氟致人肝细胞DNA损伤与细胞凋亡关系的研究

目的 研究氟致人肝细胞DNA损伤与细胞凋亡之间的关系. 方法采用40、80、160μg/ml氟化钠对培养的人肝细胞进行染毒,12 h后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和流式细胞术(FCM)检测氟化物对人肝细胞DNA损伤和细胞凋亡情况. 结果各氟染毒组人肝细胞DNA损伤程度明显高于对照组,并且随着染氟剂量的增高而增大;中、高剂量氟组人肝细胞凋亡百分率均明显高于对照组.同时,高剂量氟组与低剂量氟组之间细胞DNA损伤程度和凋亡率的差异亦有统计学意义. 结论氟可导致人肝细胞DNA损伤,诱导细胞凋亡,一定浓度范围内的氟所导致的DNA损伤与细胞凋亡之间呈现明显的正相关关系.     

肝细胞凋亡研究进展

细胞凋亡是当今生命科学中的前沿问题，本文从肝细胞凋亡度总结了目前有关引起细胞凋亡的分子生物学和生化机制，提供了有关细胞凋亡在肝脏中的生物学和病理学研究动态。     

Survivin和肝细胞凋亡

Survivin是一种16.5kDa细胞内蛋白，属于抗细胞凋亡蛋白家族。在胚胎和各种肿瘤中均表达，但近来发现在正常成人组织中也有表达，通过阻断细胞凋亡的发生过程，在促进肿瘤的发生发展过程中发挥着重要的作用：然而，在正常肝组织Survivin的表达作用不明，本文就Survivin在肝细胞凋亡和增生中的作用进行综述。     

氟对人胚肝细胞DNA损伤及凋亡的影响

目的探讨氟对人胚肝细胞(L-02细胞)DNA损伤及诱导凋亡的作用.方法采用40,80,160μg/ml氟化钠对培养的人胚肝细胞进行染毒,24 h后用单细胞凝胶电泳技术(SCGE)和流式细胞术(FCM)检测氟化物对人胚肝细胞DNA损伤和细胞凋亡情况.结果氟组人胚肝细胞DNA损伤率明显高于对照组,Ridit值分别为0.582,0.815,0.892;中、高剂量氟组人胚肝细胞凋亡百分率(9.293±1.171),(11.727±1.196)均明显高于对照组(5.343±1.620).同时,高剂量氟组与低剂量氟组之间细胞DNA损伤率和凋亡率的差异也存在显著性差异(P＜0.05).结论氟化物具有引起人胚肝细胞DNA损伤和细胞凋亡的作用,并呈现一定的剂量-效应关系.     

正己烷对实验大鼠肝细胞凋亡的影响

[目的]研究正己烷（n-Hexane）对染毒大鼠肝细胞凋亡的影响。[方法]将40只雄性SD大鼠随机分成5组，即阴性对照组、75、150、300mg／kg染毒组和阳性对照组（环磷酰胺），每组8只。经腹腔注射染毒4周旨，观察大鼠的一般状况和体重变化，用流式细胞仪检测肝细胞凋亡情况。[结果]大鼠体重随染毒时间而增加，阴性对照组增加最快；流武细胞仪检测结果显示，肝细胞凋亡率（AV^＋／PI^-）组间比较差异有统计学意义（P〈0．01），与染毒剂量作相关分析，相关系数为0．913，无明显的相关性（P〉0．05）。[结论]正己烷可引起肝细胞凋亡和坏死比例的增加。     

AO/EB染色法及流式细胞术检测DMF诱导人肝细胞凋亡

目的观察二甲基甲酰胺（DMF）诱导正常成人离体肝细胞凋亡情况。方法以50mmol/L、100mmol/L、150mmol/L和200mmol/L剂量DMF对正常成人离体肝细胞染毒。采用AO/EB双重染色法进行形态学观察;流式细胞术检测细胞凋亡率变化。结果AO/EB染色可见：活细胞核染色质着绿色,死亡细胞核染色质着橘红色,晚期凋亡细胞核染色质为橘红色并呈固缩状或圆珠状,早期凋亡细胞核染色质着绿色呈固缩状或圆珠状。染毒组早期凋亡细胞多于阴性对照组,随剂量增高,晚期凋亡细胞和死亡细胞也增多。不同剂量组间染毒24小时后,流式细胞术散点图可见,随染毒剂量增加,活细胞率逐渐下降,以200mmol/L剂量组的活细胞率最低。经单因素方差分析,空白对照组和各剂量组间早期凋亡细胞占细胞总数的百分率差异有统计学意义（F=8.299,P〈0.01）,随染毒剂量增高,早期凋亡细胞率增加。结论一定浓度的DMF能诱导正常成人离体肝细胞发生凋亡,其早期凋亡率有随DMF浓度的增高而增高的趋势。     

