氯胍及其代谢物环氯胍和对-氯苯基二胍在体外对恶性疟原虫的作用

本文报道氯胍、环氯胍、对-氯苯基二胍(PBG)、乙胺嘧啶及氯喹对10株恶性疟原虫的体外作用。该10株恶性疟原虫,7株从肯尼亚儿童分离获得,3株来自东南亚(FVO为敏感株,Camp与Smith株为抗乙胺嘧啶株)。测试抗疟作用采用96井测定板,每井加25μl完全培养液(CMS)、25μl含药的CMS及200μl 1.5形(v/v)的红细胞悬液或原虫血症为0.4%的红细胞悬液。经37℃培养24小时后,每井加入25μl含0.5μCi[~3H]次黄嘌呤的CMS,继续培养18小时。然后将各井内容物移至玻璃纤维膜上,蒸馏水洗,干燥后测放射性(cpm),计算出各药抑制50%放射性掺入原虫的浓度(1D_(50))。     

恶性疟原虫裂殖子和感染恶性疟原虫裂殖体的红细胞表面蛋白

作者按照Tragager和Jensen的方法,用含10%人血清的RPMI 1640-HEPES(称为RPS培基)在100mm的陪氏培养皿中培养恶性疟原虫。为收集大量的裂殖子,首先进行同步培养。最初,用山梨糖醇处理培养物,然后,在明胶中漂浮反复地分离环状体和滋养体。用这种方法(一般是5次)每40—42小时挑选一次感染滋养体的红细胞,直到3—4小时内原虫同步发育。在释放裂殖子预测时间的八小时前,吸出培养基,并用含下列任一基质:(a)[~(35)S]蛋氨酸,10μci/ml的培养基;(b)[~3H]亮氨酸,10μci/ml 60ci/mmol;(c)[~3H]葡萄糖胺,40μci/ml;(d)[~3H]甘露糖,25μci/ml的10ml RPS培养基进行补充。     

环亮氨酸对疟原虫生长和代谢的影响

环亮氨酸(80mg/kg)灌喂感染伯氏疟原虫小鼠5d,完全制止原虫生长。体外培养的恶性疟原虫(P.f)与环亮氨酸(1.5×10~(-2)M)接触3d,红内期原虫失去侵入新红细胞的能力,变异虫达90％。恶性疟原虫在体外与环亮氨酸培养30h,[~3H]次黄嘌呤掺入感染红细胞的量被抑制52～58％,掺入核酸中的量较对照减少79％;[~(14)C]甲硫氨酸的掺入被抑制30％,而其生成精脒的量被抑制50％。     

约氏疟原虫红内期体外培养的研究

约氏疟原虫(Plasmodium yoelii)红内期的体外连续培养尚未取得理想的效果。本研究在Trager等体外培养恶性疟原虫方法的基础上,对培养条件进行改进:将约氏疟原虫放在悬液系统培养仪的小室内,使用磁性搅拌器搅拌成悬液;每天更换培养基并向培养基中添加新的网织红细胞;37℃、5% CO_2培养箱内常规培养。每日取体外培养物尾静脉注射小鼠,第3天检查小鼠体内疟原虫感染情况。结果显示,体外培养的24 h内,约氏疟原虫的原虫率增长至2.200%,呈小幅增长,但随后开始下降。第10天,未发现被感染的红细胞。第1~9天的体外培养物感染的小鼠均呈阳性,且第10天的体外培养物感染小鼠呈阴性。第1天体外培养物感染小鼠的原虫率最高,为54.960%。说明约氏疟原虫红内期的体外培养可以维持9 d,且体外培养的约氏疟原虫具有感染力。     

一种节省劳力的恶性疟原虫体外培养法

迄今恶性疟原虫体外培养法至少需每天更换培养液一次,浪费人力和物力。作者试图对此作出改进。实验系用恶性疟原虫体外抗氯喹的SGE-1/塞内加尔株,先按Trager-Jensen(1976)法进行体外培养后(培养基谷氨酰胺含量增加到5mM),以1,000转/分离心收集原虫,配成50%的红细胞悬液,再加入正常人A型红细胞使原虫感染率稀释到0.5%或以下。一组仍按上法培养(RPMI组),另一组培养基中添加50mg/l次黄嘌呤(RPMI/HYPOX组)。培养时两组培养皿内皆加入     

青蒿素及其衍生物在体外对[G-~8H]次黄嘌呤掺入恶性疟原虫的影响

青蒿素在体内对抗氯喹疟原虫有效。本文观察了青蒿素、蒿甲醚、二氢青蒿素和α-丙氧基羰基二氢青蒿素(SM242)对[G-~3H]次黄嘌呤掺入恶性疟原虫的影响。作者用二甲基甲酰胺(DMF)将药物配制成2×10~(-5)mol/l的药液,并进一步用完全培养基(CM)制成系列稀释液,过滤灭菌后,DMF浓度小于0.5%。应用改良的Desjardins法测定药物的50%抑制浓度(IC_(50))。即在微量滴定板上,每井置入25μl的药物稀     

