应用基因芯片检测系统性红斑狼疮患者外周血B淋巴细胞

目的 应用寡聚核苷酸基因表达芯片研究系统性红斑狼疮(SLE)患者与健康志愿者外周血B淋巴细胞基因表达谱的变化.方法 应用包含21522条70 mer长度Oligo DNA的寡聚核苷酸芯片(22K Human Genome Array)分别检测6例SLE患者和6名健康志愿者外周血B淋巴细胞基因表达谱,应用聚类分析法分析差异表达的基因.结果 SLE患者外周血B淋巴细胞和健康志愿者B淋巴细胞之间基因表达谱有显著差异,芯片中聚类表达显著上调的基因15个,主要包括Ⅰ型干扰素(IFN)通路中的相关分子;聚类表达显著下调的基因22个,主要包括神经内分泌相关的精氨酸甲基化转移酶家族等与雌激素代谢相关的基因.进一步对这些差异表达基因进行了初步的功能分类分析,分析结果表明这些基因主要与B淋巴细胞的JAK-STAT信号通路和激素代谢相关.结论 SLE患者外周血B淋巴细胞基因表达谱存在显著差异,芯片显示氨基酸代谢、激素代谢、细胞增殖和凋亡、炎症反应等相关生物学功能的改变可能参与SLE的发病.     

活动性系统性红斑狼疮自噬及相关基因研究

目的 观察活动性系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞(PBMC)的自噬现象并检测相关基因的表达水平. 方法 以初诊及新发作的活动性SLE患者20例为病例组,类风湿关节炎(RA)患者10例和健康志愿者10名分别作为对照组.密度梯度离心法分离PBMC,并利用贴壁法除去单核细胞.运用透射电镜(TEM)观察细胞的超微结构,半定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及实时定量RT-PCR检测各组PBMC中Beclin1、微管相关蛋白1轻链3(MAPLC3)mRNA的表达水平. 结果 TEM发现活动性SLE患者PBMC中存在自噬现象;Beclinl和MAPLC3 mRNA在活动性SLE患者表达量均增高,且分别较RA组和健康对照组表达差异有统计学意义. 结论 活动性SLE患者外周血PBMC存在自噬现象,且细胞自噬相关基因表达较健康对照组和RA组增强,这可能与SLE的发生、发展相关.     

IKB激酶在系统性红斑狼疮患者中表达及与干扰素-α产生的关系

目的 研究系统性红斑狼疮(SEE)患者外周血白细胞中IKB激酶(IKK-α)、干扰素(IFN)-αmRNA的表达,并检测血浆中IFN-α的水平,以探讨SLE患者中IKK-α在IFN-α产生中的作用.方法 SYBR green dye I实时定量聚合酶链反应(PCR)方法检测外周血白细胞IKK-α和IFN-α的表达;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测血清IFN-α的水平.结果 ①SLE患者外周血IKK-α mRNA表达高于对照组(P<0.05);在活动组SLE患者中IKK-α mRNA的表达高于非活动组SLE患者(P<0.01).②SLE患者IFN-αmRNA的表达低于对照组(P<0.01),IFN-α mRNA的表达在非活动组SLE患者中低于活动组SLE患者(P<0.01).③SLE患者血清中IFN-α的水平高于对照组(P<0.01),其中,活动组SLE患者血浆IFN-α水平显著高于非活动组患者(P<0.05);SLE患者血浆中IFN-α浓度与抗双链DNA(dsDNA)抗体呈正相关(P=0.001),与补体C3水平呈负相关(P=0.005).④SLE患者IKK-α mRNA的表达与血浆中IFN-α的水平呈正相关(P=0.001).结论 SLE患者IKK-α mRNA的表达明显增高,且与血浆中IFN-α的水平呈正相关;而血浆中IFN-α的水平与SLE的发病及病情活动相关,提示IKK-α可能在SLE的发病中发挥重要的作用.     

