黄芪糖蛋白对小鼠脾淋巴细胞的体外作用

 目的 研究黄芪糖蛋白（Huangqi glycoprotein,HQGP）对小鼠脾淋巴细胞体外增殖、细胞周期、分泌白介素2（IL-2）的影响。方法 MTT法测定不同浓度黄芪糖蛋白对ConA、LPS诱导的小鼠脾淋巴细胞增殖反应以及对混合淋巴反应（MLR）的影响;流式细胞法测定黄芪糖蛋白对细胞周期、脾细胞分泌IL-2的影响。结果 黄芪糖蛋白明显抑制ConA、LPS诱导的脾淋巴细胞的增殖,抑制混合淋巴反应;细胞周期分析表明,黄芪糖蛋白抑制T淋巴细胞增殖于G₀G₁期;抑制培养的脾细胞分泌IL-2。结论 黄芪糖蛋白在体外具有抑制小鼠脾淋巴细胞增殖的作用,其机制可能与抑制IL-2的分泌有关。     

复肝春6号对小鼠肝癌的抑制作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响

目的：研究复肝春6号（FGC-6）的抗肝癌作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响。方法：将接种H22肝癌细胞的小鼠分为模型组、5-氟尿嘧啶组（5-Fu组）、FGC-6 高、中、低剂量组（含生药量70,35,15 g·kg^-1）,另设正常对照组,连续给药10 d。观察小鼠瘤重、体重、NK细胞杀靶活性、淋巴细胞增殖活性及脾细胞白细胞介素2（IL-2）分泌量的变化。制备FGC-6含药血清,以MTT法和生长曲线法观察该含药血清对体外培养H22细胞的增殖抑制作用。 结果：FGC-6高剂量可明显抑制荷瘤小鼠移植瘤的生长,且FGC-6含药血清对H22细胞增殖有明显的抑制作用,呈时间和浓度依赖性。模型组荷瘤小鼠的NK细胞杀靶活性和脾细胞IL-2分泌量均明显低于正常对照组（P<0.05）； 而FGC-6高剂量组荷瘤小鼠的NK细胞杀靶活性、脾细胞IL-2分泌量和淋巴细胞增殖活性均得到明显改善,FGC-6中剂量治疗使荷瘤小鼠的脾细胞IL-2分泌能力增强,与模型组比较差异显著（P<0.05）。 结论： FGC-6可明显抑制H22细胞的生长,改善荷瘤小鼠的免疫功能。     

鹿茸多肽促进肝细胞增殖及肝部分切除小鼠的肝再生

 目的研究鹿茸多肽(VAP)对细胞增殖及实验性肝再生的影响。方法培养人胚肝细胞株(L-02)和原代大鼠脾细胞,体外加入不同剂量VAP,用MTT比色法观察其对细胞增殖的影响。整体观察VAP促进肝部分切除小鼠肝再生作用。结果VAP 50和25 mg·kg^-1·d^-1能明显促进小鼠肝切除后的肝再生,与对照组比较差异显著(P<0.01和P<0.05)。VAP 5-80mg·L^-1对L-02细胞株和大鼠脾细胞均有明显的促增殖作用。结论VAP通过促进肝细胞增殖和增强免疫力的影响来加速实验性肝切除小鼠的肝再生。     

戴氏虫草胞外水溶性多糖在体外对细胞免疫及细胞因子的影响

 目的 研究虫草属新种戴氏虫草菌丝体胞外水溶性多糖在体外对人扁桃体淋巴细胞和水鼠脾细胞免疫功能的影响。方法 采用³H-TdR掺入法测定淋巴细胞增殖,乳酸脱氢酶法(LDH)测定NK细胞活性,L929细胞杀伤法测定肿瘤坏死因子(TNF),MTT法测定白细胞介素-2(IL-2)活性。结果 戴氏虫草菌丝体胞外水溶性多糖不仅能够促进人扁桃体及小鼠脾活化T细胞的增殖,而且能恢复环磷酰胺抑制免疫小鼠脾活化T细胞的增殖。它能增高小鼠脾细胞NK活性及分泌IL-2,也能增进人扁桃体活化T细胞分泌TNF β。结论 戴氏虫草菌丝体胞外水溶性多糖是具有增强细胞免疫功能的生物免疫反应调节剂。     

