局灶脑缺血大鼠脑源性神经营养因子及其受体的表达

目的：探讨脑缺血损伤与脑源性神经营养因子（BDNF）及其受体TrkB之间的关系。方法：用线栓法制备大鼠脑缺血模型，采用免疫组织化学方法及图像分析测定不同缺血时间额叶和顶叶BDNF及TrkB阳性神经元数目。结果：与假手术组相比，在额叶BDNF及TrkB阳性神经元数目于缺血开始增加（P＜0．05），缺血3d达到高峰（P＜0．001），缺血7d降至正常水平（P＞0．05）；在顶叶BDNF及TrkB阳性神经元数目于整个缺血过程均明显增加（P＜0．001）。结论：脑缺血损伤后，BDNF和TrkB表达同时增强，可能对脑缺血损伤有保护作用。     

大鼠脑缺血再灌注后脑源性神经营养因子的表达及意义

目的　研究脑局灶缺血再灌注后脑源性神经营养因子 (BDNF)的表达规律及其意义。方法　健康雄性Wistar大鼠 30只 ,随机分为正常对照组、假手术组和缺血再灌注组 ,按照改良的栓线法建立大脑中动脉缺血再灌注大鼠模型。用免疫组织化学方法检测BDNF在脑组织中的表达情况。结果　BDNF免疫阳性表达在缺血再灌注组的梗死中心区梗死灶边缘带有显著增强的阳性表达。再灌注 15min开始增多 ,再灌注 1h明显增多 ,2h达到高峰 ,4h开始下降 ,2 4h恢复至正常对照组水平。结论　缺血再灌注损伤可诱导BDNF极早表达 ,并迅速升高 ,有利于缺血再灌注损伤后神经细胞的存活及后期神经功能恢复     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后GDNF mRNA及其蛋白表达的变化

目的 观察大鼠脑缺血再灌注后缺血半暗带皮质脑源性神经营养因子(GDNF) mRNA和蛋白的表达变化.方法 采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠(MCAO)模型,用原位杂交法和免疫组化法观察脑缺血后3、6、12 h及l、3、7d共6个时间点GDNFmRNA及其蛋白的表达变化.结果 缺血半暗带GDNFmRNA及其蛋白的表达均于缺血灌注后3h开始明显上升,6h达高峰,12 h表达开始减弱(P＜0.05或P＜0.01),3-d后降至正常水平.结论 脑缺血再灌注后缺血半暗带GDNFmRNA及蛋白表达均明显增加可能参与了脑缺血后神经保护.     

黄体酮对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤后脑组织神经生长因子表达的影响

目的 观察黄体酮对大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤后缺血区皮层神经生长因子(NGF)和脑源性神经营养因子(BDNF)在mRNA与蛋白质水平表达的影响,探讨黄体酮在脑缺血-再灌注损伤中的脑保护作用机制. 方法 采用SD雄性大鼠局灶性脑缺血-再灌注损伤模型.将96只大鼠随机分为4组:假手术组、缺血再灌注组、溶剂组和黄体酮组各24只.应用Real time-PCR和Western blot技术分别对缺血区皮层NGF和BDNF mRNA与蛋白表达情况进行测定. 结果 在缺血区皮层,缺血2h再灌注6h后,缺血再灌注组NGF和BDNF的mRNA及蛋白质表达达高峰,再灌注24 h后,回复到假手术组水平;缺血2h再灌注12 h后,黄体酮组NGF和BDNF mRNA及蛋白表达达高峰,再灌注24 h后,表达仍高(P＜0.05). 结论 黄体酮可以使脑缺血-再灌注损伤后NGF和BDNF的mRNA表达上调,促进脑内NGF和BDNF蛋白的合成,从而发挥脑保护作用.     

清热化瘀方对脑缺血再灌注损伤大鼠神经干细胞增殖的影响

目的 观察清热化瘀方对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经干细胞增殖的影响.方法 90只大鼠随机分为假手术组、模型组、清热化瘀组3组,采用线栓法制作局灶性脑缺血大鼠(MCAO)模型,观察大鼠缺血损伤后缺血半暗带区的细胞增殖.采用免疫组化法观察脑缺血再灌注后2 d、4 d、7 d、14 d、21 d五个时间点巢蛋白(Nestin)及5-溴脱氧尿苷(BrdU)免疫活性的变化.结果 清热化瘀组大鼠在第2天、第4天、第7天的神经功能缺损评分明显优于模型组(P<0.05);模型组缺血半暗带Nestin和BrdU阳性表达分别于再灌注7 d和14 d达高峰(P<0.05),以后表达逐渐减弱;清热化瘀组可以明显增加缺血再灌注后第4天、第7天、第14天大鼠的Nestin阳性细胞表达(P<0.05);并可以明显增加缺血再灌注后第7天、第14天、第21天大鼠缺血半暗带的BrdU阳性细胞表达(P<0.05).结论 脑缺血损伤可激活神经干细胞,促使其增殖和表达.清热化瘀方可以促进MCAO大鼠缺血半暗带神经干细胞的增殖.     

