间接免疫荧光染色法快速鉴定产气荚膜杆菌的研究

1979年在我院收治的气性坏疽病例中,由产气荚膜杆菌引起的占97％。因此,产气荚膜杆菌的早期检出,对创伤厌气感染的及时诊治十分重要。 免疫荧光技术在微生物快诊方面日益得到广泛应用,我们运用间接免疫荧光染色法对产气荚膜杆菌保存菌种的鉴定进行了研究,报告如下。     

产气荚膜杆菌致肛周脓肿1例

气性坏疽在临床上较少见,是以肌肉进行性组织坏死、水肿、产气为特征,病情迅速发展的急性严重感染,患者可因严重的毒血症而死亡。我们从1例肛周脓肿患者伤口分泌物中分离到产气荚膜杆菌,报道如下。     

抗产气荚膜杆菌单克隆抗体的研制与鉴定

产气荚膜杆菌(Ｃ.Ｐ)是战创伤时导致气性坏疽及厌氧感染最常见的致病菌。本研究的目的是期望制备出高效价的抗Ｃ.Ｐ的单克隆抗体ＭｃＡｂ,以建立快速、简便、敏感性和特异性均很高的检测方法,为临床诊断及治疗提供依据,并为保护性抗体的筛选及有效疫苗的制备打下基础。材料与方法1.免疫原及主要试剂:Ｃ.Ｐ标准株购自美国ＡＴＣＣ公司,ＨＲＰ标记的猪抗鼠ＩｇＧ抗体,胎牛血清及聚乙二醇(ＰＥＧ)等为华美生物工程公司产品,ＢＡＬＢＣ小鼠由本校动物所提供,其余试剂均为分析纯或化学纯。2.单克隆抗体制备:Ｃ.Ｐ经体积分数为0.5%的甲醛等渗盐水…     

带荧光标签的产气荚膜梭菌ε毒素融合蛋白纯化及特性鉴定

目的 表达纯化带eGFP和mScarlet标签的产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）ε毒素（ETX）,鉴定ETX的毒素特性。方法 在大肠杆菌中表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,镍柱纯化蛋白;用MTS法测定带不同标签ETX的毒性;用共聚焦显微镜观察mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞和不同物种红细胞的结合情况。结果 成功表达带eGFP和mScarlet标签的ETX融合蛋白,纯化后得到纯度较高的eGFP-ETX和mScarlet-ETX融合蛋白。通过细胞毒实验,证实eGFP-ETX毒素与未加荧光标签的His-ETX相比毒性减弱,mScarlet-ETX毒素与His-ETX毒性基本一致,确定了eGFP-ETX和mScarlet-ETX的最佳荧光值。将mScarlet-ETX应用于HaCaT细胞和HEKa细胞,观察到mScarlet-ETX与HaCaT细胞、HEKa细胞结合,证实HaCaT细胞、HEKa细胞对ETX敏感。将mScarlet-ETX应用于人、小鼠和兔红细胞,mScarlet-ETX只与人红细胞结合。结论 mScarl...     

产气法检定水中烃化剂

该方法采用NBP·HClO_4硅胶侦检管通过化学起泡剂——柠檬酸和碳酸氢钠反应产生二氧化碳气,而该气体能把水中烃化剂赶出水面,通入到侦检管中;烃化剂经NBP·HClO_4硅胶吸附,反应,加热,进行检定.该法适用于现场快速检定;方法简便、快速、灵敏,专一性强.有机氟磷酸酯类、有机砷化物,生物碱类均无正负干扰,方法灵敏度二氯二乙硫醚和三氯三乙胺均为2.0μg/ml.     

创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌快速定量检测方法的建立及应用

目的 建立检测创伤伤口分泌物中产气荚膜梭菌的实时荧光定量PCR方法,为气性坏疽的早期快速诊断提供新手段.方法以产气荚膜梭菌16S rDNA基因序列为模板,在其保守区域设计特异性引物及探针,以PCR扩增产物重组质粒作为定量检测的标准品,绘制标准曲线.对荧光定量PCR体系和反应条件进行优化,并验证方法的特异性、敏感性、重复...     

利用groupⅡ intron构建产气荚膜梭菌突变体

目的通过插入失活α毒素基因获得产气荚膜梭菌（Clostridium perfringens）突变体。方法利用MobilegroupⅡintron的自我剪切作用,对本室保藏的1株野生型C.perfringens的α基因plc插入失活。通过菌落PCR检测,以及观察突变株在哥伦比亚血琼脂培养基和脑心浸液培养基（4%卵黄）平板上的形态变化,进行阳性筛选。蛋白质免疫印迹分析α毒素蛋白活性。结果 PCR检测到α毒素突变体的plc基因中,存在Mobile groupⅡintron片段,并且观察到该菌在哥伦比亚鲜血琼脂平板培养基上的α毒素溶血环消失,在脑心浸液培养基（4%卵黄）平板上无白晕。蛋白质免疫印迹分析表明,plc突变体不表达α毒素蛋白。结论成功构建C.perfringensα毒素突变体,为后期探索C.perfringens口服疫苗打下了重要基础。     

家畜产气荚膜梭菌病的诊断与防治

产气荚膜梭菌病是多种动物共患病,被我国规定为二类动物疫病。产气荚膜梭菌可引起牛羊猝死、坏死性肠炎(和羔羊痢疾等家畜常见传染病,同时还可导致人气性坏疽和食物源性中毒,给家畜养殖业带来严重的经济损失,也严重威胁人类健康。本文综述该病的实验室诊断和防治方法,为基层临床兽医提供该病的预防和治疗参考资料。     

