耐药肺腺癌细胞株A549/CDDP生物学特性及染色体核型分析

目的 建立氯氨顺铂诱导肺腺癌耐药细胞株A549／CDDP。分析A549／CDDP生物学特性及染色体核型，为肺腺癌的治疗提供实验依据。方法 采用氯氨顺铂（Cis—diaminodichloroplatin，CDDP）大剂量冲击加逐步诱导法建立肺腺癌耐药细胞株A549／CDDP，MTT法检测细胞耐药指数．生物发光法测定细胞能量代谢，流式细胞仪测试细胞周期，染色体G显带技术和光谱核型分析（spectral karyotyping，SKY）技术分析染色体变化。结果 MTT检测结果表明。A549／CDDP对7种不同的化疗药物表现了不同的耐药性，其ATP、ADP、AMP含量显著降低，细胞周期无明显变化。G显带结果表明A549／CDDP染色体为亚三倍体，SKY分析出现数条衍生染色体。结论 CDDP可以成功诱导肺腺癌耐药细胞株A549／CDDP，A549／CDDP衍生染色体可能与肺腺癌耐药有关。     

人肺腺癌紫杉醇耐药细胞株的建立及其特性研究

目的 建立耐紫杉醇的人肺腺癌A549(A549/Taxol)细胞株,并初步研究其生物学特性.方法 应用抗肿瘤药紫杉醇以体外浓度递增和短时作用法筛选A549细胞株.用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞的耐药指数及对多种抗癌药物的敏感性;免疫细胞化学法检测P-糖蛋白(P170)、β-tubulin等耐药相关蛋白的表达情况.结果 A549/Taxol细胞的紫杉醇半数抑制浓度(IC50 )是亲代A549细胞的512.8倍,群体倍增时间是亲代细胞的1.28倍,对紫杉醇、丝裂霉素、长春新碱、诺维本的耐药指数依次为512.8、66.48、4.88和 2.06;而对顺铂、健择无交叉耐药.A549/Taxol细胞高表达P170,β-tubulin表达水平高于其亲代细胞系.结论 成功建立了一株耐紫杉醇的A549/Taxol,并呈多药耐药特性.     

32例两性畸形染色体核型分析

我院优生遗传室1996年至2002年对来我科和外科就诊的32例两性畸形患者进行了体格检查,并做了染色体常规检查,发现异常核型21例,现报道如下。1资料与方法1.1一般资料年龄最小4岁,最大31岁。其中<10岁4例,11～20岁10例,>21岁18例。诊断为先天性卵巢发育不全6例,曲细精管发育不良12例,单纯性性腺发育不全(46,XY女性分化异常)14例。1.2临床表现6例先天性卵巢发育不全患者均表现为身矮(身高均<150cm),颈短,乳房不发育,无月经来潮,外阴幼稚型,有狭小的阴道,但子宫缺如;曲细精管发育不良12例均表现为不同程度的尿道下裂,无阴毛,阴茎短小,睾丸小硬;…     

人肺腺癌A549多重抗药细胞株生物学特性变化

目的；探讨人肺腺癌Ａ５４９多重抗药细胞株生物学特性变化，方法：采用阿霉素（ＡＤＭ）浓度递增的方法诱导人肺腺癌Ａ５４９细胞系（Ａ５４９／Ｐ）在体外持续培养６个月，获得了具有多重抗药的Ａ５４９／Ｒ２细胞，该细胞能在０．２μｇ／ｍｌＡＤＭ下持续增殖，通过光镜和电镜观察其增殖及形态结构变化，结果：Ａ５４９／Ｒ２细胞由巨大细胞增殖而来，其微绒毛，线粒体及分泌泡明显增加，有进一步分化趋向，结论：Ａ５４９／Ｒ２     