大鼠局灶性脑缺血Activin A及其受体ActRⅡA表达变化及意义

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血激活素A(Act A)及其受体ⅡA(ActRⅡ)的表达变化规律及意义.方法 线栓法制备大鼠大脑中动脉闭塞(MCAO)模型,采用光镜、免疫组化方法检测大鼠局灶性脑缺血后梗死体积、病理变化,免疫组化染色观察Act A、ActRⅡA免疫阳性表达. 结果正常组织有极低水平的Act A、ActRⅡA表达,免疫组化显示缺血3 h后在周边区Act A、ActRⅡA阳性细胞数量显著高于假手术组(P<0.05),并随缺血时间延长而逐渐增高,于24 h达高峰.结论 局灶脑缺血损伤可诱导内源性神经元Act A高表达,并可能通过特异性跨膜信号受体ActRⅡA发挥靶源性作用.     

神经营养因子与脑缺血

神经营养因子对神经元生长发育的影响逐渐被认识并得到重视 ,尤其是神经生长因子家族中的神经生长因子、脑源性神经营养因子、胶质细胞源性神经营养因子倍受重视。它们在脑缺血损伤过程中的作用 ,不仅表现在对缺血损伤的神经元具有防止发生凋亡的作用 ,而且能促进残存的神经元建立新的突触联系 ,促进神经功能的恢复。     

通心络胶囊对全脑-局灶脑缺血大鼠的脑缺血耐受及脑源性神经营养因子的影响

目的采用全脑-局灶脑缺血耐受大鼠模型,观察通心络胶囊对脑缺血耐受作用的影响。方法线栓法制备大鼠全脑缺血-局灶脑缺血再灌注模型(PC-MCAO)及局灶性脑缺血再灌注模型(MCAO)。在不同缺血时间点观察通心络组、PC-MCAO组及MCAO组大鼠神经行为评分,用免疫组化法检测脑源性神经营养因子(BDNF)阳性细胞数。结果神经行为评分在通心络组、PC-MCAO组和MCAO组的2h组之间无统计学意义(P>0.05),通心络24h,3d,5d组均显著低于对应时程的PC-MCAO组和MCAO组(P<0.05);各组缺血半暗带BDNF阳性细胞数均增高,但通心络组的阳性细胞数显著高于对应时程的PC-MCAO组和MCAO组(P<0.05)。结论通心络胶囊能提高大鼠局灶脑缺血半暗带BDNF的表达水平,促进神经元的修复,诱导脑缺血耐受。     

大鼠全脑缺血再灌注脑内神经营养因子的动态变化

目的　探讨血管性痴呆与神经生长因子 (NGF)、脑源性神经营养因子 (BDNF)之间的关系。方法　选用Wistar老龄大鼠雌雄随机分组 ,假手术组分A、B、C 3组 ,每组 4只 ;实验组分全脑缺血 15分钟组 ,缺血再灌注 1和 6小时、2、4、9天 5组 ,每组 5只。术前、术后测试游水谜成绩 ,用免疫组化ABC法检测缺血再灌注不同时相额叶、顶叶、海马和丘脑NGF、BDNF含量。结果　额叶NGF表达于再灌注 2天达高峰 ,以后迅速消失 ;缺血 15分钟顶叶即出现中量NGF表达 ,再灌注 9天时增至大量 ;缺血再灌注早期丘脑NGF表达消失 ,再灌注 2天以后NGF表达重新出现。再灌注 2天额叶BDNF表达大量增加 ,以后减少、消失 ;顶叶和海马BDNF表达始终无变化 ;丘脑BDNF表达只有再灌注 9天增加。结论　BDNF比NGF分布广泛 ,缺血再灌注早期额叶有NGF、BDNF较好的神经元保护机制 ;顶叶、海马对缺血再灌注损伤有NGF、BDNF迅速、持久的神经元保护机制 ;丘脑缺乏NGF良好的神经元保护机制 ,但有BDNF良好的神经元保护作用。     

芍药苷对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡相关基因的影响

目的 探讨芍药苷对大鼠局灶性脑缺血再灌注后缺血区神经元凋亡的影响.方法 建立大鼠MCAO模型模拟局灶性脑缺血再灌注损伤,观察芍药苷对脑缺血再灌注损伤后动物的神经行为学评分;TUNNEL法检测神经元凋亡的数量改变;用WESTERBLOT法及免疫组化法检测β-P38、Fas的表达改变.结果 假手术组无神经行为改变,各用药组神经行为学评分明显低于缺血再灌注组(P<0.01),用药组间无统计学意义.与假手术组相比,缺血再灌注组大鼠缺血侧脑组织TUNEL阳性细胞及Fas阳性细胞增多(P<0.01).与模型组相比,各用药组TUNEL阳性神经细胞及Fas阳性细胞表达明显减少(P<0.01).大鼠脑缺血再灌注后脑组织磷酸化P38蛋白表达明显增加,注射药物后蛋白磷酸化被抑制,表达减少.结论 芍药苷可改变大鼠脑缺血后的神经行为,抑制P38蛋白的表达,下调Fas蛋白表达,有抗神经元凋亡作用.     

