复方中药对老年大鼠心肌细胞Cx43表达的影响

目的探讨复方中药对老年大鼠心肌细胞间隙连接蛋白43（connexin43,Cx43）表达的影响,为心脏疾病的中药治疗提供细胞生物学及分子生物学基础。方法利用免疫组织化学和图像分析方法探讨复方中药处理对大鼠心肌细胞Cx43的分布和表达量的影响。结果免疫组化结果显示,空白对照组Cx43呈点状,散布在心肌细胞胞浆中;复方中药组Cx43呈线状,多分布在心肌细胞闰盘处和侧一侧相接处。图像分析显示复方中药组和空白对照组对Cx43的表达量影响的差异无统计学意义（P〉0．05）。结论复方中药处理后,可改善老年大鼠心肌细胞Cx43分布。     

汞中毒大鼠QRS时限与Cx43及其Ser368位点磷酸化表达水平研究

目的探讨汞中毒大鼠心电图QRS时限与心肌缝隙连接蛋白43(Cx43)及其Ser368位点磷酸化(pS368Cx43)表达水平。方法40只Wistar大鼠随机分为对照组(0.2ml生理盐水)及氯化汞低、中、高剂量染毒组(33.5、67.0、134.0μg/kg氯化汞溶液)，皮下注射染毒，1次/d。染毒90d后采集大鼠心电图，分析QRS时限改变，采用免疫组织化学染色法和Western blot法检测心室肌组织Cx43、pS368Cx43蛋白的表达情况；分析汞中毒大鼠QRS时限与Cx43及pS368Cx43表达量与分布改变的关系。结果与对照组相比，慢性汞中毒大鼠心电图QRS时限延长(P<0.05)，心室肌组织Cx43、pS368Cx43表达量降低(P<0.05)；Cx43和pS368Cx43在对照组主要分布于闰盘处，汞中毒组分布紊乱，部分呈现侧膜化改变。结论汞中毒大鼠QRS时限延长，其机制可能与汞中毒导致心肌Cx43和pS368Cx43表达降低及分布异常有关。     

糖尿病大鼠心肌Cx43的变化及相关性研究

目的 研究糖尿病大鼠心肌连接蛋白(Connexin43)的变化.方法 使用链脲佐菌素(STZ)建立糖尿病大鼠模型.经右颈总动脉插管采用电生理记录仪及超声心动图检测心功能的变化,应用免疫组化及图像分析技术观察心肌细胞CX43的改变.结果 糖尿病组大鼠心肌细胞Cx43表达明显减少,以24周组更明显(P均<0.01),12周及24周组的最大舒张期压力变化速率(-dp/dtmax)、最大收缩期压力变化速率(+dp/dtmax)均显著下降(P<0.01),左室射血分数(LVEF)亦明显降低(12周P<0.05;24周P<0.01),Cx43与-dp/dtmax(r=0.564,P<0.01)、+dp/dtmax、LVEF(r=0.426,0.414,P<0.05)呈正相关.结论 糖尿病大鼠心肌Cx43表达明显减少,心功能减低,两者具有明显相关性.     

Connexin43磷酸化调节与细胞间隙连接通讯功能

细胞间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)对于细胞增殖、分化、内环境稳定及机体新陈代谢、生长发育等生理过程起重要作用.细胞间隙连接是由细胞间隙连接蛋白(connexin,Cx)六聚体形成的跨膜通道结构,细胞间隙连接蛋白是构成细胞间隙连接的蛋白大家族,在人类组织中已经有超过20种细胞间隙连接蛋白被鉴定,connexin43(Cx43) 则是该蛋白家族中组织分布最广、研究最多的一个重要成员,主要表达在心肌、肺、平滑肌、晶状体、成纤维细胞、星形细胞等多种组织     

