注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的 探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法 通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果 注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论 注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

去甲斑蝥素通过下调c-met基因逆转肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药的研究

目的 本研究通过去甲斑蝥素（NCTD）作用于肺癌顺铂（DDP）耐药细胞A549/DDP,探讨其对DDP耐药的逆转作用及其相关机制。方法 应用CCK-8法检测NCTD对A549和A549/DDP细胞活力的影响、DDP对A549细胞和A549/DDP的半数抑制浓度（IC₅₀）、NCTD联合不同浓度DDP对A549/DDP细胞DDP耐药性的影响;细胞克隆形成实验检测NCTD、DDP单给药及NCTD与DDP联合用药对A549/DDP细胞克隆形成率的影响;Western blotting法检测A549/DDP和A549细胞中c-met表达,以及NCTD、DDP单给药及NCTD与DDP联合用药对A549/DDP细胞内c-met蛋白表达的影响。结果 NCTD剂量相关性地抑制A549和A549/DDP细胞的活力,选择抑制率小于10%的最大NCTD浓度即10 μmol/L作为逆转浓度;DDP作用于A549/DDP和A549细胞的IC₅₀分别为15.11和5.04 μmol/L,差异有统计学意义（P<0.01）;A549/DDP细胞中c-met表达明显高于A549细胞;用NCTD（10 μmol/L）处理后,DDP对A549/DDP细胞的IC₅₀从15.11 μmol/L减少到8.06 μmol/L,差异显著（P<0.01）;与DDP单给药组比较,NCTD联合DDP作用明显降低A549/DDP细胞克隆形成率（P<0.01）;Westernblotting结果显示,NCTD联合DDP作用明显抑制顺铂耐药细胞A549/DDP细胞中c-met蛋白的表达,单用DDP或NCTD与对照组比较差异不明显。结论 NCTD与DDP联用可逆转A549/DDP细胞对DDP耐药,其机制可能与抑制c-met蛋白表达有关。     

银杏达莫注射液联合鼠神经生长因子治疗重型急性颅脑损伤的临床研究

目的 探讨消岩汤逆转肺癌顺铂（DDP）耐药的可能机制。方法 MTT检测细胞增殖情况,划痕实验检测细胞侵袭能力;siRNA转染细胞获取稳定低表达基因的细胞株;实时荧光定量PCR（qRT-PCR）和Werstern blotting检测mRNA和蛋白表达水平的变化。结果 MTT检测A549/DDP,在72、96 h,消岩汤能够明显抑制细胞增殖,而在48、72、96 h,DDP联合消岩汤能够明显抑制细胞增殖。划痕实验显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株迁移距离明显缩短。MTT显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株增殖能力减低,Western blotting显示与A549/DDP/siRNA-NC比较,A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞P-糖蛋白（P-gp）和肺耐药相关蛋白（LRP）蛋白表达降低,MTT检测A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞,在72、96 h,DDP和消岩汤能明显抑制细胞增殖;而在24、48、72、96 h,DDP联合消岩汤明显抑制细胞增殖。结果显示DDP联合消岩汤使A549/DDP/siRNA-Beclin1细胞株中YES关联蛋白1（YAP1）、P-gp和LRP蛋白表达明显降低。结论 消岩汤可能通过影响Beclin 1-YAP1分子通路进而改变肺癌细胞对DDP的敏感性。     

瑞香狼毒水提取物对肺腺癌细胞株耐药及凋亡的影响

目的探讨瑞香狼毒水提取物对肺腺癌细胞株A549和耐药细胞株A549/DDP细胞凋亡率及耐药基因表达的影响。方法用不同浓度的瑞香狼毒水提取物、顺铂分别及联合处理人肺腺癌细胞株A549和A549/DDP,用MTT法检测肺癌细胞凋亡率、实时荧光定量PCR检测多药耐药(multidrug resistance protein1,MRP1)基因mRNA水平以及用Westernblot检测多药耐药蛋白1(multidrug resistance protein1,MRP1)的表达水平。结果不同浓度瑞香狼毒水提取物作用相同时间或相同浓度作用不同时间对A549和A549/DDP的细胞抑制率差异有统计学意义(P<0.05);瑞香狼毒处理前后A549/DDP细胞株与A549细胞株相比,对顺铂的敏感性差异有统计学意义(P<0.05);同时两细胞株与瑞香狼毒和顺铂联合孵育后MRP1mRNA水平及MRP1蛋白表达水平差异有统计学意义(P<0.05)。结论瑞香狼毒水提取物有明显抗肿瘤作用,能增强肺癌耐药细胞株对DDP的敏感性,对肺癌耐药具有一定的逆转作用。     

