应用原位PCR技术检测阴茎癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的：研究人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与阴茎癌的关系。方法：应用原位ＰＣＲ技术对４６例阴茎癌组织中的ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ进行检测。结果：３３例阴茎癌中检测到了ＨＰＶＤＮＡ（７１．７％），其中２９例ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性（６３．０％），６例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性（１３．０％），２例ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ均阳性，４例ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性而ＨＰＶ１６阴性；２例淋巴结转移癌，３例癌旁不典型增生组织和１例癌旁增生组织ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性。结论：阴茎癌与ＨＰＶ１６、ＨＰＶ１８感染有密切关系，原位ＰＣＲ技术是一项敏感性高、特异性强的技术。     

肺癌组织中人乳头瘤病毒16和18型DNA相关序列的检测

采用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）及用ＰＣＲ法制备生物素标记探针的斑点杂交法,检测５０例肺癌、１８例肺良性病及４例胎肺组织中高危险型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６、１８型ＤＮＡ相关序列,以探讨ＨＰＶ与肺癌之间发生的关系。结果３２％的肺癌组织中检测出ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ,其中ＨＰＶ１６ＤＮＡ阳性１０例,ＨＰＶ１８ＤＮＡ阳性５例,１例同时含ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ。２７例鳞癌组织中ＨＰＶＤＮＡ阳性率为４８．２％。而肺良性病组织及胎肺组织均未发现ＨＰＶＤＮＡ。ＨＰＶＤＮＡ呈阳性的肺癌患者绝大多数为重度吸烟者。提示原发性肺癌的发生可能与ＨＰＶ感染有关。     

宫颈癌组织中人乳头状瘤病毒DNA的原位杂交研究

应用地高辛标记的ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６和ＨＰＶ１８ＤＮＡ探针分别在４８宫颈癌组织上进行原位杂交检测ＨＰＶＤＮＡ，结果ＨＰＶＤＮＡ阳性２３例，其中ＨＰＶ１６ＤＮＡ例，ＨＰＶ１８ＤＮＡ４例，未见ＨＰＶ６ＤＮＡ和ＨＰＶ１１ＤＮＡ阳性，ＨＰＶＤＮＡ主要见于凹空细胞和癌细胞的细胞核中，少部分见于癌细胞浆中，我们的结果表明原位杂交可用来研究宫颈组织中ＨＰＶ的存在及分型，同时也证实了宫颈癌的发生和某些     

应用通用引物聚合酶链反应技术检测结肠癌组织中…

应用人乳头瘤病毒通用引物介导的聚合酶反应技术检测了１５例结肠癌石蜡包埋病理组织切片中ＨＰＶＤＮＡ，其中１０例呈阳性扩增。１２例正常结肠组织经上述ＰＣＲ检测均呈阴性反应。阳性扩增产物经核酸斑点杂交进行ＨＰＶ型别分析，ＨＰＶ１６型占４例，１８例１例，１６／１８型５例，未检出其他ＨＰＶ型别。表明ＨＰＶ可能对结肠癌的发生具有病原相关性。     

染色体外游离态的子宫颈癌HPV16分离株E1／E2区的基因 …

目的 观察子宫颈癌组织中呈染色体外质粒状态的ＨＰＶ１６分离株Ｅ１／Ｅ２基因序列。方法 Ｓｏｕｔｈｅｒｎ转印杂交检测癌组织中ＨＰＶ１６基因组的物理状态。对８例游离状态的ＨＰＶ１６分离株Ｅ１／Ｅ２区进行ＰＣＲ扩增,克隆后酶切分析和ＤＮＡ序列分析。结果 对２８例ＨＰＶ１６阳性子宫颈癌中病毒ＤＮＡ杂效结果显示８例呈染色体外质粒方式存在。ＰＣＲ克隆鉴定发现８例分离株都具有完整的Ｅ１／Ｅ２区域。此外４例分离株     

食管癌发生中人乳头瘤病毒感染与Langerhans细胞的关系

为了解人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）对免疫Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞（ＬＣ）的影响及ＨＰＶ的致癌机理，采用地高辛配基标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１ＤＮＡ及ＨＰＶ１６／１８ＤＮＡ探针和抗Ｓ－１００蛋白抗体，分别用原位分子杂交和免疫组化ＬＳＡＢ法，检测了４０例食管鳞状细胞癌中ＨＰＶＤＮＡ序列及分布，重点观察了ＨＰＶ感染时局部癌旁上皮内Ｓ－１００蛋白阳性Ｌａｎｇｅｒｈａｎｓ细胞的分布、数量及形态改变。结果显示：在有ＨＰＶ感染时，上皮内ＬＣ数量明显少于无感染者。上皮内残留的少数ＬＣ的分布及形态也有改变。我们认为，ＨＰＶ可能通过减少局部的ＬＣ，破坏机体局部的免疫监视系统，并与其它致癌因素协同作用，进而导致食管癌的发生。     