类风湿关节炎患者外周血Th17细胞的检测及意义

目的 探讨Th17细胞在类风湿关节炎(RA)患者外周血中的水平及意义.方法 分离RA患者和健康者外周血单个核细胞(PBMC),免疫磁珠阴选CD4~+T细胞,用或不用非特异性刺激剂(A-CD3、A-CD28),然后加佛波酯/离子霉素(PMA/Ion),经固定,透膜处理进行细胞内染色,流式细胞术(FCM)检测CD4~+T细胞内白细胞介素(IL)-17~+/干扰素(IFN)-γ~+、IL-17~+/IL-6~+水平.分组:①健康对照组;②RA病情稳定组;③RA病情活动组.结果 免疫磁珠阴选CD4~+T细胞纯度>90%.RA病情活动组IL-17表达水平(1.54±0.41)显著高于RA病情稳定组(0.70±0.21,P<0.01),二者又显著高于健康对照组(0.42±0.12,P<0.01).用A-CD3、A-CD28、IL-23刺激后,CD4~+T细胞IL-17胞内表达水平较无刺激组显著增加(P<0.05).CD4~+T细胞IFN-γ表达水平呈现与IL-17表达相似的特点,而RA患者与健康对照组IL-6表达水平差异无统计学意义.RA患者IL-17胞内表达水平与IFN-γ、IL-6无显著相关.结论 RA患者外周血CD4~+T细胞中存在异常增高的Th17细胞,且其水平与病情活动相关,有望作为判断RA患者病情活动的指标之一.     

类风湿关节炎中HLA-DR分子表达量的改变

目的 探讨外周血淋巴细胞表面HLA－DR分子表达量在类风湿关节炎（RA）发病中的作用。方法 选择RA患者活动期34例,静止期40例;正常对照（NC）43例,急性风湿性关节炎（ARA）21例及系统性红斑狼疮（SLE）28例,分别检测外周血淋巴细胞表面的HLA－DR分子表达量。同时在活动期RA治疗3个月前后,分别检测HLA－DR分子表达量、类风湿因子（RF）及对症状计分,进行统计学分析。结果 ①RA活动组HLA－DR分子表达水平最高（P＜0．05）,ARA组及RA静止组较NC组明显增高（P＜0．05）,而SLE组与NC组无明显差别（P＞0．05）;②RA活动组HLA－DR分子表达量及RF的阳性率均在治疗后显著下降,临床症状明显改善。结论 ①检测患者外周血淋巴细胞表面HLA－DR表达量有助于RA的诊断及监测RA活动度;②HLA－DR分子表达量与RF的动态变化相平行;③动态观察HLA－DR分子表达量变化有助于判断RA病情及其预后。     

系统性红斑狼疮的基因表达谱及其免疫调控通路的研究

目的 通过基因表达谱勾画系统性红斑狼疮（SLE）发病机制中可能的免疫调控通路。方法 用寡核苷酸基因芯片研究了10例SLE（包括2例SLE同胞对）和10份正常对照的外周血白细胞基因表达谱。进行了基因表达谱和临床免疫表型的聚类分析和比较，筛选统计学显著性差异表达的SLE相关基因，并在转录和蛋白表达水平验证芯片表达谱结果。结果 聚类分析揭示SLE临床免疫表型与基因表达谱特征存在关联。获得25个显著性表达的SLE相关基因，其中大部分未经报道。转录水平直接验证了其中C／EBPD，LY6E，OAS2三个基因的表达，较大样本独立验证了C／EBPD，LY6E在SLE中的表达上调；蛋白质水平验证了C／EBPD的高表达。结论 SLE基因表达谱可能是其临床免疫表型的分子基础，探讨了通过基因表达谱进行SLE分型乃至鉴别诊断的可能性。通过显著性差异表达的SLE相关基因，推测干扰素及其免疫调控通路在SLE发病中可能扮演重要角色。     

