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1.
携反义二型基质金属蛋白酶基因的重组腺病毒的构建 总被引:5,自引:1,他引:4
目的 构建携带反义二型基质金属蛋白酶 (MMP2 )基因的重组腺病毒。方法 从新鲜肝癌组织中提取总RNA ,用RT PCR法合成MMP2cDNA序列中 5′端转录起始位点附近长约 5 0 0bp的基因片段 ,将此片段反义克隆到腺病毒载体 (AdEasy)系统的多克隆位点 ,经转染 2 93细胞生成携带反义MMP2基因的重组腺病毒Ad MMP2 AS。结果 成功构建并包装携带反义MMP2基因片段的重组腺病毒Ad MMP2 AS,病毒滴度达 1× 10 8/ml。结论 构建的重组腺病毒Ad MMP2 AS可望能有效地将反义MMP2基因片段导入人肝癌细胞株 ,为进一步研究肝癌浸润和转移机理以及探讨抑制肝癌浸润和转移的方法提供实验基础。 相似文献
2.
目的 探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)对人脑胶质瘤细胞血管生成的抑制作用。方法 腺病毒 AdTIMP-2转染人胶质瘤细胞系U87,用酶联免疫分析法(ELISA)检测其表达,用噻唑蓝比色法(MTT)检测含TIMP-2上清对人脐静脉内皮细胞生长的影响,并检测它对鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管生成的作用。先建立裸鼠胶质瘤动物模型,体内检测血管内皮第Ⅷ因子的表达强度。结果 U87转染 AdTIMP-2病毒后 TIMP-2表达上调,100μg/L的 TIMP-2对人脐静脉内皮细胞生长表现出明显的抑制作用,TIMP-2对鸡胚尿囊膜血管形成有明显的抑制作用,血管指数:U87组为(91.1±8.2)%、AdX-gal组为(62.4±3.3)%,AdTIMP-2组为(45.7±6.1)%。Ⅷ因子相关抗原的表达在各组中均为阳性,病理指数 U87组为 17.27±7.48,AdX-gal组为 16.98±7.54,AdTIMP-2组为 6.78±3.37,后者与前两者相比较,差异有显著性(P<0.05)。结论TIMP-2具有明显的抗血管生成作用,可作为有效的抗胶质瘤血管生成治疗基因。 相似文献
3.
目的 研究血管生成拟态( vasculogenic mimicry,VM)在人前列腺癌组织中的分布及与预后的关系,探讨基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)在前列腺癌VM形成中的作用. 方法 选取天津医科大学第二医院1995年1月至2008年12月收治的前列腺癌患者96例.年龄59 ~ 72岁,平均(66.7±11.0)岁.术前血清PSA为15.6 ~ 76.7 μg/L,平均(34.6±1.7)μg/L.术前经MRI检查及穿刺活检均诊断为局灶性前列腺癌.收集前列腺根治性切除术后的组织标本,采用血小板-内皮细胞黏附分子-1(platelet-endothelial cell adhesion molecule-1,PECAM-1/CD31)免疫组化和过碘酸雪夫氏( periodic acid-sciff,PAS)组织化学双重染色后,光镜下观察VM结构,比较VM表达阳性组和阴性组的预后情况,分析VM表达与预后的关系.免疫组化法检测MMP-2在前列腺癌组织中的表达,分析MMP-2蛋白表达与VM形成的关系和作用. 结果 96例中24例存在VM结构,VM阳性组平均Gleason评分8.0±0.3,PSA( 37.7±2.3) μg/L,均高于VM阴性组Gleason评分6.2±0.3,PSA(19.5±2.1) μg/L,差异有统计学意义(P<0.05).VM阴性组无生化复发中位生存期96个月,高于VM阳性组无生化复发中位生存期39个月,差异有统计学意义(P<0.05).MMP-2表达和VM的形成呈明显正相关(rs =0.60,P<0.01). 结论 前列腺癌组织中VM形成与组织恶性程度相关,肿瘤细胞分泌MMP-2可能促进了VM的形成,VM阳性和MMP-2高表达与前列腺癌预后不良有关. 相似文献
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腺病毒介导反义c-myc基因抑制人肝癌细胞生长的研究 总被引:3,自引:0,他引:3
目的观察重组腺病毒介导反义c-myc基因(Ad-ASmyc)对体外培养人肝癌细胞的生长抑制作用和裸鼠体内移植肝肿瘤的治疗效果.方法Ad-ASmyc感染人肝癌细胞系后,观察细胞生长形态变化,通过细胞生长曲线、流式细胞仪分析、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫印迹法(Western blot)分析Ad-ASmyc对人肝癌细胞系SMMC-7721和HCC-9204细胞生长、c-myc和bcl-2基因表达的影响;裸鼠皮下移植瘤内注射3种不同剂量Ad-ASmyc(1×109pfu-A组,1×108pfu-B组,1×107pfu-C组)抑制裸鼠肿瘤生长的差异.结果Ad-ASmyc可高效转导人肝癌细胞系SMMC-7721和HCC-9204,抑制细胞生长(抑制率分别为48.72%和56.88%),诱导肝癌细胞G1期阻滞和凋亡,c-myc、bcl-2 RNA及c-myc蛋白水平下降;瘤内注射3种不同剂量Ad-ASmyc均可明显抑制裸鼠皮下移植肿瘤生长,抑制率分别为47.1%、77.3%和82.6%(与对照组比较,P<0.01).结论重组腺病毒介导的反义c-myc基因能够引起人肝癌细胞c-myc、bcl-2 RNA及c-myc蛋白表达下调和细胞生长抑制,瘤内注射Ad-ASmyc治疗裸鼠皮下移植肝癌有效. 相似文献
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6.
