悬浮芯片法与生物素-亲和素ELISA法检测炭疽杆菌芽孢比较研究

〔目的〕建立快速、敏感、特异、高通量、同时检测多种病原体的技术方法。〔方法〕建立基于双抗体夹心免疫学检测的编码微球悬浮芯片和生物素-亲和素ELISA方法,比较2种方法对炭疽芽孢杆菌定量检测以及直接从＂白色粉末＂样品中检测的能力。〔结果〕悬浮芯片对炭疽杆菌芽孢检测具有很好的敏感性和特异性,最低检出限为4.2×103cfu/ml,动态范围为103-107cfu/ml;生物素-亲和素ELISA最低可以检测到1.4×104 cfu/ml,线性范围为104-107cfu/ml。〔结论〕悬浮芯片方法检测炭疽杆菌芽孢比ELISA方法具有更高的灵敏度和更宽的动态检测范围,在病原菌的早期识别、快速诊断、应对生物恐怖威胁、控制传染病爆发中具有广阔的应用前景。     

免疫层析法与酶联免疫吸附法检测血中HBsAg、抗-HCV、抗-HIV的比较

〔目的〕分析比较乙型肝炎表面抗原(HBsAg)、丙型肝炎病毒抗体(抗-HCV)、HIV抗体(抗-HIV)的免疫层析快速试剂在实际应用中的灵敏度、特异度和准确度,为今后的工作提供参考。〔方法〕对502份健康体检血清标本同时用快速免疫层析法和酶联免疫吸附法(ELISA)检测HBsAg、抗-HCV、抗-HIV,对其灵敏度和特异度进行比较。〔结果〕与ELISA相比,502份血清标本中HBsAg金标法有2份假阴性,5份假阳性,灵敏度为99.6%,特异度为99.0%,准确度为98.6%;抗-HCV金标法无假阴性,有9份假阳性,灵敏度为100%,特异度为98.2%,准确度为98.2%;抗-HIV硒标法有2份假阳性,灵敏度为100%,特异度为99.6%,准确度为99.6%。〔结论〕金标法检测HBsAg灵敏度和特异度稍低于ELISA,有漏检和误检现象,而抗-HCV、抗-HIV快速法与ELISA比较灵敏度相当,而特异度稍低,因此,都要结合ELISA结果才可出具最终检测报告,抗-HIV的检测任何一种方法出现阳性时都要进行确认试验。     

肠道传染病病原体可视化基因芯片检测技术的研究

〔目的〕研究建立能同时检测7种肠道传染病病原体的可视化的快速、高效的基因芯片检测技术。〔方法〕针对霍乱弧菌、副溶血弧菌、沙门菌、大肠埃希菌O157：H7、金黄色葡萄球菌、轮状病毒、诺瓦克病毒（Ⅰ型和Ⅱ型）等7种肠道传染病病原体,设计特异引物和探针,构建芯片。以链霉亲和素包被的磁珠为信号标记分子检测芯片上的特异杂交反应,结果采用裸眼观察或普通光学设施成像保存。测试构建芯片的特异性、重复性及灵敏度等参数。〔结果〕该芯片具有较好的特异性和重复性,检测灵敏度可达25ng/μl;对27份临床粪便样本分别进行PCR和芯片检测,芯片检测结果与PCR方法检测结果一致。〔结论〕本研究建立的基于磁珠标记的可视化芯片技术,能够用于快速筛查选定的7种主要的肠道传染病病原体。该技术对于进一步开发更多指标的微生物检测方法具有很好的示范作用。     