鸡血藤煎剂对小鼠骨髓细胞增殖的影响

目的 :探讨鸡血藤调控小鼠骨髓细胞增殖及其“补血”作用的生物学机理。方法 :采用正常小鼠和贫血小鼠模型 ,以造血生长因子生物活性检测技术测定鸡血藤对骨髓细胞增殖的影响。结果 :鸡血藤对正常小鼠和贫血小鼠骨髓细胞增殖有显著促进作用 ;经体内鸡血藤诱导制备的巨噬细胞、脾细胞、肺和骨骼肌体外条件培养液能明显促进正常小鼠和贫血小鼠骨髓细胞增殖。结论 :鸡血藤促进造血的机理可能与直接或间接刺激造血微环境的基质细胞分泌较高活性的造血生长因子有关。     

鹅不食草挥发油抗变态反应血清药理学研究

目的:用血清药理学方法研究鹅不食草挥发油对抗原诱导RBL-2H3细胞释放组胺、β-氨基已糖苷酶,对刀豆蛋白(Con-A)诱导小鼠脾细胞增殖、诱导脾淋巴细胞分泌IL-4的影响,探讨其抗变态反应的可能机制。方法:ELISA法测定鹅不食草挥发油含药血清对抗原诱导RBL-2H3释放组胺、β-氨基已糖苷酶的影响;MTT法测定鹅不食草挥发油含药血清对Con-A诱导脾细胞增殖的影响,ELISA法测定鹅不食草挥发油含药血清对Con-A诱导脾淋巴细胞分泌IL-4的影响。结果:与空白血清相比,鹅不食草挥发油0.5～2h含药血清(9g/kg生药量,10%含药血清)均具有抑制抗原诱导RBL-2H3释放组胺、β-氨基已糖苷酶,抑制Con-A诱导小鼠脾细胞增殖、分泌IL-4的作用。结论:鹅不食草挥发油抗变态反应作用机制可能与抑制炎症介质释放,抑制细胞免疫功能有关。     

重组葡萄球菌肠毒素B蛋白表达、纯化及生物活性的实验研究

 目的建立重组葡萄球菌肠毒素B(staphylococcal enterotoxin B,SEB)表达、纯化方法,了解rSEB细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤生长的作用。方法采用IPTG(1.0mmol·L^-1)诱导SEB原核表达系统pET32a-SEB-E.coliBL21DE3表达rSEB,10%SDS-PAGE检测其产量,Ni-NTA亲和色谱法纯化rSEB。采用Vero细胞测定rSEB的细胞毒性作用,并计算TCIC₅₀值。通过MTT法分别检测不同浓度rSEB体外促淋巴细胞增殖作用,以及对肿瘤细胞株HepG2、HeLa的生长抑制作用。结果所构建的SEB原核表达系统中,rSEB表达量约为细菌总蛋白的40%,主要以包涵体形式存在。纯化的rSEB对Vero细胞的TCIC₅₀为3.02μg。5.0～20.0mg·L^-1的rSEB对小鼠脾细胞和人PBMC均有明显的促增殖作用(P<0.05)。5.0～20.0mg·L^-1rSEB作用的人PBMC上清均能有效地抑制HepG2细胞和HeLa细胞生长(P<0.05)。结论建立了SEB高效表达、纯化方法,获得rSEB蛋白。所建立的细胞毒性、促淋巴细胞增殖和抑制肿瘤细胞生长作用的检测方法,为后续进一步分析SEB分子中相关活性位点及其减毒SEB突变体的筛选奠定了基础。     

