脂肪细胞缺氧对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响

目的：观察脂肪细胞缺氧对骨骼肌细胞胰岛素作用的影响。方法：缺氧（5％CO2、85％N2、10％H2或200μmol／L CoCl2）处理小鼠3T3-L1脂肪细胞,制备条件培养基孵育小鼠骨骼肌细胞。通过对胰岛素信号通路中关键蛋白的磷酸化水平和葡萄糖转运子4（GLUT4）转位得以检测骨骼肌胰岛素作用的改变。结果：缺氧处理的3T3-L1脂肪细胞条件培养基抑制骨骼肌胰岛素信号通路,其中胰岛素受体底物10RS1Set307）磷酸化水平呈显著增高,相反蛋白激酶B（AktSer473）磷酸化水平呈显著下降,最终显著抑制了胰岛素刺激的GLUT4myc转位（p〈0．05）。结论：抑制胰岛素刺激的GLUT4myc转位,其机制与IRSt的Ser307的磷酸化水平升高和Akt的Ser473的磷酸化水平降低有关。     

复方贞术调脂方对HepG2细胞胰岛素抵抗的作用及机制研究

目的 观察复方贞术调脂方（FTZ）对胰岛素抵抗（IR） HepG2细胞的作用,为开拓FTZ的治疗范围,阐明FTZ调节糖脂代谢的机制提供实验依据.方法 用高浓度胰岛素诱导HepG2细胞使其产生胰岛素抵抗,用高、中、低3个剂量的FTZ干预后,葡萄糖氧化酶法检测HepG2细胞培养液上清液中葡萄糖的含量,实时荧光定量PCR检测HepG2细胞胰岛素信号PI-3Kp85 mRNA的表达,Western blot检测HepG2细胞胰岛素信号转导蛋白IRS1表达.结果 模型细胞培养基上清液中葡萄糖含量高于正常细胞（P＜0.05）.给予FTZ（1、25、100μg/mL）后,HepG2细胞培养基上清液中葡萄糖含量均低于模型细胞葡萄糖含量（P＜0.05）.胰岛素抵抗细胞与正常细胞相比PI-3Kp85 mRNA和IRS1的蛋白表达显著降低（P＜0.05）.给予FTZ干预后,与胰岛素抵抗细胞相比PI-3Kp85 mRNA和IRS1的蛋白表达显著增加（P＜0.05）.结论 FTZ可改善胰岛素抵抗HepG2细胞对葡萄糖的摄取.其改善胰岛素抵抗的作用机制之一可能是通过上调胰岛素信号PI-3Kp85 mRNA和IRSl蛋白质在胰岛素抵抗HepG2细胞的表达.     

骨骼肌胰岛素受体底物-1及其丝氨酸磷酸化与酪氨酸磷酸化在感染大鼠胰岛素抵抗中的作用

【摘要】目的研究不同程度感染大鼠骨骼肌胰岛素受体底物-1（IRS-1）及其丝氨酸（Ser^307）磷酸化和酪氨酸（Tyr）磷酸化在胰岛素抵抗（IR）中的作用。方法SD大鼠随机分为对照组、10％组和30％组。10％组和30％组大鼠用盲肠结扎穿孔制造感染模型,结扎长度分别为总长度的10％和30％,对照组为假手术组。3组大鼠分别在术前和术后各时间点取空腹血和后腿腓肠肌后处死。测定血浆空腹血糖（FPG）、空腹血胰岛素（FINS）、TNF-α和IL-6浓度,计算IR指数（IgIRI）,同时检测IRS-1及其Tyr磷酸化和Ser^307磷酸化水平。结果3组大鼠生存曲线之间,均差异有统计学意义（P〈0．01）。术后10％组和30％组TNF-α和IL-6均明显高于对照组（均P〈0．01）,其中30％组更高（均P〈0．01）。术后10％组和30％组FPG、FINS和IgIRI在各时间点均明显高于对照组（均P〈0．01）,而30％组则明显高于10％组（P〈0．01）,术后FINS升高程度要明显高于FPG。对照组和30％组IRS-1均呈阳性位于骨骼肌细胞质内;对照组IRS-1Tyr磷酸化呈阳性,而30％组仅呈散在阳性;对照组IILS-1Ser^307磷酸化呈阴性,而30％组呈强阳性。半定量分析显示30％组IRS—1在术后各个时间点与对照组相似（均P〉0．05）,IRS-1Tyr磷酸化在30％组术后各时间点明显低于对照组（均P〈0．01）,IRS-1Ser^307磷酸化在术后各时间点明显高于对照组（均P〈0．01）。IgIRI与IRs-1 Tyr磷酸化呈显著负相关（r=-0．957,P〈0．01）,与IRS-1Ser^307磷酸化呈显著正相关（r=0．955,P〈0．01）。结论感染状态下骨骼肌细胞内IRS-1的含量不变,而是其Tyr磷酸化降低,同时Ser^307磷酸化增强,其变化程度与机体胰岛素抵抗程度密切相关。     