重组腺病毒介导hTIMP-1对人肝癌细胞系体外增殖的影响 总被引:2,自引:2,他引:0
目的探讨人基质金属蛋白酶组织抑制因子-1(hTIMP-1)过表达对人肝癌细胞系HepG2体外增殖的作用。方法构建携载hTIMP-1全长cDNA的重组腺病毒载体,感染HepG2细胞,应用Western blot及RT-PCR方法检测TIMP-1蛋白及mRNA的表达,透射电镜观察细胞超微结构改变,MTT法检测hTIMP-1对HepG2细胞生长的影响。结果成功构建携载hTIMP-1的重组腺病毒载体,感染HepG2细胞,实现其体外稳定表达,hTIMP-1过表达对HepG2体外增殖有明显抑制作用。结论hTIMP-1过表达可抑制人肝癌细胞系HepG2的体外增殖,可用于肝癌基因治疗的研究。 相似文献
7.
目的探讨携带人基质金属蛋白酶组织抑制因子(hTIMP)-1的重组腺病毒(Adh- TIMP)-1对人肝癌生长、转移、血管形成以及凋亡的作用。方法构建AdhTIMP-1感染人肝癌细胞并接种于裸鼠皮下观察其成瘤情况;建立荷瘤鼠模型,观察AdhTIMP-1对肿瘤生长的作用;计数荷瘤鼠肺转移结节;CD34免疫组织化学观察肿瘤血管生成;TUNEL法检测肝癌细胞凋亡。结果AdhTIMP-1感染的HepG2细胞成瘤量下降4倍(P<0.01),荷瘤鼠瘤体内注射AdhTIMP-1使肿瘤生长减少45%(P<0.01),组织血管密度减少47%(P<0.05),肺转移结节减少70%(P<0.01),肿瘤组织中细胞凋亡增加3倍(P<0.05)。结论AdhTIMP-1能抑制肝癌的生长、转移及血管形成,诱导肝癌细胞凋亡,可用于肝癌基因治疗的研究。 相似文献
8.
癌灶内注射腺病毒介导的血管内皮生长因子启动子-胸苷激酶基因治疗大鼠肝癌 总被引:1,自引:0,他引:1
目的研究腺病毒介导的血管内皮生长因子启动子调控的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因(AdVEGF tk)对大鼠肝癌的治疗作用。方法以二乙基亚硝胺 (DEN)诱导Wistar大鼠产生肝癌 ,将成癌鼠随机分组 ,在同鼠肝内的多发性癌灶中选取 2个孤立的癌灶分别作为参照癌和处理癌 ,记录癌灶直径。参照癌不作处理。处理癌分别用不同的重组腺病毒癌内注射 ,并从次日起连续 10d每天腹腔内给予丙氧鸟苷 (GCV)或生理盐水 1次。停止注射后第 10天剖腹测量处理癌和参照癌大小 ,比较各组间癌灶体积增长率。结果用低浓度DEN处理 12 0d ,所有被探查的大鼠均有典型的肝癌形成。与同鼠中参照癌相比 ,AdVEGF tk/生理盐水处理的癌灶体积增长率平均值差异无显著意义 (P>0 0 5 ) ,而AdCMV tk/GCV和AdVEGF tk/GCV处理的癌灶体积增长率平均值显著降低 (P <0 0 1) ,与AdVEGF tk/生理盐水组处理癌和参照癌的体积增长率平均值之间的差异也有显著意义 (P<0 0 1)。AdVEGF tk/GCV处理癌与AdCMV tk/GCV处理癌体积增长率之间差异无显著意义 (P>0 0 5 )。结论癌灶内注射AdVEGF tk对大鼠肝癌生长具有明显抑制作用。 相似文献
9.
