI-095+20μmol·L^-1虫草素+高糖;干预B组给予100 nmol·L^-1西罗莫司+20μmol·L^-1虫草素+高糖。用5-溴脱氧尿嘧啶核苷-酶联免疫吸附法检测光密度值观察细胞增殖能力,用Annexin V-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶流式细胞术检测细胞凋亡率,用实时荧光定量聚合酶链反应检测沉默信息调节因子2同源蛋白1(SIRT1)mRNA的表达水平,用Western Blot检测SIRT1蛋白的表达水平。结果模型组、对照组和低、中、高浓度虫草素组以及干预A组、干预B组的增殖能力(光密度值)分别为(1.38±0.11),(1.86±0.06),(1.44±0.03),(1.60±0.05),(1.70±0.08),(1.85±0.04)和(1.85±0.06),细胞凋亡率分别为(6.72±1.00)%,(0.56±0.37)%,(3.86±0.16)%,(2.64±0.23)%,(2.16±0.15)%,(1.57±0.28)%和(0.86±0.20)%,SIRT1 mRNA表达相对倍数分别为(0.24±0.05),(2.97±0.41),(0.62±0.07),(1.37±0.18),(2.14±0.35),(3.45±0.76)和(3.02±0.79)。模型组、对照组、高浓度虫草素组、抑制剂B组和干预B组的SIRT1蛋白表达分别为(0.82±0.11),(1.14±0.29),(0.98±0.13),(0.74±0.19)和(1.30±0.20)。对照组和高浓度虫草素组的上述指标与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预A组和干预B组的细胞增殖力及SIRT1 mRNA表达水平与高浓度虫草素组比较差异均有统计学意义(均P<0.05)。干预B组细胞凋亡率与高浓度虫草素组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。干预B组SIRT1蛋白表达与抑制剂B组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论虫草素可能通过促进SIRT1表达,从而起到保护高糖损伤的内皮细胞作用。     

溶血卵磷脂对血管内皮细胞增殖及凋亡的影响

目的观测溶血卵磷脂(LPC)对血管内皮细胞增殖及凋亡的影响,从而探讨动脉硬化发生的机制。方法取体外培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs),在含不同浓度LPC(5、10、20mg/L)的培养基中分别培养6、12、24、48h,用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法、流式细胞仪、荧光显微镜观测血管内皮细胞增殖及凋亡的变化。结果与正常对照组比较,LPC抑制内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,且其作用呈时间-效应、浓度-效应依赖关系,但随着LPC浓度增加,细胞凋亡增加的同时细胞死亡比例也增加。结论LPC抑制血管内皮细胞增殖,促进细胞凋亡,可能是其致动脉粥样硬化机制之一。     

波生坦对高糖诱导静脉内皮细胞血管表达的影响

目的研究波生坦对高糖诱导静脉内皮细胞血管表达的影响。方法提取健康剖腹产孕妇脐静脉内皮细胞,在体外人工培养、分化、制成细胞悬液并培养。将内皮细胞随机分为3组:正常组、模型组、实验组。正常组加入正常糖浓度5.5 mmol·L^-1;模型组加入糖浓度30 mmol·L^-1;实验组在模型组的基础上加入波生坦0.1 mmol·L^-1,各组培养24 h。用荧光实时定量PCR法检测人体静脉内皮细胞血管的内皮生长因子(VEGF)、转录活化因子3(STAT3)、Toll样受体4(TLR4)水平,用免疫印迹法检测人体静脉内皮细胞的磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶(pE RK1/2)表达水平。结果模型组加入高糖0,12,24 h后,VEGF水平分别为0.14±0.02,0.25±0.04,0.41±0.07,pE RK1/2水平分别为0.50±0.07,1.27±0.24,1.92±0.16,加糖24 h后与加糖前比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。加入药物24 h后,实验组、模型组和正常组VEGF水平分别为0.07±0.01,0.41±0.07,0.26±0.03;这3组的TLR4分别为0.70±0.07,1.94±0.32,1.28±0.12;这3组的p ERK1/2分别为0.66±0.05,1.92±0.16,0.92±0.02,模型组与正常组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论波生坦可以有效减少高糖诱导静脉内皮细胞血管VEGF的表达,其机制可能与波生坦抑制ERK信号通路有关。     