复合检测5种重要发热病原悬浮芯片筛查方法的建立

目的建立同时检测甲型流感病毒、人禽流感病毒、鼠疫耶尔森菌、SARS冠状病毒、结核分枝杆菌5种发热病原抗体蛋白悬浮芯片方法。方法分别用各病原体的诊断抗原耦联不同编码的微球作为反应载体,采用间接反应模式,建立蛋白悬浮芯片方法检测引起发热体征的5种病原的特异性抗体,在同一反应体系中对人血清中的流感、禽流感、鼠疫、SARS、肺结核等特异性抗体进行复合检测。结果建立的蛋白悬浮芯片5种病原抗体快速筛查系统具有较高的特异性和敏感性,同时检测鼠抗流感NPIgG、兔抗禽流感H5N1IgG、兔抗鼠疫F1IgG、兔抗SARSNIgG、兔抗结核分枝杆菌IgG的检测灵敏度分别为968.80ng/ml、69.40ng/ml、6.30ng/ml、15.50ng/ml、1.60ng/ml。结论重要发热病原悬浮芯片快速筛查系统能快速、敏感、特异、同时检测人血清中的5种病原抗体,对口岸出入境人员是否携带病原的快速筛查具有广阔的应用前景。     

检测3种发热性疾病IgM抗体的微孔板蛋白质芯片的研制

〔目的〕针对风疹、麻疹、流行性乙型脑炎3种病毒建立能同时1次检测3种病毒IgM抗体的微孔板蛋白质芯片。〔方法〕将风疹、麻疹和乙脑3种病毒的特异抗原阵列于PVDF微孔板内,建立了在1个反应孔内能同时检测风疹、麻疹、乙脑等3种IgM抗体的蛋白质芯片检测方法。以ELISA实验为对照,通过对239份临床血清样本的分析,系统评价了该芯片系统的灵敏性和特异性。〔结果〕该芯片检测风疹、麻疹、乙型脑炎病毒的灵敏性分别为91.67%、100%、94.12%,特异性分别为99.53%、99.50%、99.10%,与ELISA实验的总符合率依次为98.74%、99.58%、98.74%。〔结论〕本研究建立的微孔板蛋白质芯片检测方法具有准确、简便、快捷、高通量等特点,具有良好的应用前景。     

时间分辨免疫荧光法测定乙肝病毒血清标志物的结果分析

[目的]探讨时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)在测定乙型肝炎血清标志物(HBV-M)中的应用价值。[方法]分别采用时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)两种方法进行乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)、乙型肝炎病毒表面抗体(HBsAb)、乙型肝炎病毒e抗原(HBeAg)、乙型肝炎病毒e抗体(HBeAb)、乙型肝炎病毒核心抗体(HBcAb)检测。对比研究了TRFIA和ELISA两种方法的灵敏度、特异性和结果符合率。[结果]TRFIA法测定HBsAg、HBsAb、HbeAg均有较高的灵敏度、特异性及符合率,对HbeAb测定的符合率为90.9%,灵敏度为97.40%,但易出现假阴性,特异性仅为86.7%,故测定特异性还有待提高。HBcAb测定结果符合率只有55.8%,特异性为27.0%。ELISA法检测HBV-M五项指标也有较高的灵敏度,其中以HBsAg最为理想,灵敏度为95.24%、特异性为96.55%、符合率为96.15%,HBcAb和HBeAg次之,HBeAb灵敏度最低。[结论采用TRFIA检测乙型肝炎血清标志物的灵敏度、特异性及符合率优于传统ELISA法,同时可以根据血清标志物表达量的多少评估患者的病情及传染性,较传统ELISA法更准确和更可靠,值得临床推广应用。     

酶联免疫吸附法检测HBsAg的假阳性和解决方法

〔目的〕避免酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg假阳性报告的发生。〔方法〕对ELISA法检测HBsAg结果为阳性而金标法为阴性的69份血液标本,用ELISA法和Abbott免疫发光法检测乙型肝炎3系5项免疫指标,并对结果进行分析。〔结果〕ELISA法检测HBsAg的假阳性率为1.19%,而用同样方法复检后,其假阳性率降至0.06%。〔结论〕ELISA法检测HBsAg的假阳性大多可通过用同样方法复检并结合乙型肝炎3系的其他免疫指标发现并给予纠正,对少数复检结果仍难以确定者,可用Abbott免疫发光法检测乙肝3系5项免疫指标给予确认。     