FHL1对肺腺癌细胞株A549生物学特性的影响

 目的 研究FHL1的表达对人肺腺癌细胞株A549生物学特征的影响。方法 以FHL1 mRNA及shRNA慢病毒载体转染肺腺癌细胞株A549,并采用Western blot及RT-PCR法筛选检测稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株模型及低表达细胞株模型;运用CCK-8实验、Transwell实验、流式细胞仪、细胞集落形成实验等方法对其增殖、侵袭、凋亡及锚定非依赖性生长生物学特性进行检测评估。结果 FHL1稳定过表达及低表达组的Western blot及RT-PCR法检测显示病毒转染效果可靠稳定;CCK-8实验提示低表达组的细胞增殖情况明显高于过表达组及空白组(P=0.002 2);流式细胞仪检测提示过表达组的细胞总体凋亡率为50.48%,明显高于两个低表达组(16.41%、20.12%)及空白对照组(25.90%),差异有统计学意义(P<0.001);Transwell实验提示过表达组细胞表现出的侵袭性明显低于低表达组及空白组差异有统计学意义(P<0.001);成集落实验显示过表达组细胞株形成的集落数为28.7±6.0,明显少于两个低表达组(157.0±6.4、150.7±9.5),差异有统计学意义(P<0.001)。结论 稳定过表达FHL1肺腺癌细胞株A549模型及低表达模型构建成功。FHL1的表达对于肺腺癌细胞株A549的增殖、侵袭及转移均有抑制作用,并能够诱导其加速凋亡。     

羊水细胞染色体核型分析在产前诊断中的应用

目的 探讨羊水细胞培养染色体核型分析技术在细胞遗传学产前诊断中的应用价值.方法 普通培养法对350例羊水标本进行细胞培养染色体核型分析.结果 350例羊水标本一次培养成功340例,一次培养成功率约97.1%.其中引产羊水标本60 例,染色体核型分析未见异常;35岁或35岁以上的高龄孕妇羊水标本158例,染色体核型分析发现异常核型有1例47,XY,+21,1例 47,XXX;1例46,XY,15p+.异常核型约1.9%;产前筛查唐氏高风险孕妇132例,核型分析结果异常有2例47,XY,+21;1例46,XY,t(6;19)(q12;q134).异常核型约2.3%.结论 羊水细胞培养染色体核型分析技术在细胞遗传学产前诊断中具有较高的应用价值.     

染色体核型分析技术的发展

各种生物染色体的形态、结构和数目都是相对稳定的。每一生物细胞内特定的染色体组成叫染色体组型,染色体组型分析也称核型分析。染色体组型分析有助于探明染色体组的演化和生物种属间的亲缘关系,对于遗传研究与人类染色体疾病的临床诊断也非常重要。染色体显带技术的产生使人们能对人类24条染色体(1～22,X,Y)进行识别和鉴定,而且近年来已经可以通过计算机软件进行自动核型分析。     

靶向OPN的miRNA对人肺腺癌细胞株A549顺铂敏感性的影响

目的通过miRNA介导RNAi沉默OPN表达探讨其对人肺腺癌细胞株A549顺铂(DDP)敏感性的影响。方法利用体外构建的靶向OPN的miRNA表达质粒瞬时转染A549,酶联免疫吸咐法(ELISA)检测转染后48h细胞OPN蛋白表达;转染后24、48、72、96h,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法分别检测转染细胞和转染联合5μg/mL顺铂作用后细胞的增殖;于转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,MTT法检测细胞增殖抑制率。结果(1)转染后48h,OPN蛋白表达水平下调了47.34%(P0.01)。(2)转染后24h细胞增殖开始受抑制(P0.05),48、72、96h细胞增殖被明显抑制,细胞增殖活性差异均有统计学意义(P0.01)。(3)转染联合顺铂作用24h细胞增殖开始受抑(P0.05),48、72、96h细胞增殖明显受抑,细胞增殖活性转染组与未转染组及非特异性转染组差异均有统计学意义(P0.01)。转染后24h联合不同浓度的顺铂作用48h,当顺铂浓度为2.5、5、10、20μg/mL时,细胞增殖被明显抑制,细胞增殖抑制率差异均有统计学意义(P0.01)。结论靶向OPN的miR-NA抑制人肺腺癌细胞A549增殖,增强细胞对DDP的敏感性。     

抗人肺腺癌杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

用人肺腺癌细胞株AGZ—83a常规免疫BALB/C小鼠,取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞SP2／0融合,获得一稳定分泌抗人肺腺癌单克隆抗体（McAb）的杂交癌细胞林──—QMC－WL99。制备并纯化了小鼠腹水抗体,腹水效价为5.5X106,亚型鉴定为IgG1。免疫组化结果显示QMC－WL99单抗的特异性较高,与肺腺癌有较好选择反应性,与正常组织无交及反应。该单克隆抗体的亲和常数为7.25×1010M－1,液氮冻再后复苏,杂交瘤细胞株QMC－WL99分泌抗体的能力不受影响。     