DEHP对大鼠睾丸支持细胞间隙连接蛋白43表达和间隙连接通讯功能的影响

目的 通过对原代培养的大鼠睾丸支持细胞进行邻苯二甲酸二乙基己酯(di-2-ethylhexyl phthalate,DEHP)染毒,探讨DEHP体外对大鼠睾丸支持细胞间隙连接蛋白43(connexin 43,Cx43)表达及间隙连接通讯(gap junction intercellular communication,GJIC)功能的影响.方法 体外分离和原代培养大鼠睾丸支持细胞,应用不同浓度的DEHP(10、50、100nmol/L)作用于支持细胞24h,应用荧光定量PCR法检测Cx43基因mRNA表达,用Weastern blot方法检测Cx43蛋白表达,划痕标记荧光染料示踪方法检测GJIC功能.结果 与对照组相比,DEHP各组支持细胞Cx43基因mRNA和蛋白表达均下降(P＜0.05),呈浓度依赖关系,同时支持细胞GJIC功能降低.结论 DEHP在体外可通过抑制大鼠睾丸支持细胞Cx43基因表达而抑制GJIC功能,进而影响支持细胞功能.     

大气细颗粒物对心肌细胞缝隙连接通讯的影响

目的 探讨大气细颗粒物(PM2.5)对原代培养大鼠心肌细胞的急性毒性作用及对缝隙连接通讯的影响.方法 对出生24 h的SPF级SD大鼠乳鼠分离心肌细胞进行原代培养,以不同浓度(0、1、10、100g/μml)的PM2.5染毒24 h,采用划痕染料标记示踪法(SLID)测定细胞缝隙连接通讯(GJIC)水平,采用间接免疫荧光细胞化学方法测定缝隙连接蛋白Cx43分布及密度,采用免疫印迹法测定连接蛋白Cx43的表达.结果 随PM2.5浓度的上升,细胞间荧光扩散面积减少,细胞膜连接处Cx43绿色荧光减弱,Cx43蛋白表达量稍有减少.与对照组比较,10和100μg/ml染毒组细胞间荧光扩散面积减少,差异有统计学意义(P<0.01);10和100 μg/ml染毒组Cx43荧光强度下降,差异有统计学意义(P<0.01).结论 PM2.5可抑制心肌细胞的缝隙连接通讯功能.其机制可能是通过影响心肌细胞的Cx43表达和分布.     

人参皂苷 Rg1 通过调控缝隙连接拮抗铅致大鼠心肌细胞损伤的作用机制

目的 观察醋酸铅染毒大鼠经人参皂苷 Rg1(ginsenoside Rg1,以下简称Rg1)干预前后心肌缝隙连接蛋白Cx43(connexin 43,Cx43)及其磷酸化蛋白(p-Cx43)的表达变化,探究Rg1通过缝隙连接对铅致心肌细胞损伤的保护作用。方法 将无特定病原体级的Sprague Dawley雄性大鼠按随机数字表法分为对照组,以二甲基亚砜(DMSO)溶解辛醇,作为辛醇对照组,辛醇为Cx43特异性阻滞剂,设置DMSO组及辛醇组,且不做干预;低、中、高剂量铅染毒组(90、180、360 mg/kg),Rg1干预组分为不同剂量铅染毒+Rg1组、辛醇+Rg1组、高剂量铅染毒+辛醇+Rg1 组(Pb360 mg/kg+辛醇+Rg1),共11组,每组8只。对照组给予等量蒸馏水,DMSO组、辛醇组按照体质量进行腹腔注射染毒(5 mmol/kg),不同剂量铅染毒组和铅染毒+Rg1 组经口灌胃醋酸铅溶液,每天染毒1次,每周连续5d,造模4周后,各Rg1(20 mg/kg)干预组每天给药1次,每周连续 5 d,共4周;对照组及不同剂量铅染毒组每天经口灌胃蒸馏水。4 周后处死大鼠收集心脏组织,计算心脏脏器系数,观察心肌组织病理学变化,检测全血血铅浓度,Cx43、p-Cx43、Bcl-2、Bax、Cleaved caspase-3、LC3-Ⅰ和 LC3-Ⅱ蛋白表达水平。结果 与对照组相比,染毒组血铅水平显著升高(P<0.05);高剂量铅染毒组心脏脏器系数显著降低,Rg1干预后脏器系数升高(P<0.05)。HE染色显示,对照组、DMSO组及辛醇组心肌结构无明显变化;低、中剂量铅染毒组出现心肌纤维排列紊乱;高剂量铅染毒组心肌纤维断裂。与铅染毒组、辛醇组相比,Rg1 干预组心肌组织结构明显改善,心肌纤维排列相对整齐紧密,无明显炎症。Western blot检测结果显示,铅染毒组Cx43、p-Cx43、Bcl-2及LC3-Ⅰ蛋白表达低于对照组(P<0.05),Bax、Cleaved caspase-3 及 LC3-Ⅱ蛋白表达高于对照组(P<0. 05);Rg1干预组Cx43、p-Cx43、Bcl-2及LC3-Ⅰ蛋白表达高于各剂量铅染毒组(P<0.05),Bax、Cleaved caspase-3及LC3-Ⅱ蛋白表达低于各剂量铅染毒组(P<0.05)。辛醇组与对照组、辛醇+Rg1 组相比,Cx43蛋白表达差异无统计学意义。结论 人参皂苷Rg1对铅致心肌细胞损伤的保护作用可能与其升高Cx43、p-Cx43 蛋白表达有关。     