艾滋病病毒抗体初筛检测试剂质量比较研究

〔目的〕　对 4种艾滋病病毒抗体初筛检测试剂的质量进行比较 ,以寻求敏感性、特异性高的初筛检测试剂。〔方法〕　用双抗原夹心法、间接酶联法 (ELISA)及快速层析法试剂 ,分别对 30份抗 -HIV抗体阳性血清及6 4 0份境内外不同人群血清进行平行检测。检测数据运用敏感性、特异性、δ值和LogC .O .I.等统计学指标进行评价。〔结果〕　 4种试剂检测阳性一致率为 10 0 % ;检测阴性血清国产酶联试剂及快速层析法试剂出现 0 .2 %～ 0 .6 %的假阳性率。采用δ值和LogC .O .I.指标对检测试剂在不同人群血清HIV抗体的筛检效力进行了评价 ,分析结果显示 :双抗原夹心法显示阴性的样本 ,国产酶联试剂的 (LogC .O .I.χ± 3SD)值不是负值而是正值。〔结论〕　国产酶联试剂在检测阴性样本时 ,容易出现假阳性     

黑龙江口岸蜱类及其携带病原体状况的初步研究

〔目的〕从分子流行病学角度探讨可能存在的新发蜱媒传染病及复合感染情况。〔方法〕采集黑龙江10个口岸的蜱类,通过病原培养分离,动物试验后进行分子生物学检测。〔结果〕检出4种病原微生物,发现了复合感染蜱,其中,人巴贝西原虫为国内首次检出,人埃立克体为质检系统内首次检出。全沟硬蜱可同时携带这4种病原体。〔结论〕黑龙江口岸蜱类及蜱携带病原体情况复杂,引起蜱传疾病的风险巨大。     

对8种艾滋病抗体初筛试剂的比较

〔目的〕对8种艾滋病抗体检测试剂进行比较,选择质量最好的试剂。〔方法〕采用酶标法、全自动免疫仪器法和金标法3种检测方法与8种试剂检测艾滋病抗体。〔结果〕最佳试剂为第3代酶标试剂Vironstika,它准确度及灵敏度高,操作较简便。〔结论〕因我国大部分地区艾滋病长期处于低感染水平,宜采用高灵敏度的试剂,对可疑标本应用高准确试剂进行复测,按规定随访。     

ELISA法与胶体金法检测健康人群抗-HCV的实验研究

〔目的〕为早期发现健康人群丙型肝炎感染状况 ,对漯河市无偿献血人员进行丙型肝炎病毒抗体 (抗 -HCV)检测 ,为安全输血制订丙型肝炎预防措施提供参考依据。〔方法〕采用酶联免疫法 (ELISA)与胶体金法两种方法进行比较。〔结果〕2年 ( 2 0 0 1-2 0 0 2年 )检测献血人员 1682 8人 ,ELISA法阳性 13 3份 ,阳性率 0 .79% ;胶体金法阳性 13 0份 ,阳性率 0 .77%。符合率 97.74% ,二者阳性结果无显著性差异 ( χ2 =0 .0 14 ,P >0 .0 5 )两种方法阴性对照结果一致 ,符合率10 0 %。〔结论〕胶体金法检测抗 -HCV ,具有操作简便 ,观察直观、快速、省时。其特异性、敏感性均达到ELISA水平。可作为筛查无偿献血人员丙型肝炎病毒抗体的重要手段。对丙型肝炎的早期发现 ,预防及控制有重要价值和意义。     

电化学发光免疫分析技术及其临床应用

〔目的〕通过研究电化学发光免疫分析(ECLIA)技术,使其更好的用于出入境传染病筛查。〔方法〕从ECLIA的原理、临床应用、应用前景等方面入手,比较其临床应用的优越性。〔结果〕ECLIA是一种新型的化学发光免疫分析技术,采用了电化学发光技术、生物素—亲和素技术以及磁性微珠包被技术,是一项准确度和灵敏度高、特异性强、检测范围宽、线性良好的全自动快速分析系统。〔结论〕ECLIA现已应用于基础医学研究及临床疾病的诊断和治疗中,在口岸传染病检测方面具有很好的应用前景。     

