扶正透毒祛毒复方对髓系微小残留白血病患者CD34+细胞源树突状细胞的影响

目的研究扶正透毒祛毒复方加味青蒿鳖甲汤对髓系微小残留白血病(MRD-L)患者骨髓CD34+细胞源树突状细胞(DC)的影响。方法用Ficoll离心法分离急性髓系MRD-L患者骨髓单个核细胞(BMNC),采用免疫磁珠分选出CD 34+细胞,并培养扩增,用不同浓度中药含药血清联合细胞因子进行体外诱导培养DC,倒置显微镜下观察DC的形态学特征,流式细胞术检测DC表面分子CD 83、CD 80、CD 86、CD 1a、HLA-DR的表达。诱导转化成熟的DC分别激发异体、自体T细胞,MTT法检测激发后的T细胞在不同效靶比时对人白血病细胞株K562的杀伤作用。结果各中药含药血清联合细胞因子培养髓系MRD-L患者CD 34+9 d后均能促进CD 34+分化为形态特征典型的DC,各中药联合细胞因子组、细胞因子组均明显上调CD 83、CD 80、CD 86、HLA-DR的表达,与胎牛血清及空白兔血清对照组比较有统计意义(P<0.01),中剂量及低剂量含药血清组能促进CD 1a的表达提高,与高剂量组、细胞因子组比较有差异(P<0.01),其余各组无明显差异。DC激发T细胞杀伤K562细胞,各中药联合细胞因子组的杀伤率均高于细胞因子组、胎牛血清组和空白兔血清组,其中中剂量和低剂量组又明显优于(P<0.01)或优于(P<0.05)细胞因子组、胎牛血清组和空白兔血清组。T细胞的杀伤作用随效靶比的增高而增强,正常T细胞与患者T细胞对K562细胞的杀伤作用无明显差异(P>0.05)。结论加味青蒿鳖甲汤能促进髓系MRD-L患者CD 34+细胞向DC转化。     

抗原致敏树突细胞激活细胞毒性T淋巴细胞的体外抗肿瘤作用

目的 利用新型诱导剂钙离子载体(CI)A23187联合重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)体外诱导人外周血单核细胞(PBMC)生成树突细胞(DC),观察DC刺激细胞毒性T细胞(CTL)对人白血病细胞K562细胞产生的特异性杀伤作用.方法 采用密度梯度离心法及黏附法分离出PBMC,分2组培养:传统方法组,加人rhGM-CSF+重组人白细胞介素4+重组人肿瘤坏死因子-α;新型诱导剂组,加入rhGM-CSF+CI A23187.培养开始前,予K562细胞冻融抗原致敏,培养96 h后收集负载抗原的DC.光镜观察细胞形态的变化;流式细胞仪检测DC细胞的表面标志;四甲基偶氮唑盐比色法检测各组DC刺激同种异体外周血T细胞增殖的能力、DC对K562细胞的抑制作用和DC激活的CTL细胞对K562细胞的杀伤作用.结果 与传统方法相比,A23187联合rhGM-CSF 诱导培养的DC具有更加典型的树突形态;DC 表面分子CD83、CD1a、CD86、CD40表达(45.2%±1.8%、31.5%±3.9%、40.1%±7.8%、36.4%±6.3%)较传统方法组(16.9%±1.3%、20.4%±3.4%、26.5%±2.2%、22.3%±3.0%)明显高(均P<0.05),且CD14表达(5.7%±0.8%比19.0%±1.6%)明显低(P<0.05);负载K562细胞冻融抗原后的DC具有明显刺激同种异体T细胞增殖作用;对K562细胞有明显抑制作用,效靶比为1:1及10:1时,抑瘤率分别为(25.3±3.8)%比(15.6±2.4)%、(35.6±5.2)%比(22.9±3.2)%(均P<0.05);刺激的CTL对K562细胞有明显的杀伤作用,效靶比为10:1及40:1时,杀瘤率分别为(44.3±6.2)%比(29.9±2.8)%、(61.0±5.2)%比(43.1±4.8)%(均P<0.05).结论 新型诱导剂CI A23187联合rhGM-CSF能更有效地诱导PBMC生成强效成熟DC,K562细胞冻融抗原冲击该DC激活CTL能够获得较强的杀伤K562细胞的能力.     