芦荟大黄素对人肺腺癌细胞顺铂多药耐药性的逆转作用

目的：以耐顺铂人肺腺癌细胞系A549／DDP为研究对象，检测芦荟大黄素（aloe emodin，AE）能否逆转其对顺铂（DDP）的耐药性。方法：采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数，电感耦合等离子体质谱（ICP-MS）法测定细胞内顺铂浓度。结果：芦荟大黄素5mg&#183;L^-1能增加A549／DDP细胞对DDP的敏感性，使DDP的半数抑制质量浓度IC50由16．81mg&#183;L^-1降至5．86mg&#183;L^-1；能提高DDP在A549／DDP细胞内的浓度。结论：AE能部分逆转A549／DDP细胞的MDR，其机制与增加细胞内药物浓度有关。     

PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞增殖及耐药性的影响

目的探讨第3代选择性PARP-1抑制剂PJ34对肺腺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP生长活性及耐药性的影响。方法使用不同浓度梯度的顺铂(DDP)、PJ34单药或联合作用于A549/DDP细胞,MTT法检测各药物对细胞的增殖抑制率;流式细胞术检测细胞凋亡率;Western blot检测细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平。结果PJ34单药对A549/DDP细胞有明显的抑制作用,无毒剂量的PJ34可明显增强A549/DDP细胞对顺铂的敏感性,诱导细胞凋亡,使细胞内PARP-1蛋白、MDR相关蛋白(LRP、GST-π)的表达水平明显降低。结论 A549/DDP细胞的顺铂耐药性与细胞内PARP-1蛋白的过度表达有关,PJ34有明显的顺铂增敏作用,能部分逆转A549/DDP细胞对顺铂的耐药性,其机制可能与诱导细胞凋亡,降低细胞内LRP、GST-π的蛋白表达水平有关。     

三苯氧胺对肺癌A549/DDP细胞多药耐药性的逆转作用及机制

目的探讨三苯氧胺（TAM）逆转肺癌A549/DDP细胞多药耐药性（MDR）的作用及可能机制。方法以噻唑蓝（MTT）比色法测定TAM对A549/DDP细胞的生长抑制率,流式细胞术检测TAM对A549/DDP细胞内Rho123表达的影响,选取最佳的TAM实验浓度。以MTT法检测TAM对阿霉素（ADM）、吉西他滨（GEM）、顺铂（DDP）的逆转效率,即时聚合酶链反应法检测TAM对A549/DDP细胞多药耐药基因1（MDR1）mRNA水平的变化,蛋白质印迹法检测P糖蛋白（P-gp）表达水平的变化。结果 TAM剂量在10.0μmol/L时对A549/DDP细胞毒性小且可增加细胞内Rho123的蓄积,10.0μmol/L的TAM能增加化疗药物的敏感性,对ADM、GEM、DDP的逆转倍数分别为3.0、7.2、2.0倍,使MDR1 mRNA的表达率较用药前下降35%,并可显著抑制P-gp的表达水平。结论 TAM体外可逆转A549/DDP细胞MDR,提高A549/DDP细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与抑制MDR1表达、减少细胞内药物外排有关。     

注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP耐药逆转作用研究

目的探讨注射用黄芪多糖药物血清在体外对耐顺铂（DDP）人肺腺癌A549/DDP细胞株的耐药逆转作用。方法通过建立小鼠肿瘤模型,运用血清药理学方法,以人肺腺癌敏感细胞A549和耐药细胞A549/DDP为研究对象,采用细胞毒实验（MTT）方法,探讨注射用黄芪多糖对耐顺铂人肺腺癌细胞A549/DDP的耐药逆转作用。结果注射用黄芪多糖药物血清高、中、低剂量组分别与DDP合用时对A549/DDP细胞的耐药逆转倍数分别为1.24、1.41、1.34;且中、高剂量组与阳性对照DDP组比较差异有统计学意义（P〈0.05）。结论注射用黄芪多糖能明显增加A549/DDP耐药细胞对DDP的敏感性,提高细胞死亡率,具有耐药逆转作用。     