腺病毒siRNA沉默 Raf-1基因抑制异丙肾上腺素 诱导大鼠心肌肥厚

摘要:目的　研究Raf-1 siRNA重组腺病毒载体对大鼠心肌肥厚的作用并探讨其机制。方法　构建Raf-1腺病毒siRNA 载体,大鼠随机分为正常对照组、心肌肥厚组、无关siRNA 组、Raf-1 siRNA 干预组,皮下注射异丙肾上腺素（ISO）制备大鼠心肌肥厚模型,无关siRNA 组及Raf-1 siRNA 干预组注射ISO后,分别经心包腔注射重组腺病毒pAd-siCon及pAd-siRaf-1,4周后染色测定全心重指数（HWI）、心肌细胞横截面积（CSA）、心肌间质胶原容积分数（CVF）及血管周围胶原面积（PVCA）,western blot检测心肌Raf-1、NF-κB及ERK1/2蛋白表达,RT- PCR检测TNF-α、MCP-1、TGF-β1 mRNA表达。结果　与心肌肥厚组相比,Raf-1 siRNA 干预组可降低大鼠HWI、CSA、CVF及PVCA,下调Raf-1、NF-κB、ERK1/2蛋白及TNF-α、MCP-1、TGF-β1 mRNA表达;无关siRNA 组与心肌肥厚组相比无明显差异。结论　Raf-1 siRNA重组腺病毒载体能减轻大鼠心肌肥厚,其作用可能与抑制Raf-1/ NF-κB、Raf-1/ ERK1/2信号转导及下调肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、单核细胞趋化蛋白-1（MCP-1）、转化生长因子-β（TGF-β）表达相关。     

铜摄入量对大鼠动脉粥样硬化炎症因子影响

目的 探讨铜摄入量对大鼠动脉粥样硬化(arteriosclerosis,AS)相关炎症因子的影响。方法 选择Wistar大鼠饲以缺铜饲料并给予不同剂量葡萄糖酸铜30 d,以大鼠血中铜蓝蛋白(CP)为铜摄入量评价指标,分析其对大鼠AS相关炎症因子的影响。结果 大鼠血中CP活力为20.442～37.569 U/L时,C反应蛋白(CRP)可对铜摄入量过高或过低引发的AS作出预警;铜摄入量低于或高于日常摄入量时,同型半胱氨酸(HCY)水平均高于对照组(P<0.05);CP活力超出30.279～37.569 U/L时,各组细胞间粘附因子-1(ICAM-1)水平均明显高于正常对照组(P<0.05);CP活力超出20.442～37.569 U/L时,各组单核细胞趋化因子-1(MCP-1)水平均高于正常对照组(P<0.05)。结论 铜摄入量过高或过低均可不同程度激活AS相关各炎症因子,有引起AS的潜在风险。     