细胞外基质和基底膜重塑是癌细胞侵袭转移过程中的关键环节,需借助于蛋白降解酶的表达和激活。基质蛋白酶主要有以下数种:丝氨酸蚩白酶类,包括血浆酶原激活剂;半胱氨酸蛋白酶类,包括组织蛋白酶D在内的溶酶体酶;金属蛋白酶类(metalloproteioases)。金属蛋白酶类在肿瘤侵袭过程中的作用近年来倍受关注,大量证据表明基质金属蛋白酶,特别是基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2.MMP-2)在肿瘤细胞介导的细胞外基质降解中起关键作用,临床研究表明,MMP-2活性和表达的增加与人类多种恶性肿瘤侵袭转移潜能及预后密切相关。 相似文献
10.
目的 探讨Ⅳ型胶原和基质金属蛋白酶-2(MMP2)、MMP9在胆囊癌血管生成拟态(VM)中的表达与意义。方法 74例胆囊癌、胆囊腺瘤和慢性胆囊炎各10例病理标本及资料,应用免疫组织化学Envision、SABC法测定上述病变组织Ⅳ型胶原和MMP2、MMP9表达,Kaplan-Meier生存曲线和Cox风险模型分析其与胆囊癌VM的相关性和临床意义。结果 (1)在VM(+)胆囊癌,Ⅳ型胶原表达明显低于、MMP2表达明显高于VM(-)胆囊癌(P〉0.01),MMP9则无差异。(2)Ⅳ型胶原与VM(+)胆囊癌分化程度负相关;MMP2、MMP9与VM(+)胆囊癌的Nevin晚期、侵犯浆膜、肝转移正相关,MMP2尚与VM(+)胆囊癌的低分化和淋巴结转移正相关。(3)Ⅳ型胶原阳性和MMP2、MMP9阴性VM(+)胆囊癌患者术后5年生存期明显短于VM(-)胆囊癌(P〈0.01;P〈0.05;P〈0.01),MMP2阳性VM(+)胆囊癌患者术后5年生存期亦明显短于VM(-)胆囊癌。VM、1V型胶原是影响胆囊癌患者预后的独立因素。结论Ⅳ型胶原、MMP2分别与胆囊癌VM呈负、正相关,MMP9与胆囊癌VM无关;Ⅳ型胶原和MMP2可作为判断胆囊癌是否存在VM及VM胆囊癌预后的重要指标。 相似文献
11.
血管内皮生长因子反义核酸对胰腺癌细胞增殖、凋亡和血管生成的影响 总被引:8,自引:7,他引:1
目的探讨腺病毒介导的血管内皮生长因子(VEGF)反义核酸对胰腺癌细胞增殖、凋亡和血管生成的作用。方法构建反向插入VEGF165基因的复制缺陷型腺病毒载体(Ad-αVEGF)。18只裸鼠皮下接种人胰腺癌细胞株SW1990,随机分成3组(n=3),1周后瘤体内分别注射磷酸盐缓冲液(PBS,100μl,PBS对照组)、报告基因LacZ重组腺病毒(100μl,Ad-LacZ对照组)、反义VEGF重组腺病毒(100μl,Ad-αVEGF治疗组),隔日1次,共4次。1个月后处死动物。PCNA染色、TUNEL法和CD31染色观察反义VEGF165基因转染对胰腺癌细胞增殖、凋亡和血管生成的影响。结果Ad-αVEGF治疗组PCNA阳性表达率为(38.1±6.8)%,较LacZ组(89.6±4.3)%、PBS对照组(92.1±5.2)%明显降低(P<0.01),LacZ组与PBS对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Ad-αVEGF治疗组细胞凋亡率(32.3±3.8)%,明显多于LacZ组(8.6±7.6)%和PBS对照组(9.9±4.2)%(P<0.01),LacZ组与PBS对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。Ad-αVEGF治疗组肿瘤微血管密度(12±3),明显少于LacZ组(26±5)和PBS对照组(25±4)(P<0.01),LacZ组与PBS对照组之间差异无统计学意义(P>0.05)。结论反义VEGF165基因转染可以抑制肿瘤细胞增殖,增加细胞凋亡,减少了肿瘤内微血管数量,从而抑制肿瘤生长。 相似文献
12.