二至丸有效部位群促进T淋巴细胞免疫活性的实验研究

目的考察二至丸有效部位群(女贞子总皂苷、女贞子多糖、墨旱莲总黄酮)促进小鼠T淋巴细胞免疫活性作用的机制。方法环磷酰胺致小鼠免疫力低下,灌胃给药,制备含药血清、细胞悬液和脾总RNA,中性红法测定腹腔巨噬细胞的吞噬能力,MTT法测定脾淋巴细胞的增殖能力,胸腺细胞增殖法和ELISA法测定腹腔巨噬细胞分泌IL-1的水平、脾淋巴细胞分泌IL-2、IL-12的水平,RT-PCR法检测IL-1、IL-2和IL-12 mRNA的表达。结果免疫力低下小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬能力、脾淋巴细胞的增殖能力,以及IL-1、IL-2和IL-12的水平,均较正常小鼠明显下降,三种细胞因子的表达也受到抑制,经该方治疗后,上述检测指标均有不同程度的提高。结论该方对免疫失衡机体的保护作用与其改善T淋巴细胞因子的活性水平及其mRNA的表达水平有关。     

十全大补汤免疫调节作用的实验研究

目的探讨十全大补汤对淋巴细胞活化,增殖及其分泌白细胞介素-2(IL-2)的影响。方法测定ConA刺激的小鼠脾淋巴细胞3H-TdR掺入水平,及以ConA活化的小鼠淋巴细胞作为反应细胞,测定脾条件培养液(SCM)中IL-2活性。结果该方剂能显著促进小鼠脾淋巴细胞3H-TdR的掺入(P<0.001),显著促进大鼠混合脾淋巴细胞分泌IL-2(P均<0.001),显著促进小鼠和大鼠脾淋巴细胞分泌IL-2(P<0.025)。结果十全大补汤有增强机体细胞免疫功能的作用。     

蝉翼藤对小鼠脾细胞体外增殖和淋巴因子分泌水平的影响

目的探讨蝉翼藤醇提取物对小鼠淋巴细胞体外增殖和分泌白细胞介素-2(IL-2)与肿瘤坏死因子β(TNF-β)的影响。方法向小鼠脾细胞加入刀豆蛋白(ConA)和蝉翼藤醇提取物进行培养,以MTT法检测淋巴细胞增殖反应,用ELISA法测定IL-2和TNF-β分泌水平。结果蝉翼藤醇提取物能增强ConA诱导的小鼠脾细胞的体外增殖和分泌IL-2和TNF-β的水平。结论蝉翼藤醇提取物对小鼠淋巴细胞活性有增强作用。     

白及对小鼠骨髓细胞增殖和白细胞介素-2产生的影响

目的观察白及对小鼠骨髓的造血功能和白细胞介素-2(IL-2)产生的影响。方法用100%白及浸出液对小鼠连续灌胃10 d,1次/d,MTT法检测灌胃前后小鼠骨髓细胞以及IL-2水平的不同。结果与生理盐水对照组相比,白及组以上两项免疫学指标均明显增强,组间比较具有显著性差异(P<0.05)。结论白及可促进小鼠骨髓细胞增殖以及IL-2的分泌。     

五种中药对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用

目的:观察单味中药黄芪、丹参、淫羊藿及复方右归饮药物血清和煎剂以及雪莲花药物血清及其醇提液对体外培养的大鼠骨髓间充质干细胞增殖活性的作用。方法:雪莲花乙醇浸泡后定容,其他单味和复方中药水煎定容,高压灭菌。按10倍于任用剂量进行SD大鼠灌胃,心脏采血,制备血清。取大鼠股骨和肱骨,分离骨髓间充质干细胞,常规培养传代3次后,加入含药血清、煎剂及雪莲花醇提液。药物血清分为15%1、0%5、%和1%浓度,其煎剂及雪莲花醇提液浓度分为10-2、10-3、10-4、10-5,作用3天后用MTT法测定细胞活力。结果:雪莲花含药血清及其醇提液在4个浓度组均显示促进细胞增殖。结论:雪莲花具有促进大鼠骨髓间充质干细胞体外培养增殖活性的作用。     