饮水氯化消毒副产物MX对人胚肝细胞(L-02)的DNA损伤及凋亡作用

目的　研究饮水氯化消毒副产物 3 氯 4 二氯甲基 5 羟基 2 (5氢 ) 呋喃酮 (MX)致人胚肝细胞 (L 0 2 )DNA损伤及凋亡作用。方法　以L 0 2为靶细胞 ,采用单细胞凝胶电泳技术 (SCGE)和流式细胞术 (FCM)分别检测MX致L 0 2细胞DNA损伤及凋亡作用。结果　随着MX浓度的增加 ,L 0 2细胞DNA链断裂逐渐增加 ,且 10 0和 30 0 μmol L剂量组与溶剂对照组相比具有统计学显著性差异 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ;MX各剂量组均引起L 0 2细胞凋亡率明显增加 ,与溶剂对照组相比具有统计学显著性差异 (P <0 0 0 1)。结论　饮水氯化消毒副产物MX可致L 0 2细胞DNA单链断裂和凋亡     

60Co γ射线诱发人正常肝细胞HL-7702 HAVCR2和MXR7基因表达变化研究

目的 探讨电离辐射诱导人正常肝细胞HL-7702甲型肝炎病毒受体2(HAVCR2)和MXR7基因的表达变化,为寻找辐射致肝脏损伤早期诊断标志物提供实验依据.方法 将对数生长期的人正常肝细胞HL-7702分为10组,利用中国辐射防护研究院钴-60(60Co)照射装置对各组肝细胞照射,吸收剂量率为1.29 Gy/min,吸收剂量分别为0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0 Gy,利用实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)技术检测肝细胞HL-7702 HAVCR2和MXR7基因的变化,分析剂量-反应关系.结果 HAVCR2基因表达在照射后4、24 h总体上调;其中,0.2～0.8 Gy剂量组在照射后24 h基因相对表达量与照射剂量具有很好的剂量-反应关系,满足回归方程:y=0.14x2-0.48x+ 1.34;1.0～3.0Gy剂量组在照射后24 h,基因相对表达量与照射剂量呈现很好的剂量-反应关系,满足回归方程:y=0.44x+0.56.MXR7基因表达在照射后4、24 h较对照组显示出明显差异;其中,0.2～0.8 Gy剂量组MXR7基因表达在照射后4h与对照组相比总体上调,但随照射剂量增大,上调幅度降低;照射后24h,其基因表达未见明显规律;1.0～5.0 Gy剂量组MXR7基因表达在照射后24 h整体上调,且基因的表达与照射剂量呈现一定的剂量相关性,满足方程为y=0.57x+0.43.结论 电离辐射可以诱导人正常肝细胞HL-7702 HAVCR2和MXR7基因的差异表达,且基因表达与照射剂量存在一定的剂量相关性.     

纳米银在HepG2和L02细胞中的生物分布及凋亡作用研究

目的探讨纳米银在人肝癌(Hep G2)细胞株及人正常肝(L02)细胞株内的生物分布及引起凋亡作用差异的可能机制。方法将HepG2细胞、L02细胞分别暴露于终浓度为0(对照)、20、40、80、160μg/ml含纳米银的细胞培养液中24、48 h。采用透射电镜(TEM)观察细胞超微结构及颗粒分布;采用流式细胞术检测细胞线粒体膜电位下降细胞比例和活性氧(ROS)水平的变化。结果染毒24 h时,HepG2和L02细胞的细胞膜受损,在膜周围可见黑色颗粒;染毒48 h时,在HepG2细胞的线粒体及L02细胞的溶酶体和内吞小泡中发现黑色颗粒。与对照组相比,20~160μg/ml纳米银暴露Hep G2细胞24、48 h以及40、80、160μg/ml纳米银暴露L02细胞24 h及80、160μg/ml纳米银暴露L02细胞48 h时的线粒体膜电位下降细胞比例均较高,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);且随着纳米银暴露浓度的升高暴露时间的延长,HepG2细胞和L02细胞的线粒体膜电位下降细胞比例均呈上升趋势。与对照组相比,20~160μg/ml纳米银暴露HepG2细胞24、48 h的ROS水平上升明显,差异有统计学意义(P0.01);且随着纳米银暴露浓度的升高暴露时间的延长,HepG2细胞ROS水平呈上升趋势;各剂量纳米银暴露L02细胞中ROS水平无明显变化。结论纳米银在HepG2和L02细胞中的生物分布不同对这两种细胞的凋亡造成了不同的影响。     