异钩藤碱逆转人肺腺癌细胞A549/DDP对顺铂耐药性

目的 研究异钩藤碱(IR)在体外对耐药人肺腺癌细胞系A549/DDP对顺铂(DDP)的耐药性.方法 采用MTT法检测药物细胞毒性作用及耐药细胞逆转倍数,电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)法测定细胞内顺铂浓度.结果 IR无细胞毒浓度组(3.0μg·mL-1)使A549/DDP细胞对DDP的IC50由16.81 mg·L-1降至3.36 mg·L-1;低细胞毒浓度(8.0μg·mL-1)组的IC50降至2.34 mg·L-1;2组均明显提高DDP在A549/DDP细胞内的浓度.结论 研究表明IR能部分逆转A549/DDP细胞的MDR,并可增加肿瘤细胞内DDP药物浓度.     

Twist1基因在A549与A549/DDP细胞中的表达及意义

目的　检测人Twist1 基因在A549 与A549/DDP 细胞株中的表达,探讨Twist1 与肺腺癌顺铂耐药的相关性。方法　通过细胞计数,观察不同浓度梯度顺铂干预24 h 后A549 细胞和A549/DDP 细胞的生长情况;用RIPA 裂解液裂解A549、A549/DDP 细胞,充分游离细胞总蛋白,用BCA 法检测总蛋白浓度,ELISA法检测Twist1 转录因子的浓度。结果　定义m 值（m=Twist1 转录因子浓度/ 总蛋白浓度）。浓度为0、10、20、30、40、50 mg/L的顺铂干预下,分别测得A549 与A549/DDP 的m 值为3.01/3.31、2.17/2.82、1.63/2.94、1.73/1.99、-/1.31、-/-,A549/DDP 细胞的m 值显著大于A549 细胞（P<0.05）。结论　Twist 1 基因在人顺铂耐药肺腺癌细胞中表达增高,提示Twist1 可能与肺腺癌顺铂耐药相关。     

雷公藤甲素对肺癌A549/DDP细胞多药耐药的逆转作用及机制

目的：探讨雷公藤甲素对肺癌A549/DDP多药耐药的逆转作用及机制。方法：雷公藤甲素作用于肺癌A549/DDP细胞后,应用MTS法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞内罗丹明-123（Rhodamine-123,Rh-123）及细胞表面P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达,应用Western blot法和real time PCR检测肿瘤细胞多药耐药蛋白 （MDR1）和肺耐药相关蛋白（LRP）表达变化,应用报告基因技术检测细胞NF-κB启动子活性,应用Western blot法检测肿瘤细胞Akt磷酸化。结果：雷公藤甲素可提高肺癌A549/DDP细胞药物敏感性,经2μM和10μM雷公藤甲素作用后,顺铂逆转倍数（RF）分别为2.09倍和2.93倍,肿瘤细胞中Rh-123含量分别提高了1.38倍和2.88倍,P-gp表达分别是对照组的57.1%和32.1%,MDR1和LRP蛋白表达水平显著下降,MDR1 mRNA表达分别是对照组的64.2%和22.6%,LRP mRNA表达分别是对照组的54.8%和34.7%, NF-κB启动子活性分别是对照组的55.6%和23.6%,Akt磷酸化水平显著下降。结论：雷公藤甲素可逆转肺癌A549/DDP细胞多药耐药性,提高肿瘤细胞药物敏感性,抑制药物外排,降低细胞MDR1和LRP表达,其机制可能与抑制Akt磷酸化水平,下调NF-κB启动子活性有关。     

