微囊化胰岛细胞异种移植治疗小鼠糖尿病

我们进行空囊移植及胰岛、微囊化胰岛的异种移植 ,以期寻找影响胰岛存活的原因 ,现将结果报道如下。一、材料和方法1 .糖尿病小鼠的制备 :链脲菌素溶于枸橼酸钠溶液中 ( ｐＨ4.5)制成浓度1 0 ｇ/Ｌ溶液 ,2 2 0ｍｇ/ｋｇ体重小鼠腹腔注入。非空腹血糖连续 2次超过 3.5ｇ/Ｌ则定为已患糖尿病。剪尾以便携式血糖仪测定尾静脉血糖。2 .胰岛细胞的分离和纯化 :胰岛细胞的分离见文献 [1 ]。胰岛细胞纯化 :Ｆｉｃｏｌｌ离心。消化沉淀物和 2 5%Ｆｉｃｏｌｌ溶液混匀 ,其上依次加入 2 3.0 %、2 0 .5%、1 1 .0 %Ｆｉｃｏｌｌ各 2ｍｌ,80 0 ｇ离心 1 5…     

微囊包膜新生猪胰岛移植逆转糖尿病大鼠甲状腺形态学改变

目的探讨糖尿病大鼠胰岛移植后的甲状腺形态学的变化。方法给用链脲霉素所致的糖尿病大鼠腹腔内移植微囊包膜的新生猪胰岛８００个。术后３个月将动物处死,取甲状腺切片观察。结果动物处死前对照组及移植组的血糖水平分别为（４．８７±０．４７）ｍｍｏｌ／Ｌ和（６．４４±１．８２）ｍｍｏｌ／Ｌ,糖尿病组为（１６．１２±１．４７）ｍｍｏｌ／Ｌ,移植组与对照组比较,差异不显著（Ｐ＞０．０５）,糖尿病组与对照组比较,差异显著（Ｐ＜０．００１）;甲状腺滤泡腔内胶质的面积,移植组、糖尿病组分别与对照组比较,差异不显著,但甲状腺滤泡上皮细胞的高度,糖尿病组与对照组相比,差异显著（Ｐ＜０．００１）,而移植组与对照组相比,差异不显著（Ｐ＞０．０５）。结论胰岛移植后若受体的血糖控制良好,其甲状腺滤泡上皮细胞的形态改变可以逆转,这可能是纠正糖尿病时甲状腺分泌功能低下的重要因素之一。     

微囊化人胎胰岛移植治疗小鼠实验性糖尿病的观察

目的 :探讨微包囊技术在解决胰岛移植免疫排斥问题中的作用。方法 :将用链脲霉素 (STZ)制备的合格糖尿病模型鼠 2 1只随机分为 3组 ,每组 7只。空囊组腹腔内植入 5 0 0～ 6 0 0个空囊 ,游离胰岛组植入经胶原酶消化制备的人胎胰岛细胞 10 0 0± 10 0个 ,微囊组植入 10 0 0± 10 0个微囊包裹的胰岛细胞。结果 :游离胰岛组和微囊组小鼠在完全停用胰岛素的情况下 ,术后血糖分别降至 7.94± 2 .36mmol.L-1和 7.0 7± 1.15mmol.L-1,与空囊组比较差异有统计学意义 (t=13.170　P <0 .0 0 1,t=2 4 .999　P <0 .0 0 1) ,分别持续 7.4 3± 3.4 2天和 78.4± 2 1.2 7天 (t =8.6 5P <0 .0 0 1)。结论 :该微囊化人胎胰岛移植具有良好的组织相容性和免疫隔离作用 ,明显延长移植胰岛的存活时间     