Apelin-13对高糖诱导的功能障碍血管内皮的作用探讨

目的 探讨Apelin-13对高糖环境下人脐静脉内皮细胞(HUVECs)是否具有保护作用.方法 实验Ⅰ,CCK-8法检测48h后HUVECs在不同糖浓度环境下的增殖活性.实验Ⅱ,实验分组为空白对照组、模型组、实验组,分别培养16、24、48 h,CCK-8检测细胞增殖活性.实验Ⅲ,实验分组为空白对照组、模型组、实验组,...     

银杏内酯B抑制高糖诱导内皮细胞凋亡及机制研究

目的探讨银杏内酯B对高糖诱导的内皮细胞凋亡的影响及相关的分子机制。方法使用脐静脉血管内皮细胞作为细胞模型,分为对照组、高糖组、银杏内酯B处理组。用Transwell实验检测内皮细胞迁移,AnnexinⅤ试剂盒检测细胞凋亡,荧光试剂盒检测活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,Western blot检测Bax,Bcl-2,caspase-3的表达以及p53的磷酸化。结果高糖(30 mmol·L~(-1))处理组内皮细胞迁移数量明显降低,迁移率为(66.6±15.6)%,而银杏内酯B(0.6 g·L~(-1))处理增加了内皮细胞的迁移数量,迁移率为(94.8±11.4)%。高糖处理导致内皮细胞ROS水平增高2.75倍,与高糖处理组比较,0.6 g·L~(-1)银杏内酯B完全抑制了高糖诱导的ROS产生。流式细胞仪分析表明,高糖刺激内皮细胞凋亡率为(53.8±2.6)%,银杏内酯B处理组内皮细胞凋亡率为(44.0±3.1)%。对凋亡相关蛋白的分析表明,高糖组Bax、caspase-3表达增加,Bcl-2表达降低,银杏内酯B处理抑制了Bax、caspase-3表达,并增加了Bcl-2表达。此外,高糖处理增加了内皮细胞p53表达及磷酸化,而银杏内酯B抑制高糖刺激的p53活化。结论银杏内酯B能抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,改善内皮细胞迁移功能,对高糖引起的内皮细胞损伤具有保护作用。     

高糖对人脐静脉内皮细胞TLR4表达的影响

目的观察高糖对人脐静脉内皮细胞TLR4表达的影响,比较加用脂多糖后不同浓度的高糖培养下对人脐静脉内皮细胞TLR4表达水平变化。方法将体外培养人脐静脉内皮细胞株分对照组（5mmol/LGS）、高糖组（10mmol/LGS、20mmol/LGS、40mmol/LGS）、高糖＋LPS组（10mmol/LGS、20mmol/LGS、40mmol/LGS/＋100ng/LLPS）,培养24h后,用ELISA法检测各组上清IL-6水平,实时定量PCR检测各组细胞TLR4及MyD88基因表达水平。结果 （1）高糖培养能促使人脐静脉内皮细胞产生IL-6水平增加,具有统计学意义（P〈0.05）,在LPS诱导下高糖能进一步促进该细胞产生IL-6,具有统计学意义（P〈0.05）。（2）随着葡萄糖浓度增高,从5mmol/L到20mmol/L,人脐静脉内皮细胞产生的IL-6逐渐增多,具有统计学意义（P〈0.05）,但再增高糖浓度（到40mmol/L）,该细胞产生IL-6水平不再继续增加（P〉0.05）。（3）在LPS存在的前提下,高糖能诱导人脐静脉内皮细胞TLR4和MyD88基因表达增加,具有统计学意义（P〈0.05）,但仅高糖培养对该细胞TLR4和MyD88基因表达无影响（P〉0.05）。结论高糖能刺激人脐静脉内皮细胞炎症反应,使炎症因子IL-6产生增多,但对TLR4和MyD88表达无明显增高;而高糖联合LPS培养能诱导人脐静脉内皮细胞TLR4和MyD88表达上调,说明高糖在LPS存在前提下可能激发TLR4信号通路。     