荜茇酰胺对人肺癌A549/DDP细胞耐药性的逆转作用

目的:研究荜茇酰胺对人肺癌A549/顺铂(DDP)细胞耐药性的逆转作用。方法:A549/DDP细胞经0、20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,用MTS法检测肿瘤细胞抑制率;流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、细胞周期、P-糖蛋白(P-gp)表达和肿瘤细胞内罗丹明Rht123含量的变化;Western blotting法检测多药耐药基因(MDR)1、多药耐药相关蛋白(MRP)1、DNA拓扑异构酶(Top)Ⅱ、谷胱甘肽S-转移酶(GST)-π、凋亡抑制蛋白Survivin、周期蛋白依赖性蛋白激酶(CDK)1和蛋白激酶(PK)Cζ蛋白表达;实时荧光聚合酶链反应(RT-PCR)法检测MDR1、MRP1、Top-II、GST-π、Survivin和CDK1 m RNA表达;酶标仪检测含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3、8活性。结果:A549/DDP细胞经0、20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP对肿瘤细胞增殖的抑制率明显升高;与0μmol/L比较,20、30μmol/L荜茇酰胺作用48 h后,DDP导致的细胞凋亡率和G2期/M期明显升高,P-gp表达明显减弱,Rh-123浓度明显增加,MDR1、MRP1、Top-II、GST-π、Survivin、CDK1和PKCζ蛋白表达明显减弱,MDR1、MRP1、Top-Ⅱ、GST-π、Survivin、CDK m RNA表达明显减弱,Caspase-3、8的活性明显增强。结论:荜茇酰胺可逆转人肺癌A549/DDP细胞DDP耐药性,可能与其调节多药耐药相关基因表达有关。     

基于RNA干扰技术探讨消岩汤对肺腺癌A549细胞凋亡的影响

目的 分析消岩汤干预下sh-survivin对人肺腺癌A549细胞增殖及凋亡的影响。方法 选择人肺腺癌A549细胞, 采用中药复方进行干预及shRNA进行转染, 将转染后的细胞分组, 通过MTT法观察消岩汤对A549细胞生长的影响, 免疫组化法检测survivin蛋白的表达, 流式细胞仪检测细胞凋亡率。结果 消岩汤能有效地抑制人肺腺癌A549的细胞增殖, 运用消岩汤作用细胞24 h后, 侵袭的细胞数明显减少, 该方作用48 h后可以诱导肿瘤细胞凋亡;消岩汤中剂量组与转染sh-survivin组抑制率相当, 不同剂量的消岩汤均可协同sh-survivin使肺癌细胞凋亡率增加。结论 消岩汤可以通过干预肿瘤细胞凋亡抑制蛋白的表达而有效抑制肿瘤的发展。     

非离子表面活性剂逆转肿瘤细胞多药耐药性的机制

目的探讨非离子表面活性剂聚氧乙烯醚﹑聚乙二醇300﹑曲拉通X100对肺癌耐药细胞A549/DDP(耐顺铂)多药耐药性的逆转及其机制。方法用四氮唑盐(MTT)法进行体外耐药逆转实验,Westernblot检测P-gp(P-糖蛋白)蛋白的表达。结果①合用非离子型表活剂前后,A549/DDP对化疗药物阿霉素、顺铂、丝裂霉素、5-氟尿嘧啶、依托泊甙和长春新碱的敏感性显著增加(各组都为P<0.01);②三种非离子型表面活性剂能抑制P-gp蛋白的表达。结论三种非离子表面活性剂具有逆转A549/DDP耐药性的作用,逆转机制与其抑制P-gp蛋白的表达有关。     