哮喘患儿外周血树突状细胞共刺激分子表达研究

目的　探讨小儿哮喘发作时外周血树突状细胞 (DC)表面协同刺激分子CD4 0、CD80、CD86和HLA DR的表达 ,以及其激发同种异体T淋巴细胞和脐带血幼稚T淋巴细胞 (Na veTcells)的作用 ,为进一步研究小儿哮喘的发病机制及治疗提供新的思路。方法　以Thomas法分离、培养并诱导哮喘患儿和健康儿童外周血DC细胞 ,流式细胞仪 (fluorescentactivatedcellsorter,FACS)检测DC表面协同刺激分子CD4 0、CD80、CD86和HLA DR的表达 ,以及其激发同种异体T淋巴细胞和脐带血幼稚T淋巴细胞的作用。结果　哮喘患儿外周血DC表面CD86和HLA DR的表达较对照组明显升高 (t分别 =3 .3 0 4、9.4 81;P分别 <0 .0 1、0 .0 0 1) ,而CD4 0则显著降低 (t=5 .65 9,P <0 .0 0 1) ;其激发同种异体T淋巴细胞和脐带血幼稚T淋巴细胞的能力较对照组明显增强 (P <0 .0 1～ 0 .0 0 1)。结论　哮喘患儿可通过其DC表面差异表达CD4 0、CD86和HLA DR等协同刺激分子 ,从而使其激发T淋巴细胞的作用增强。所以DC在小儿哮喘发作时起重要作用。     

负载冻融抗原的DC诱导特异性CTL杀伤U937细胞的实验研究

目的　探讨树突状细胞 (DC)负载白血病细胞株U937冻融抗原 ,体外诱导细胞毒性T细胞 (CTL) ,使其对U937细胞产生特异性杀伤作用。方法　应用基因重组人白介素 4 (rhIL 4 )、基因重组人粒 /单细胞集落刺激因(rhGM CSF)联合培养体系自正常人骨髓单个核细胞诱导产生DC ,使其负载U937冻融抗原 ,致敏T淋巴细胞 ,产生CTL。观察负载U937冻融抗原的DC对所激发的T淋巴细胞表型及功能的影响及CTL对U937细胞的特异性杀伤活性。结果　负载U937冻融抗原后DC的CD1a表达率较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,CD86、CD11c、HLA DR表达也较培养前明显增高 (P <0 .0 1) ,而CD83、CD14与培养前相比无明显变化 (P >0 .0 5 )。且负载U937冻融抗原DC诱导的CTL中 ,CD3+ CD8+ T细胞比例较诱导前明显增高 (P <0 .0 1)。U937冻融抗原负载DC诱导CTL对U937细胞及K5 6 2细胞的杀伤率分别为 (6 6 .96± 6 .2 1) %和 (9.81± 4 .4 5 ) % ,两者有极显著性差异 (P <0 .0 0 1)。结论　经rhGM CSF、rhIL 4培养产生的DC为CD14 -CD1a+ 的DC ,能诱导CTL产生明显的特异性杀伤作用 ;负载U937冻融抗原DC诱导的CTL中的CD3+ CD8+ T细胞比例明显增高 ,提示CD8+ T细胞在抗肿瘤免疫中具有极其重要的作用。     

VEGF对白血病树突状细胞抗原提呈能力的影响

目的 探讨血管内皮生长因子(vascular endothelial cell growth factor,VEGF)对白血病源树突状细胞(dendritic cell,DC)抗原提呈能力的影响及其分子机制.方法 K562细胞经5 μmol/L VEGF反义寡核苷酸(AS-ODN)处理24 h,ELISA和免疫组化检测VEGF蛋白水平.以正常K562细胞诱生的白血病DC作为对照组,利用流式细胞术和混合淋巴细胞反应,观察AS-ODN处理的白血病DC的免疫表型及其刺激T细胞增殖的能力.采用荧光素酶检测系统和RT-PCR分析培养12 h时白血病DC内NF-κB转录活性和Flt-1 mRNA水平.结果 AS-ODN处理使K562细胞VEGF蛋白分泌量较K562细胞组显著下降(P＜0.05).与K562-DC比较,AS-ODN处理的免疫表型(CD40、CD86、CD83、HLA-DR)表达明显上调.在不同DC/T值(1:10～1:40)时,MLR实验中AS-K562-DC组刺激指数(SI)明显高于对照组(P＜0.05).此外,培养12 h时AS-K562-DC NF-κB转录活性较K562-DC明显增高(P＜0.05),而Flt-1 mRNA水平未见明显改变.结论 反义寡核苷酸可抑制白血病细胞VEGF表达,下调VEGF能够增强白血病DC免疫表型的表达,提高DC抗原提呈能力.     