基于3D微流控芯片分析鸡血藤总鞣质对宫颈癌细胞HeLa的药理作用

目的:研究鸡血藤总鞣质的化学成分,并分析该有效部位对宫颈癌细胞HeLa的药效与作用机制,为鸡血藤抗宫颈癌提供实验依据。方法:运用UPLC-Q-TOF/MS对鸡血藤鞣质类化学成分进行定性分析。将不同质量浓度的鸡血藤总鞣质作用于宫颈癌细胞HeLa,通过3维(3D)微流控芯片筛选合适的给药浓度及时间。运用流式细胞仪测定鸡血藤总鞣质对宫颈癌细胞HeLa周期与凋亡的影响,分别应用Flow Jo v10. 0. 7及ModFit LT 3. 2软件进行分析。采用酶联免疫吸附测定(ELISA)测定经鸡血藤总鞣质作用后,宫颈癌细胞HeLa上清液中血管内皮生长因子-A(VEGF-A)与半胱天冬酶-3(Caspase-3)因子的含量变化。结果:鉴定并推断了鸡血藤总鞣质中15种成分。最终确定鸡血藤总鞣质低、中、高给药质量浓度分别为0. 5,1. 0,2. 0 g·L-1,36 h为最佳给药时间。经鸡血藤总鞣质作用后宫颈癌细胞HeLa早凋与晚凋比例明显增加,宫颈癌细胞HeLa DNA合成前期(G0/G1期)明显增加,DNA合成期(S期)与DNA合成后期(G2/M期)减小。经鸡血藤总鞣质作用后,宫颈癌细胞HeLa上清液中VEGF-A因子显著降低,Caspase-3因子显著增加。结论:鸡血藤中含有丰富的鞣质类成分,此类成分对宫颈癌细胞HeLa有明显的抑制其增殖并促进其凋亡的作用,为该有效部位的后续研究与开发提供了实验依据。     

强肌健力口服液含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞体外增殖的影响

目的观察强肌健力口服液含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）体外增殖的影响。方法使用密度梯度离心法分离大鼠MSCs，5-溴脱氧嘧啶（Brdu）和CD44、CD54双重免疫组化鉴定，传3代后的MSCs分为强肌健力口服液含药血清组和空白血清对照组，四甲基偶氮唑蓝（MTT）法检测2组MSCs的生长情况。结果强肌健力口服液含药血清组以浓度依赖方式促进MSCs的增殖活力，与相应浓度的空白血清对照组比较差异有显著性意义（P〈0．05，P〈0．01）。结论补脾法（强肌健力口服液含药血清）能促进干细胞的生长。     

基于网络药理学和分子对接探讨鸡血藤治疗肺癌的分子作用机制

通过网络药理学和分子对接方法探讨鸡血藤治疗非小细胞肺癌的分子机制研究.以中药鸡血藤Spatholobi Caulis为对象,通过在中药药理学系统分析平台(TCMSP)数据库中获得鸡血藤中活性成分和相应潜在的药物靶点,利用GeneCards数据库收集癌症相关基因,借助Cytoscape软件构建鸡血藤活性成分-作用靶点-通...     

淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对骨髓基质细胞增殖及成骨能力的影响

目的:探讨补肾药有效成分淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ对实验犬骨髓基质细胞(BMSCs)增殖及其成骨能力的影响。方法:抽取犬BMSCs,诱导培养、传至第三代时于培养液中添加淫羊藿苷或黄芪苷Ⅰ使两种药物的终浓度为50 ng/m l。设BMP-2阳性对照和空白对照组,分别于第1至第8天每天测细胞的MTT值,绘制BMSCs生长曲线、观察其增殖情况;于第1、3、6、10、14天检测BMSCs的ALP和OD值,绘制该OD值变化曲线判断ALP的活性。结果:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ预处理后BMSCs的MTT值从第1天至第7天均高于空白对照组;BMSCs分泌ALP的OD值也均高于空白对照组,二者差异有显著性(P<0.05)。结论:淫羊藿苷和黄芪苷Ⅰ能促进BMSCs增殖、促进BMSCs合成ALP从而增强其成骨能力。     