肺鳞癌人乳头状瘤病毒感染的原位杂交检测和观察

经多重多聚酶链反应，检测４９例肺鳞癌中发现７例人乳头瘤病毒阳性的肿瘤组织，采用生物素标记ＨＰＶＤＮＡ探针，进行原位杂交检测，结果发现在５例肿瘤组织中显示ＨＰＶＤＮＡ阳性信号，其中ＨＰＶ１１型阳性３例；ＨＰＶ１６例阳性１例；１例为ＨＰＶ１１例和１６型均阳性。原杂交ＨＰＶＤＮＡ阳性信号，大多位于凹空样肿瘤细胞或低分化鳞癌细胞的核内，分子生物学研究表明ＨＰＶ感染可能与部分鳞有关。     

HPV16、18 E6蛋白在乳腺癌组织中的表达

目的：观察ＨＰＶ１６ 、１８ Ｅ６ 蛋白在人乳腺癌中的表达并探讨ＨＰＶ１６、１８ 感染与乳腺癌病因学的关系。方法：应用ＳＰ免疫组化法,检测５３ 例乳腺癌、２０ 例正常乳腺组织中ＨＰＶ１６、１８ Ｅ６ 蛋白的表达。结果：乳腺癌组织中ＨＰＶ１６、１８ Ｅ６ 蛋白的阳性表达率为５６－６％ （３０／５３）,多种组织学类型的乳腺癌组织中有ＨＰＶ１６、１８ 型感染的存在。结论：ＨＰＶ１６、１８ 型感染可能与乳腺癌的病因学密切相关。     

应用通用引物聚合酶链反应技术检测结肠癌组织中人乳头瘤病毒DNA

应用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）通用引物介导的聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例结肠癌石蜡包埋病理组织切片中ＨＰＶＤＮＡ，其中１０例呈阳性扩增（阳性率为６６．７％）。１２例正常结肠组织经上述ＰＣＲ检测均呈阴性反应。阳性扩增产物经核酸斑点杂交进行ＨＰＶ型别分析，ＨＰＶ１６型占４例（４０．０％），１８型１例（１０．０％），１６／１８型５例（５０．０％），未检出其他ＨＰＶ型别。表明ＨＰＶ可能对结肠癌的发生具有病原相关性。     

卵巢上皮性肿瘤p16抑癌基因突变与HPV感染的研究

采用聚合酶链反应－单链构象多态性分析（ＰＣＲ－ＳＳＣＰ）技术，对同一卵巢上皮性肿瘤石蜡包埋组织中ｐ１６基因（第二外显子）突变及人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）感染进行相关性研究。并与正常卵巢组织进行对照。结果，２８例卵巢上皮性肿瘤组织中ｐ１６基因突变１５例，突变率为５３．６％（１５／２８），其中７例伴有ＨＰＶ１６型或ＨＰＶ１８型感染，占突变率的４６．７％。在卵巢上皮性肿瘤组ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ阳性率为５３．６％（１５／２８），对照组ＨＰＶ１６、１８ＤＮＡ阳性率为５．６（１／１８），二者比较有显著性差异。提示：卵巢上皮性肿瘤中ｐ１６基因突变与ＨＰＶ１６、１８型感染有关。ＨＰＶ１６、１８型感染与卵巢上皮肿瘤密切相关     

人乳头瘤病毒与P 53协同致膀胱移行细胞癌关系的研究

目的 研究人类乳头瘤病毒（ＨＰＶ）６、１１、１６和１８型及Ｐ５３与膀胱移行细胞癌的关系。方法 采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）方法检测了７５例膀胱移行细胞癌组织中ＨＰＶ的感染,免疫组化ＳＰ法检测Ｐ５３蛋白表达情况。结果 膀胱移行细胞癌组织中ＨＰＶ６、１１、１６和１８的阳性率分别为６．７％（５／７５）,５．３％（４／７５）,３３．３％（２５／７５）和６．７％（５／７５）。低危型ＨＰＶ（６或１１）阳性率为９．３％（７／７５）,高危型ＨＰＶ（１６或１８）阳性率为３４．７％（２６／７５）。同一膀胱癌组织中两种以上（包括两种）ＨＰＶ亚型感染８例,占１０．６％。ＨＰＶ６、１６和１８型之间感染阳性率在肿瘤有无转移组中差异显著（Ｐ〈０．０５）,ＨＰＶ１６、１８的阳性率在肿瘤病理分级中差异有极显著性（Ｐ〈０．０１）。ＨＰＶ ＤＮＡ型别     