检测土拉弗朗西斯菌的生物素—亲和素ELISA法的建立

〔目的〕建立一种快速、敏感、特异检测土拉弗朗西斯菌的免疫学方法。〔方法〕应用生物素-亲和素标记系统,建立双抗体夹心ELISA方法,检测土拉弗朗西斯菌,并进行"模拟样品"的检测判定其定量检测能力。〔结果〕建立的生物素—亲和素ELISA检测土拉弗朗西斯菌的方法具有很好的敏感性和特异性,检测FopA蛋白的灵敏度达到6ng/ml;批内变异系数1.96%～6.64%,批间变异系数8.94%～10.02%,重复性好;检测不同浓度马秋波GP2蛋白、天花M1R蛋白、黄热YF-E-D3蛋白、禽流感NP蛋白、登革病毒Deng-E-D3蛋白和普氏立克次体120N蛋白,未发现交叉反应;对"模拟样品"中土拉弗朗西斯菌FopA蛋白的检测回收率为91.7%～125.0%。〔结论〕应用生物化的FopA多抗与酶标亲合素结合,建立了检测土拉弗朗西斯菌的生物素—亲和素放大酶联免疫吸附法(BSA-ELISA),具有较好的灵敏度和特异性,在病原菌的识别、快速检测、应对生物恐怖威胁中具有广阔的应用前景。     

悬浮芯片定量检测鼠疫菌的方法研究

目的利用编码微球悬浮芯片技术,探讨直接从"白色粉末"样品中检测鼠疫菌的可行性,为建立快速、敏感、特异、高通量、同时检测多种生物恐怖因子的技术平台奠定基础。方法用抗体包被编码微球作为反应载体,双抗体夹心法为反应模式,建立鼠疫菌F1抗原悬浮芯片检测方法,对"白色粉末"中的鼠疫耶尔森菌进行检测。通过盲样和标准实验室检测评估对现场样品的适用性。结果建立的定量检测鼠疫菌F1抗原的悬浮芯片方法具有较高的特异性和敏感性,并在0.154～4514ng/ml浓度范围内具有良好的动力学响应特性,比ELISA方法有较高的灵敏度和较宽动态检测范围。结论定量检测鼠疫菌的悬浮芯片方法能快速、敏感、特异地定量检测"白色粉末"中鼠疫菌,在早期识别、快速诊断和应对生物恐怖威胁、传染病暴发中具有广阔的应用前景。     

梅毒实验室初筛与确证方法在产前检查中的合理应用

梅毒的病原体为梅毒螺旋体(Treponema pallidum,TP)即苍白密螺旋体的苍白亚种。梅毒的诊断主要依据病人病史、临床症状和实验室检查结果。梅毒实验室检测方法按目标不同可分为三大类:①检测梅毒病原体及抗原;②检测梅毒“非特异性抗体”(血浆反应素,非梅毒螺旋体抗原试验);③检测梅毒特异性抗体(梅毒螺旋体抗原试验)。目前一般医疗单位将第②类试验中的一种作为初筛试验将第③类试验中的一种作为确证试验,但是由于各种方法的敏感性和特异性局限〔1～4〕,加上梅毒感染机体后的复杂性〔5～10〕(一期梅毒初期机体尚未产生抗体、梅毒活动与潜…     

黑龙江口岸蜱类及其携带病原体状况研究初报

〔目的〕根据目前蜱媒病原的危害情况,从分子流行病学角度探讨可能存在的新发蜱媒传染病及复合感染情况。〔方法〕采集黑龙江11个口岸的蜱,通过病原培养分离,动物试验后进行分子生物学检测。〔结果〕检出5种病原微生物,全沟硬蜱可同时携带这5种病原体,发现了复合感染蜱。〔结论〕黑龙江口岸蜱类及蜱携带病原体情况复杂,引起蜱传疾病的风险巨大。     