肝细胞凋亡与病毒感染

本文对病毒感染后肝细胞凋亡现象及其免疫学诱导机制、基因调控机制等进行了综述,从一个新的角度阐述了病毒性肝炎及肝细胞癌的发病机理。     

电离辐射诱发小鼠脾细胞DNA链断裂及修复

目的通过观察γ射线照射后IRM-2辐射抗性小鼠DNA链的断裂及修复,探讨IRM-2小鼠辐射抗性产生的可能机理。方法采用脉冲场凝胶电泳法,测定不同剂量γ射线诱发IRM-2小鼠及其亲本ICR/JCL和615小鼠脾细胞DNA单、双链断裂及照射后不同时间DNA链断裂的修复动力学。结果对照组IRM-2小鼠本底DNA损伤较低,即ssb和dsb的数目低于未照射的亲本ICR和615小鼠(P<0.01)。不同剂量(1、2、4和8Gy)照射后,IRM-2小鼠ssb和dsb的数量均明显低于经相同剂量照射的亲本ICR和615小鼠(P<0.05和P<0.01)。在较低剂量2Gy时,IRM-2小鼠与亲本小鼠相比,dsb和ssb修复无统计学差异;当分别接受4、8Gy大剂量照射后,IRM-2小鼠表现出较高的修复效率,即IRM-2小鼠0.5h和1hdsb、ssb修复速率比亲本小鼠快(P<0.05和P<0.01),而且修复后剩余的损伤远低于亲本小鼠。结论电离辐射后IRM-2小鼠DNA链断裂量较低,DNA链断裂的修复速率比亲本小鼠快,因此能及时快速地抵抗辐射造成的损伤,具有较强的辐射抗性。     

富勒烯对人胚肝细胞L-02的损伤作用

目的 探讨富勒烯(C60)对人胚肝细胞(L-02)的毒性作用及其可能的作用机制.方法 将L-02细胞液分别暴露于0、1.25、2.5、5、10、20、40μg/ml的C60悬浊液中染毒24 h后,检测细胞内LDH、GSH含量和SOD活力,并比较不加和加入抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)条件下的细胞存活率.结果 与空白对照组相比,1.25、2.5、5、10、20、40μg/ml C60单独染毒组细胞存活率较低,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01):且呈现明显的剂量-效应关系.加人抗氧化剂NAC后,1.25、2.5、5、10μg/ml联合染毒组细胞存活率有所上升,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).与空白对照组相比,1.25、5、10、20、40μg/ml C60染毒组LDH活力较高,5、20、40μg/ml C60染毒组SOD活力和10、20、40μg/ml C60染毒组GSH含量降低,差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 氧化损伤可能是C60对L-02细胞毒性作用的机制之一.     

枸杞多糖对辐射雄性大鼠睾丸细胞凋亡的影响（英文）

目的观察枸杞多糖(Lycium barbarum polysaccharide,LBP)对低剂量电离辐射所致雄性大鼠睾丸细胞凋亡的影响。方法 Wistar雄性大鼠84只,随机分为空白对照组、辐射组对照组1、辐射对照组2、辐射对照组3、LBP+辐射组1、LBP+辐射组2、LBP+辐射组3共7组,每组12只,LBP组在每次辐射前给与10 mg/kg LBP干预、其余各组以等量生理盐水灌胃;除空白对照组外,各组进行60Coγ射线局部照射(周一至周五),连续4w,总剂量2.3 Gy/capita。分别于停止照射后1d、7d、14d处死大鼠,。检测脏器系数、精子计数和活力,用RT-PCR,Weston-blot法检测P53和HSP70的m RNA的相对表达量以及蛋白表达。结果 LBP+辐射组1,2,3的睾丸系数较各自辐射对照组增加,以LBP+辐射组3最为明显(P<0.01),但对附性腺器官系数没有明显影响;与辐射对照组1,2,3相比,LBP+辐射组1,2,3的大鼠各组的精子计数和活力明显提高(P<0.01),RT-PCR,Weston-blot法显示LBP+辐射组3的P53m RNA的相对表达量和蛋白表达较辐射对照组3明显降低,而HSP70m RNA的相对表达量和蛋白表达则明显升高(P<0.01);结论 LBP对低剂量电离辐射造成大鼠生殖系统的损伤有一定保护和修复作用。该作用可能是通过减少睾丸细胞的凋亡途径而实现的。     