局灶性脑缺血大鼠海马CA3区BDNF的动态表达

目的　研究局灶性脑缺血损伤后海马 CA3区 BDNF的动态表达以及神经修复的可塑性。方法　选取健康成年 SD大鼠 40只 ,随机分为脑缺血组和对照组。采用线栓法建立大脑中动脉脑缺血大鼠模型 ,应用免疫组化技术观察海马 CA3区 BDNF的表达。结果　脑缺血后海马 CA3区 BDNF的表达 7d时开始升高 ,1 4 d时明显增多 ,2 1 d时达到高峰 (P<0 .0 1 ) ,以后逐渐降低。结论　脑缺血损伤后中枢神经系统具有再生和修复的可塑性。     

脑缺血再灌注后神经细胞bcl-2、bax和p53mRNA的表达

目的　研究大鼠局灶性脑缺血再灌注后神经细胞 bcl- 2、bax和 p53m RNA表达的变化规律。方法　利用大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型 ,原位杂交技术分别观察缺血 1 .5 h再灌注后 2 h、 6 h、 1 2 h、 1 d、 2 d、 3 d、 7d和 1 4 d不同时间点神经细胞 bcl- 2、 bax和 p53 m RNA的表达。结果　脑缺血再灌注 2 h在缺血周围区 bcl- 2 m RNA开始表达 ,1 d达高峰 ,之后逐渐减弱 ,再灌注 1 4 d接近假手术组水平 ;bax m RNA与 p53 m RNA均于缺血再灌注 6 h出现 ,bax m RNA于 1 d达高峰 ,3 d降至假手术组水平 ,p53 m RNA于 1～ 2 d达高峰 ,7d降至假手术组水平。结论　脑缺血再灌注后 bcl- 2、 bax和 p53m RNA的表达与缺血性损伤有一定关系 ,参与了神经细胞凋亡的调节     

局灶性脑缺血大鼠海马区不同部位BDNF的表达及其意义

目的　研究局灶性脑缺血损伤后海马区不同部位脑源性神经营养因子 (BDNF)表达的规律 ,探讨其对缺血后中枢神经重塑的影响。方法　选取健康成年SD大鼠 40只 ,随机分为脑缺血组和假手术组。采用线栓法建立大脑中动脉脑缺血大鼠模型 ,应用免疫组化技术观察海马各区BDNF的表达。结果　 (1 )脑缺血后BDNF的表达水平在海马区具有部位差异性 ,表现为齿状回CA3和CA4 区BDNF的表达明显高于假手术组 ,且差异有显著性 (P <0 0 1 ) ,而CA1 区和CA2 区BDNF表达较假手术组仅轻度升高 ,但差异无显著性 (P >0 0 5) ;(2 )脑缺血组BDNF的表达在脑缺血后 7d时开始升高 ,1 4d时明显增多 ,2 1d时达到高峰 (P <0 0 1 ) ,以后逐渐降低。结论　齿状回、CA3和CA4 区及对缺血损伤具有反应迅速、作用持久的BDNF保护机制对中枢神经系统再生和修复起着重要的作用。     

大鼠局灶性脑缺血再灌注后TNF-a、SOCS-3动态表达的实验研究

目的探讨肿瘤坏死因子-a（TNF—a）、细胞因子信号转导抑制因子-3（SOCS-3）在大鼠脑缺血再灌注后的动态表达及特点,阐明TNF-a、SOCS-3在脑缺血再灌注中的作用。方法将雄性sD大鼠48只随机分为假手术组和缺血3h再灌注3h、6h、12h、24h、48h、72h、7d组,6只／组。运用改良线栓法制作大鼠局灶性脑缺血再灌注模型。用放射免疫法测定TNF-a含量及用RT—PCR法测定SOCS-3的含量。结果TNF-a含量变化：与假手术组比较,缺血再灌注纽脑组织TNF—a含量在6h明显增加,12h达到高峰,随后各时间点表达开始下降。在缺血半暗带区,TNF—a含量变化与中心区相同,但含量较低。SOCS-3mRNA含量变化：缺血再灌注组缺血中心区SOCS-3表达在6h开始有明显升高与假手术组相比有显著性差异,再灌注24h时达到高峰,随后备时间点表达相对稳定,至再灌注7d时仍过分表达。在缺血半暗带区,SOCS～3mRNA变化与中心区相同,但含量较低。结论TNF—α在大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤中具有重要作用,可诱导SOCS-3基因的产生和表达。而SOCS-3基因是一个脑缺血后上调基因,它参与了脑缺血再灌注损伤的全过程,可能起到了内源性神经保护剂的作用。     

