胞外调节蛋白激酶在糖尿病肾病系膜细胞中的信号传递作佑

目的研究胞外调节蛋白激酶(ERK)在糖尿病大鼠肾脏中的表达及意义,并探讨其激活的机制.方法将大鼠肾脏系膜细胞进行体外培养,用激光共聚焦显微镜研究高糖、血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)对系膜细胞ERK活性的影响.用链脲佐菌素(STZ)复制糖尿病模型,于2周时处死大鼠,取肾进行ERK免疫组化染色,检测其在肾脏中的表达.结果体外培养的正常细胞中,ERK定位于胞浆,当AngⅡ和高糖作用于系膜细胞后,可使ERK从胞浆转移至胞核.糖尿病大鼠肾小球ERK表达较正常大鼠明显增强(P＜0.05).结论高糖和AngⅡ可激活系膜细胞ERK,ERK参与了糖尿病肾病的发生. 关健词胞外调节蛋白激酶;糖尿病肾病;高糖;血管紧张素Ⅱ     

细胞外信号调节蛋白激酶在梗阻性肾组织中的表达及其意义

目的 探讨细胞外信号调节蛋白激酶（ERK）在梗阻性肾病的分子发病机制中作用。方法 应用免疫组化方法检测ERK和增殖细胞核抗原（PCNA）在47份梗阻性肾组织中表达，并分析ERK表达与梗阻肾纤维化之间相关关系。结果 梗阻肾的肾小管和间质中ERK表达均高于正常的，但仅间质中两者表达差异有显著性（P〈0．05）。间质中ERK表达与梗阻肾纤雏化程度密切正相关（P〈0．05），而肾小管中两者相关差异无显著性（P〉0．05）。梗阻肾的肾小管和间质中ERK强表达者的PCNA指数均分别显著高于ERK弱表达者（P〈0．01）。结论 ERK活性增强促进细胞增殖增多、从而参与梗阻挂肾病的发病过程，尤其在肾纤维化过程中起着重要作用。     

磷酸化细胞外信号调节蛋白激酶加重糖尿病大鼠脑缺血性损伤

目的探讨高血糖加重脑缺血性损伤的分子机制。方法采用大鼠全脑缺血模型,通过免疫组化、末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP原位切口末端标记方法和Western blot技术,对比研究Streptozotoein诱导的糖尿病大鼠脑缺血时神经元细胞外信号调节蛋白激酶1／2（ERK1／2）磷酸化和神经元凋亡的关系。结果糖尿病组脑缺血30min和再灌注1、3、6h后,扣带皮质和海马CA3区ERK1／2阳性细胞数和神经元凋亡明显高于正常血糖组（P〈0．05）。ERK1／2抑制剂U0126可明显减少ERK1／2的磷酸化和凋亡神经元的数量。Western blot分析可见,在缺血脑组织中磷酸化ERK1／2明显增高,再灌注3和6h糖尿病组显著高于正常血糖缺血组（P〈0．05）。结论糖尿病高血糖加重缺血性脑损伤与MAPK家族激活有关,特别是ERK1／2参与了脑细胞的损伤。     

蛋白激酶C-βⅠ,βⅡ在糖尿病肾病小鼠肾组织中的分布、表达及替米沙坦对其影响

目的 探讨蛋白激酶C（PKC）-βⅠ,βⅡ在糖尿病肾病（DN）小鼠肾脏中各部位的分布、表达以及血管紧张素受体拮抗剂替米沙坦对其影响。方法 18只小鼠随机分为正常组、DN组和治疗组（TG组）。采用半定量免疫荧光技术检测肾小球内PKC-βⅠ、βⅡ,转化生长因子（TGF-β1）和血管内皮细胞生长因子（VEGF）的表达情况,激光共聚焦及免疫印迹技术检测PKC-βⅠ,βⅡ在肾组织中的分布与表达。结果 与正常组相比,DN小鼠近曲小管上皮细胞腔膜侧PKC-βⅠ,βⅡ的表达较强,而皮质和内髓集合管上皮细胞PKC-βⅡ的表达消失;DN小鼠肾皮质和外髓PKC-β1的表达量较多（P〈0．01）,而肾皮质内PKC-βⅡ的表达则明显较低（P〈0．01）。半定量免疫荧光进一步表明,PKC-βⅠ、TGF-β1和VEGF在DN小鼠肾小球内的表达量明显高于正常组（分别上调0．48、0．20和0．24倍,均P〈0．01）,而PKC-βⅡ的表达则下调0．27倍（P〈0．05）,其中PKC．[31的表达与TGF．[31呈正相关（r=0．649,P=0．030）而与VEGF无关（r=0．387,P=0．079）,PKC-βⅡ的表达与TGF-β1、VEGF均无关。替米沙坦能部分纠正上述变化。结论 （1）DN小鼠肾组织中PKC-βⅠ、βⅡ的表达和分布发生变化,提示它们参与DN近曲小管功能改变,其中PKC-β1可能通过影响肾小球TGF-β1的表达参与DN肾小球的肥大。（2）DN时肾素血管紧张素系统的活性增加可能是PKC-βⅠ,βⅡ异常激活的重要原因,替米沙坦可能通过部分改善PKC-βⅠ,βⅡ的表达来实现其肾脏保护作用。     