不同波形的周期性机械拉伸对人肺腺癌细胞株A549增殖的影响

目的研究不同波形的周期性机械拉伸对人肺腺癌细胞株A549增殖的影响。方法应用Flexercell4000加载系统对拉伸应变下细胞增殖动力学变化进行分析。结果在应变为15%,频率为30次/min,加载时间为2h下,不同波形的拉伸刺激对细胞增殖的影响不同。其中方波组细胞生长明显受抑。结论施加方波的周期性机械拉伸可能对肺腺癌细胞增殖有抑制作用。     

基于XGBoost对肺鳞癌和肺腺癌的分类预测

目的 对肺癌亚型肺鳞状细胞癌（肺鳞癌）和肺腺癌进行预测并找出分子标记。方法 通过研究两种不同癌症亚型中mRNA表达量,选取有差异有统计学意义的mRNA,利用极限梯度增强（extreme gradient boosting,XGBoost）算法构建模型,预测亚型分类,并比较其与逻辑回归分类模型和支持向量机分类模型的预测性能。结果 基于XBGoost模型的预测准确率为96.55%,曲线下面积为99.04%,优于逻辑回归分类模型和支持向量机分类模型。同时,找到11个基因作为两种亚型的分子标记。结论 肺癌两种亚型的在分子层面存在明显差异特征,将辅助临床医生进行疾病亚型预测。     

弹力纤维在肺腺癌组织中的分布量与患者临床特征和预后的关系

目的 探讨弹力纤维在肺腺癌组织中的分布量与患者临床特征和预后的相关性.方法 收集安徽医科大学第一附属医院2012年1月至2014年8月术后病理诊断为肺腺癌的标本123例.所有病理标本行苏木精-伊红、弹力纤维染色,观察弹力纤维在肺腺癌中的分布量,同时依据弹力纤维在癌组织中量的多少,将弹力纤维量的表达分为I级、II级、III级3个等级,术后随访5～66个月,分析弹力纤维3个等级与肺腺癌的临床特征和预后的关系.结果 123例肺腺癌中,弹力纤维I级60例(48.78％),II级23例(18.70％),III级40例(32.52％);单因素分析显示,3组弹力纤维分级患者一般资料比较显示,年龄、性别,差异无统计学意义(P均>0.05),肿瘤直径、淋巴结分期和病理类型,差异有统计学意义(P均<0.05).随访结果显示,123例肺腺癌中,弹力纤维I级、II级、III级患者的总生存率分别为60.00％、79.30％、95.00％,弹力纤维III级患者的总生存率高于I级、II级,差异有统计学意义(P<0.05).COX多因素分析显示,肿瘤直径、淋巴结分期是影响肺腺癌预后的独立危险因素(P均<0.05),弹力纤维分级与患者预后无关(P>0.05).结论 弹力纤维明显增生的肺腺癌患者预后较好,但弹力纤维增生不是影响肺腺癌预后的独立危险因素.     

光动力疗法对人肺腺癌细胞系A549凋亡的影响

目的:探讨光动力疗法(photodynamic therapy,PDT)对体外培养的人肺腺癌细胞系A549凋亡的影响.方法:以人肺腺癌细胞系A549为研究对象,用MTT法筛选最佳PDT参数.实验分为对照组(不进行PDT)和PDT组,在PDT 24 h后,采用DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡的梯形条带、流式细胞术检测细胞周期及凋亡率、TUNEL标记法测定细胞凋亡指数(AI).结果:血卟啉衍生物(HPD)浓度10 mg/L、激光剂量10 J/cm2是PDT对A549细胞杀伤作用的最佳条件.当激光剂量均为10 J/cm2时,采取6组不同的功率时间组合测得的D492值无统计学差异.在最佳PDT条件下,琼脂糖电泳结果可见PDT组产生了特征性的DNA梯形条带;流式细胞术检测显示PDT组发生了G0/G1期生长停顿,凋亡率为(18.443±7.122)%,显著高于对照组的(0.301±0.361)%(P<0.01);TUNEL标记法也证实该组可见明显的棕黄色凋亡细胞,AI为(18.480±9.555)%,明显高于对照组的(0.880±0.944)%(P<0.01).结论:PDT通过诱导凋亡对体外培养的A549细胞产生杀伤作用.     

