EB病毒潜伏性膜蛋白1转化NP69细胞的蛋白表达分析

目的探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1（LMP1）转化鼻咽上皮细胞NP69的表达蛋白。方法采用比较蛋白质组学方法,鉴定NP69-pLNSX与NP69-LMP1细胞系中的差异表达蛋白,分析LMP1在NP69细胞中参与调节的蛋白。结果鉴定了LMP1在NP69细胞中参与调节有22个蛋白（表达上调的蛋白9个,下调的13个）。结论LMP1在NP69细胞中可能通过调节Vimentin和Keratin 19等蛋白的表达而起转化作用。     

EB病毒潜伏膜蛋白1的基础研究进展与临床意义

EB病毒的感染与B细胞及上皮细胞来源等肿瘤密切相关，其潜伏膜蛋白1的基础研究和临床应用也取得了一些颇具意义的进展，本文对此作一综述。     

EB病毒潜伏膜蛋白1与鼻咽癌关系的研究进展

鼻咽癌的发生发展与EB病毒密切相关。EB病毒潜伏膜蛋白1（LMP1）在细胞的恶性转化中起着重要的作用。本文就LMP1的结构、多态性、与鼻咽癌的相关性研究进行综述。     

EB病毒编码潜伏性膜蛋白1的信号传导和生物学特性及与CD40的相关性

EB病毒(EBV)编码的癌基因LMP1可使病毒在免疫系统的细胞中长期存活,并为EBV介导的人静止B细胞永生化过程所必需.它通过接头蛋白肿瘤坏死因子(TNF)受体相关因子(TRAFs)和TNF受体相关死亡结构域蛋白(TRADD),激活NF-κB、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)和JAK/STAT等信号途径,上调B细胞上粘附分子LFA-1、ICAM-1和共刺激分子B7-1的表达,调节B细胞抗体和细胞因子的分泌.它在信号传导方面与TNF受体家族的CD40有很大的相似性,二者都以脂筏为载体协同传递信号.鉴于和CD40的密切相关性,LMP1的研究成为免疫学领域的一个热点.     

EB病毒潜伏膜蛋白1的研究进展

EB病毒 (Epstein -BarrVirus,EBV)是一类全球性分布、人群感染率较高的单纯疱疹病毒家族成员之一 ,是一种线状双链DNA病毒 ,感染者体内终生潜伏存在 ,有致瘤性。编码LMP1的基因位于EB病毒基因组U5 -TR区的BNLF - 1基因 ,为BamHINhet区域 ,由ED-L1和L1-TR激活子所控制。LMP1是由     

鼻咽癌中EB病毒潜伏膜蛋白1启动子的突变

 【目的】 检测EB病毒潜伏膜蛋白1 (LMP1) 远端启动子L1-TR在鼻咽癌(NPC)组织中的突变情况并探讨突变对启动子活性的影响。【方法】 用聚合酶链反应(PCR)方法分别扩增出B95.8细胞和新鲜鼻咽癌组织细胞中EB病毒(EBV)的L1-TR片段,并测序比较其核苷酸序列的差异。构建含原型和突变型L1-TR启动子的荧光素酶报告质粒并分别转染HaCat细胞、B95.8细胞和C666-1细胞,比较两种启动子的活性。【结果】 和B95.8原型比较,鼻咽癌组织中的EB病毒L1-TR启动子区域有多处缺失。插入和点突变,且启动子活性明显降低(P < 0.05)。【结论】 鼻咽癌组织中LMP1启动子 L1-TR的活性与B95.8原型相比明显降低,这在EB病毒的免疫逃避机制中可能有一定的意义。     

PCR克隆EB病毒潜伏膜蛋白-1基因

目的：构建ＥＢ病毒潜伏膜蛋白－１重组表达质粒。方法：ＰＣＲ克隆技术,即用ＰＣＲ方法从Ｂ９５－８细胞中钓出ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因ＤＮＡ序列,然后定向克隆到真核表达质粒ｐｃＤＮＡ３．１中,以此构建成ｐｃＤＮＡ３．１－ＬＭＰ重组质粒。结果：经酶切鉴定,确定已获得重组质粒ｐｃＤＮＡ３．１ＬＭＰ１。结论：在真核表达质粒中已成功地克隆了ＥＢ病毒ＬＭＰ１基因。     