DC-CIK与CIK体外抗肿瘤作用的实验研究

目的探讨树突状细胞（Dc）与细胞因子诱导的杀伤细胞（CIK）共培养后对白血病细胞株K562、淋巴瘤细胞株Raji、肺癌细胞株A549、胃癌细胞株BOG-803的杀伤作用。方法采集健康志愿者外周血50mL,用淋巴细胞分离液分离单个核细胞,分别用不同的细胞因子诱导,培养D0细胞与CIK细胞。然后将成熟的DC和CIK细胞混合培养,用流式细胞仪检测两组细胞中。D3＋CD56＋、CD3＋CD8＋T细胞的比例;用MTT法检测其对K562、P-ajj、A549、BCG-803细胞株的杀伤活性。结果DC-CIK组较CIK组具有较高的CD3＋CD56＋、CD3＋CD8＋T细胞比例（p〈0．05）;DC—GIK、GIK对K562、Pajj、A549、BCG-803细胞株均具有较强的杀伤作用,且随着效靶比的增加,杀伤活性逐渐增加;DC—CIK的杀伤活性较CIK明显增高（P〈0．05）。结论DC—CIK共培养体外可增强对肿瘤细胞的杀伤作用,为肿瘤的临床治疗提供了理论和实验依据。     

急性髓细胞白血病树突状细胞诱导T细胞对自体白血病细胞毒性作用的研究

目的　研究急性髓细胞白血病 (AML)树突状细胞 (DC)诱导 T细胞对自体白血病的细胞毒性作用。方法　分离 AML 患者外周血单个核细胞 (MNC) ,在含有 GM- CSF、IL- 4、TNF- α等刺激因子的培养体系中培养7～ 14 d,通过形态学和免疫表型鉴定 DC。通过反复冻融的方法获取白血病抗原肽 ,分别以白血病抗原肽及白血病抗原肽 - HSP90复合物方式脉冲 DC,再将 DC与自体 T淋巴细胞共同孵育 ,以乳酸脱氢酶的方法检测经不同抗原方式激活的自体 T淋巴细胞对白血病细胞的杀伤效应。结果　急性白血病患者外周血 MNC中培养出 DC为 (6～11)× 10 4 / 10 6 MNC,经两种抗原方式激活的自体 T淋巴细胞对自体白血病细胞的杀伤活性分别为 (6 2 .0 7±8.2 9) %和 (35 .33± 9.0 4 ) % ;体外培养的 AML 患者外周血 MNC可诱导分化出大量 DC。结论　单纯白血病抗原肽与白血病抗原肽 - HSP90复合物方式脉冲的 DC均能够激活自体白血病特异性 T淋巴细胞 ,但后者具有更强的激活能力。     

肿瘤坏死因子—α预刺激培养成熟树突状细胞

目的 利用肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导树突状细胞(DC)成熟的作用原理培养成熟DC的新方法。方法Ficoll密度梯度离心分离健康人外周血获得单个核细胞，用含有10％胎牛血清的RPMI640培养基培养。TNF-α预刺激4h后加入粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(GM—CSF)及IL-4，48、96h再次同时加入上述3种细胞因子并继续培养，第8—10天收集细胞，记作T—DC。FCM检测FDC表型，用^3H-TdR检测同、异基因混合淋巴细胞反应(MLR)及抗原提呈功能；MTT法检测FDC诱导T细胞的杀伤活性。结果 T—DC表达CD83、CDla、CD54、CDlla、CD80、CD86、HLA—DR、CD83HLA—DR并能刺激T细胞增殖与MLR（同基因、异基因)反应；T—DC具有抗原提呈功能、可诱导特异性杀伤。结论 用TNF-α预刺激4h的方法并在含有GM—CSF、IL-4的完全培养基中培养人外周血单核细胞8d可获得成熟的DC。     