从泰国分离的恶性疟原虫对青蒿素和蒿甲醚的敏感性

本文介绍用体外方法测定取自中国的青蒿素和蒿甲醚对泰国分离的恶性疟原虫的效果。实验用的2个非克隆(K_1和K_(31))以及9个克隆(T_9)分别从泰国的北碧和Mae sod地区分离获得。另外从冈比亚得到1个从非洲分离的非克隆(G_1)作为对照。所有分离的原虫株在试验前均在培养皿内用Trager和Jensen蜡烛缸法进行培养。培养液为RPMI1640,内含100ml/L血清。分离的疟原虫株与青蒿素和蒿甲醚接触的浓度为10~(-7)mol/L到10~(-12)mol/L。置于微量测试板的凹井中,在37℃中培养36～72小时。在24和48小时后更换培养液(含药),并按时取样,作薄膜血片镜检原虫,观察药物完全抑制原虫生长的最低浓度(MIC)。实验表明原虫与药物接触36、48或72小时,其MIC值几乎相似,故本试验中以接触药物36小时作为标准。MIC值随最初的原虫血症而定的,在本次试验中最初原虫血症在0.5～1%范围内。     

甲巯咪唑对体外培养人甲状腺细胞增殖的影响

目的研究甲巯咪唑(MMI)对体外培养人的甲状腺细胞增殖的影响，以探讨MMI的药理作用，为指导临床用药提供一个理论依据。方法甲状腺细胞培养2天，之后分别培养在5H和6H液中，不同浓度MMI(1、10、100μmol/L)状态下孵育2天。以竞争性蛋白结合法测定cAMP。采用四氮唑蓝比色法测定甲状腺细胞增殖。结果MMI在较大范围(1-100μmol/L)内不影响细胞内的第二信使cAMP的含量。在细胞增殖实验中，小剂量MMI(1～10μmol/L)对甲状腺细胞增殖无明显影响，大剂量MMI(100μmol/L)抑制甲状腺细胞增殖。结论MMI对体外培养人的甲状腺细胞的生长有影响。     

云南省恶性疟原虫对青蒿素类药物及咯萘啶与氯喹敏感性的体外测定

目的 :了解恶性疟原虫对青蒿素类药物及咯萘啶与氯喹等抗疟药的敏感性。方法 :采用Rieckmann体外微量法检测。结果 :滇东南、滇南、老挝、滇西及缅甸恶性疟原虫对氯喹的抗性率为79%— 96% ,半数抑制量 ( ID50 )为 12 2— 2 4 0 nmol/L;对咯萘啶的抗性率为 2 0 %— 35% ,ID50 为16— 32 nmol/L ;来自老挝感染的恶性疟原虫对青蒿素类药物 (青蒿琥酯 ,还原青蒿素、蒿乙醚、蒿甲醚 )均敏感 ,其他各地抗性率为 5%— 16%。结论 :云南恶性疟原虫对氯喹普遍存在抗性 ,大部分原虫对青蒿素类药物及咯萘啶敏感 ,但也有部分原虫产生了低度抗性。     

东非灵长类作为内脏利什曼病动物模型的适用性

作者用杜氏利什曼原虫(NIB/065)感染4只黑长昆猴(Cercopithecus aethiops),4只青猴(C.mitis),2只黄狒狒(Popio cynocephatus)和2只粗尾婴猴(Galago crassicaudatus)。除粗尾婴猴外,其他3种动物经静脉、腹腔和皮内接种仓鼠脾内的利杜体悬液以及培养在含20%胎牛血清的施奈德基中的前鞭毛体悬液1.0ml,每只动物接种总量为3×10~7个利杜体和等量前鞭毛体。每只婴猴经腹腔和皮内接种2×10~7个利杜体和等     

云南省恶性疟原虫对青蒿素类药物及咯萘啶与氯喹敏感性的体外测定

目的 :了解恶性疟原虫对青蒿素类药物及咯萘啶与氯喹等抗疟药的敏感性。方法 :采用Rieckmann体外微量法检测。结果 :滇东南、滇南、老挝、滇西及缅甸恶性疟原虫对氯喹的抗性率为79%— 96% ,半数抑制量 ( ID50 )为 12 2— 2 4 0 nmol/L;对咯萘啶的抗性率为 2 0 %— 35% ,ID50 为16— 32 nmol/L ;来自老挝感染的恶性疟原虫对青蒿素类药物 (青蒿琥酯 ,还原青蒿素、蒿乙醚、蒿甲醚 )均敏感 ,其他各地抗性率为5%— 16%。结论 :云南恶性疟原虫对氯喹普遍存在抗性 ,大部分原虫对青蒿素类药物及咯萘啶敏感 ,但也有部分原虫产生了低度抗性。     