内异消癥汤含药血清对子宫内膜异位症在位和异位内膜间质细胞增殖及分泌Ang-2的影响

目的:观察内异消癥汤含药血清对子宫内膜异位症在位和异位内膜间质细胞增殖及分泌Ang-2的影响。方法:对在位和异位内膜间质细胞进行体外分离原代培养,免疫细胞化学法鉴定。制备大鼠含药血清,分为内异消癥汤组、米非司酮组、空白血清组,用MTT法检测含药血清对间质细胞的生长抑制率,并用Elisa法检测对间质细胞分泌的Ang-2水平。结果:体外原代细胞培养方法可培养出纯度较高的间质细胞,与空白血清组相比内异消癥汤含药血清可以抑制间质细胞的增殖(P0.01),同时可以显著减少Ang-2的分泌水平(P0.01)。结论:内异消癥汤含药血清可以抑制间质细胞的增殖,显著减少Ang-2的分泌水平。     

妇科千金片对急性盆腔炎大鼠子宫、卵巢TNF-α、IL-2mRNA转录水平的影响

目的观察妇科千金片(千斤拔、单面针、金樱根、穿心莲、功劳木、党参、鸡血藤、当归)对急性盆腔炎大鼠子宫、卵巢细胞因子TNF-α、IL-2 mRNA表达的影响,初步探讨该药抗炎免疫作用的分子机制。方法采用混合菌(大肠杆菌、解脲支原体和金黄色葡萄球菌)接种法建立急性盆腔炎大鼠模型。妇科千金片给药后取大鼠子宫、卵巢,提取总RNA,进行RT-PCR反应,通过光密度扫描进行半定量分析。结果与假手术组相比,模型组TNF-α、IL-2 mRNA表达均上升,差异有统计学意义(P<0.05)。与模型组比,妇科千金片治疗组TNF-α、IL-2 mRNA表达均下降(P<0.05)。结论 妇科千金片的抗炎免疫作用可能是通过降低TNF-α、IL-2 mRNA表达,减轻由细胞炎症因子介导的炎症反应来实现的。     

逍遥丸含药血清依赖雌激素受体促进鼠成骨细胞增殖作用的研究

目的：采用中药血清药理学的方法,制备逍遥丸含药血清（XCS）,体外培养鼠成骨细胞株UMR-106,观察XCS对成骨细胞增殖影响及其是否与雌激素受体相关,以便为开展更广泛的临床实验提供理论基础.方法：选择Wistar大鼠30只,以2.7g/（kg·d）剂量灌胃逍遥丸,连续3周,第22日取动物血离心,将XCS冻存备用;体外培养UMR-106细胞,将细胞分为空白组、空白血清组、妊马雌酮（conjugated estrogens）含药血清组、XCS（20％,10％,5％,2.5％,1.25％,0.625％）不同浓度组,MTT法检测细胞增殖率,同时观察雌激素受体拮抗剂（ICI 182780）与细胞共孵育后细胞增殖能力.结果：与空白血清组相比,妊马雌酮含药血清和XCS（20％,10％,5％,2.5％）对UMR-106细胞的增殖有明显促进作用（P＜0.05）,最大增殖率达到（10.67±2.34）％;但在ICI 182780干预下,妊马雌酮含药血清和各浓度XCS对细胞增殖率无明显影响.结论：XCS对UMR-106细胞的增殖有明显促进作用,此作用需依赖雌激素受体才能发挥.     

双黄升白颗粒剂升高白细胞作用机制的研究

目的:观察双黄升白颗粒(黄芪、黄精、女贞子、天花粉、骨碎补等)对白细胞减少症模型小鼠骨髓细胞增殖及粒单系集落刺激因子(GM-CSF)生成的影响,并探讨其作用机制。方法:Se-137放射源照射造成小鼠白细胞减少症动物模型,采用MTT比色法测定小鼠骨髓细胞增殖程度:采用双抗体夹心Elisa法测定小鼠血清中GM-CSF含量;采用SP免疫细胞化学方法测定培养的小鼠脾细胞胞浆中GM-CSF蛋白表达。结果:双黄升白颗粒能够促进模型小鼠骨髓细胞增殖,并能升高模型小鼠血清GM-CSF含量,促进小鼠脾细胞GM-CSF蛋白表达。结论:双黄升白颗粒能够促进白细胞减少症模型小鼠骨髓细胞增殖,升高其血清GM-CSF含量,并促进小鼠脾细胞GM-CSF蛋白表达,这可能是其具有升高白细胞作用的内在机制之一。