斑点分子杂交检测HPV感染与宫颈癌的关系

采用ＤＮＡ－ＤＮＡ分子杂交技术，对经病理组织学确诊的慢性宫颈炎，宫颈癌和正常宫颈的宫颈活检组织中ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８型ＤＮＡ进行同源序列检测，结果表明ＨＰＶ６，ＨＰＶ１１，ＨＰＶ１６，ＨＰＶ１８型ＤＮＡ的检出率在正常宫颈均为０；在慢性宫颈炎分别为１６．０９％，１２．６４％，１１．４９％，３．４５％；在宫颈癌组分别为３．９６％，１．９８％，４６．５３％，７．９２％。在宫颈癌组     

人喉癌组织中人乳头瘤病毒DNA的检测

目的为探讨喉癌与人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）感染的关系和ＨＰＶ在喉癌中基因组型的分布与表达。方法应用聚合酶链反应技术（ＰＣＲ）制备非放射性探针标记物－地高辛标记ＨＰＶ共有引物探针,对１４６例喉不同病变的新鲜组织标本（喉癌６８例,喉其它病变４８例,正常喉组织３０例）,进行ＨＰＶ６,１１,１６,１８,３１,３３,３５,４２,５８共９型ＨＰＶＤＮＡ感染的检测;阳性者用多重引物ＰＣＲ方法分型。结果喉癌ＨＰＶ感染阳性率４５．６％（３１／６８）,喉癌颈转移淋巴结组织阳性率２０．０％（３／１５）,喉癌前病变阳性率１１．８％（２／１７）,声带息肉阳性率６．３％（１／１６）,１５例癌旁及１５例癌周正常喉组织均为ＨＰＶＤＮＡ阴性。ＨＰＶＤＮＡ型别分布在喉癌中以ＨＰＶ１６、１８型为主,喉良性病变中以ＨＰＶ６、１１型为主。结论喉癌发生与ＨＰＶ感染有关。     

食管鳞癌HPV感染与病毒致癌基因E6的关系

目的：探讨人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与食管鳞状细胞癌的关系。方法：采用多重引物多聚酶链反应（ＰＣＲ）的免疫组化技术、对１０４例食管鳞癌进行ＨＰＶ ＤＮＡ和病毒癌基因Ｅ６蛋白检测。结果：ＨＰＶ ＤＮＡ阳性者占５０．９６％（５３／１０４），其中ＨＰＶ１６型ＤＮＡ４９．０６％（２６／５３），ＨＰＶ１８型 ＤＮＡ５．６％（３／５３），ＨＰＶ６／１１ ＤＮＡ７．５％（４／５３）；两上或三个类型的混合感染占３７．     

人乳头状瘤病毒不同型别与宫颈病变的相关性研究

目的探讨人乳头状瘤病毒（ＨＰＶ）不同型别与宫颈病变性质的关系。方法应用ＰＣＲ技术和原位杂交方法对６１例宫颈上皮内瘤（ＣｅｒｖｉｃａｌｉｎｔｒａｅｐｉｔｈｅｌｉａｌＮｅｏｐｌａｓｉａＣＩＮ）和１２例宫颈鳞癌（ＳＣＣ）进行ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ检测。结果ＰＣＲ检测结果显示ＨＰＶ６、１１主要分布于低度鳞状上皮内病变（６１９％）和一部分ＣＩＮⅡ中（２０％），而在ＣＩＮⅢ和ＳＣＣ中检测不到；ＨＰＶ１６、１８的检出率随ＣＩＮ级别增高而增加，在ＳＣＣ中高达８３３％。原位杂交结果显示在低度鳞状上皮内病变中，地高辛（Ｄｉｇ）标记的ＨＰＶ６Ｂ／１１、１６、１８ＤＮＡ杂交物质在核中均呈细颗粒状，为“游离型”。上述杂交阳性信号形态亦出现于ＣＩＮⅡ的所有ＨＰＶ６Ｂ／１１及部分ＨＰＶ１６、１８型感染中，而ＣＩＮⅢ和宫颈鳞癌及部分ＣＩＮⅡ中，其杂交阳性信号均为非颗粒状的“整合型”。结论低度鳞状上皮内病变是以ＨＰＶ６、１１低危型为主的多型别病毒的繁殖性感染，ＣＩＮⅢ和宫颈鳞癌为ＨＰＶ１６、１８高危型病毒的整合型感染，而在ＣＩＮⅡ中存在着ＨＰＶ６，１１和ＨＰＶ１６，１８的繁殖性感染及ＨＰＶ１６，１８的整合型感染     