应用荧光测定法测定体外恶性疟原虫的生长

溴化乙锭是一种能与DNA特异结合并具有杀锥虫作用的染剂,可用溴化乙锭对疟原虫染色并应用荧光测定法定量测定体外恶性疟原虫的生长。试验虫株为恶性疟原虫FCR-3株,按Trager等(1976)和Miyagami等(1985)法,将24孔培养板置于含5% CO_2的湿空气环境中培养,按Lambros等(1979)法使原虫同步。每孔加入0.5ml含1.5%环状体的5%红细胞悬液。将各样本涂制血涂片,用吉氏染剂染色,计算每万个红细胞中疟原虫感染     

伯氏疟原虫:大鼠肝脏细胞初步单层培养中的有感染性的红外期裂殖体

作者用体重为35～70克的雌性大鼠,静脉接种伯氏鼠疟原虫NK-65株子孢子1～3×10~6个,于3～10、18～28及29～36小时后,取其肝,以胶原酶法制成含肝脏红外期裂殖体(HEX)的肝细胞悬液。在培养前后,均计数悬液中的肝细胞;以台盼蓝排除试验(trypan blue exclusion)测定肝细胞活力;以腹腔接种大鼠,接种后2～3周内检查有无原虫血症,判定悬液中是否有感染性HEX存在。     

磷酸萘酚喹伍用青蒿素对猴疟原虫的药效学研究

目的 研究磷酸萘酚喹与青蒿素伍用对猴疟的治疗作用。 方法 感染诺氏疟原虫恒河猴模型随机均分为9组（3只/组）,A组和B组分别灌服6和10 mg/kg磷酸萘酚喹3 d,1次/d;C组和D组分别灌服31.6和100 mg/kg青蒿素,第1天2次,第2～3天各1次;E组、F组和G组用10 mg/kg磷酸萘酚喹分别与10、20和25 mg/kg青蒿素配伍（即以1?誜1、1?誜2和1?誜2.5配伍）灌服;H组和I组分别灌服单药磷酸萘酚喹10 mg/kg和青蒿素30 mg/kg。于给药后24 h观察原虫感染率,以给药后105 d查不见原虫为治愈标准。 结果 给药后24 h,A、B、C、D组原虫下降率均超过90%。E、F和G组平均原虫转阴时间依次为（56.0±16.0）、（53.3±4.6）和（56.0±8.0）h,均较H组［（69.3±4.6）h］快。A、B、D、E、F和G组治愈猴数分别为1、3、3、2、2和3只。C、H和I组均未治愈。 结论 磷酸萘酚喹与青蒿素伍用可降低伍用单药剂量,缩短疗程,提高治愈率,两药1:2.5的比例配伍治愈率达100%。     

Fura-2/AM荧光法测定日本血吸虫培养细胞内游离钙离子浓度

目的　研究用钙荧光探剂 (Fura- 2 / AM)检测静息状态下日本血吸虫培养细胞内的游离钙离子浓度 ([Ca2 + ]i) ,以及β-巯基乙醇对培养细胞 [Ca2 + ]i的影响。方法　将 18d虫龄的日本血吸虫童虫制成细胞悬液 ,贴壁法接种于 30 ml培养瓶中 ,培养液为 RPMI- 16 4 0含 2 0 %小牛血清及常量抗生素。在培养的 0 - 3d,制备日本血吸虫细胞悬液 ,采用 Fura- 2 / AM钙荧光探剂测定正常静息状态下及加入β-巯基乙醇后日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 + ]i。结果　正常静息状态下 ,培养 0 d的日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 + ]i为 188.2 nmol/ L ;培养 1- 3d的 [Ca2 + ]i两两比较差异无显著性(P>0 .0 5 ) ,它们的平均值为 (187.0± 10 .7) nm ol/ L ,与培养 0 d的 [Ca2 + ]i比较 ,差异也无显著性(P>0 .0 5 )。β-巯基乙醇可使日本血吸虫培养细胞内 [Ca2 + ]i明显升高 (P<0 .0 1) ,并随浓度的增加而升高。结论　培养 1- 3d,静息状态下日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 + ]i比较稳定 ,β-巯基乙醇能影响日本血吸虫培养细胞内的 [Ca2 + ]i     