目的 构建双调控溶瘤腺病毒,携带小鼠内皮抑素基因(mE),研究其对裸鼠肝癌移植瘤的抗瘤活性.方法 以人端粒酶逆转录酶启动子(hTERT)和缺氧调控元件序列(HRE)调控腺病毒E1a和E1b基因,基因组插入mE基因,构建双调控溶瘤腺病毒CNHK500-mE;在裸鼠模型中观察CNHK500-mE对肝癌移植瘤模型的疗效.结果 CNHK500能够在hTERT阳性的肝癌细胞中增殖[24 h:(16.67±4.04)%;48 h:(65.33 ±7.02)%;P<0.01],并介导mE高效表达;与空白对照组( 1895.80±323.37) mm3比较,CNHK500-mE和Ad-mE的抑瘤率分别为50.95%[(929.80±211.10) mm3,P<0.01]和29.99%[(1327.23 ±319.36) mm3,p<0.05];CNHK500-mE对癌组织间质血管的抑制作用明显强于Ad -mE(P <0.05).结论 将mE与溶瘤腺病毒结合,发挥病毒增殖的溶瘤作用和基因产物的血管抑制作用,表现出明显的协同抗瘤作用. 相似文献
13.
目的观察黑色素瘤分化相关基因7(MDA-7/IL-24)基因对人肝癌细胞Hep3B和正常的肝细胞L02的作用,并且探讨其该作用机制。方法将携带人MDA-7/IL-24基因的腺病毒Ad.mda-7感染人正常肝细胞L02和肝癌细胞Hep3S,逆转录-聚合酶链式反应(RT—PCR)和ELISA方法观察MDA-7/IL-24基因的表达,噻唑蓝染色法(MTT)观察MDA-7/IL-24对肝癌细胞的生长抑制,Hoechst染色和Annexin-V和PI双染后流式细胞仪检二种细胞的凋亡,利用PI染色后流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR方法检测bcl-2的表达变化。结果Ad.mda-7能介导外源基因MDA-7/IL-24在肝癌细胞株Hep3B和正常细胞L02中高效表达,细胞培养上清液中MDA-7/IL-24蛋白的表达(Hep3B:L02分别为790:810ng/L)。MDA-7/IL-24能明显抑制肝癌细胞的生长(抑制率分别是83%和1.2%),能促进肝癌细胞的凋亡(58%:2.2%),阻滞肝癌细胞在G2/M期(48.29%:7.95%)。而对正常的肝细胞没有促凋亡和增殖阻滞作用;能明显的抑制Hep3B的凋亡抑制基因bcl-2的表达。结论Ad.mda-7能介导MDA-7/IL-24基因在人肝癌细胞中高效表达,选择性的杀伤肝癌细胞Hep3B,促进细胞增殖阻滞,其机制是通过抑制bcl-2的表达诱导肿瘤细胞凋亡。 相似文献
14.
目的 探讨Ku80基因在人原发性肝癌的表达及其表达水平与肝癌的生物学特征的关系.方法 采用免疫组织、细胞化学技术及Westem blot技术,检测40例在同济医院肝脏外科中心行手术切除的原发性肝细胞癌患者的肝癌组织及癌旁组织、肝癌细胞系HepG2细胞及正常肝细胞系L02细胞中Ku80的表达,分析Ku80表达水平与肝癌、肝癌的分化程度及转移特性的关系.结果 Ku80在肝癌组织中的表达明显低于在癌旁肝组织中的表达,分别为14.95%和43.78%,差异有统计学意义(P<0.01);Ku80在低分化肝和中、高分化肝癌组织中的表达率分别为16.05%和13.85%,差异无统计学意义(P>0.05);伴有门静脉癌栓和不伴有门静脉癌栓的肝癌组织中Ku80的表达率分别为14.81%和16.31%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 Ku80基因在人原发性肝细胞癌组织中表达显著下调,表明Ku80表达下调与原发性肝细胞癌的发生密切相关,但与肝癌的分化程度、转移特征无明显相关. 相似文献
15.