动态观察肝脏JNK信号通路在非酒精性脂肪肝病中的表达

目的 动态观察c-jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)信号传导通路在非酒精性脂肪肝病(non-alcoholic fatty liver diseaae,NAFLD)大鼠肝脏中的表达及探讨其在该病发生中的意义.方法 雄性SD大鼠192只,随机分为对照组(NG)和高脂组(HG)各96只,各组分别于第1周开始至第16周末,每2周随机抽取8只大鼠使用正糖高胰岛素钳夹实验技术检测葡萄糖输注率( GIR),另抽取8只大鼠门静脉采血检测转氨酶、血脂等指标,制备肝匀浆测定氧化指标;Western blot检测肝组织JNK1、胰岛素受体底物1(IRS-1)、胰岛素受体底物1 丝氨酸307磷酸化(p-IRS-1 Ser307)、蛋白激酶B(PKB)、蛋白激酶B丝氨酸473磷酸化( p-PKBSer473)水平.结果 从第4周末起,HG与同期NG比较,HG各组间两两比较:GIR水平降低,差异均有显著性(均P＜0.05).从第2周末起,HG与同期NG比较,HG各组间两两比较:肝组织JNK1蛋白表达、p-IRS1 Ser307水平增高,p-PKBSer473水平降低,差异均具有显著性(均P＜0.05).JNK1的蛋白表达强度与IR呈正相关(Pearson相关系数为0.968,P＜0.01).结论 高脂饮食可诱导肝组织JNK1增高,通过影响胰岛素信号蛋白IRS-1、PKB的磷酸化功能导致IR;肝组织的IR出现在全身IR和肝脏脂肪变性之前,肝组织的IR可能是NAFLD发病的启动因素.     

细胞因子信号转导抑制因子3对糖尿病大鼠胰岛素受体底物1及其丝氨酸磷酸化水平的影响

目的 观察糖尿病大鼠肝脏和骨骼肌中细胞因子信号转导抑制因子3(SOCS-3)、胰岛素受体底物1(IRS-1)及丝氨酸磷酸化胰岛素受体底物1(PIRS-1Ser307)水平,探讨其在胰岛素抵抗发生中的机制。 方法 将40只雄性SD大鼠按随机数字表法分为对照组(20只)和糖尿病组(20只)。对照组大鼠予以普通饲料喂养,糖尿病组大鼠予以高糖高脂饲料喂养4周后腹腔注射链脲霉素,其中16只大鼠制成2型糖尿病模型。采用实时荧光定量PCR法检测大鼠肝脏和骨骼肌中SOCS-3、IRS-1 mRNA水平,Western blot法检测大鼠肝脏和骨骼肌中SOCS-3、IRS-1、PIRS-1Ser307蛋白水平。应用t检验及Pearson直线相关进行数据分析。 结果 ①与对照组相比,糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3 mRNA显著升高(P＜0.05),IRS-1 mRNA显著降低(P＜0.05);糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3和PIRS-1Ser307蛋白显著升高(P＜0.05),IRS-1蛋白显著降低(P＜0.05);②糖尿病组大鼠肝脏和骨骼肌SOCS-3蛋白与IRS-1蛋白呈负相关(r=-0.865、-0.756,P＜0.05),与PIRS-1Ser307蛋白呈正相关(r=0.678、0.663,P＜0.05)。 结论 糖尿病大鼠可能通过上调SOCS-3基因,增加IRS-1丝氨酸磷酸化水平和降低IRS-1表达,诱发胰岛素抵抗。      