微囊化大鼠胰岛异种移植的实验研究

目的　通过动物实验明确微囊化胰岛是否具有免疫隔离作用。方法　SD大鼠胰腺原位消化 ,Ficoll间断密度梯度离心法纯化、分离胰岛 ,气流吹喷制作海藻酸钠 /聚赖氨酸 /海藻酸钠(APA)微囊化大鼠胰岛 ,比较微囊化与未微囊化胰岛的胰岛素释放试验 ;将微囊化 (实验组 )与未微囊化 (对照组 )大鼠胰岛植入链脲佐菌素 (STZ)诱导的I型糖尿病小鼠中 ,作两组间血糖正常持续时间比较。结果　实验组与对照组的胰岛素释放试验差异无显著性 (P >0 .0 5 ) ;实验组血糖正常持续时间为 2 3～ 6 5d(平均 48d) ,对照组为 3～ 6d(平均 5d) ,两组差异有极显著性 (P <0 .0 1)。已排斥的实验组小鼠腹腔灌洗发现部分微囊化胰岛存活 ,部分已坏死 ,但微囊膜皆完整 ,囊壁无纤维化。结论　微囊具有良好的免疫隔离作用 ,可使胰岛移植物存活时间明显延长。同时推测微囊内移植物死亡与细胞因子、自由基作用或营养不足等有关。     

微囊化新生猪胰岛异种移植治疗糖尿病大鼠的实验研究

目的 观察微囊化新生猪胰岛异种移植对糖尿病大鼠的治疗效果及其对糖尿病并发症的预防作用。方法 糖尿病大鼠随机分为3组：①海藻酸钠-聚赖氨酸-海藻酸钠(APA)微囊包膜胰岛移植组；②未微囊包膜胰岛移植组，两组均接受胰岛腹腔移植；③未移植组。定期监测移植后血糖，白内障发生情况。并进行肾脏组织病理学检查，比较各组结果。结果 微囊化胰岛移植逆转了糖尿病大鼠的高血糖状态，最长达235天，明显长于未微囊胰岛移植组。有效的早期微囊胰岛移植的大鼠未出现糖尿病性白内障及肾小球基底膜改变，而未移植组及未微囊化胰岛移植组大鼠2～3个月后均出现白内障及肾小球基底膜改变。结论 APA微囊能有效保护移植物的体内存活，微囊化新生猪胰岛移植对大鼠糖尿病及其并发症有较好的治疗及顶防作用。     

微囊化新生猪胰岛样细胞团异种移植

本实验研究新生猪与大鼠产的异种移植。结果显示，新生猪胰岛样细胞团可纠正糖尿病大鼠的高血糖状态；海灌酸钠－多聚赖氨酸微囊能有效保护移植物的存活，平均存活时间为４个月。而微囊作为一种新型防排斥手段，将应用于广泛的领域。     

海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊化异种胰岛移植治疗小鼠糖尿病

目的比较海藻酸-聚赖氨酸-海藻酸微囊化(APA)大鼠胰岛和海藻酸-壳聚糖-聚乙烯乙二醇微囊化(ACP)大鼠胰岛移植对小鼠糖尿病的治疗作用.方法链脲霉素220 mg/kg体重腹腔内注射制作小鼠糖尿病动物模型.成模后分成APA微囊组、ACP微囊组和未微囊化胰岛组,每只小鼠腹腔内分别植入200个相应胰岛,检测监测移植前后小鼠的血糖.结果移植后第1天,3组小鼠血糖均较移植前明显降低.未微囊化胰岛移植组小鼠术后第2天血糖均恢复到术前水平;APA微囊组和ACP微囊组小鼠血糖分别维持正常(57.00±14.61)d和(41.67±16.73)d,此两组间差异无显著性(P＞0.05),但均较未微囊化胰岛移植组明显延长(P＜0.05).结论 ACP微囊与APA微囊一样具有免疫隔离作用;ACP微囊化异种胰岛移植可纠正小鼠糖尿病.     