系统性红斑狼疮初发患者外周血中维生素D及其受体mRNA的水平和意义

目的 ①检测初发系统性红斑狼疮(SEE)患者外周血中维生素D内分泌系统的水平,探讨维生素D内分泌系统在SLE发病中的作用.②分析维生素D内分泌系统水平与SLE患者骨密度和病情活动程度的关系.方法 选择初发SLE患者43例,健康对照组44名,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测患者外周血浆中25羟基维生素D3(250HD3)和1,25-二羟基D3[1,25(OH)2D3]的水平,利用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测患者外周血维生素D受体(VDR)表达水平.双能X线分别检测患者腰椎(L1-4)和股骨近端2个部位的骨密度,根据SLE疾病活动指数(SLEDAI)评分评估SLE病情活动程度.采用统计学单因素分析分别检验25OHD3、1,25(OH)2D3和VDR基因mRNA表达水平与SLE患者骨密度和病情活动程度的关系.结果 初发SLE患者25OHD3和1,25(OH)2D3激素水平与健康对照组比较,差异有统计学意义(P均<0.01);初发SLE患者组与健康对照组比较,VDR基因mRNA表达水平的差异有统计学意义(P<0.01);SLE患者2个部位的骨密度均低于健康对照组,且两组间的差异有统计学意义(P<0.05),SLE患者组骨量异常的发生率为35%,骨量异常与骨量健康对照组之间25OHD3、1,25(OH)2D3激素水平及VDR基因mRNA表达水平的差异无统计学意义(P0.05);250HD3、1,25(OH)2D3激素水平和VDR基因mRNA表达水平与SLE患者骨密度的情况不存在相关性(r=0.187,P0.05;r=0.172,P0.05;r=0.287,P0.05),它们与SLE患者的病情活动度之间也不存在相关性(r=0.054,P0.05;r=0.190,P0.05;r=0.046,P0.05).结论 SLE患者维生素D激素的水平及VDR基因的表达异常提示维生素D内分泌系统可能参与了SLE的发病,但与SLE患者骨量异常的发生和SLE病情活动度不存在相关性.     

系统性红斑狼疮凋亡相关基因Fas、sFas mRNA表达研究

目的　从转录水平研究系统性红斑狼疮患者凋亡相关基因Fas、sFas表达情况 ,探索凋亡在SLE发病中的作用。方法　利用荧光标记RT PCR半定量方法 ,以 β actin为内参照 ,对 5 0例SLE、2 4例RA和 2 4名正常人外周血白细胞凋亡相关基因Fas、sFasmRNA表达水平进行了检测。结果　SLEFas、sFas表达均高于正常对照 ( 3 2± 1 8vs 2 1± 0 6,P <0 0 0 1和 1 2± 0 7vs 0 5 8±0 2 7,P <0 0 0 0 1) ,并且表达量与病情活动度相关 (相关系数分别为 0 5 2 18,P =0 0 0 7和 0 4 188,P =0 0 3 7) ,而RA仅sFas表达增高 ( 0 9± 0 5vs 0 5 8± 0 2 7,P <0 0 1)。结论　SLE患者外周血白细胞凋亡相关基因表达存在异常 ,提示凋亡在SLE发病中可能具有一定作用和意义。     

类风湿关节炎患者外周血白细胞介素1受体相关激酶1与疾病活动及CD4+T细胞亚群分析

目的探索RA患者外周血白细胞介素1受体相关激酶1(IRAK1)的表达, 并分析其与疾病活动及CD4+ T细胞亚群的相关性。方法①采用ELISA检测77例RA组患者和24名健康对照组外周血中IRAK1的活性表达量;②收集RA患者的一般资料及临床观察指标(包括DAS28评分、ESR、CRP、外周血CD4+ T细胞亚群等);③采用独立样本t检验或Mann-whitneyU检验进行两组间的比较;采用Spearman秩相关及多元线性回归分析IRAK1的表达水平与各临床观察指标的相关性。结果① RA组外周血IRAK1的表达相比于健康对照组显著升高(P<0.001)。② RA组外周血CD4+ T细胞亚群, 较健康对照组相比, 调节性T细胞(Treg)绝对值、Treg%均降低(P<0.001), 辅助性T细胞17(Th17)绝对值、Th17%、Th17/Treg比值均升高(P<0.001), 且Th1/Th2比值明显升高(P<0.05)。③随着RA患者疾病活动度的增加, IRAK1的活性表达量也增加, RA组外周血IRAK1的表达与ESR、受累关节的个数、DAS28评分呈正相关...     