氟化钠诱导人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞凋亡及其机制研究

目的 研究氟化钠(NaF)对人神经母细胞瘤SH-SY5Y细胞的损伤及致凋亡作用,并初步探讨NaF致神经毒性的作用机制.方法 取对数生长期的SH-SY5Y细胞(1×107/ml),先加入0(对照)、20、40、80mg/L的NaF溶液对SH-SYSY细胞染毒24h;再选择40 mg/L的NaF溶液与380.40 mg/L的乙二醇双(2-氨基乙醚)四乙酸(EGTA)溶液或38.23 mg/L的胞内钙离子螯合剂(BAPTA-AM)溶液(提前30 min加入)联合染毒24h.采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测细胞活性,采用流式细胞仪检测细胞凋亡率和胞内钙离子([Ca2+]i)水平,并用激光共聚焦(laser scanning confocal microscopy,LSCM)技术,从单个细胞水平检测NaF对胞内游离Ca2+瞬间动态变化的影响.结果 与对照组比较,40、80 mg/L NaF染毒组SH-SY5Y细胞的存活率较低,凋亡率较高,差异均有统计学意义(P＜0.05);各NaF染毒组SH-SY5Y细胞的[Ca2+],水平均高于对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).且随着NaF染毒浓度的升高,SH-SY5Y 细胞的存活率呈下降趋势,凋亡率和[Ca2+]i水平均呈上升趋势.LSCM连续扫描显示,40和80 mg/L NaF染毒组SHSY5Y细胞[Ca2+]i的FI值达到峰值的时间分别为6 000～7 000 s和1 000-2 000 s,20 mg/L NaF染毒组未见明显的峰值;且NaF的浓度越高,[Ca2+]i达到峰值的时间越短.析因分析表明,胞内钙离子螯合剂(BAPTA-AM)与NaF对SH-SY5Y细胞凋亡和[Ca2+]i升高存在交互作用(F值分别为10.69、366.14,均P＜0.05),BAPTA-AM可拮抗NaF对SH-SY5Y细胞的损伤作用;胞外钙离子螯合剂乙二醇双四乙酸(EGTA)与NaF对SH-SY5Y细胞凋亡和[Ca2+]i升高无交互作用(F值分别为0.02、0.03,均P＞0.05).结论 NaF对SH-SY5Y细胞的升钙作用可能参与了NaF的致细胞损伤和诱导凋亡作用,[Ca2+]i的升高可能与胞内钙库的释放有关.     

浓缩铀诱发细胞凋亡的形态及基因调控

目的　研究浓缩铀诱发人白血病HL 6 0细胞凋亡的电镜形态特征 ,以及对相关基因bcl 2和bax的调控作用。方法　探讨受浓缩铀内照射不同时间 ,诱发HL 6 0细胞凋亡的电镜形态 ;运用免疫组织化学技术探讨浓缩铀对HL 6 0细胞bcl 2和bax蛋白的表达 ,运用RNA分子杂交技术探讨浓缩铀对HL 6 0细胞bcl 2mRNA的转录水平表达的影响。结果　人白血病HL 6 0细胞在浓缩铀辐照作用下 ,可呈现核断裂和核染质边聚。对照的HL 6 0细胞中bcl 2蛋白呈高度表达 ,为 (88± 7) % ,而受浓缩铀辐照下 ,可下调至(6 1± 5 ) %。bax在对照细胞中表达很低 ,在浓缩铀作用下 ,未见明显改变。经浓缩铀辐照后 ,可使HL 6 0细胞中的bcl 2mRNA表达呈明显下调。结论　浓缩铀内照射可诱发人白血病HL 6 0细胞凋亡发生 ,且其诱发HL 6 0细胞的凋亡作用与其下调凋亡相关基因bcl 2的表达相关联     