visfatin对体外脂肪细胞胰岛素受体底物和PI3K表达的影响

目的：从胰岛素经典信号传导通路磷脂酰肌醇-3-激酶（PI3K）角度探讨内脏脂肪素（visfatin）与2型糖尿病（T2DM）胰岛素抵抗（IR）的关系。方法：复苏、传代和诱导分化人源T2DM前脂肪细胞,构建 visfatin过表达载体,进行载体转化、培养和提取;以4个不同表达梯度（0.0、1.0、2.5和5.0 μg）转染传代脂肪细胞,以0.0 μg组为对照组,其余3组为观察组;Q-PCR法检测visfatin 、胰岛素受体底物1（IRS-1）、胰岛素受体底物2（IRS-2）和 PI3K（P85α） mRNA表达水平,Western blotting法检测visfatin、IRS-1、IRS-2和PI3K（P85α） 蛋白表达水平及IRS-1和IRS-2酪氨酸磷酸化水平,[³H]-2-脱氧-D-葡萄糖摄取法测定细胞葡萄糖摄取率的变化。结果：各组 visfatin mRNA及蛋白表达水平随转染浓度梯度升高而升高（P<0.01）,所构建visfatin过表达载体有效。随visfatin表达增加,各组IRS-1和PI3K（P85α） mRNA和蛋白表达水平以及IRS-1磷酸化程度均明显升高（P< 0.01）,但IRS-2 mRNA和蛋白表达水平未出现明显变化（P>0.05）。脂肪细胞的葡萄糖摄取率随visfatin表达增加而升高（P<0.05）。结论：体外脂肪细胞visfatin过表达可增加IRS-1和PI3K的表达水平。     

去甲肾上腺素及血管紧张素Ⅱ对大鼠心肌细胞胰岛素受体及胰岛素受体底物1酪氨酸磷酸化的综合效应

目的:初步探讨去甲肾上腺素（NE）与血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对大鼠心肌细胞胰岛素受体β亚基（Ins-Rβ）及胰岛素受体底物1（IRS-1）酪氨酸磷酸化的综合效应,以及心肌胰岛素抵抗的机制。方法:培养新生大鼠心肌细胞。按照浓度梯度,将相同浓度的NE与AngⅡ的混合液加入培养基中,培养72 h后,采用Western blotting法检测胰岛素信号分子蛋白表达水平。另于每个实验组中加入AngⅡ受体阻断剂氯沙坦,分别观察NE与AngⅡ的独立效应。结果:相同浓度的NE与AngⅡ混合液可引起心肌细胞Ins-R、IRS-1及葡萄糖转运体4（GLUT4）等蛋白表达减少,Ins-Rβ亚基酪氨酸磷酸化等蛋白表达减少,IRS-1酪氨酸磷酸化蛋白表达增加（P<0.05）。1 μmol/L氯沙坦对Ins-Rβ亚基酪氨酸磷酸化蛋白表达无显著影响（P>0.05）,可减少IRS-1酪氨酸磷酸化蛋白表达（P<0.05）。结论:相同浓度的NE与AngⅡ的共同作用可降低大鼠心肌细胞Ins-Rβ酪氨酸磷酸化水平,升高IRS-1酪氨酸磷酸化水平。NE为引起Ins-Rβ酪氨酸磷酸化水平降低的主要原因,AngⅡ升高为IRS-1酪氨酸磷酸化水平升高的主要原因。     