B淋巴细胞刺激因子的异常表达与系统性红斑狼疮发病的关系

目的 通过检测系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血中B淋巴细胞刺激因子(Blys)的表达水平,研究BlyS与SLE发病的关系,进一步阐明SLE的发病机制.方法 采用反转录一聚合酶链反应(RTPCR)半定量技术,分别检测38例SLE患者及36名健康者外周血细胞内B淋巴细胞刺激因子的mRNA水平.结果 狼疮组外周血细胞内B淋巴细胞刺激因子的mRNA表达水平显著高于健康对照组,比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论 B淋巴细胞刺激因子在狼疮组中的表达有明显升高趋势,说明BlyS在SLE的致病过程中起着重要作用.     

干扰素指数在系统性红斑狼疮诊断和活动性判断中的应用价值

目的 选择5个干扰素诱导基因人黏液病毒抗性蛋白1(MX1);2',5'-寡腺苷酸样合成酶(OASL);2'5'-寡腺苷酸合成酶1(OAS1);α-干扰素诱导蛋白15(ISG15)、淋巴细胞抗原6复合体E(LY6E)作为系统性红斑狼疮(SLE)候选基因进行表达研究并探讨干扰素诱导基因在SLE中的表达情况以及对SLE诊断的临床价值.方法 收集68例SLE患者、50例其他自身免疫性疾病患者和26名健康者外周血细胞,提取RNA,以实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术进行检测,观察各组间基因表达量的差异及各组间干扰素(IFN)指数的差异;应用受试者工作曲线(ROC)分析软件评价干扰素诱导基因在SLE诊断中的价值,Spearman相关分析法分析干扰素指数与SLE疾病活动度指标[SLEDAI积分和尿蛋白定量(24 h)]的相关性.采用t检验和秩和检验进行统计学分析.结果 ①SLE患者外周血细胞MX1、OASL、OAS1、ISG15、LY6E基因的表达水平均显著高于疾病对照组和健康对照组,差异有统计学意义(P值均＜0.01).②SLE患者干扰素指数(17.9±29.1)显著高于疾病对照组(3.0±8.1)和健康对照组(0±3.3),差异有统计学意义(P值均＜0.01).③在SLE诊断中,干扰素指数ROC曲线下的面积(AUCROC)为0.846,当干扰素指数取2.56时,对SLE患者诊断的敏感性为82.4%,特异性为76.3%.④SLE患者干扰素指数水平与SLEDAI积分(r=0.256,P＜0.01)和尿蛋白定量(24 h)水平(r=0.337,P＜0.01)呈显著正相关.⑤合并肾脏损害的SLE患者、抗Sm与抗dsDNA抗体阳性SLE患者干扰素指数显著升高,差异有统计学意义(P值均＜0.05).结论 干扰素诱导基因MX1、OASL、OAS1、ISG15和LY6E在SLE患者中呈高表达,干扰素指数的升高对于SLE的诊断及疾病活动性判断具有参考价值.     

桡动脉、乳内动脉、大隐静脉中RhoA/ROK mRNA 的表达与心血管危险因素的相关性

目的 探讨桡动脉（RA）、乳内动脉(IMA)、大隐静脉(GSV) 中RhoA/Rho 激酶（ROK）mRNA表达的差异，以及心血管危险因素对其表达的影响。方法 取14例CABG术中废弃的配对RA、IMA、GSV各5～10 mm，用RT-PCR检测RhoA/ROK mRNA的水平。采用多元逐步回归分析心血管危险因素对3种桥血管中RhoA/ROK表达的影响。结果 ①RT-PCR:IMA与GSV比较，RhoA和ROK mRNA表达的水平无显著差异；但RA中RhoA 和ROK mRNA表达的水平显著高于IMA（P<0.01，P<0.05）。②多元逐步回归分析显示，GSV中RhoA和ROK mRNA表达的水平与糖化血红蛋白呈显著正相关（r=0.642、r=0.692,P<0.05）。3种血管中RhoA、ROK mRNA的表达与年龄、总胆固醇、三酰甘油、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇、载脂蛋白A1、载脂蛋白B、C反应蛋白、胰岛素、胰岛素抵抗及体质量指数均无显著相关。结论 ①RA、IMA、GSV管壁中RhoA/ROK mRNA的表达有差异，RA中Rho/ROK mRNA的表达明显强于IMA。②糖化血红蛋白可影响GSV 中RhoA/ROK mRNA的表达。     