大气PM2.5对自发性高血压大鼠心律的影响及其机制研究

目的 探讨大气细颗粒物(PM2.5)对自发性高血压大鼠(SHR)心律的影响及其机制.方法 将28只自发性高血压大鼠(SHR)随机分为4组,即空白膜对照组、7.5、15和30mg/kg剂量组.颗粒物采用一次性气管滴注染毒,染毒24h后处死动物.染毒30 min、1 h、24 h后测定SHR大鼠心电图,采用间接免疫荧光细胞化学方法测定大鼠心脏缝隙连接蛋白Cx43的分布及表达密度,采用免疫印迹法测定连接蛋白Cx43的表达;采用试剂盒法测定心肌组织MDA和SOD水平.结果 染毒30 min后,各组SHR大鼠均较基础测量时心律失常发生率增加,染毒1 h后对照组恢复正常心律,而染毒组仍显示异常心律,染毒24 h后各组均恢复正常心律Cx43免疫荧光结果显示,染毒24 h后,15和30 mg/kg剂量组SHR大鼠心肌连接蛋白Cx43荧光强度显著降低(P<0.01),其中30mg/kg剂量组心肌细胞闰盘处几乎未见荧光分布;Western blot测定结果显示,随着PM2.5染毒剂量的增加,心肌组织Cx43表达逐渐减少,尤其以15、30 mg/kg剂量组蛋白水平降低最为显著(P<0.01),分别为对照的56%和45%;此外,随着PM2.5染毒剂量的增加,心肌组织丙二醛(MDA)含量有所增加.超氧化物歧化酶(SOD)活力逐渐减少,但与对照组相比,差异无统计学意义(P>0.05).结论 大气PM2.5可引起自发性高血压大鼠心律异常的发生,心肌组织Cx43表达的减少可能是其机制之一.     

板党对冈田酸致大鼠阿尔茨海默病抗氧化作用

目的 观察板党对阿尔茨海默病(Alzheimer disease,AD)模型大鼠海马、皮质氧自由基和神经元微管相关蛋白(tau蛋白)表达的影响。方法 于大鼠侧脑室注射冈田酸(Okadaic acid,OA)造模,用抗氧化剂维生素C(V,C)腹腔注射作阳性对照,测定正常对照组、阳性对照组、模型组、板党高、中、低剂量组海马、皮质超氧化物岐化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)、过氧化脂质(MDA)和tau蛋白的含量。结果 模型组皮质SOD(114.98±22.90)、GSH-PX(13.11±1.78)和海马SOD(159.94±14.67)、GPK-PK(12.25±1.47)低于正常对照组(P<0.05,P<0.001),皮质MDA(5.38±2.76)t、au蛋白(174.97±12.89)和海马MDA(4.81±1.54)t、au蛋白(148.61±10.77)高于正常对照组(P<0.001)。板党各组与阳性对照组比较,SOD、GSH-PX、MDA和tau蛋白表达,在高(750 mg)、中(500 mg)剂量组差异有统计学意义(P<0.05),低(250 mg)剂量组差异无统计学意义(P>0.05)。结论 板党能增强脑组织SOD、GSH-PX活性、减少脑组织MDA蓄积、降低脑脊液tau蛋白水平。     

肥胖青少年血清脂联素水平与胰岛素抵抗关系

目的 研究青少年肥胖与血清脂联素水平与胰岛素抵抗的关系。方法 中学生健康体检时选择47名体质指数(BMI)在同年龄、同性别第95百分位数或以上的中学生为肥胖组,对照组为50名健康学生,检测血压、血糖、血脂、胰岛素和脂联素等指标,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并采用双能χ线吸收检测体脂含量。结果 肥胖组血压高于对照组(P<0.05),BMI、HOMA-IR和躯干部体脂百分比高于对照组(均P<0.01),而血清脂联素水平显著低于对照组(P<0.05)。多元逐步回归分析显示,总体脂百分比、躯干部体脂百分比和HOMA-IR是血清脂联素独立相关因素,呈负性相关。结论 肥胖青少年存在显著低脂联素血症,血清脂联素与体脂含量和胰岛素抵抗呈显著负相关。     