消岩汤对环磷酰胺诱导Lewis肺癌小鼠骨髓抑制的造血微环境的改善研究

目的观察消岩汤对环磷酰胺诱导Lewis肺癌小鼠造血微环境的影响,探究消岩汤对Lewis肺癌小鼠骨髓抑制的造血微环境的改善作用及其作用机制。方法 SPF级Lewis肺癌小鼠随机分为对照组、模型组、重组人粒细胞刺激因子组和消岩汤组,每组各10只。对照组和模型组ig 0.02 mL/g生理盐水。人粒细胞刺激因子组在造模后sc重组人粒细胞刺激因子注射液15 ng/g,1次/d,连续给药7 d。消岩汤组在造模后ig 2.9 g/mL消岩汤,2次/d,0.2 mL/次,连续给药7 d。采用流式细胞仪分析细胞周期,通过细胞培养技术检测基质细胞分化能力,采用QRT-PCR法检测骨髓细胞Bcl-2和Bax mRNA的基因表达。结果与模型组比较,消岩汤能促进骨髓细胞从G_0/G_1期向S、G2/M期转化(P0.05);能一定程度上缓解化疗导致的成纤维细胞集落生成单位(CFU-F)形成减少(P0.05);能上调抗凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达((P0.05)。结论消岩汤能够促进骨髓细胞向增殖周期转化,上调Bcl-2 mRNA表达,改善造血微环境,从而缓解Lewis肺癌骨髓抑制对小鼠造血功能的影响。     

单端孢菌素逆转肺癌耐药A549/DDP细胞耐药性及其机制研究

目的 探讨单端孢菌素对肺癌耐顺铂细胞系A549/DDP顺铂耐药性的逆转作用及机制。方法 应用MTS法检测单端孢菌素对A549/DDP细胞顺铂敏感性的影响,流式细胞术检测肿瘤细胞表面P-糖蛋白（P-Glycoprotein,P-pg）表达以及胞内罗丹明-123（Rhodamine-123,Rh-123）含量的变化,生化法检测细胞内SOD和GSH的水平,Western blot法和Real time PCR检测肿瘤细胞多药耐药蛋白MDR1、MRP1和Survivin表达的变化,Western blot法检测Akt磷酸化的变化,液相芯片法检测TGF-β,IL-6和IL-8的变化,应用双萤光报告基因技术检测细胞NF-κB和AP-1转录活性。结果 单端孢菌素可增加细胞对顺铂的敏感性,经5 μg·mL^-1和10 μg·mL^-1单端孢菌素作用72 h后,耐药逆转倍数（RF）为1.84和3.95倍。经5 μg·mL^-1和10 μg·mL^-1单端孢菌素作用24 h后,肿瘤细胞P-gp表达分别下降了62.6%和19.8%,细胞中Rh-123含量分别提高了183.3%和308.3%,细胞内SOD水平下降65.2%和50.1%,GSH水平下降 71.6%和46.3%,MDR1的mRNA水平下降了72.7%和52.3%,MRP1的mRNA水平下降了64.0%和22.5%,Survivin的mRNA水平下降了45.8%和14.7%,Akt磷酸化水平下降,TGF-β分泌水平下降了80.2%和51.5%,IL-6分泌水平下降了73.4%和37.2%,IL-8分泌水平下降了71.2%和43.2%,NF-κB转录活性下降42.3%和22.7%,AP-1的转录活性下降了57.4%和32.5%。结论 单端孢菌素逆转A549/DDP对顺铂的耐药性,这一作用与抑制药物外排,负调控肿瘤耐药相关蛋白的表达有关。     

顺铂对人肺腺癌细胞作用与ERCC1、Bcl-2表达的相关性研究

目的:探讨ERCC1、Bcl-2表达与顺铂作用的关系,进而推测ERCC1、Bcl-2在顺铂耐药中的作用.方法:选择人肺腺癌细胞A549及其耐DDP细胞株A549/DDP作为研究对象,采用MTT法检测A549/DDP细胞耐药指数;免疫细胞化学方法、RT-PCR方法检测不同浓度、不同作用时间干预后细胞中ERCC1、Bcl-2的表达.结果:10μg/mL DDP作用12 h,A549细胞中ER-CC1、Bcl-2 mRNA表达开始增高,随着作用时间的延长,ERCC1、Bcl-2 mRNA的表达逐渐增高,在72 h表达最强.浓度为5μg/mL的DDP即可刺激A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA表达水平上升,随着DDP浓度的增加,其表达水平逐渐上升,ERCC1民mRNA表达水平在20μg/mL组达到高峰.与亲本细胞相比,A549/DDP中ERCC1、Bcl-2表达明显增高.结论:随着顺铂作用时间的延长和浓度的增加,A549细胞中ERCC1、Bcl-2 mRNA和蛋白的表达量增加,推测ERCC1、Bcl-2可能参与了顺铂继发耐药的形成.