三种EB病毒潜伏膜蛋白基因转基因载体的构建

为制备ＥＢ病毒潜伏膜蛋白（ＬＭＰ）基因转基因小鼠,探讨ＬＭＰ的体内致瘤作用,本文构建了三种不同的ＬＭＰ基因转基因载体,即ｐＢＲ３２２ＭＴＬＭＰ,ｐＭｃｉ３ＬＭＰ和ｐＭＶＬＭＰｃｍｙｃ;并分别讨论了上述三种载体的特征及其应用前景     

EB病毒潜伏膜蛋白对鼻咽上皮细胞生物学表型的影响

EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）是一种全球性分布、人群感染率颇高的具有致瘤潜能的DNA疱疹病毒,90％以上的人群建立了EBV终生潜伏状态感染。目前的研究发现其致瘤谱越来越广,除与传染性单核细胞增多症相关外,还与某些恶性淋巴瘤（Burkitt淋巴瘤,霍奇金病,某些T、B细胞源性非霍奇金淋巴瘤如血管中心性淋巴瘤、间变性大细胞性淋巴瘤、Lennert淋巴瘤、器官移植后及免疫缺陷者淋巴瘤等）、鼻咽癌、乳腺癌、胃癌、肺癌、喉癌、宫颈癌等恶性肿瘤相关。     

儿童狼疮性肾炎患者中 EB 病毒潜伏膜蛋白1的表达

目的：通过实时定量逆转录 PCR(RT-PCR)、肾脏免疫组化和 ELISA 3种方法研究儿童狼疮性肾炎(LN)中 EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)的表达,试图探讨 LMP-1在儿童 LN 中的致病机制。方法41例 LN 患儿和12例健康对照组,分别用 RT-PCR 法、免疫组化法、ELISA 法检测两组外周血单核细胞(PBMCs)、肾脏组织及血清中 LMP-1的表达。结果① RT-PCR 法、免疫组化法、ELISA 法检测 LN患儿和健康对照者的阳性率分别为65．9% vs 8．3%,95．1%vs 16．7%,22．0% vs 8．3%,差异有统计学意义(P <0．05);②3种方法检测 LMP-1的表达,免疫组化法检测阳性率高于其他两种方法,差异有统计学意义(P <0．05)。结论儿童 LN 中存在 EBV 潜伏期基因 LMP-1表达异常,其中肾脏组织中表达阳性率最高,提示 LMP-1可能参与了儿童 LN 的发病。     

EB病毒相关胃癌潜伏感染膜蛋白-1表达的研究

①目的探讨EB病毒阳性胃癌(EBVaGC)中潜伏感染膜蛋白-1(LMP-1)的表达状况。②方法原位杂交法检测胃癌患者石蜡包埋组织标本中EB病毒编码的小RNA(EBV encoded RNA,166bps,EBER-1);免疫组化法检测EBVaGC中LMP-1。③结果EBVaGC中无LMP-1表达。④结论EB病毒阳性胃癌中缺乏潜伏感染膜蛋白LMP1的表达。     

EB 病毒 LMP2A 在胃癌研究中的进展

EB 病毒（EBV）是具有致瘤潜能的疱疹病毒,其编码的潜伏性膜蛋白2A（LMP2A）通过多条信号传导通路,参与上皮细胞的转化。 EB 病毒存在于胃癌组织中,在胃癌的发生和发展过程中发挥重要的作用。本文主要就 LMP2A 的结构、介导的信号传导通路与胃癌的关系进行综述。     