宫颈癌组织中人乳头瘤病毒16型E7蛋白致癌机理初探

目的 研究宫颈癌组织中人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）１６－Ｅ７蛋白对视网膜母细胞瘤基因（Ｒｅｔｉｎｏｂｌａｓｔｏｍａ）Ｒｂ蛋白及Ｅ２Ｆ－１的作用的机制,探讨ＨＰＶ１６－Ｅ７蛋白与宫颈癌发生的关系。方法 采用聚合酶链反应检测宫颈癌及正常宫颈组织中ＨＰＶ１６感染等,用蛋白印迹技术对ＨＰＶ１６ ＤＮＡ阳性的宫颈癌组织中是否存在ＨＰＶ１６－Ｅ７蛋白和Ｒ６蛋白－Ｅ２Ｆ－１形成的复合物进行检测。正常宫颈组织作为对照,     

用PCR检测肺癌组织中人乳头瘤病毒16、18型DNA相关序列

用ＰＣＲ检测肺癌组织中人乳头瘤病毒１６、１８型ＤＮＡ相关序列胡克，李清泉，潘显光，曹作炎，杨炯人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）与人类某些恶性肿瘤的发生有密切关系，ＨＰＶ可能在病因学方面参与机体多部位肿瘤的形成。作者应用ＰＣＲ技术检测肺癌组织中ＨＰＶ１６、１８型...     

不同引物介导的聚合酶链反应检测人乳头瘤病毒DNA

应用３对人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）引物对１０７例各种宫颈标本进行了聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增。结果显示，共同引物（ＧＰ）扩增，有５８．８％（３０／５１）宫颈鳞癌，１００％（１４／１４）尖锐湿疣、１３．６％（３／２２）宫颈炎和１０％（２／２０）正常宫颈出现ＨＰＶ阳性。型特异性引物ＳＰ１６／ＳＰ１８扩增，有３７．２％（１９／５１）宫颈鳞癌２５．７％（５／１４）尖锐湿疣和５％（１／２０）正常宫颈出现ＨＰＶ１６型阳性，５．８％（３／５１）宫颈鳞癌为ＨＰＶ１８型阳性。进一步用ＳＰ１６ｂ引物扩增，没有１例ＨＰＶ１６ｂ亚型被发现。说明宜颈磷癌和尖锐湿疣与ＨＰＶ感染有关，结合应用共同引物和型特异性引物可作为ＨＰＶ检测与分型方法。     

尖锐湿疣组织中人乳头状瘤病毒的检测

用免疫组织化学、ＤＮＡ原位杂交和聚合酶链反应技术，检测人生殖器尖锐湿疣和女阴假性湿疣组织中人乳头状瘤病毒衣壳抗原（ＨＰＶ－Ａｇ）和病毒核酸序列（ＨＰＶ－ＤＮＡ），并观察了ＨＰＶ在尖锐湿疣组织中的分布特点与病变组织学改变的关系。结果显示尖锐湿疣中ＨＰＶ－Ａｇ阳性率为７１．４％（３５／４９）；原位杂交ＨＰＶ６／１１ＤＮＡ阳性率为９６．５％（２８／２９）；ＰＣＲ扩增后尖锐湿疣ＨＰＶ６／１１／１６／１８ＤＮＡ阳性率为１００％（５３／５３）；假性湿疣ＨＰＶ６／１１／１６／１８ＤＮＡ阳性率为２１．４％（３／１４）。观察ＨＰＶ－Ａｇ和ＨＰＶ－ＤＮＡ分布，表明ＨＰＶ增殖性感染和尖锐湿疣特异的病理改变密切相关。     

地高辛配基人乳头瘤病毒DNA探针的制备和应用

采用非同位素标记物地高辛配基（Ｄｉｇｏｘｉｇｅｎｉｎ），通过随机引物法制成地高辛配基人乳头瘤病毒ＤＮＡ（Ｄｉｇ－ＨＰＶＤＮＡ）探针。用斑点杂交法检测宫颈组织中的ＨＰＶＤＮＡ。经试验证明，该探针检测ＨＰＶＤＮＡ的灵敏度与（３２）Ｐ－ＨＰＶＤＮＡ探针相近。经与（３２）Ｐ－ＨＰＶＤＮＡ探针同时对６５份临床标本进行比较，结果附合率达９５％以上。３５份宫颈癌组织中ＨＰＶ１６／１８型检出率为３４．２９％。Ｄｉｇ标记的探针检测ＨＰＶＤＮＡ特异性高，重复性好，背景显色低。