短期和长期过氧化状态对HepG2细胞Sestrin2以及PKB胰岛素信号的影响

目的探讨短期和长期过氧化状态对Sestrin2(Sesn2)及PKB胰岛素信号的影响及调控机理。方法在人肝HepG2细胞株以葡萄糖氧化酶(GO)和含糖培养基共培养4h或16h分别造成细胞短期和长期氧化状态;或胰岛素刺激(15min或16h),然后以蛋白印迹法检测Sesn2蛋白含量和胰岛素信号变化(如PKBSer473和Thr308磷酸化水平)。为明确Sesn2作用,用Sesn2siRNA沉默Sesn2后,探讨胰岛素信号及相关信号变化。结果 GO和胰岛素处理均可明显增加HepG2细胞Sens2蛋白水平;GO短期(4h)处理可明显刺激胰岛素标志性信号分子PKBSer473的磷酸化并刺激细胞Sesn2蛋白升高;而长时间(16h)GO处理则可抑制胰岛素刺激的Sesn2表达作用;Sesn2siRNA转染后,可增强胰岛素刺激的PKBSer473和Thr308位点的磷酸化作用。因此,Sesn2对上述不同机制调控的两个PKB磷酸化位点均有抑制作用。结论 HepG2细胞在短期氧化状态下,可激活PKB活性(PKBSer473磷酸化)并诱导Sesn2蛋白表达;长期过氧化及胰岛素刺激情况下能激活Sesn2功能,而Sesn2可分别通过对PKBSer473及PKBThr308两个活性位点的抑制性作用和调控,实现对胰岛素信号及PKB活性的长期负反馈平衡作用。     

Ghrelin改善骨骼肌细胞胰岛素抵抗的机制研究

目的观察酰化ghrelin和非酰化ghrelin分别对胰岛素抵抗（insulinresistance,IR）骨骼肌细胞的胰岛素受体后信号通路关键因子P13Kp85α、Akt／PKB及GLUT4的影响。方法大鼠L6成肌细胞经棕榈酸诱导分化,建立IR模型成功后入选实验,分为酰化ghrelin组（AG组）、非酰化ghrelin组（UAG组）、P13K抑制剂（LY）＋酰化ghrelin组（LY＋AG组）、LY＋非酰化ghrelin组（LY＋UAG组）和对照组（IR—CO组）。各组经处理因素干预24h后,激光共聚焦和流式细胞术检测各组骨骼肌细胞在胰岛素刺激下对荧光葡萄糖的摄取能力,免疫印迹法检测骨骼肌组织的磷酸化／总P13Kp85α、磷酸化／总Akt、细胞膜／总GLUT4的蛋白表达,实时荧光定量PCR法检测骨骼肌组织P13Kp85α、Akt、GLUT4mRNA的表达。结果L6成肌细胞诱导分化及IR模型建立成功;AG组和UAG组的细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取分别是IR—CO组的1．25和1．28倍,磷酸形总P13Kp85α相对蛋白表达量分别是IR-CO组的1．78和1．89倍,磷酸化／总Akt、细胞膜／总GLUT4的蛋白表达是IR—CO组的1．84和1．80倍,细胞P13Kp85α、Akt／PKB、GLUT4的mRNA表达均较对照组显著升高,LY＋AG组和LY＋UAG组细胞的上述指标较单独使用酰化ghrelin或非酰化ghrelin作用时显著下降。结论酰化ghrelin和非酰化ghrelin均能改善骨骼肌细胞的IR,增加骨骼肌细胞在胰岛素刺激下的葡萄糖摄取;能够上调骨骼肌细胞的磷酸化P13Kp85α、磷酸化Akt／PKB、细胞膜GLUT4的相对蛋白表达和3者的mRNA表达,PI3K抑制剂LY294002能够抑制酰化和非酰化ghrelin的上述改善作用。     