利用groupⅡ intron构建产气荚膜梭菌突变体

目的通过插入失活α毒素基因获得产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)突变体。方法利用MobilegroupⅡintron的自我剪切作用,对本室保藏的1株野生型C.perfringens的α基因plc插入失活。通过菌落PCR检测,以及观察突变株在哥伦比亚血琼脂培养基和脑心浸液培养基(4%卵黄)平板上的形态变化,进行阳性筛选。蛋白质免疫印迹分析α毒素蛋白活性。结果 PCR检测到α毒素突变体的plc基因中,存在Mobile groupⅡintron片段,并且观察到该菌在哥伦比亚鲜血琼脂平板培养基上的α毒素溶血环消失,在脑心浸液培养基(4%卵黄)平板上无白晕。蛋白质免疫印迹分析表明,plc突变体不表达α毒素蛋白。结论成功构建C.perfringensα毒素突变体,为后期探索C.perfringens口服疫苗打下了重要基础。     

羊源性产气荚膜梭菌的药物敏感性检测

为了解新疆羊源性产气荚膜梭菌的耐药性,为羊梭菌病的防治提供参考,根据美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)推荐的厌气菌药物敏感性实验方法,对新疆不同地区2010-2012年间分离的羊源性产气荚膜梭菌进行了药物敏感性检测.结果表明,所分离的菌株对首选药甲硝唑、克林霉素、青霉素已经耐药,但对次选药头孢曲松、替卡西林仍然敏感,推荐在羊梭菌病临床防治中用这些药物进行治疗.     

一种快速准确检测HLA-B27的荧光标记单克隆抗体

HLA—B27是血清学检测的HLA—B座位上的一个等位基因。因为它和强直性脊椎炎(AS)高度关联,所以检测HLA—B27非常重要。通常HLA—B27的检测是采用标准的NIH微量细胞毒法,这种方法准确且重复性好,但是它依赖补体和需要纯化的淋巴细胞。作者用鼠的骨髓瘤细胞和被HLA—B27阳性     

A型产气荚膜梭菌α毒素基因的克隆及高效表达

目的：实现产气荚膜梭菌α毒素(Clostridium perfringens alphs toxin，CPa)基因的克隆与表达。方法：用PCR技术从A型产气荚膜梭茵中扩增出CPa基因，克隆到原核表达载体pQE30中，构建了重组质粒pQE30-CPa，转化E．coli M15获得了CPa的高效表达。结果：序列测定和双酶切表明，CPa基因正确插入载体。序列分析发现CPa基因与GenBank中的4种CPa基因相似率为76．7％—99．9％。工程茵裂解液经SDS-PAGE分析显示在相对分子质量43000处有一条表达很强的蛋白区带，与CPa相对分子质量相符，约占菌体总蛋白的62.88％。主要以包涵体形式存在。免疫印迹结果表明，表达的重组CPa蛋白同抗CPa血清有特异性结合。结论：为进一步研究CPa重组疫苗和制备CPa的特异性抗体奠定了基础。     

荧光标记染色体原位杂交技术及其应用

介绍了荧光标记染色体原位杂交技术的基本过程，各种探针的特点、用途及制备方法，并叙述了此技术在基因定位、生物剂量估计和临床诊断等领域里的广泛应用。     

荧光标记染色原位杂交技术及其应用

介绍了荧光标记染色体原位杂交技术的基本过程，各种探针的特点、用途及制备方法，并叙述了此技术在基因定位、生物剂量估计和临床诊断等领域里的广泛应用。     

炭疽杆菌快速检验的研究

我们通过实验研究和现场初步观察,提出可用于临床和外环境标本的炭疽杆菌快速检验法。基本上达到快速、简易、准确的要求。 炭疽杆菌的快速增菌 先将含芽孢的标本经短期增菌培养,使之变为繁殖型,迅速增殖。为了进行快速增菌的     

实时荧光定量PCR法检测炭疽杆菌

为建立一种简便而特异的炭疽杆菌检测方法用作临床诊断工具，以nXO1持粒上的pag基因及pXO2质粒上的cap基因为靶合成特异引物，用DNA嵌入荧光染料SYBR Green I进行定量PCR扩增，在PCR后进行熔融曲线分析以确定得到的产物是否为目的产物，定量PCR条件优化结果为：引物浓度0．8umol/L,Mg^2 5.0mmol/L。该法检测炭疽的灵敏度达10^3拷贝，并能区分炭疽杆菌与其他蜡样杆菌，表明实时荧光定量PCR技术能够快速准确，特异地对炭疽进行定量分析。     

大鼠神经干细胞的荧光标记及脑内移植

增强型绿色荧光蛋白（enhanced green fluorescent protein，EGFP）是绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）的人工改造型，在蓝色光（波长488nm）激发下可以稳定地发出绿色荧光，以EGFP示踪是目前细胞生物学示踪剂研究中的一种重要手段。笔者分离培养了胚胎大鼠神经干细胞（neural stem cells，NSCs），以逆转录病毒介导EGFP进行标记，探索标记方法的可行性以及EGFP对NSCs正常功能有无影响。并做标记细胞脑内移植实验，探讨EGFP在NSCs脑内移植中的示踪作用。