多不饱和脂肪酸对多巴胺能神经元保护作用

目的 研究饮食补充n-3多不饱和脂肪酸(PUFA)对脂多糖(LPS)诱导的多巴胺神经元损伤的保护作用。方法 将雄性SD大鼠随机分为对照组,LPS组,LPS+30%,60%鱼油组,鱼油组基础饲料中添加30%和60%鱼油;黑质内注射LPS 5μg/只,对照组注射生理盐水5μL/只,14 d后,观察大鼠旋转行为及检测黑质酪氨酸羟化酶(TH)含量。结果 对照组无明显行为异常,LPS组大鼠旋转圈数(114±36)明显大于30%鱼油组(42±22)和60%鱼油组(18±13)(P<0.05);与对照组比较,LPS组TH阳性细胞数明显减少(P<0.05),30%,60%鱼油组与对照组比较TH阳性细胞数差异无统计学意义。结论 通过膳食补充n-3 PUFAs(鱼油),对多巴胺能神经元有一定保护作用。     

高职生自我效能感及应对方式与焦虑关系

目的 探讨高职生焦虑、自我效能感及应对方式的特点以及相互关系。方法 采用状态焦虑量表、一般自我效能感量表和简易应对方式量表对高职大学生763人进行调查。结果 高职大学生焦虑状态发生率为13.4%,焦虑平均分为(41.50±7.68)分,男女生分别为(41.62±7.84),(41.44±7.60)分,与普通人群常模男性、女性(39.71±8.89),(38.97±8.98)分比较,差异有统计学意义(t=3.95,7.24,P<0.01),高职生焦虑水平明显高于普通人群;男女生自我效能感平均分为(2.67±0.44),(2.52±0.42)分,与普通大学生常模男生、女生(2.69±0.57),(2.55±0.50)分比较,差异均无统计学意义;高职生积极应对、消极应对平均分为(1.98±0.45),(1.23±0.48)分,积极应对分值明显高于消极应对分(t=37.81,P<0.01)。结论 自我效能、应对方式和焦虑之间存在密切关系,重视学生自信心、积极心态和应对能力的培养是预防和减轻高职大学生焦虑的有效途径。     

大气交通污染物对雄性小鼠生殖系统影响

目的 探讨暴露于大气交通污染物对雄性小鼠生殖系统影响。方法 15只雄性昆明系小鼠随机分为3组:重度污染暴露组、中度污染暴露组和相对清洁对照组,每组5只,每日现场暴露10 h。小鼠暴露26 d后,称量体重、睾丸重量并计算脏器系数,然后睾丸和附睾经组织切片、苏木素-伊红(HE)染色,在光镜下观察组织病理学变化。结果 对照组小鼠平均体重为27.88 g,睾丸重量为0.140 2 g,而重度污染暴露组小鼠平均体重为25.60 g,睾丸重量为0.115 7 g,经检验差异均有统计学意义(P<0.05);与对照组比较,重度污染暴露组小鼠生精细胞层数由正常的5～7层减少到1～2层,中度污染暴露组小鼠生精细胞层数由正常的5～7层减少到3～4层,差异均有统计学意义(P<0.01);与对照组比较,中度、重度污染暴露组精子数量均明显减少且差异有统计学意义(P<0.01)。结论 大气交通污染物对雄性小鼠生殖系统会造成一定损伤。     