3T3L1脂肪细胞对大鼠胰岛β细胞功能障碍的影响

目的 通过3T3L1脂肪细胞与大鼠原代胰岛细胞共培养,从细胞整体水平探讨脂肪细胞对胰岛β细胞功能的影响.方法 研究分为两组:(1)对照组:SD大鼠原代胰岛细胞组;(2)共培养组:SD大鼠原代胰岛细胞与3T3L1脂肪细胞共培养.对各组胰岛细胞观察以下指标:(1)胰岛素释放试验和细胞内胰岛素含量;(2)用RT-PCR检测葡萄糖转体2(GLUT2)、葡萄糖激酶(GCK)及内向整流钾离子通道6.2(Kit6.2)的mRNA表达水平;(3)用免疫沉淀和Western印迹检测胰岛素受体β(IR-β)、胰岛素受体底物-1(IRS-1)蛋白及其酪氨酸磷酸化程度.结果 (1)共培养组在低糖水平胰岛素分泌明显增多[(0.79±0.35)ng·h-1·ml-1胰岛比(0.38±0.09)ng·h-1·ml-1胰岛,P=0.028],而高糖刺激时两组胰岛素分泌差异无统计学意义(P=0.760),共培养组刺激指数较对照组降低[(1.57±0.61)比(2.84±0.92),P=0.04].两组的胞内胰岛素含量差异无统计学意义(P=0.102).(2)共培养组胰岛细胞GLUT2、GCK、Kil6.2的mRNA表达下调为0.27 ±0.11,(P=0.01)、0.32±0.24,(P=0.009)、0.41±0.09,(P=0.003).(3)共培养组胰岛细胞IR-β、IRS-1蛋白表达及其酪氨酸磷酸化程度均下降.结论 3T3L1脂肪细胞通过下调胰岛细胞葡萄糖刺激的胰岛素分泌(GSIS)的相关基因,及通过抑制其自身胰岛素信号通路,从而影响GSIS.脂肪细胞可能参与了2型糖尿病胰岛细胞功能障碍的发生.     

交泰丸通过骨骼肌磷脂酰肌醇(-3)激酶通路提高糖尿病大鼠胰岛素信号强度

Objective: To investigate the effect of Jiaotai Pill (交泰丸, JTP) at different constitutional proportions on insulin signaling through phosphatidylinositol 3-kinase (PI3K) pathway in the skeletal muscle of diabetic rats. Methods: The rat model of type 2 diabetes mellitus (T2DM) was established by intravenous injection of a small dose of streptozotoein plus high fat diet feeding. JTP at the same dosage of cinnamon and the increasing dosage of Coptis chinensis was administered to diabetic rats for nine weeks respectively. Plasma glucose and insulin levels were assayed. The expressions of proteins were determined by Western blot method. Results: All the three formulations of JTP decreased plasma glucose and fasting insulin levels as well as increased the protein expressions of insulin receptor β (InsRβ) subunit, insulin receptor substrate-1 (IRS-1), PI3K p85 subunit and glucose transporter 4 (GLUT4) in skeletal muscle. Meanwhile, JTP increased the tyrosine phosphorylation of InsRβ subunit and IRS-1, and reduced the serine phosphorylation of IRS-1 in skeletal muscle. Interestingly, the effect of JTP on improving insulin sensitivity was not dose-dependent. In contrast, JTP containing the least amount of Coptis chinensis exhibited the best effect. Conclusion: JTP at different constitutional proportions attenuates the development of diabetes in a rat model of T2DM. The mechanism might be associated with enhancing insulin signaling through PI3K pathway in the skeletal muscle.     

游离脂肪酸引起肝细胞胰岛素抵抗及其机制的研究

目的研究游离脂肪酸（FFA）诱导人肝癌细胞（HepG2）引起胰岛素抵抗及其分子机制.方法应用含0.25 mmol/L的软脂酸（PA组）或100 nmol/L胰岛素（Ins组）与不含软脂酸和胰岛素（正常组）的DMEM培养基培养HepG2细胞24 h,正常组和PA组中又分加与不加磷酯酰肌醇3激酶（PI3K）抑制剂Wort-mannin两个亚组,100 nmol/L胰岛素刺激后分别测定培养液中的葡萄糖浓度、细胞内的糖原含量、磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶（PEPCK）活性及胰岛素受体底物2（IRS-2）的蛋白水平.结果PA组和Ins组培养液中葡萄糖含量显著高于正常组（P＜0.01）,而细胞内糖原含量显著减少（P＜0.01）;PA组胰岛素刺激的PEPCK活性显著高于正常组（P＜0.01）,IRS-2蛋白水平显著低于正常组（P＜0.01）.无论应用Wortmannin处理与否,PA组中的PEPCK活性及IRS-2蛋白水平差异无显著性（P＞0.05）,而正常组中PEPCK活性及IRS-2蛋白水平的差异有显著性（P＜0.01）.结论加0.25 mmol/L的软脂酸培养24 h后,肝细胞可能由于胰岛素信号转导障碍产生胰岛素抵抗;胰岛素抵抗的形成可能与IRS-2及PI3K相关分子缺陷有关.     