rhGM-CSF联合rhIL-4诱导慢性粒细胞白血病细胞来源的树突状细胞

目的 用rhGM-CSF联合rhIL－4将慢性粒细胞白血病（CML）原代细胞诱导成树突状细胞（DC），探索白血病免疫治疗的新途径。方法 分离初诊CML患者外周血单个核细胞（PBMNC），用rhGM-CSF联合rhIL－4共同培养7d；流式细胞仪（FACS）检测细胞因子诱导前后细胞表面HLA－DR、CD1a、CD80和D86的表达，电镜观察细胞形态。结果 经7d的诱导，HLA－DR、CD1a、CD80和CD86的表达明显上调；电镜观察到典型的DC 形态特征。结论 rhGM-CSF联合rhIL－4可成功将CML原代细胞诱导成CML－DC，可望用于CML的免疫治疗。     

扶正透毒祛毒复方对髓系MRD-L患者CD34~+细胞源DC诱导过程中IL-2、sIL-2R的影响

【目的】研究扶正透毒祛毒复方(加味青蒿鳖甲汤)中药含药血清对髓系微小残留白血病(minimal residual disease in leukemia,MRD-L)患者CD34+细胞源树突状细胞(DC)诱导培养的不同阶段血清中白细胞介素-2(IL-2)、可溶性白细胞介素-2受体(sIL-2R)的含量变化,探讨扶正透毒祛毒复方影响MRD-L患者CD34+细胞源DC诱导及生物学效应的机制。【方法】将急性髓系白血病缓解期(AML-CR)患者骨髓经Ficoll密度梯度离心获得骨髓单个核细胞(BMNC)后,用免疫磁珠阳性选择法提取CD34+细胞,培养扩增后用不同浓度中药含药血清与细胞因子进行体外培养诱导DC,培养过程中观察细胞的形态,流式细胞仪检测DC表面CD83、CD80、CD86、CD1a、人白细胞DR抗原(HLA-DR)的表达。在培养的第0天、第6天和第9天采用酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测、比较各组血清中IL-2、sIL-2R的含量。【结果】(1)各中药含药血清联合细胞因子组能促进CD34+细胞分化为形态特征典型的DC,并高表达CD83、CD80、CD86、HLA-DR等DC的表面标志,与胎牛血清及空白兔血清组比较差异有统计学意义(P0.01),中药中剂量及低剂量含药血清组能促进CD1a的表达提高,与中药高剂量组、细胞因子组比较差异有统计学意义(P0.01)。(2)IL-2含量:含药血清制成后(第0天),各中药含药血清组均高于空白兔血清组;各中药含药血清联合细胞因子组第9天、第6天均高于第0天,中药中剂量联合细胞因子组第9天显著高于第6天(P0.01),中药高剂量联合细胞因子组第9天高于第6天(P0.05);在同一时间内,各中药含药血清联合细胞因子组均高于空白兔血清组。(3)sIL-2R含量:含药血清制成后(第0天),各中药含药血清组均低于空白兔血清组;各中药含药血清联合细胞因子组第9天均显著低于第0天、第6天(P0.01),中药高剂量联合细胞因子组第6天低于第0天(P0.05),其余各组第6天与第0天比较差异无统计学意义(P0.05);在同一时间内,各中药含药血清联合细胞因子组均低于空白兔血清组(P0.05或P0.01)。【结论】扶正透毒祛毒复方能增加血清IL-2的含量和降低sIL-2R的水平,随着DC的不断成熟,其含量变化更加明显,可能对CD34+细胞向DC转化发挥了积极作用。     

树突状细胞对APL凋亡细胞溶解抗原交叉提呈诱导产生的抗白血病效应

目的:研究树突状细胞(DC)在体外对恶性肿瘤凋亡细胞溶解抗原交叉提呈的可能性及由此诱导产生的抗瘤效应.方法:用As2O3体外诱导急性早幼粒白血病(APL)细胞凋亡.取患者完全缓解期(CR)外周血单个核细胞(PBMNC)体外诱导DC,体外进行APL凋亡细胞溶解抗原(ALA)负载,并设APL细胞溶解抗原(CLA)负载对照,ALA-DC激自体T细胞,流式细胞术分析DC,T细胞免疫表型.51Cr释放法测定T细胞对APL细胞杀伤活性.结果:APL细胞经2 μmol/LAs2O3体外诱导5 d,凋亡率为(86±4)%;自体T细胞被DC激化前,CD2 ,CD3 ,CD8 T细胞百分率为(27±5)%;被ALA-DC激活后,CD2 ,CD3 ,CD8 T细胞百分率上升至(50±12)%,对照组下降至(22±4)%.细胞毒性实验示ALA-DC激活的自体T细胞对APL细胞的杀伤活性明显强于对照组(P＜0.01).结论:APL凋亡细胞溶解抗原能被DC交叉提呈,激活CD8 CTL细胞,其诱导的抗白血病效应强于非凋亡细胞溶解抗原致敏的DC.     