EB病毒与淋巴瘤关系的研究

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是一种嗜人类淋巴细胞的DNA疱疹病毒，EBV在正常人群中感染非常普遍，约90％以上的成人血清EBV抗体阳性。国内外众多研究结果表明，EBV与多种人类肿瘤有关，如传染性单核细胞增多症、淋巴瘤、鼻咽癌等疾病；其中Burkitt’s淋巴瘤和鼻咽癌的密切相关性已被公认；EBV与霍奇金淋巴瘤及T、B细胞淋巴瘤均有     

应用PNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白-1表达对鼻咽癌细胞生长的影响

目的 探讨能否通过siRNA人工诱导RNA干扰，在EB病毒阳性的鼻咽癌细胞株C611中，选择性抑制潜伏膜蛋白1(LMP1)的表达，并了解LMPl抑制对鼻咽癌细胞生长的影响。方法利用脂质体转染的方法，将人工合成的双链siRNA导入鼻咽癌细胞，通过半定量RT-PCR检测LMP1 mRNA水平的变化。并采用MTT法和流式细胞仪检测LMP1表达抑制后，鼻咽癌细胞增殖和细胞周期的变化。结果C611细胞转染siRNA可使LMP1 mRNA水平下降90％以上。LMP1基因抑制后，C611细胞增殖速度下降33％；流式细胞检测显示，C611细胞周期在G0-G1期受阻。结论 本研究证明，全新的人工诱导．RNA干扰技术，能够有效抑制LMP1基因的表达，并降低鼻咽癌细胞的增殖能力。为鼻咽癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新的思路。     

应用RNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白-1表达对鼻咽癌细胞生长的影响

目的探讨能否通过siRNA人工诱导RNA干扰,在EB病毒阳性的鼻咽癌细胞株C611中,选择性抑制潜伏膜蛋白1(LMP1)的表达,并了解LMP1抑制对鼻咽癌细胞生长的影响。方法利用脂质体转染的方法,将人工合成的双链siRNA导入鼻咽癌细胞,通过半定量RT-PCR检测LMP1 mRNA水平的变化。并采用MTT法和流式细胞仪检测LMP1表达抑制后,鼻咽癌细胞增殖和细胞周期的变化。结果C611细胞转染siRNA可使LMP1 mRNA水平下降90%以上。LMP1基因抑制后,C611细胞增殖速度下降33%;流式细胞检测显示,C611细胞周期在G0-G1期受阻。结论本研究证明,全新的人工诱导RNA干扰技术,能够有效抑制LMP1基因的表达,并降低鼻咽癌细胞的增殖能力,为鼻咽癌研究和抗肿瘤基因治疗提供了新的思路。     

重组腺相关病毒介导RNA干扰抑制EB病毒潜伏膜蛋白1对鼻咽癌细胞影响的动物试验

目的 探讨EB病毒(EBV)潜伏膜蛋白1(LMP-1)对于鼻咽癌细胞在体内增殖及转移能力的影响.方法 设计针对EBV-LMP-1的特异性发夹状RNA(shRNA)干扰序列,构建2种重组腺相关病毒(rAAV)载体:(增强型绿色荧光蛋白,EGFP)rAAV-EGFP和rAAV-shRNA-LMP-1,以不同滴度rAAv-EGFP转染鼻咽癌C666-1细胞确定最佳转染复数(MOI),rAAV-shRNA-LMP-1按MOI转染C666-1,RT-PCR鉴定抑制效率,将体外转染RNA干扰后的C666-1细胞注入裸鼠肝脏包膜下制作鼻咽癌异位肝种植的肝肺转移模型,观察肝脏成瘤及肝内、肺转移情况,分析LMP-1基因沉默在动物水平对鼻咽癌细胞成瘤及转移能力的影响.结果 rAAV-EGFP以5×104v.g(virus genome,病毒基因组数)/细胞转染C666-1细胞,转染效率大于95%,RT-PCR鉴定rAAV-shRNA-LMP-1以5×104v.g/细胞转染C666-1后目的 基因抑制效率大于90%,动物试验结果显示rAAV-shRNA-LMP-1组肝脏成瘤体积与对照组rAAV-EGFP无显著差异,但显著减少了种植肿瘤的肝内及肺转移率.结论 通过rAAV介导RNA干扰能有效抑制LMP-1基因表达,可在动物水平抑制鼻咽癌细胞转移,但对鼻咽癌细胞生长无显著影响.     