染料木苷对FFAs诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗的影响

目的观察染料木苷对游离脂肪酸(FFAs)诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗的影响。方法软脂酸诱导HepG2细胞胰岛素抵抗,给予不同浓度的染料木苷(1、2、4μmol/L)、罗格列酮(1μmol/L)干预,采用MTT法检测药物对细胞增殖的影响,以葡萄糖氧化酶法检测葡萄糖消耗量(GC),使用Western blot法检测肝细胞葡萄糖转运体1(GLUT1)蛋白的表达水平。结果不同浓度的染料木苷对HepG2细胞增殖无影响;与对照组比较,软脂酸作用24h后,HepG2细胞在胰岛素刺激下的GC降低,GLUT1表达减少(P0.05,P0.01);与模型组比较,染料木苷组HepG2细胞GC随浓度增加而明显提高,GLUT1蛋白表达明显增加(P0.05,P0.01)。结论染料木苷能改善软脂酸诱导的HepG2细胞胰岛素抵抗。     

养精种玉汤对胰岛素抵抗卵泡影响的实验研究

目的观察养精种玉汤复方水溶液对过多雄激素诱导的胰岛素抵抗（IR）卵泡胰岛素受体底物-1（IRS-1）和葡萄糖转运体-4（GLUT4）蛋白的影响,从而初步探讨其改善卵泡IR的机制。方法收集新鲜猪卵泡,经250μM丙酸睾酮（TP）作用48 h后,检测培养液上清残糖量,评估构建IR卵泡模型是否成功。采用蛋白印迹（Western Blot）检测IRS-1和GLUT4蛋白在正常组、抵抗组和复方组中的变化。结果 250μM的TP刺激48 h后,卵泡培养液上清残糖较正常组升高了29%（P〈0.05）。当卵泡产生IR后,其IRS-1与GLUT4蛋白表达量较正常组分别降低了74%与95%（P〈0.05）。然而加入养精种玉汤复方作用后,复方组IRS-1与GLUT4蛋白表达量较抵抗组分别升高了2倍与5倍（P〈0.05）。结论过多雄激素可以使卵泡产生IR,而养精种玉汤能够上调产生胰岛素抵抗卵泡IRS-1与GLUT4蛋白的表达,这可能是其改善IR的机制。     

SP600125改善TNF-α诱导的肝癌细胞胰岛素抵抗

目的观察SP600125对肿瘤坏死因子（TNF-α）诱导肝癌细胞胰岛素抵抗的改善作用。方法用TNF-α（4 ng/mL）刺激人肝癌细胞HepG2,建立胰岛素抵抗细胞模型。蒽酮法检测细胞内糖原合成;Western blot检测JNK和p-JNK的表达。结果 TNF-α刺激HepG2后细胞内糖原合成障碍,产生胰岛素抵抗。SP600125能显著抑制TNF-α对JNK的激活,并促进细胞内糖原合成。结论 SP600125能改善TNF-α诱导的肝癌细胞胰岛素抵抗。     

LITAF基因对脂肪酸诱导HPA-v细胞胰岛素抵抗的影响

目的:通过RNA干扰技术特异性抑制LITAF基因,观察HPA-v人前脂肪细胞胰岛素信号通路的变化情况.方法:将HPA-v人前脂肪细胞和THP-1源巨噬细胞共培养,分为3组,分别为阴性对照组(Scramble组)、siRNA组和正常对照组(NC组),通过qRT-PCR,Western blot法检测LITAF,IRS-2,p-PKC,PI3-K及GLUT2的表达.结果:在软脂酸的刺激下Scramble组LITAF的表达较高于LITAF siRNA和IVC组;IRS-2,p-PKC,PI3-K及GLUT2在LITAF RNAi组较NC组和Scramble组明显提高(P＜0.05).结论:LITAF参与了软脂酸引起的脂肪细胞胰岛素抵抗,而脂肪酸作用于巨噬细胞的受体TLR4同样也是LITAF通路的细胞膜受体,软脂酸减弱了对胰岛素信号通路分子的抑制作用,因此LITAF参与胰岛素抵抗对糖尿病的发病起了至关重要的作用.     