体外探究脱落酸对肺腺癌细胞系Spc-A1自噬的影响

目的观察脱落酸(ABA)作用于肺腺癌细胞株Spc-A1引起自噬方面的变化,研究ABA对Spc-A1细胞自噬的影响。方法以人肺腺癌细胞系Spc-A1为研究对象,ABA给药浓度分别为0.8、20、100μmol/L,采用MTT法检测ABA作用后Spc-A1细胞的活力;激光共聚焦显微镜观察ABA作用于Spc-A1细胞后自噬现象;提取培养细胞mRNA及蛋白质,分别采用荧光实时定量PCR、蛋白印迹法检测自噬相关基因Beclin-1及LC3-Ⅱ的表达。结果 ABA作用后,肺腺癌细胞Spc-A1活力随着ABA浓度的增高而下降,各处理组之间差异具有统计学意义(P<0.001);ABA可诱导Spc-A1细胞自噬,自噬现象随药物浓度增高而增加;ABA处理后Bec-lin-1及LC3-Ⅱ的mRNA表达量随着ABA浓度的增加而增高,各处理组表达量差异具有统计学意义(P<0.05);蛋白表达结果显示ABA 100μmol/L处理组与对照组Beclin-1表达量差异具有显著性(P=0.04);ABA 100μmol/L处理组与对照组LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.005),ABA 0.8μmol/L组与ABA 100μmol/L组之间LC3-Ⅱ表达量差异具有显著性(P=0.039),余处理组表达量两两之间未见显著性差异。结论 ABA可通过调节自噬信号转导通路中相关基因的表达诱导肺腺癌细胞Spc-A1自噬,随着自噬的增加,可能抑制肿瘤的生长。     

肺腺癌中细胞分裂周期相关蛋白家族预后价值的生物信息学分析

目的对肺腺癌(LUAD)中细胞分裂周期相关蛋白家族(CDCAs)的预后价值进行生物信息学分析。方法通过GEPIA、Kaplan-Meier、cBioPortal、GeneMANIA、String和TIMER2.0等数据库对肺腺癌患者CDCAs的差异表达、预后价值、临床肿瘤分期、基因改变和免疫细胞浸润结果进行分析。结果LUAD组织中CDCA1～8 mRNA水平较正常组织升高,CDCA1、2、3、4、5、7、8蛋白表达水平也较正常组织升高,但CDCA6蛋白表达水平较正常组织下降。CDCA1、3、4 mRNA与LUAD患者总生存期(OS)和无病生存期(DFS)呈正相关,CDCA2、5、8仅与OS呈正相关。CDCAs的功能主要与染色体位置、着丝粒、 染色体分离调控和赤道板集合等有关。CDCAs的表达与肺腺癌中CD4⁺T细胞、巨噬细胞、中性粒细胞、B细胞、CD8⁺T细胞、树突状细胞等6种免疫细胞的浸润呈显著相关。结论CDCAs可能对LUAD的发生和发展产生调控作用,CDCA1、2、3、4、5、8有望成为LUAD预后生物标志物与免疫治疗的新靶点。     

人耐药肺腺癌A549/DDP细胞株的差异蛋白质组学

目的：建立A549与A549/DDP两组细胞株的双向凝胶电泳图谱,识别并鉴定其差异表达的蛋白质,筛选肺腺癌耐药相关蛋白质。方法：收集A549与A549/DDP两组细胞株的总蛋白质,应用二维凝胶电泳（two-dimensional gel electrophoresis,2-DE）进行分离应用,图像分析识别差异表达的蛋白质点,采用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱鉴定差异蛋白质点。使用Western免疫印迹对其中4个蛋白质进行验证。结果：建立了A549与A549/DDP细胞蛋白质的2-DE图谱,识别了40个差异表达的蛋白质点,鉴定了23个差异表达蛋白质。Western免疫印迹证实了差异蛋白质热休克蛋白β1,膜联蛋白A4,丝切蛋白l和波形蛋白在A549与A549/DDP细胞中的差异表达水平。结论：23个差异表达蛋白质为研究肺腺癌耐药机制提供了实验依据。