系膜细胞外基质与糖尿病肾病

细胞外基质进行性积聚是导致糖尿病肾病发生、发展的重要病理基础.通过对细胞外基质成分及代谢相关途径包括糖代谢紊乱引发的葡萄糖转运蛋白表达、蛋白激酶C通路激活、糖激化终末产物及多元醇通路激活;细胞因子影响,以系统阐明糖尿病肾病发病过程中影响系膜细胞外基质的机制.     

血管紧张素受体拮抗剂在糖尿病肾病治疗中的作用

糖尿病肾病的防治是糖尿病慢性并发症防治研究的一项重要课题.研究显示,血管紧张素受体拮抗剂能够降低尿蛋白排泄量,延缓肾动脉硬化及肾脏纤维化的进展,对肾脏具有显著的保护作用.目前认为,这一作用是通过多种途径实现的,除降低血压带来的益处外,还存在非血流动力学方面的作用,如抑制细胞外基质在肾脏局部的积聚、下调肾脏皮质转化生长因子-β的表达、减少肾脏细胞凋亡、改善肾组织的高代谢状态和抗过氧化酶活性等.近年来,一些重要的大型临床试验如RENAAL研究等证明了血管紧张素受体拮抗剂在糖尿病肾病防治中的地位与作用.     

血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂洛沙坦对糖尿病大鼠肾脏蛋白激酶C活性的影响

目的观察血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)受体拮抗剂洛沙坦对糖尿病大鼠肾组织蛋白激酶C(PKC)活性的影响,初步探讨AngⅡ和PKC在糖尿病肾病中的关系.方法雄性Wister大鼠经尾静脉注射链脲佐菌素造成糖尿病模型后,随机分为未处理组(10只)和洛沙坦治疗组(9只),洛沙坦以灌胃给药,剂量为50mg     

细胞外信号调节激酶在脑缺血损伤中的研究进展

脑缺血是危害人类健康的常见病、多发病,因而一直受到许多科学工作者重视,近年来关于脑缺血的发病机制、病理变化及其防治的实验研究越来越多。研究发现不同脑区的神经元对缺血有不同的敏感性。缺血性脑损伤的分子机制主要包括ATP的耗竭、钙离子移位、兴奋性氨基酸(excitatory amino acids,EAA)的释放、自由基形成等。最近,一种与蛋白激酶C(protein kinasec,PKC)相关在细胞信号传导通路中起重要作用的蛋白激酶——丝裂原激活蛋白激酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)又受到注目,其家族成员成为细胞信号传导研究的热点。本文就细胞外信号调节激酶在脑缺血性损伤中的研究进展进行文献复习,现简要综述如下。     

糖尿病肾病与丝裂原活化蛋白激酶信号级联反应的相关性研究

糖尿病肾病是导致终末期肾病的主要原因。丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路,广泛存在各种真核细胞中,可将胞外刺激信号传递给胞核,是细胞应激和损伤反应的主要信号通路。该通路在糖尿病时被激活,与糖尿病肾病发病机制密切相关,本文就近年来该通路与糖尿病肾病(DN)关系的研究进展予以综述。     