抗原致敏树突状细胞诱导CTL杀伤K562细胞体外实验研究

目的 研究体外负载K562细胞冻融抗原的树突状细胞（DC）诱导细胞毒性T淋巴细胞（CTL）的特异性杀伤作用。方法 联合应用细胞因子从外周血单个核细胞（PBMC）诱导培养出DC,在体外负载K562细胞冻融抗原。采用乳酸脱氢酶释放法,对比K562冻融抗原致敏DC组、未致敏DC组、淋巴细胞组、前列腺癌PC3冻融抗原致敏DC组分别激活的CTL对K562细胞的杀伤作用。结果 培养出具有典型特征的DC;在效靶比为10：1及20：1时。K562冻融抗原致敏DC组诱导的CTL对K562细胞的杀伤率分别为55．9％土22．0％、90．2％＋24．8％,均高于其他3组（p,0．05）。结论 K562细胞冻融抗原致敏DC可诱导激活CTL,具有明显杀伤K562细胞作用。并具有特异性。     

亚硒酸钠对树突状细胞体外增强CTL杀伤K562细胞作用的研究

目的探讨经亚硒酸钠(Na2SeO3,Se)处理、K562细胞裂解物(又称为抗原细胞裂解物:ACL)冲击致敏的外周血单个核细胞(PBMNC)衍生的树突状细胞(DCs)体外诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)杀伤白血病细胞的能力。方法1)DCs培养:用含3种细胞因子重组人粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(rhGM-CSF)、重组人白细胞介素-4(rhIL-4)和肿瘤坏死因子(TNF-α)的RPMI-1640(10%FBS)培养体系,培养健康人的PBMNC 4d,收获贴壁细胞;2)DCs分4组:Ⅰ组:单独DC培养组;Ⅱ组:加入0.5μmol/LSe的DC组;Ⅲ组:加入ACL的DC组;Ⅳ组:同时加入0.5μmol/LSe和ACL的DC组;3)效应细胞-CTL的诱导培养:用含细胞因子IL-2的1640(10%FBS)培养体系,将非贴壁细胞(淋巴细胞)作为效应细胞,单独或与各组DC共同孵育5d;4)CTL活性测定:用乳酸脱氢酶(LDH)释放试验,靶细胞为K562细胞。结果效应细胞与K562细胞按不同效靶比混合培养时,DC-Ⅳ组、Ⅲ组及Ⅱ组刺激后的T细胞比DC-Ⅰ组刺激后的T细胞及单纯T细胞对K562细胞的杀伤作用更显著,杀伤率随效靶比的增加而增加。其中E∶T=25∶1时,T细胞组及T-DC-Ⅰ、T-DC-Ⅱ、T-DC-Ⅲ、T-DC-Ⅳ组对K562细胞的杀伤率分别为:5.9%±2.4%、15.3%±2.3%、26.3%±3.7%、28.2%±4.5%、36.2%±3.7%。T-DC-Ⅳ组杀伤活性高于其他各组(P值均<0.01)。结论用含GM-CSF、IL-4和TNF-α的体外培养体系可从健康人PBMNC获得成熟的DCs,小剂量亚硒酸钠和K562细胞裂解液负载均可诱导出特异性杀伤靶细胞的CTL,且两者具有协同作用。     