麦麸多肽对小鼠抗氧化损伤作用

目的 探讨麦麸多肽对氧化损伤模型小鼠的抗氧化作用。方法 应用D-半乳糖建立亚急性衰老小鼠模型;麦麸多肽每d分别按150,300,600 mg/(kg·bw)的剂量灌胃,42 d后取脾脏及胸腺称重,计算脏器指数,测定血清、肝脏中丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性。结果 麦麸多肽300,600 mg/(kg·bw)组小鼠体重增长分别为(5.92±0.73),(6.19±0.30)g;脾脏指数分别为(4.39±0.06),(4.56±0.15);胸腺指数分别为(2.53±0.12),(2.96±0.11),与模型对照组比较,差异有统计学意义(P<0.01);血清和肝脏中MDA含量明显下降(P<0.01),SOD和GSH-Px活力明显提高(P<0.01)。结论 在本实验条件下,麦麸多肽对氧化损伤模型小鼠有较强的抗氧化作用。     

宁夏盐池县农村居民需住院率及影响因素分析

目的 了解宁夏盐池县农村居民需住院率及其相关影响因素。方法 采用多阶段分层整群随机方法,于2009年2-3月对5 358名农村居民进行入户问卷调查,并采用非条件Logistic回归方法分析影响需住院率因素。结果 盐池县农村居民需住院率为8.8%,应住院而未住院比例为17.8%;单因素分析结果显示,女性居民需住院率高于男性(χ²=25.16,P<0.01);不同年龄组需住院率间差异有统计学意义(χ²=211.09,P<0.01);不同婚姻状况需住院率间差异有统计学意义(χ²=98.64,P<0.01);居民需住院率随着文化程度的升高而降低(χ²=99.72,P<0.01);不同经济收入居民需住院率间差异无统计学意义(χ²=2.47,P>0.05);多因素分析结果显示,女性、年龄较大、患慢性病和调查前2周内患病是影响农村居民需住院的危险因素;较高文化程度是影响农村居民需住院的保护因素。结论 盐池县农村居民中妇女、儿童、老人和健康状况较差人群需住院率较高。     

染锰大鼠生殖激素水平与生精细胞凋亡基因表达

目的 探讨染锰大鼠血清生殖激素水平与生精细胞凋亡基因Caspase-3表达关系。方法 雄性SD大鼠48只,随机分为对照组和15,30 mg/kg氯化锰组,分别染锰4,6周,乙醚麻醉,眼眶取血,分离双侧睾丸,称重,采用免疫组织化学方法检测生精细胞caspase-3表达,放射免疫法检测血清睾酮(testosterone,T)、卵泡刺激素(follicle stimu-lating,FSH)、黄体生成素(luteinizine hormone,LH)水平。结果 30 mg/kg氯化锰组染锰4,6周,血清中T、FSH、LH含量分别为(2.78±0.74)和(2.76±0.81)nmol/L,(0.44±0.03)和(0.57±0.03),(0.19±0.02)和(0.19±0.03)U/L;Caspase-3表达水平分别为(65.49±11.34)和(82.65±5.26);染锰组大鼠生精细胞Caspase-3表达与血清T含量呈负相关(r=-0.799,P<0.01),与血清中FSH、LH水平呈正相关(r=0.735,r=0.737,P<0.01)。结论 染锰大鼠血清T水平降低,FSH和LH水平上升是生精细胞caspase-3表达上调的主要原因。     

锰致神经元细胞DNA损伤作用

目的 建立体外染锰细胞模型,探讨锰神经毒性作用机制。方法 成熟原代皮层与低、中、高不同浓度的锰液,(分别为0.2,0.6,1.0 mmol/L,共孵育24 h。观察各组神经细胞形态学的变化,单细胞凝胶电泳试验(SCGE)检测神经细胞的DNA损伤,以彗星细胞尾长及彗星样细胞百分率为评价损伤指标。结果 光镜下可见不同浓度锰孵育后神经细胞形态学发生改变,SCGE显示神经细胞DNA出现不同程度的损伤,彗星尾长分别为(117.3±30.8),(136.6±29.0),(218.7±22.6)μm;彗星样细胞百分率分别为40%,43%,96%,2指标均较对照组((84.1±11.8)μm,15%)显著增加(P<0.01)。尤以高浓度锰损伤组严重,显著高于中、低浓度组(P<0.01)。结论 锰不但能引起体外培养的神经细胞外在的形态学损伤,还可导致神经细胞DNA损伤。