蜕皮甾酮对高糖培养大鼠肾小球系膜细胞增殖及其细胞外基质含量的影响

目的：观察蜕皮甾酮对高糖环境下大鼠肾小球系膜细胞（MCs）增殖、细胞外基质的影响。方法：体外培养大鼠MCs细胞株,分低糖组、高糖组、高糖＋蜕皮甾酮组（EDS组）,分别作用12、24、48h,MTT法检测细胞增殖活力,ELISA法检测细胞上清中FN的含量。结果：与低糖组比较,高糖组12h、24h、48h MCs增殖显著增快（P〈0.01）,FN含量明显增加（P〈0.05）;与低糖组比较,EDS在浓度〉1×10-5mol/L时MCs增殖显著减慢（P〈0.01）;与高糖组比较,EDS 1×10-6mol/L组各时间点及1×10-7mol/L组24h、48h MCs增殖显著减慢（P〈0.05或P〈0.01）,EDS 1×10-6mol/L组各时间点FN含量均有降低（P〈0.05或P〈0.01）;EDS 1×10-10、1×10-8mol/L组各时间点FN含量差异无统计学意义（P〉0.05）。结论：①蜕皮甾酮在浓度〉1×10-5mol/L时对MCs有明显的细胞毒性作用。②蜕皮甾酮可抑制高糖诱导的MCs增殖。③蜕皮甾酮能减少高糖培养大鼠MCs细胞外基质的增加。     

细胞外信号调节激酶在大鼠胰腺纤维化中作用的研究

目的研究细胞外信号调节激酶（ERK1/ERK2）在大鼠胰腺纤维化中的作用。方法通过对大鼠胰管内注射2%三硝基苯磺酸（TNBS）的方法制备大鼠胰腺纤维化模型。采用免疫组化技术检测第四周胰腺组织中α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、血小板衍化生长因子（PDGF）、磷酸化细胞外信号调节激酶1、2（P-ERK1/P-ERK2）的含量。结果 PDGF、P-ERK1/P-ERK2、α-SMA在模型组的表达均强于对照组（P〈0.01）。α-SMA与PDGF、P-ERK1、P-ERK2定量分析成正相关（P〈0.05）。结论 ERK1/ERK2信号传导通路在慢性胰腺炎发生纤维化过程中具有重要作用。     

尿微量白蛋白测定对早期诊断糖尿病肾病的价值

目的　研究尿微量白蛋白测定对早期诊断糖尿病肾病的意义。方法　采用改良免疫凝集比浊法检测12 3例 2型糖尿病患者 2 4小时尿微量白蛋白 (MA)、免疫球蛋白 F(Ig G) ,并与 45例正常人对照。结果　常规尿蛋白正常的 2型糖尿病患者尿 MA和 Ig G明显高于正常对照组 (P<0 .0 1) ,常规尿蛋白异常的 2型糖病患者尿 MA和 Ig G又显著高于常规尿蛋白正常的糖尿病患者 (P<0 .0 1)。结论　尿微量白蛋白及免疫球蛋白 G测定可作为早期诊断糖尿病肾病的敏感指标     

胰岛素对糖尿病大鼠肾小球蛋白激酶C表达的调控

目的：探讨胰岛素对糖尿病(DM)大鼠不同阶段肾小球蛋白激酶C(PKC)同工酶表达变化的影响。方法：将实验动物随机分为正常对照组、STZ—DM模型组、胰岛素治疗组2周、4周，采用免疫组化方法检潮PKC同工酶的表达变化情况。结果：胰岛素明显抑制了2周、4周组DM大鼠肾小球PKCα的表达以及4周组DM大鼠PKCβⅡ的表达；PKCβⅠ、ε表达无明显变化。结论：胰岛素对DM大鼠不同阶段肾小球PKC各同工酶表达变化的影响不同。胰岛素治疗可以延缓糖尿病肾病(DN)的发生、发展。     

蛋白激酶C对2型糖尿病大鼠肾组织中MMP-9表达的影响

目的：探讨基质金属蛋白酶-9（MMP-9）在2型糖尿病肾病（2-DN）大鼠肾组织中的表达及况及磷酸肌酸激酶（PKC）对其袁迭的影响。方法：Wistar大鼠喂以高糖高脂饲料加链脲佐菌素（STZ）建立的2型糖尿病大鼠模型。将Wistar大鼠随机分为正常对照组、模型对照纽、怀牛膝治疗组。12周后，观察尿素氮（BUN）、肌酐（BCr）等相关生化指标。HE染色观察肾组织病理变化，并以逆转录PCR检测肾脏MMP-9表达，采用ELISA方法检测PKC活性。结果：结果：怀牛膝能够显著地改善2-DN大鼠的肾脏功能。模型大鼠肾脏MMP-9mRNA表达上调，PKC活性升高。（P〈0．01），而怀牛膝治疗组降低NMP-9mRNA表达，PKC活性（P〈0．01）。怀牛膝还明显减轻2～DN大鼠肾组织病理变化。结论：怀牛膝可通过抑制肾脏PKC活性，使MMP-9的表达下调，而发挥保护2-DN大鼠肾脏功能的作用。推测PKC的活性状况可影响DN细胞外基质降解过程。     