400例乙肝表面抗原胶体金试条法与ELISA法检测结果分析

目的对胶体金试纸条与酶联免疫吸附（ELISA）法检测乙肝表面抗原（HBsAg）进行方法学评价,探讨两种方法各自的优缺点,以期提高HBsAg检测的准确性。方法分别用胶体金试纸条与ELISA法同时检测400份血清标本中的HBsAg,对阳性率进行比较,然后将阳性的20份标本做倍比稀释,观察两种检测方法灵敏度的差异。结果两种方法阳性率之间差异无统计学意义,ELISA法灵敏度较胶体金试纸条法高。结论胶体金试纸条与ELISA法均为测定HBsAg的可靠方法。ELISA法适用于常规检测,胶体金试纸条法操作简便、快速,适用于急诊及健康人群的筛查,但灵敏度有待提高。     

安徽口岸出入境人员传染病监测情况分析

〔目的〕了解安徽口岸出入境人员中传染病的发生情况,为制定防止传染病流行的措施提供依据。〔方法〕采集接受传染病监测体检人员血清标本,进行乙型肝炎、梅毒、丙型肝炎、HIV抗体检测;对监测人员进行X射线检查。〔结果〕在8300名进行了传染病监测体检的出入境人员中,共计发现各种传染病535例,总检出率为6.45%。其中HBsAg阳性检出率为6.00%;梅毒阳性检出率为0.12%;HIV抗体阳性检出率为0.12%;丙型肝炎抗体阳性检出率为0.06%;肺结核检出率0.25%。〔结论〕应加强对口岸出入境人群传染病防治知识的宣传教育,提高人们对传染病的认知水平,增强自我保护意识,以达到防止传染病传入传出的目的。     

抗结核菌糖脂抗原抗体及抗阿拉伯甘露糖抗原抗体并联检测在口岸肺结核病快速诊断中的应用

〔目的〕研究抗结核菌糖脂抗原(TBGL)抗体及抗阿拉伯甘露糖抗原(LAM)抗体并联检测在结核病血清学诊断中的价值。〔方法〕采集结核病患者及健康对照者血清,用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测抗TBGL抗体,用胶体金法检测抗LAM抗体。〔结果〕91例结核患者TBGL抗体、LAM抗体总阳性率均为62.6%,其中活动性肺结核病人的TBGL阳性率为65.3%,LAM阳性率为69.4%;非活动性结核病人TBGL阳性率为59.5%,LAM阳性率为54.8%,两组间差异不明显。肺结核病人两抗体并联检测阳性率为89.0%,明显高于单独抗体检测阳性率(P0.05),特异性达85.7%。〔结论〕抗TBGL、LAM抗体并联检测敏感性、特异性高,方法快速简便,对口岸结核病预防控制有较高的实用价值。     

液相蛋白芯片法与BAS-ELISA法检测病原抗体的方法比较

〔目的〕分别建立流感病毒、禽流感病毒、鼠疫耶尔森菌、SARS病毒、结核分支杆菌等发热病原抗体的液相蛋白芯片定量检测方法,比较液相蛋白芯片方法与生物素—亲和素系统（BAS-ELISA）方法的检测能力。〔方法〕用诊断抗原包被编码微球,应用间接法检测模式,建立液相蛋白芯片定量检测病原抗体的方法,用液相蛋白芯片和BAS-ELISA方法检测相当样品并进行比较分析。〔结果〕建立的液相蛋白芯片分别检测流感、禽流感、鼠疫、SARS、结核特异性抗体,最低检测限分别为5.68ng/ml、1.50ng/ml、50.30pg/ml、105.57pg/ml、14.06pg/ml。液相蛋白芯片方法和BSA-ELISA方法的检测性能,在一定浓度范围内,对于相同样品2种方法有很好的相关性。〔结论〕与BAS-ELISA方法相比,液相蛋白芯片检测灵敏度高,动态范围宽,为同时检测多种病原抗体、任意组合检测目标物提供了平台。