WT1基因肽诱导细胞毒性T淋巴细胞免疫治疗白血病的实验研究

目的探讨肾母细胞瘤基因(WT1)肽负载树突状细胞(DC)诱导特异性细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病细胞体外靶向免疫治疗作用。方法合成一段针对HLA-A0201锚位的WT1特异性九聚肽(CMTWNQMNL),体外负载来源于HLA-A0201阳性健康志愿者的DC后,诱导产生WT1肽特异性、HLA-A0201限制的CTL(A组),四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色(MTT)法观察其对白血病细胞株及原代白血病细胞体外杀伤效应。采用流式细胞术直接免疫荧光标记法,检测DC表面抗原CD83、CD1α、CD80、CD86、CD14、HLA-DR和T细胞表面的CD3、CD4、CD8、CD56等的表达。设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照组。结果K562细胞不表达HLA-A0201但高表达WT1基因(1.111±0.128);U937细胞表达HLA-A0201,但极低表达WT1基因(0.006±0.001);NB4细胞表达HLA-A0201,且高表达WT1基因,NB4/WT1D、NB4/WT1A及NB4细胞株中WT1表达水平分别为1.42±0.07、3.20±0.19和1.14±0.09,均显著高于U937细胞株(P均<0.01)。A组CTL能够通过HLA-A0201限制方式杀伤HLA-A0201阳性,WT1+NB4白血病细胞株和白血病患者原代骨髓单个核细胞,而不能特异性杀伤HLA-A0201阳性,WT1-U937细胞胞株及白血病细胞,HLA-A0201-,WT1+K562细胞株及白血病细胞,对HLA-A0201阳性或阴性正常骨髓细胞也无杀伤活性;A组CTL对NB4/WT1D、NB4/WT1A和NB4细胞株杀伤活性无统计学意义(P=0·065,P=0·621)。结论WT1肽特异性CTL能够以HLA-Ⅰ类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病细胞,而对正常骨髓细胞无杀伤作用,WT1基因的表达产物可以作为白血病免疫治疗靶点。     

树突状细胞的诱导及抗肿瘤作用探讨

目的：从人外周血诱导树突状细胞（DC）,分析其免疫学特性及抗肿瘤作用。方法：分离人外周血DC前体细胞,采用rhGM-CSF、rhIL-4和肿瘤抗原联合诱导,分析DC表型,采用混合淋巴细胞反应检测DC激发T淋巴细胞增殖能力;乳酸脱氢酶4h释放法检测肿瘤抗原致敏DC与CD3AK混合物的杀瘤活性。结果：DC前体细胞经rhGM—CSF、rhIL-4和肿瘤抗原共同诱导2周,可获得大量成熟DC,其中第7～15天,DC增殖最明显。至第15天,DC纯度达90％以上。DC具有典型的树突状或裙褶样突起,高表达CD86、CD40、HLA—DR、CD83、CDIa分子,能强烈刺激T淋巴细胞增殖。CD3AK细胞与肝癌抗原致敏DC的混合物具有很强的杀伤BEL-7402肝癌细胞的作用,杀伤率显著高于CD3AK细胞（P〈0．01）。结论：可从人外周血诱导培养获得大量功能成熟的DC,能激活T淋巴细胞增殖和显著增强CD3AK细胞的抗肿瘤活性。     

肾母细胞瘤基因衍生肽诱导细胞毒性T淋巴细胞对白血病患者骨髓CD34+细胞的体外杀伤效应

目的 探讨肾母细胞瘤基因(WT1)衍生肽负载树突状细胞(DC)诱导细胞毒性T淋巴细胞(CTL)对白血病CD34+细胞的体外清除效应.方法 合成一段针对HLA-A*0201锚位的WT19聚肽,体外负载来源于HLA-A*0201*健康人的DC后,诱导产生WT1肽特异性CTL(A组),以噻唑盐(MTT)比色法观察其对WT1表达阳性白血病患者(HLA-A* 0201+者3例,HLA-A*0201-者3例)骨髓CD34+细胞、健康人(HLA-A*0201+者2例,HLA-A*0201-者1例)外周血CD34+细胞和白血病NB4、K562及U937细胞株的体外杀伤效应,粒细胞-巨噬细胞系集落形成试验观察其对白血病患者骨髓CD34+细胞和健康人外周血CD34+细胞粒细胞-巨噬细胞系集落形成单位(CFU-GM)形成的影响.设立单独DC诱导CTL(B组)和IL-2诱导T细胞(C组)作为对照.结果 在效靶比为20:1时,A组CTL对3例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞和NB4细胞的杀伤活性(分别为55.3%±2.8%,67.1%±3.2%、49.4%±3.8%和55.0%±3.7%)明显高于对3例HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞及K562、U937细胞的杀伤活性(均<20%),并明显高于B组和C组CTL(均P＜0.01).2例HLA-A*0201+白血病患者骨髓CD34+细胞经A组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率分别为17.8%±4.0%和20.8%±3.4%,明显低于经B组CTL处理后(分别为88.9%±3.4%和91.8%±5.7%,均P＜0.01);HLA-A*0201-白血病患者骨髓CD34+细胞、健康人外周血CD34+细胞经A组和B组CTL处理后CFU-GM集落相对形成率差异尤统计学意义.结论 WT1肽特异性CTL能够以HLA-1类抗原限制方式杀伤高表达WT1基因的白血病CD34+细胞,且能特异性抑制其CFU-GM集落形成,WT1基因的表达产物可以作为清除白血病CD34+细胞靶点.     