大鼠胰岛微囊化延长异种移植物在糖尿病小鼠体内生存期

本实验用胶原酶消化法分离新生大鼠胰岛，培养和Ｆｉｃｏｌｌ密度梯度离心纯化胰岛。用海藻酸－聚赖氨酸－海藻酸生物膜包裹胰岛并进行体外胰岛素分泌的能测定和体内异种移植实验。１０只链脲霉素诱导的糖尿病小鼠腹腔内移植微囊化胰岛３天后，小鼠血糖降至正常，体重逐渐增加，糖尿病得到纠正。维持最长者达１３０天，平均８５．２天。明显优于单纯胰岛植组，其功能维持不足９天。肾脏病理组织染色和透射电镜显示早期微囊化胰岛移植     

微囊化胰岛移植的研究进展

免疫隔离膜微囊化胰岛移植，通过一个人造屏障将胰岛与宿主的免疫系统隔离开业，为解决排斥反应开辟了新的思路和途径。在糖尿病动物模型上获得了令人鼓舞的效果，本文就海藻酸钠微囊的制备、免疫屏障作用、移植数量和移植后纤维化进行了探讨。     

改良的微囊化新生猪胰岛细胞移植治疗Ⅰ型糖尿病八例报告

在动物实验的基础上，对８例Ⅰ型糖尿病患者进行了改良的微囊化新生猪胰岛细胞移植治疗。８例患者中，３例移植于网膜囊，５例移植于三角肌，于移植前及移植后１、６、１２个月观察空腹血糖（ＦＢＧ）、糖基化血红蛋白Ａ１ｃ（ＨｂＡ１ｃ）、Ｃ－酞、ＣＤ４阳性细胞、ＣＤ８阳性细胞、可溶性白细胞介素２受体和胰岛素用量（ＩＮＳ）的变化。结果显示，移植前后Ｔ细胞亚群无明显变化，提示无排斥反应发生；结果还显示移植的猪胰岛数量决定了疗效：移植量少于１０个猪胰的胰岛（约３２６１８０±１２１３０个胰岛），移植后ＩＮＳ减量少于４０％，Ｃ－酞升高不明显，移植量达到１０个猪胰的胰岛，术后ＩＮＳ减量＞７５％，Ｃ－酞峰值是术前的２．５６倍。提示此种方法移植的必需量为１０个新生猪胰的胰岛。     

14例胰岛素依赖型糖尿病患者胚胎胰腺组织移植的远期临床分析

目的观察胰腺组织移植的远期效果。方法将胚胎胰腺制成１ｍｍ×１ｍｍ×１ｍｍ大小的组织块,经培养后移植至胰岛素依赖型糖尿病患者的大网膜及小网膜腔内。结果术后１４例患者的胰岛素用量均较术前减少,低血糖出现的时间为术后７～３７天。术后５年、６年、７年和８年的胰岛素用量分别为（４５．８６±１６．８３）Ｕ／ｄ、（４６．９１±１８．３４）Ｕ／ｄ、（４８．６０±１７．０２）Ｕ／ｄ和（５２．６７±１４．１４）Ｕ／ｄ,与术前比较,差异均有显著意义（Ｐ＜０．０１）。结论胚胎胰腺组织移植具有一定的远期效果,可作为胰岛素依赖型糖尿病的一种有效的治疗方法;术后效果与移植的胰岛数量、质量及排斥反应有关     

兔胰岛细胞团颅内移植治疗糖尿病的研究

将新鲜制备的成年兔胰岛样细胞团经腰椎穿刺注入脊髓腔，采取小剂量多次颅内移植治疗糖尿病兔。术后不用免疫抑制剂，不用外源性胰岛素。结果１０只糖尿病兔在胰岛细胞团颅内移植后，３只显效，２只有效，无排斥反应及神经系统异常。     