胸腺肽α1对皮肤移植小鼠免疫功能的影响

目的 本研究拟通过建立C57-BABL/c小鼠同种异体皮肤移植模型,观察胸腺肽α1（Tα1）对皮肤移植小鼠免疫功能的影响,同时探讨Tα1在体内诱导移植免疫耐受的机制。方法 取80只C57小鼠作为供体,80只BABL/c小鼠作为受体,建立C57-BABL/c小鼠同种异体皮肤移植模型,将移植术后的受体小鼠分为4组:A组,对照组（移植后不给予任何药物,n=20）;B组,环孢素A（CsA）治疗组（移植后给予CsA 10 mg/kg,n=20）;C组,Tα1治疗组（移植后给予Tα1 400 μg/kg,n=20）;D组,联合治疗组（移植后给予CsA 10 mg/kg+Tα1 400 μg/kg,n=20）。上述药物每日腹腔注射1次,共注射21 d。观察、记录移植皮片存活情况;各组分别于移植术后第1、7、14、21 d处死5只小鼠,取血行液相芯片细胞因子检测;取移植皮片作HE染色;取小鼠脾脏淋巴细胞行流式细胞术检测T细胞分化。结果 在移植后第1、7、14、21 d,同时点B、C、D组与A组相比,D组分别与B组、C组相比,白细胞介素（IL）-1、IL-2、IL-6、IL-17均降低（ P<0.05）,而IL-10均升高（ P<0.05）;而 B、 C两组相比差异无统计学意义。CsA与Tα1单药对细胞因子的作用类似,而联合用药能加强单药效果。B组及D组CD4/CD8比例倒置。D组CD4+CD25+ T细胞数高于其他组,差异有统计学意义（ P<0.05）。结论 移植后使用Tα1,在一定程度上能减轻T细胞对移植物的损伤,但不能完全阻止排斥反应的发生。     

苯丙氨酸对C2C12细胞葡萄糖摄取能力的影响及与mTOR-p70S6K通路的关系探讨

目的 观察苯丙氨酸对小鼠成肌细胞系C2C12葡萄糖摄取能力的影响,以及刺激后细胞内哺乳动物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）-p70S6K信号通路分子的变化。方法 体外培养C2C12细胞,分化诱导为多核的肌管细胞后进行饥饿处理,然后分别用不同浓度苯丙氨酸（1.25、2.5、5、10、20 mmol/L）处理细胞,以KRB平衡液作为对照。通过检测2-NBDG评价细胞葡萄糖摄取能力。用Western blot方法检测细胞内mTOR、p70S6K、胰岛素受体底物（IRS）-1、蛋白激酶B(Akt)的表达情况。结果 与KRB平衡液对照相比,5 mmol/L亮氨酸使C2C12细胞的葡萄糖摄取能力下降了约30%（P=0.001）,5 mmol/L苯丙氨酸使C2C12细胞摄取葡萄糖的能力上升了约40%（P＜0.01）,且苯丙氨酸的这种促进作用随浓度增大有逐渐增强的趋势。苯丙氨酸对细胞内mTOR Ser2448磷酸化水平无明显影响。除1.25 mmol/L外,其它浓度苯丙氨酸均能抑制p70S6K Thr389的表达。亮氨酸使IRS-1 Ser636/639磷酸化水平表达增高（P＜0.01）,除1.25 mmol/L外,其它浓度的苯丙氨酸均有抑制IRS-1 Ser636/639表达的趋势,但与对照相比差异无统计学意义（P=0.381）。高浓度短时间的苯丙氨酸刺激对C2C12细胞内的Akt Ser473表达无明显影响。结论 苯丙氨酸可能通过减少p70S6K的磷酸化,继而减少p70S6K对IRS-1的刺激作用而使细胞葡萄糖摄取能力增强。但苯丙氨酸对mTOR-p70S6K通路的抑制作用不通过Akt的激活。