黄葵胶囊联合前列地尔治疗糖尿病肾病的临床观察

目的：探讨黄葵胶囊联合前列地尔治疗糖尿病肾病的疗效及安全性。方法78例糖尿病肾病患者随机分成对照组和治疗组。两组均给予糖尿病基础治疗,对照组38例再给予前列地尔注射液静脉注射,10ug/日,治疗14d。治疗组40例在对照组基础上加用黄葵胶囊口服,治疗14d。治疗前后分别检查24h尿蛋白定量、血肌酐（SCr）、尿素氮（BUN）、甘油三脂（TG）、胆固醇（TCG）。结果两组治疗后尿蛋白定量均有下降,与治疗前相比,差异均有统计学意义（ P ＜0．05）;治疗组尿蛋白下降更明显,差异有统计学意义（ P ＜0．01）。结论黄葵胶囊联合前列地尔治疗糖尿病肾病疗效好,不良反应少,安全性高。     

肾炎康复片联合前列地尔治疗糖尿病肾病的临床研究

目的分析并探讨肾炎康复片联合前列地尔治疗糖尿病肾病的临床疗效。方法选取2011年7月—2014年7月在该院接受治疗的糖尿病肾病患者140例,随机分为观察组与对照组,每组70例。二组患者均给予常规的支持治疗和低糖饮食治疗,将空腹血糖控制在7mmol/L以下。在此基础上,观察组给予肾炎康复片联合前列地尔的治疗方案,而对照组仅给予前列地尔药物治疗。结果观察组显效38例,有效27例,无效5例,总有效率为92.86%;对照组显效29例,有效28例,无效13例,总有效率为81.43%。二组患者治疗后各项指标与治疗前相比均有显著改善,治疗后,观察组总胆固醇、三酰甘油、尿素氮、24h尿蛋白改善程度明显优于对照组(P<0.05)。结论肾炎康复片联合前列地尔治疗糖尿病肾病的临床疗效显著,值得推广。     

高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-κBp65核转位的影响

目的：探讨高糖对大鼠肾系膜细胞增殖及NF-κBp65核转位的影响。方法：大鼠HBZY-1肾系膜细胞进行体外培养,用5.6mmol/L葡萄糖（正常对照组）、10、20、30mmol/L高糖分别作用12、24、48小时,用噻唑蓝（MTT）法测各组肾系膜细胞增殖,western-blot法测各组肾系膜细胞NF-κBp65总蛋白的表达;双染免疫荧光激光共聚焦显微镜测各组肾系膜细胞NF-κBp65核转位。结果：48h内,各高糖组大鼠肾系膜细胞的增殖无统计学差异（P〉0.05）;各高糖组NF-κBp65总蛋白的表达无统计学差异（P〉0.05）;高糖组NF-κBp65核转位增加（P〈0.01）,呈时间浓度依赖性。结论：在48h内,高糖直接促进肾系膜细胞NF-κBp65核转位导致NF-κB信号通路激活,并不促进大鼠肾系膜细胞的增殖及NF-κBp65总蛋白的表达增加。     

蛋白激酶C在心肌细胞肥大中的作用

目的 :要探讨蛋白激酶 C(PKC)在心肌细胞肥大中的作用机制。方法 :在培养新生大鼠心肌细胞上 ,通过测量心肌细胞表面积和 [3 H] -Leu的掺入量来判断心肌细胞肥大。结果 :肾上腺素能明显增加心肌细胞表现积和 [3H] -L eu的掺入量 ,PKC抑制剂 (Calphostin C)可抑制肾上腺素诱导的心肌细胞表面积和 [3 H] -L eu掺入量增加。结论 :PKC在肾上腺素诱导的心肌细胞肥大反应中起重要作用