大鼠局灶性脑缺血预处理后生长停滞与DNA损害可诱导基因34表达的变化

目的观察脑缺血预处理(brain ischemia preconditioning,BIP)对大鼠脑缺血再灌注后,生长停滞与DNA损害可诱导基因34(GADD34)mRNA及蛋白表达的影响。方法健康雄性SD大鼠120只,随机分为假手术组、脑缺血组、BIP组,每组40只,后2组行大脑中动脉栓塞法制模后,各组于再缺血后12 h、1、2和3 d 4个时间点观察,每个时间点10只。采用2次线栓法制备大鼠局灶性脑缺血预处理模型,用原位杂交法检测GADD34 mRNA表达,western blot法观察各组GADD34蛋白表达。结果与假手术组比较,脑缺血组12 h GADD34 mRNA及蛋白表达均达高峰,随再灌注时间延长,其表达逐渐下降,但1、2和3 d时仍高于假手术组(P<0.05,P<0.01);BIP组GADD34 mRNA及蛋白表达各时间点均较脑缺血组明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论 BIP可诱导GADD34mRNA及蛋白的表达。     

3-硝基丙酸对缺血预处理后脑组织caspase-3表达的影响

目的探讨脑缺血预处理后3-硝基丙酸(3-NPA)对脑组织中caspase-3表达的影响。方法72只健康雄性SD大鼠,随机分成3组:脑缺血组24只,脑缺血预处理组24只,脑缺血预处理后3-NPA干预组24只。各组再按缺血时间分为6h、1、2和4天4个时间点。结果在缺血后相同时间点,脑缺血预处理组与脑缺血组比较神经功能缺损评分明显降低(P<0.05),梗死体积明显缩小(P<0.05),海马区caspase-3阳性细胞表达明显降低(P<0.05);脑缺血预处理后3-NPA干预组神经功能缺损评分、梗死体积、caspase-3阳性细胞表达较脑缺血预处理组明显降低,差异有显著性意义(P<0.05)。各组在脑缺血后6h出现caspase-3阳性细胞表达,1～2天达到高峰后逐渐下降。结论缺血预处理后3-NPA干预可进一步加强神经保护作用。     

大鼠脑缺血后可逆性蛋白磷酸化水平变化的实验研究

目的：研究大鼠脑缺血后可逆性蛋白磷酸化水平的变化。方法：采用线栓法制作大鼠永久性大脑中动脉闭塞模型,免疫荧光染色法检测神经颗粒素（Ng）、磷酸化Ng（p-Ng）和钙调神经磷酸酶（CaN）在脑缺血不同时间的变化情况。结果：脑缺血3h p-Ng开始增加,1d后达高峰（P〈0．05）,随着缺血时间的延长,P-Ng水平逐渐下降且不再恢复;缺血6hNg总蛋白无明显变化,缺血1d后呈下降趋势;脑缺血6hCaN开始发挥去磷酸化作用,3d时达到高峰（P〈0．05）,以后随着缺血时间的延长,CaN的去磷酸化作用逐渐丧失。结论：急性脑缺血后神经元内的可逆性蛋白磷酸化水平发生失衡,蛋白磷酸化／去磷酸化作用参与了缺血性神经元损伤过程。     

脑缺血再灌流损伤神经细胞凋亡与Bcl-2和caspase-3的关系

目的 探讨大鼠局灶性脑缺血再灌流后神经细胞凋亡及其与Bcl-2和caspase-3基因表达的关系。方法应用原位末端标记(TUNEL)和原位杂交技术分别观察脑缺血再灌流不同时间点神经细胞凋亡的变化与Bcl-2mRNA和caspase-3 mRNA的表达。结果(1)脑缺血再灌流后凋亡神经细胞主要分布于缺血周围区，随着再灌流时间的延长凋亡细胞数逐渐增加，至24h达高峰，2d开始下降，14d时仍高于假手术组。(2)脑缺血再灌注2h后，神经细胞Bel-2 mRNA开始表达，并随着再灌流时间的延长而增强，12～24h达高峰，2d后逐渐下降，至14d略高于假手术组。(3)脑缺血再灌流后，神经细胞caspase-3 mRNA的表达与Bcl-2m RNA的表达规律相似，但于再灌流24h达高峰。结论脑缺血再灌流后，缺血周围区神经细胞的凋亡是-个动态的渐进过程，Bel-2基因表达可能抑制细胞凋亡，caspase-3基因在介导脑缺血损伤神经元凋亡过程中起关键作用。