采用Edmonton免疫抑制方案的成人胰岛移植治疗1型糖尿病八例

目的：探讨成人胰岛移植治疗1型糖尿病的临床效果。方法：为8例1型糖尿病患者施行胰岛移植，供胰来自于成人尸体，消化、分离获得的胰岛培养过夜，然后经动脉插管输注至肝固有动脉，每例输注胰岛数为（8415±757）胰岛当量／kg，其中3例接受1个供者的胰岛移植，5例接受2个供者的胰岛移植（分2次进行）。8例患者中，除1例供、受者的ABO血型不同外，其余供、受者的ABO血型均相同。本组病例未行HLA配型。术后免疫抑制治疗采用Edmonton方案中的免疫抑制剂使用方法，即不使用类固醇激素，采用西罗莫司和他克莫司联用，并辅以5剂达利珠单抗。术后观察外源性胰岛素的使用量、血糖及血清C-肽的变化。结果：移植后平均随访7．7个月，2例完全停用胰岛素，5例的胰岛素用量减少47％～90％，1例效果不明显，胰岛素用量仅减少21％。8例血糖从移植前的（10．6±3．9）mmol／L降至（6．6±1．3）mmol／L，控制更为平稳；糖化血红蛋白A1从（11．9±1．6）％降至（5．9±1．2）％。移植有效者的血清C-肽基础值及葡萄糖刺激后C-肽水平分别由移植前的（0．054±0．076）nmol／L和（0．075±0．045）nmol／L升高至（0．620±0．080）nmol／L和（1．580±0．770）nmol／L。免疫抑制剂相关的并发症主要为白细胞减少（6例），减少或停用免疫抑制剂后白细胞可回升至正常，无大出血、门静脉栓塞或门静脉高压等并发症发生。结论：经肝动脉输注成人胰岛治疗1型糖尿病具有一定的临床效果，采用Edmonton免疫抑制方案安全、有效。     

经hCTLA4-Ig基因转染的猪胰岛细胞在小鼠体内的存活与功能状况研究

目的研究将人细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白（hCTLA4-Ig）基因转染至猪胰岛细胞后，再将其移植至小鼠体内的存活及功能状况。方法采用腺相关病毒载体（AAV）介导hCTLA4-Ig基因体外转染新生猪胰岛细胞（NIPs），再将转基因的NIPs移植至构建了人免疫系统的SCID糖尿病小鼠左肾被膜下。逆转录聚合酶链（RT-PCR）反应和免疫荧光染色法检测转染后hCTLA4-Ig基因的表达状况；观察小鼠移植转基因NIPs后的生存时间；移植物免疫组织化学分析及酶联免疫（ELISA）法测定受者血清中细胞因子的水平。结果NIPs经转染后，可检测到hCTLA4-Ig基因及其蛋白表达，且葡萄糖刺激胰岛素释放试验与未转染的对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）；糖尿病小鼠经转基因的NIPs移植后，生存时间及血糖维持正常的平均时间分别为（72．5±30．6）d和（59．1±24．0）d，较未转染的对照组（26．9±6．9）d和（12．7±3．3）d显著延长（P〈0．01）；免疫组织化学染色检测移植后不同时间（15、30、90d）的移植物组织，可见转基因细胞移植部位有完整的胰岛细胞，而对照组胰岛细胞破坏、消失，周围可见较多的炎性细胞浸润；且转基因细胞移植的小鼠血清白细胞介素2（IL-2）、γ干扰素（IFN-γ）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）的水平明显低于对照组（P〈0．05）。结论AAv介导hCTLA4-Ig基因体外转染猪胰岛细胞后再移植至受者体内，可提高受者的免疫耐受水平，延长胰岛细胞在异种受者体内的存活时间，而胰岛细胞的内分泌功能不受明显影响。     

特异性转录因子在正常小鼠和糖尿病小鼠胰岛内的表达及其意义

目的 探讨正常小鼠与糖尿病小鼠胰腺组织病理学特征的异同及其意义.方法 正常C57BL/6小鼠作为对照组(n=4),腹腔内注射链脲霉素(STZ)的C57BL/6小鼠作为STZ组(n=8),非肥胖性糖尿病(NOD)小鼠作为NOD组(n=2).观察各组小鼠胰腺组织苏木素-伊红(HE)染色特点;应用免疫荧光技术观察特异性标记物在各组小鼠胰腺组织中的表达情况.结果 STZ、NOD组小鼠与对照组小鼠比较,HE染色:胰岛数目明显减少;免疫荧光染色:胰岛中Insulin+细胞与Glucagon+细胞数量比例倒置,Nkx2.2和Nkx6.1的表达均减少,STZ组小鼠胰岛中有少量Ngn3+细胞及Insulin+Glucagon+细胞.结论 糖尿病小鼠血糖升高可能是由于a细胞和á细胞数量的比例倒置所致;成体小鼠胰腺中有干细胞样特性的细胞存在;Nkx2.2需要其他转录因子的参与才能使胰岛内分泌前体细胞生成成熟a细胞.