目的 探讨二烯丙基三硫化物(DAIS)对肝移植术后大鼠肝癌皮下移植瘤生长的影响及其机制.方法 建立大鼠肝移植术后肝癌皮下移植瘤模型24只,随机分为对照组、DAIS Ⅰ组(每日1 mg/kg)、DAISⅡ组(每日15 mg/kg).用药2周后观察肿瘤体积和重量,生化法测定大鼠血清肝肾功能,荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测肿瘤的血管内皮生长因子(VEGF)、基质金属蛋白酶(MMP)-2 mRNA的表达,肿瘤组织切片行透射电镜检查.结果 与对照组比较,DAIS能抑制肿瘤生长,对照组、DAIS Ⅰ组和DAIS Ⅱ组皮下移植瘤体积分别为(0.78±0.25)、(0.42±0.17)、(0.38±0.21)cm3(P<0.01);DAIS抑制肝癌细胞VEGF mRNA、MMP-2 mRNA的转录(P<0.01).DAIS对肝移植术后大鼠肝、肾功能无明显毒性作用(P>0.05);透射电镜下可见DAIS组肿瘤组织内有较多细胞凋亡现象.结论 DAIS可以抑制肝癌细胞VEGFmRNA和MMP-2 mRNA的转录,诱导肿瘤细胞凋亡,抑制肝移植术后皮下移植瘤的生长. 相似文献
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基质金属蛋白酶组织抑制剂-2基因转染对平滑肌细胞的影响 总被引:5,自引:1,他引:4
目的探讨基质金属蛋白酶组织抑制剂(TIMP)2基因对体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞(SMCs)增殖和迁移能力的影响。方法利用重组腺病毒载体,将目的基因导入宿主细胞,建立转基因细胞株。应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)和酶联吸附试验(ELISA)检测TIMP2表达。同时应用细胞直接计数法和侵袭小室研究转染细胞体外增殖和侵袭情况。结果转染TIMP2基因的平滑肌细胞基因组中存在有590bp目的基因特异性片断,TIMP2蛋白在转染后平滑肌细胞中获得稳定表达和分泌。转染后平滑肌细胞生长受到明显抑制。AdhTIMP2组透过人工基底膜的细胞数为21.38±12.81,与正常对照组和AdCMV组(53.64±11.27,44.23±12.75)比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重组腺病毒载体介导TIMP2基因转染对体外生长主动脉平滑肌细胞增殖和侵袭有明显抑制作用。 相似文献
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<正>Objective:To investigate the expression of matrix metalloproteinase-7(MMP-7) and its tissue inhibitor (TIMP-2) in endometrial carcinoma and analyze their significance in endometrial cancer's invasion and metastasis. Methods:Endometrial tissues were collected from 64 patients with endometrial carcinoma,20 patients with endometrial hyperplasia and 20 normal women.The expressions of MMP-7,TIMP-2 in endometrium were measured by immuohistochemistry. Results;Expressions of MMP-7,TIMP-2 in endometrium of patients with endometrial carcinoma were significantly higher than those in normal endometrium(P0.05).MMP-7 expression increased with surgical-pathological staging,depth of myometrial invasion,histologic grades and lymph node metastasis(P0.05),while TIMP-2 expression was related to lymph node metastasis(P0.05).TIMP-2 expression in endometrial cancer was significantly higher than that in hyperplastic endometrium(P0.05).Expressions of TIMP-2 and MMP-7 in endometrium of patients with endometrial carcinoma were positively correlated(r=0.654,P0.001). Conclusion:Highly expressed MMP-7 and TIMP-2 in endometrium may be related to development,invasion and metastasis of endometrial cancers. 相似文献
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目的探讨子宫内膜癌(EC)组织中基质金属蛋白酶-7(MMP-7)及其组织抑制剂-2(TIMP--2)的表达,分析其与EC侵袭、转移的关系。方法选取64例EC组织标本及同期子宫内膜不典型增生组织标本20例、正常子宫内膜20例为对照组。用免疫组织化学方法检测MMP-7、TIMP-2的表达。结果 MMP-7在EC中阳性表达强度显著高于正常子宫内膜(P0.05);与不典型增生组比较差异无统计学意义(P0.05);MMP-7的阳性表达强度在不典型增生组高于正常内膜组(P0.05);MMP-7与手术-病理分期、肌层浸润深度、组织学分级及淋巴结的转移相关(P0.05)。TIMP-2在EC中阳性表达强度显著高于正常子宫内膜组和不典型增生组(P0.05);正常子宫内膜组和不典型增生组比较TIMP-2的表达无统计学意义(P0.05);TIMP-2仅与有无淋巴结转移有关(P0.05)。MMP-7和TIMP-2在EC组织中的表达呈正相关性(r=0.654,P0.001)。结论 MMP-7与TIMP-2在EC组织中均呈高表达;且子宫内膜不典型增生组MMP-7的表达强度明显高于正常内膜组,可能与EC前病变以及EC的发生发展、浸润和转移相关。 相似文献