一种低温保存体外连续培养疟原虫的简易方法

本文报告了一种简易的冻存方法。该方法系以含10%甘油或10%二甲基亚砜的RPMI 1640培养液作为保护剂,将体外连续培养的恶性疟原虫保存于-185℃液氮或-70℃冰箱中,以复苏后原虫率上升到5%并能按常规稀释2至3倍连续传代培养作为冰冻复苏成功的指标。其具体操作步骤是:1)冰冻材料的制备:经3至4天培养,原虫率达到5%(或更高)的培养物即可用于冰冻。冰冻前,吸去培养物上层液体,加入含保护剂的营养液,使其成为1%悬液,混匀后,分装3ml于无菌小瓶内,密封瓶盖。2)冰冻保存:将小瓶迅速投入液氮或冰箱内。3)复苏:取出小瓶置于37℃水浴中速融,然后将融化的     

青蒿素对人白血病细胞株和原代细胞的影响

青蒿素是一种低毒、有效的抗疟药 ,最近发现其有抑制实体瘤细胞增殖的作用[1,2 ] 。我们研究了青蒿素对人白血病细胞株和原代细胞的影响及可能机制 ,以期为其抗白血病新用途提供实验证据。一、材料与试剂1 材料 :人白血病细胞株NB4 ,K5 6 2为江苏血液病研究所馈赠 ,原代细胞从急性早幼粒细胞白血病 (APL)患者骨髓液分离。2 试剂 :青蒿素晶体 (黑龙江省医药工业研究所 ) ,纯度99 8% ,配制 5mmol/L储存液 ,避光 4℃保存。用前由RPMI 16 4 0稀释至所需浓度。Fluo 3/AM (Sigma)。RPMI 16 4 0培养基含 10 %的新生牛血清 ,青霉素、链霉素…     

骨髓基质细胞移植对心肌纤维化的干预

目的:评价骨髓基质细胞移植对心肌梗死后心肌间质纤维化的影响。方法:30只日本大耳白兔,随机分为细胞移植组、药物治疗组、对照组,体外骨髓穿刺提取、分离、培养骨髓基质细胞,心肌梗死模型制作成功2周后沿梗死周边区域注射细胞悬液100μl(细胞移植组)或DMEM培养基100μl(对照组)或给予安体舒通20mg,bid,服用1个月(药物治疗组)。各组实验前、后4周经心脏超声检查,氯胺T氧化法测定血浆、组织羟脯胺酸含量,TTC染色评价梗死面积。结果:细胞移植组血浆、组织羟脯胺酸含量[(22.79±1.69)mg/L、(1.59±0.89)μg/mg]均低于对照组[(40.16±2.31)mg/L、(3.59±0.19)μg/mg]、药物治疗组[(34.24±1.98)mg/L、(2.67±0.81)μg/mg],均P<0.05。实验后4周时,细胞移植组心功能有所提高[LVEF(56.91±2.04)%],与对照组[(32.49±1.29)%]、药物治疗组[(53.22±2.13)%]比较,均P<0.05;梗死面积[(22.82±3.12)%]有所下降,与对照组[(29.73±2.11)%]、药物治疗组[(28.61±1.24)%]比较,均P<0.05。结论:细胞移植后可抑制心肌胶原合成、抑制心肌局部间质纤维化,是细胞移植心功能改善机制之一。     

吸烟对肺泡巨噬细胞凋亡的影响及机制探讨

本研究拟通过观察和分析肺泡巨噬细胞的凋亡情况 ,探讨吸烟者肺泡巨噬细胞增多原因。材料与方法　 (1)肺泡巨噬细胞的分离和培养 :以吸烟者 12人 ,男 10人 ,女 2人 (吸烟均大于 2 0 0年支 ,近 3ｄ仍吸烟 ) ,非吸烟者 12人 ,男 8人 ,女 4人为研究对象 ,被测对象均为健康者 ,并知情同意。行纤维支气管镜肺泡灌洗 ,灌洗液回收率 6 0 %～ 70 %。置 5 %ＣＯ2 孵箱中培养 2 4ｈ。制成细胞悬液 1× 10 6个 /ｍｌ备用。 (2 )细胞存活率计数 :采用台盼蓝染色法。 (3)细胞凋亡观察 :①荧光染色观察 :取细胞悬液95 μｌ和荧光染色液 5 μｌ,混匀 ,37℃…     

一种体外分析系统对有效抗疟药的鉴定

本文介绍采用体外培养技术,根据~3H标记的次黄嘌呤摄入疟原虫核酸的情况,测定药物抗疟作用的方法。体外培养采用改良的Nguyen-Dinh和Trager蜡烛缸法。恶性疟原虫是对氯喹有一级抗性的FCR_(8TC)株和敏感的洪都拉斯株。塑料微量板分24井和96井两种。在24井板中,先加入20μl含50%红细胞而原虫密度为0.2～0.3%的混悬液,然后用含血清和不同浓度药物的RPMI1640加至500μl;在96井板中,先加入20μl含10%红细胞而原虫密度为1%的混悬液,再用上述含药及血清的培养液加至200μl,分别置于37℃的蜡烛缸中连续培养48小时,并计数此时的原