波动性高糖对人脐静脉内皮细胞炎症因子表达的影响

目的研究体外波动性和持续性高糖对人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cells,HUVEC）炎症因子表达的影响。方法分别在正常葡萄糖（5.5 mmol/L,NG）、持续性高糖（25 mmol/L,PHG）、波动性高糖（5.5 mmol/L和25 mmol/L葡萄糖每24 h交替,OHG）和波动性高渗环境（不加入葡萄糖,加入不同量甘露醇控制渗透压与波动性高糖组一致,OC）中连续培养HUVEC 7d。采用ELISA法和实时定量PCR法分别检测HUVEC在不同血糖环境中白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）和细胞间黏附因子-1（ICAM-1）中蛋白和mRNA的表达。结果与NG组和OC组比较,发现持续性高糖可以显著升高HUVEC的IL-6、TNF-α和ICAM-1蛋白表达（P〈0.05）,而波动性高糖可以进一步放大这种差异（P〈0.05）。在mRNA水平,PHG组较NG组和OC组显著增加IL-6、TNF-α和ICAM-1表达（P〈0.05）,而这一趋势在波动性高糖组最为明显（P〈0.05）。结论持续性高糖可以显著增强HUVEC炎症反应,而波动性高糖进一步放大这一效应。     

吡格列酮对高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响

目的利用体外培养的乳鼠心肌成纤维细胞,观察噻唑烷二酮(TZD)类药物吡格列酮对高浓度葡萄糖与高浓度胰岛素共同诱导的心肌成纤维细胞增殖的影响,进一步推测TZD类药物对糖尿病并发心肌肥厚的可能作用机制。方法以培养的乳鼠心肌成纤维细胞为模型分组给药后。利用结晶紫染色法测定细胞的数量;利用[3H]thym id ine标记法测定细胞DNA的合成;利用流式细胞仪分析细胞周期。结果吡格列酮可以抑制高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞数量、DNA合成及S+G2+M期细胞的百分比增加,并呈一定的剂量依赖性。结论吡格列酮能有效抑制高糖高胰岛素诱导的心肌成纤维细胞的增殖,这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

川芎嗪对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞增殖的影响

目的 观察川芎嗪对高糖诱导的人视网膜血管内皮细胞（HRCECs）增殖的影响。方法 将HRCECs细胞分为对照（生理盐水）组、模型（25 mmol/L葡萄糖）组和川芎嗪低、中、高浓度（50、100、200 μmol/L）组,培养48 h后,MTT细胞毒实验检测细胞增殖变化,流式细胞技术检测细胞周期,ELISA法检测血管内皮生长因子（VEGF）表达。结果 与对照组比较,高糖对HRCECs细胞增殖、分裂（M）期比例、上清VEGF浓度均具有显著促进作用（P<0.05、0.01）;与模型组比较,低、中、高浓度川芎嗪对高糖诱导的HRCECs细胞增殖、分裂（M）期比例、上清VEGF浓度均发挥显著抑制作用（P<0.05、0.01）,且呈浓度相关性。结论 川芎嗪可能通过抑制高糖诱导的HRCECs细胞VEGF高表达,阻滞细胞周期,发挥抑制HRCECs细胞增殖的作用。     