急性早幼粒细胞白血病中白血病细胞CD_(117)的表达

为观察CD117分子在急性早幼粒细胞白血病 (APL)中的表达及探讨其意义 ,采用三色流式细胞术对 2 2例APL骨髓白血病细胞表面CD117的表达进行分析。结果 :CD117在APL中的表达率为 1 9/2 2 ,在急性粒细胞白血病(AML M1)和AML M2 中的表达率分别为 2 /2和 1 8/2 1。 1 9例CD117+ 的APL患者中 ,1 8例CD34 - 、HLA DR- ,1例部分细胞HLA DR+ 。提示 :APL患者有较高水平的CD117表达 ,CD117与CD34 、HLA DR联合进行多色流式细胞术分析 ,可用于APL微小残留病灶的检测。     

骨髓瘤冻融物致敏树突状细胞诱导特异性细胞免疫反应

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者肿瘤冻融物致敏的树突状细胞(DC)诱导T细胞对不同靶细胞产生的细胞毒作用.方法GM-CSF、IL-4和TNF-α体外联合诱导生成MM患者自身DC,患者骨髓瘤冻融物冲击致敏DC诱导自身淋巴细胞;MTT法检测致敏DC对不同靶细胞(患者骨髓瘤细胞、K562细胞株)的杀伤率及其与效靶比的关系.结果当效靶比为20:1时,骨髓瘤细胞冻融物致敏的DC加IL-2诱导的自身T细胞对骨髓瘤细胞有明显的溶解作用,而它对K562细胞则无明显影响.结论MM患者肿瘤冻融物致敏的DC能有效地诱导自身T细胞对其骨髓瘤细胞的特异性杀伤作用.     

DC细胞刺激γδ T细胞的抗白血病作用

目的研究γδ T细胞的体外生存期和抗白血病活性. 方法对外周血采集物用GM-CSF+IL-4进行培养,使其分化和扩增为树突状细胞(dendritic cells, DC);然后用DC和细胞因子IL-2刺激其CD4+ T细胞扩增后,协同DC共同刺激γδ T细胞扩增,再与多种白血病细胞株进行混合培养,进而用MTT比色法研究抗白血病能力. 结果γδ T 细胞能在体外长期大量扩增.扩增的γδ T细胞对多种白血病细胞株具有杀伤作用. 结论γδ T细胞可望用于白血病的临床免疫治疗.     

Her2/neu基因重组腺相关病毒转染人外周血树突状细胞的免疫功能

目的 Her2/neu基因重组腺相关病毒(rAAV-Her2/neu)转染人外周血树突状细胞(dendritic cell,DC),并检测其免疫功能.方法 检测乳腺癌细胞MCF7的HLA基因分型.采用与乳腺癌细胞株SK-BR-3、MCF7的HLA基因分型一致的健康人外周血,Ficoll分离取得单个核细胞,各分两组,分别加入病毒和不加病毒.应用含10%人AB血清的RPMI-1640培养基及粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF),白细胞介素-4(IL-4)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)培养.第7天收获成熟DC.流式细胞仪检测DC表型.MTT法检测DC诱导T细胞的杀伤活性,此步骤重复4次取平均值.结果 加病毒组CD 1a、CD86和CD83分别为:98.10%、99.42%、84.59%;无病毒组为:92.69%、98.07%、82.72%,组问差别不明显.加病毒组CD40、CD80分别为:61.02%、97.61%;无病毒组为:36.19%、55.5%,加病毒组高于无病毒组.两组均能刺激T淋巴细胞增殖.加病毒组DC可诱导特异性杀伤,最高杀伤率(39.7±7.2)%.结论 rAAV-Her2/neu转染的DC有更强的免疫功能.