高迁移率族蛋白1及Toll样受体4在类风湿关节炎患者血清和外周血单个核细胞中的表达及意义

目的 通过研究高迁移率族蛋白(HMGB)1及Toll样受体(TLR)4在类风湿关节炎(RA)外周血单个核细胞(PBMC)和血清中的表达,探讨HMGB1的作用及其与疾病活动的关系.方法 选取活动期RA患者38例和非活动期RA患者36例及健康对照组26名.采用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测PBMC中HMGB1 mRNA的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清中HMGBI蛋白的表达.采用流式细胞术分析PBMC上TLR4的表达.结果 ①活动期RA组PBMC中HMGB1 mRNA相对表达量和血清中HMGB1蛋白水平均高于健康对照组和非活动期RA患者[分别为2.63与0.71.0.93和(10.2±1.2)与(7.5+1.8),(8.3±1.8)ng/ml,P＜0.01.②活动期RA患者CD14+单核细胞和CD3+淋巴细胞上TLR4蛋白相对表达量高于非活动期和健康对照组(P＜0.05或P＜0.01),非活动期患者高于健康对照组(P＜0.05或P＜0.01).③血清中HMGB1蛋白水平与红细胞沉降率(ESR)、C反应蛋白(CRP)、类风湿因子(RF)、关节压痛数、肿胀数及关节X线分期均呈正相关,亦与TLR4蛋白相对表达量呈正相关.结论 RA患者PBMC具有合成和分泌HMGB1蛋白的功能,并部分通过与TLR4结合激活炎症反应,加重骨质破坏.     

系统性红斑狼疮患者Ⅰ型干扰素诱导基因的表达

目的 通过观察系统性红斑狼疮(SLE)患者Ⅰ型IFN诱导基因[黏液病毒抗性蛋白1(MXI)、2',5'-寡腺苷酸样合成酶(OASL)、2',5'-寡腺苷酸合成酶1(OASI)、α-干扰素诱导蛋白15(ISGl5)、淋巴细胞抗原6复合体E(LY6E)]mRNA表达,探讨其对SLE活动或感染鉴别诊断的作用.方法 收集48例SLE患者、16例类风湿关节炎(RA)患者、26例健康人外周血细胞,提取RNA,用实时荧光定量PCR检测所有受试者MXI、OASL、OASI、ISG15、LY6E mRNA表达.单因素和多因素logistic回归分析上述5个基因表达水平与狼疮感染或活动的关联性.结果 (1)与健康人相比,SLE患者MXI、OASL、OASI、ISGl5、LY6E mRNA表达水平显著增高,差异有统计学意义(P值均小于0.01);SLE患者OASL、OAS1、ISG15、LY6E mRNA表达水平较RA者显著增高,差异有统计学意义(P值均小于0.01).(2)男性SLE患者MXI、OASL、OASI、ISGl5、LY6E mRNA表达水平与女性患者相比,差异均无统计学意义.(3)logistic回归分析显示,ISG15、LY6E是SLE活动的独立危险因素(P相似文献   

Phenotypic characteristics of B cells in Behçet's disease: increased activity in B cell subsets