帕唑帕尼对甲状腺癌细胞和血管内皮细胞增殖的影响及其作用机制

目的 研究新型酪氨酸激酶抑制剂帕唑帕尼对甲状腺癌细胞株SW579和血管内皮细胞株HUVEC增殖的影响及作用机制.方法 将SW579和HUVEC暴露于不同浓度（1、2、4、8和16 μmoL/L）的帕唑帕尼至72 h,无药物处理的细胞作为对照.采用细胞活度测定、图像分析技术及分裂细胞荧光免疫染色观察评价帕唑帕尼对细胞增殖的影响,应用流式细胞仪进行细胞周期时相分析.结果 细胞活度测定显示,帕唑帕尼对SW579和HUVEC细胞的生长增殖均有明显的抑制作用,并呈浓度依赖性及时间依赖性,其半数抑制浓度（IC50）分别约为2和4μmol/L.图像分析显示,在IC50作用下,帕唑帕尼使两种细胞的细胞密度降低,分裂指数下降.帕唑帕尼作用48 h时,SW579细胞分裂指数（0.9％）明显低于其对照细胞（2.2％）,差异有统计学意义（P＜0.01）;HUVEC细胞分裂指数（1.9％）亦明显低于其对照细胞（4.0％）,差异有统计学意义（P＜0.01）.细胞周期时相分析表明,帕唑帕尼可使SW579和HUVEC发生细胞周期休止,分别休止于G1期和S期.帕唑帕尼作用24、48 h时,SW579在G1期的比例均明显高于其对照组细胞[（60.4±2.2）％比（49.2±1.6）％,（70.4±1.6）％比（58.6±3.3）％],差异有统计学意义（P＜0.01）;HUVEC细胞在S期的比例均明显高于其对照组细胞[（47.3±2.7）％比（39.5±0.6）％,（43.5±1.6）％比（28.8±4.2）％],差异有统计学意义（P＜0.01）.结论 帕唑帕尼对甲状腺癌细胞和血管内皮细胞的增殖均有明显的抑制效应,其作用是藉细胞周期休止作用而实现,但在两种细胞细胞周期休止时相不同.     

高糖环境下P物质活化Akt通路促进间充质干细胞增殖和成血管内皮细胞分化的研究

目的　揭示高糖环境下P物质（SP）对人骨髓间充质干细胞（BMSC）增殖、迁移及成血管内皮细胞分化的影响,为其应用于治疗糖尿病皮肤溃疡等并发症提供依据。方法　细胞高糖模型分为高糖对照组、高糖SP组和高糖蛋白激酶B（Akt）抑制剂组;正常环境培养的BMSC为正常对照组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Transwell细胞小室迁移实验检测BMSC迁移数目;各组BMSC进行成血管内皮细胞分化实验,酶联免疫吸附试验检测成血管内皮细胞分化后各组BMSC的CD31蛋白含量;基质胶网眼形成实验检测成血管形成能力。Western blot检测各组BMSC的Akt和磷酸化Akt（p-Akt）蛋白表达情况。结果　与正常对照组比较,高糖对照组吸光度（A450）值、迁移数目、CD31蛋白含量、网眼数目、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均降低;与高糖对照组比较,高糖SP组A450值、迁移数目、CD31蛋白含量、网眼数目、Akt和p-Akt蛋白相对表达量均升高;与高糖SP组相比,高糖Akt抑制剂组上述指标均降低（P＜0.01）。结论　高糖环境下,SP可活化Akt通路促进BMSC增殖、迁移和血管内皮细胞分化。     

吡格列酮对波动性高糖处理的人脐静脉内皮细胞脂联素受体表达的影响

目的探讨吡格列酮对波动性高糖处理的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)脂联素受体(AdipoR1和AdipoR2)表达的影响。方法将HUVEC在波动性高糖培养液(5.5、20mmol.L-1每隔8h轮换1次)中培养5d后,随机分为阴性对照组、吡格列酮处理组(10、1与0.1μmol.L-1)和阳性对照组。应用实时定量PCR方法检测脂联素受体mRNA表达的改变。结果与波动性高糖组比较,吡格列酮处理后HU-VECAdipoR1表达增高。当吡格列酮浓度增至1μmol.L-1以上时,AdipoR1mRNA表达增加呈现差异。各组细胞Adi-poR2表达量间差别无显著性。结论AdipoR1很可能是胰岛素增敏剂吡格列酮改善内皮胰岛素敏感性的作用机制之     