EB病毒潜伏膜蛋白LMP2A对人鼻咽癌细胞增殖与迁移特性的影响

目的:制备重组慢病毒载体pLMP2A,并检测其在人鼻咽癌细胞CNE1的表达情况及潜伏膜蛋白2A(latent membrane protein 2A,LMP2A)对人鼻咽癌细胞CNE1增殖?迁移?侵袭的影响?方法:利用DNA重组技术将EB病毒编码的LMP2A基因克隆到慢病毒表达载体plv-GFP中,通过酶切?测序验证,将重组慢病毒载体pLMP2A与包装质粒pdelta-8.91?pVSVG共转染人胚肾上皮细胞株293T,包装重组慢病毒LV-LMP2A,并感染人鼻咽癌细胞CNE1,经单克隆筛选后,用RT-PCR?免疫荧光和Western blot检测LMP2A在人鼻咽癌细胞CNE1的表达,CCK8法检测LMP2A对人鼻咽癌细胞CNE1增殖的影响,划痕实验?Transwell侵袭实验检测LMP2A对人鼻咽癌细胞CNE1迁移和侵袭的影响?结果:酶切及测序结果表明,成功制备了重组慢病毒载体pLMP2A;RT-PCR?Western blot?免疫荧光结果显示筛选出的细胞克隆能高表达EBV-LMP2A,CCK8结果显示LMP2A能促进人鼻咽癌细胞CNE1增殖,划痕实验结果显示LMP2A能促进人鼻咽癌细胞CNE1迁移,Transwell侵袭实验结果显示LMP2A能提高人鼻咽癌细胞CNE1侵袭能力?结论:成功制备了慢病毒载体pLMP2A,包装的慢病毒能够成功感染人鼻咽癌细胞系CNE1,使LMP2A基因得以高表达,并发现LMP2A能够促进人鼻咽癌细胞株CNE1增殖?迁移?侵袭,为进一步探讨EB病毒在鼻咽癌中的发病机制及基因治疗奠定了基础?     

EB病毒潜伏膜蛋白1的研究进展

EB病毒潜伏膜蛋白1(LMP1)是EB病毒编码的一种主要蛋白,它能通过其C末端的3个功能结构域CTAR1、CTAR2及CTAR3启动一系列信号途径,包括核因子κB、PI3K-Akt/PAB、MAPK及JAKs/STATs,从而调节其宿主细胞的生长、增殖、分化、凋亡等多种细胞生物学功能,本文就这方面的研究进展及其自身调节的机制综述如下。     

经典性霍奇金淋巴瘤中EB病毒潜伏膜蛋白1的表达

目的 探讨经典性霍奇金淋巴瘤（cHL)肿瘤性H／R－S细胞埃泼斯坦－巴尔病毒（EBV）潜伏膜蛋白1（LMP1）的表达情况及其意义。方法 采用免疫组化SABC法对32例cHL进行LMP1蛋白表达的检测。结果 20／32（62．5％）例LMP1蛋白表达阳性、在各亚型之间没有显著性差异（X^2=0.0809,P=0.847)。结论 LP1蛋白表达有地区差异,在cHL亚型间可能没有分型差异性。     

鼻咽癌细胞EB病毒编码BHRF1基因的研究

利用斑点杂交技术检测正常鼻咽青草 咽未分化癌、低分化及高分化鳞癌中ＥＢ病毒编码ＢＨＲＦ１基因的存在情况。结果表明，鼻咽未分化癌及低分化鳞癌中的ＢＨＲＦ１阳性率分别为９０％和８５．７％，而高分化鼻咽癌组织的阳性率为２５％。提示ＢＨＲＦ１基因可能与因癌细胞的分化有关。