OBJECTIVE: Increased numbers of spontaneous Ig secreting B cells and elevated immunoglobulin levels have been described in Beh?et's disease (BD), in addition to changes in numbers and activities of T cells, natural killer cells, and monocyte-macrophages. We investigated other characteristics of B cells in BD. METHODS: B lymphocyte subsets (CD19+CD5+, CD19+CD13+, CD19+CD28+, CD19+CD33+, CD19+CD80+, CD5+CD19+CD45RA+, CD5+CD19+CD45RO+) were phenotypically evaluated in 50 patients with BD, 80 healthy subjects, and 20 other patients with rheumatoid arthritis (RA), systemic lupus erythematosus (SLE), and sepsis. RESULTS: Although the B cell number (CD19+) was normal, CD13 and CD33 positive B cells were more numerous in BD and sepsis compared to healthy controls and patients with RA and SLE. The percentage of CD45RO positive B cells was higher in both BD and sepsis, while the percentage of CD80 positive B cells was high only in BD. There was no increase in the CD5+CD19+ B cell subset, previously shown to be increased in several autoimmune diseases. Naive (CD45RA) and memory (CD45RO) status of CD5+CD19+ and CD5-CD19+ B cells showed that CD45RA expression was higher in CD5+CD19+ B cells, whereas expression of both CD45RA and CD45RO was higher in the CD5-CD19+ B cell group compared with healthy controls. CONCLUSION: Although the total B cell number was normal, increased levels of activated and memory B cell subsets suggest a modified B cell function in BD, which may be related to a weak stimulus by an unknown external antigen.     

Plasminogen activator inhibitor-1 as a link between pathological fibrinolysis and arthritis of Behçet's disease

Behçet's disease (BD) commonly presents with articular manifestations and thrombotic vasculopathy. Arthritis of BD characteristically demonstrates a recurrent and nondestructive course. The pathobiological basis of the thrombotic vasculopathy and protective factors against cartilage destruction in arthritis of BD have not been elucidated. Apart from being involved in fibrinolysis and thrombolysis, the plasminogen activation system can contribute to the pathogenesis of destructive joint diseases such as rheumatoid arthritis (RA). Plasminogen activator inhibitor-1 (PAI-1) is a well known fibrinolysis inhibitor. In this study, local synovial fluid and circulating plasma PAI-1 concentrations of BD were assessed in comparison to RA patients and healthy controls to investigate the nonerosive, nondestructive nature of Behçet arthritis. Twelve patients with BD (mean age 34±11 years, males:females 6:6), 15 with RA (mean age 36±8 years, males:females 3:12), and 15 healthy adults (mean age 32±10 years, males:females 6:9) were included in this study. Plasma PAI-1 antigen levels and PAI-1 activities were significantly greater in BD patients than in RA patients and healthy controls (P<0.001). Synovial fluid levels of both parameters were also higher than in RA patients (P<0.001). These results suggest that PAI-1 may promote hypofibrinolysis of Behçet's vasculopathy and also have a protective role in the arthritis of BD.     

PIM1 gene cooperates with human BCL6 gene to promote the development of lymphomas

Diffuse large B-cell lymphomas in humans are associated with chromosomal rearrangements (～40%) and/or mutations disrupting autoregulation (～16%) involving the BCL6 gene. Studies of lymphoma development in humans and mouse models have indicated that lymphomagenesis evolves through the accumulation of multiple genetic alterations. Based on our prior studies, which indicated that carcinogen-induced DNA mutations enhance the incidence of lymphomas in our mouse model expressing a human BCL6 transgene, we hypothesized that mutated genes are likely to play an important cooperative role in BCL6-associated lymphoma development. We used retroviral insertional mutagenesis in an effort to identify which genes cooperate with BCL6 in lymphomagenesis in our BCL6 transgenic mice. We identified PIM1 as the most frequently recurring cooperating gene in our murine BCL6-associated lymphomas (T- and B-cell types), and we observed elevated levels of PIM1 mRNA and protein expression in these neoplasms. Further, immunohistochemical staining, which was performed in 20 randomly selected BCL6-positive human B- and T-cell lymphomas, revealed concurrent expression of BCL6 and PIM1 in these neoplasms. As PIM1 encodes a serine/threonine kinase, PIM1 kinase inhibition may be a promising therapy for BCL6/PIM1-positive human lymphomas.