人硫氧还蛋白1在大肠杆菌中的重组表达及其对高糖导致的人脐静脉内皮细胞损伤的保护作用

目的 克隆人硫氧还蛋白1(hTRX1)基因并构建其原核表达载体,获得重组人硫氧还蛋白1(rhTRX1),评价rhTRX1对高糖导致的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用.方法 采用逆转录PCR方法扩增hTRX1基因片段,插入pET22b(+)质粒并转化大肠杆菌Rosetta-gami(2),获得工程菌Rosetta-gami(2)-pET22ab(+)/hTRX1.用SDS-PAGE电泳和Western blot鉴定重组蛋白的正确性,用镍亲和层析纯化重组蛋白.采用高糖制备HUVEC损伤模型,MTT比色法检测HUVEC的存活率,生化方法测定HUVEC中乳酸脱氢酶(LDH)的外漏率以及细胞上清液中一氧化氮(NO)的水平.结果 构建的工程菌及其产生的重组蛋白rhTRX1正确.与正常对照组比较,高糖损伤组HUVEC的存活率降低、LDH外漏率明显升高,NO的水平明显地降低.不同剂量rhTRX1处理组HUVEC的存活率升高、LDH的外漏率明显降低,NO的水平明显地升高.结论 成功克隆并在大肠杆菌中表达rhTRX1、获得结构正确的rhTRX1,rhTRX1对高糖诱导的HUVEC损伤具有保护作用.     

吡格列酮对高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大的影响

目的　利用体外培养的乳鼠心肌细胞 ,观察吡格列酮对高浓度葡萄糖与高浓度胰岛素共同诱导的肥大心肌细胞的影响 ,进一步推测吡格列酮对糖尿病并发心肌肥大的可能作用及作用机制。方法　以培养的乳鼠心肌细胞为模型分组给药后 ,用Lowrys法测心肌细胞的蛋白质含量 ;用 [3 H]leucine标记法测定心肌细胞蛋白的合成 ;利用计算机图像分析系统测心肌细胞的体积 ;用显微镜目镜计数心肌细胞搏动的频率。结果　 10 μmol·L-1浓度的吡格列酮在对高糖高胰岛素诱导的肥大心肌细胞的蛋白含量、蛋白合成及体积均有显著的抑制作用。其抑制肥大的效果比维拉帕米更为明显 ;同时观察到吡格列酮同维拉帕米一样有抑制心肌细胞搏动的作用。结论　吡格列酮能有效抑制高糖高胰岛素诱导的心肌细胞肥大。这种作用可能是通过作用于PPARγ来实现的。     

3,4,5,6-Tetrahydroxyxanthone prevents vascular endothelial cell apoptosis induced by high glucose

Apoptosis of endothelial cells may be an important risk factor contributing to the incidence of vascular complications in diabetes. In the present study, we tested the effect of 3,4,5,6-tetrahydroxyxanthone, a synthetic xanthone derivative, on apoptosis induced in human umbilical vein endothelial cells (HUVEC) by a high glucose concentration. Cell apoptosis was detected using DNA ladder formation and flow cytometric techniques. The expression of Bcl-2 protein was analysed using flow cytometric techniques. Lactate dehydrogenase (LDH) activity and malonyldialdehyde (MDA) content in the medium were measured. Cell viability was assayed by the 3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) method. Exposure of HUVEC to a high glucose concentration (30 mM) for 48 h markedly increased LDH release and MDA content in the medium and induced apoptosis and Bcl-2 protein expression in HUVEC. Pretreatment with 3,4,5,6-tetrahydroxyxanthone (1, 3 or 10 M) or probucol (10 M) significantly decreased the level of LDH and MDA in the medium, reduced apoptosis and increased the expression of Bcl-2 protein in HUVEC. These results suggest that 3,4,5,6-tetrahydroxyxanthone inhibits high-glucose-induced endothelial cell apoptosis by increasing Bcl-2 protein expression in HUVEC.