双酚A对人胚肝细胞凋亡的影响

[目的]研究双酚A(BPA)对人胚肝L-02细胞的凋亡的影响。[方法]以MTT来分析不同浓度BPA对人胚肝L-02细胞的细胞存活率的影响;用流式细胞术分析不同浓度BPA对细胞凋亡的影响;通过RT-PCR分析BPA引起的生长抑制、DNA损伤基因GADD45、GADD153、GADD34表达水平的变化。[结果]BPA处理后,L-02细胞的生存率随着BPA浓度的增加而下降,在≥50μmol/L,细胞的存活率显著降低(P<0.01)。随着BPA浓度升高,细胞凋亡率增加,≥50μmol/L可显著升高L-02细胞的凋亡率(P<0.01)。生长抑制DNA损伤基因GADD45、GADD153.GADD34表达水平随着BPA浓度增加表达量也增加,100μmol/LBPA组显著高于正常对照组,但在100μmol/L,BPA+VitC组三种GADD基因表达量均稍降低。[结论]BPA对L-02细胞具有细胞毒性作用,可导致细胞凋亡率升高,与细胞生长调控和DNA损伤相关的GADD45、GADD153、GADD34基因表达升高,VitC可减缓BPA对DNA的损伤作用。     

氢醌诱导L-02肝细胞凋亡的研究

目的探讨氢醌(HQ)对体外培养L-02肝细胞凋亡(apoptosis)的影响和HQ毒性作用的分子机制。方法采用噻唑蓝(MTT)比色法测定不同浓度HQ(0,5,10,20,40,80,160和320μmol/L)作用24 h后L-02肝细胞的相对存活率;采用DNA琼脂糖凝胶电泳和流式细胞术检测HQ染毒后的细胞凋亡状况。结果HQ在0~80μmol/L的染毒剂量范围内,对L-02肝细胞的存活率没有明显的影响(P>0.05),当HQ染毒剂量超过160μmol/L时,L-02肝细胞的存活率则明显地下降(P<0.01)。10,20,40,80,160和320μmol/L组L-02肝细胞DNA琼脂糖凝胶电泳出现凋亡特征性梯状条带,并且随着HQ染毒剂量增加而渐趋明显。流式细胞术检测显示,HQ各染毒剂量组(5,10,20,40,80,160和320μmol/L)作用24 h后均可引起L-02肝细胞的调亡,并呈现出一定的剂量—反应关系;此外,还可出现明显的亚二倍体峰。结论HQ在体外能够诱导L-02肝细胞发生凋亡。     

电离辐射对人类健康的影响

随着国民经济的飞迅发展,人民生活水平的不断改善以及国民健康水平极大提高的同时,越来越多的人们充分认识到:健康才是人类的最大财富。本文阐述了影响人类健康因素之一的电离辐射对健康的影响:人类生活在地球上,除接受宇宙辐射,陆地辐射,食物链辐射及室内辐射外,还有核辐射放射事故以及医疗照射。因此,本文强调为了避免电离辐射事故的发生,各行各业必须依据国家法规条例,加强管理,加强宣传,加强培训。这是放射医学与防护工作者义不容辞的最大责任。     

双靶点沉默hTERT和Bi-1基因诱导人鼻咽癌细胞凋亡的初步研究

目的利用RNA干扰阻抑hTERT和Bi-1基因的表达并诱导人鼻咽癌细胞的凋亡。方法收集CNE-2Z细胞,设未处理组、Lip组、pcDNA3.1(+)/Lip对照组、TR/Lip组、TRs/Lip组、Bi-1/Lip组、Bi-1s/Lip组、TR-Bi-1/Lip组和TRsBi-1s/Lip组,采用MTT法观察质粒载体及转染试剂对CNE-2Z细胞生长增殖的影响;采用流式细胞术检测CNE-2Z细胞凋亡,Hoechst 33258染色,采用荧光显微镜观察鼻咽癌细胞形态学的变化。结果 TR、Bi-1和TR-Bi-1组的CNE-2Z细胞增殖能力显著降低,且TR-Bi-1组的生长增殖能力最低(P<0.05);凋亡细胞有所增加。转染TR、Bi-1和TR-Bi-1重组质粒48 h后,荧光显微镜下可见部分鼻咽癌细胞出现典型的凋亡形态学变化;而pcDNA3.1(+)、TRs、TRs-Bi-1s、Lip和未处理组则无明显变化。结论双基因表达载体可以同时特异、有效地沉默hTERT和Bi-1两种基因,与沉默单基因的效果相比较,双基因沉默组鼻咽癌CNE-2Z细胞的增殖率受到明显抑制。