肝纤维化病程中Kupffer细胞与HSC的相互关系（综述）

肝纤维化（HF）是诸多慢性肝病共同的病理过程,也是各种慢性肝病向肝硬化转归的中转站。肝星状细胞（HSC）是细胞外基质（ECM）的主要来源,在肝纤维化形成中起关键性作用。枯否细胞（KC）是肝脏内重要的非实质细胞,KC通过分泌一系列细胞因子参与HSC的活化。参与肝纤维化的发生与发展。在肝纤维化的恢复阶段,KC可抑制HSC活性,促进其凋亡从而发挥抗纤维化作用。因此,深入研究Kupffer细胞与HSC的Cross-talk在肝纤维化的发生与发展中的作用和机制,对于临床工作中防治肝脏损伤,提高患者生存率具有实际意义。     

Smad蛋白与肝纤维化

肝星形细胞（HSC）是肝纤维化发生发展的关键细胞，转化生长因子β1（TGF-β1）是促进HSC活化、细胞外基质（ECM）的合成主要因子。在肝纤维化的过程中，TGF-β1-Smad信号转导对HSC的作用非常重要。本文就TGF-βI-Smad信号转导及其调控、Smad与肝纤维化的关系进行阐述。     

瘦素、血管紧张素Ⅱ对肝纤维化作用的研究进展

肝纤维化是指肝脏中细胞外基质中胶原的过量沉积,是慢性肝病发展为肝硬化的共同病理过程。肝星状细胞（HSC）活化导致细胞外基质（ECM）的增加足肝纤维化形成的主要原因。多种细胞因子以及微环境的改变,凋节细胞内信号传导是HSC激活的重要因素。越来越多的研究表明,瘦素和血管紧张素Ⅱ可通过调节细胞内信号传导,从而激活HSC,与肝纤维化进展关系密切。     

神经生长因子与肝纤维化的研究进展

肝星形细胞(HSC)活化是肝纤维化形成的关键因素.目前研究显示,神经生长因子(NGF)可能通过抑制肝脏炎症,诱导活化的HSC凋亡,进而减缓肝纤维化的进展,其作用机制可能包括NGF及其低亲和力受体P75的作用.诱导活化HSC凋亡将是治疗和逆转肝纤维化的理想途径.     

肝纤维化发病机制与治疗进展

细胞外基质(ECM)的合成增加和降解减少是肝纤维化形成的主要机制,肝星形细胞(HSC)活化是肝纤维化形成的细胞学基础.去除病因,抗炎,抑制HSC活性与增殖,刺激活化HSC凋亡,促进ECM降解均为抗肝纤维化治疗的标靶.间充质干细胞移植抗纤维化尚有争议.基质金属蛋白酶(MMP)基因转导系统因可调控性及安全性问题,用于临床尚需时日.该文就肝纤维化发病机制与治疗进展作了综述.     

苦参碱对血小板衍生生长因子介导的大鼠肝星状细胞迁移、增殖和凋亡的影响

目的研究苦参碱对体外培养的肝星状细胞（HSC）迁移、增殖与凋亡的影响,探讨苦参碱抗肝纤维化的作用机制。方法用0.25、0.5mg/ml的苦参碱分别处理肝星状细胞-BB型（HSC-T6）和由血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）干预的HSC-T6,观察HSC的生长情况,采用Transwell小室检测细胞迁移,用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。结果苦参碱0.25mg/ml组和0.5mg/ml组细胞迁移数、吸光度值均低于空白对照组,细胞凋亡率则明显增高;在有PDGF-BB参与的3组中,苦参碱0.25mg/ml组和0.5mg/ml组的细胞迁移率和吸光度值降低,但是细胞凋亡率在3组之间差别无统计学意义。结论苦参碱对单纯激活状态下的HSC迁移、增殖均有较强的抑制作用,并能促进HSC凋亡的发生;苦参碱对PDGF作用下HSC的迁移、增殖有一定的抑制作用,但对此状态下的HSC的凋亡则无明显促进作用。     

Smad蛋白与肝纤维化

肝星形细胞(HSC)是肝纤维化发生发展的关键细胞,转化生长因子β1(TGF-β1)是促进HSC活化、细胞外基质(ECM)的合成主要因子。在肝纤维化的过程中,TGF-β1-Smad信号转导对HSC的作用非常重要。本文就TGF-β1-Smad信号转导及其调控、Smad与肝纤维化的关系进行阐述。     

纤维化淤胆性肝炎肝组织α-SMA及Ⅰ、Ⅲ型胶原的表达

目的了解纤维化淤胆性肝炎（FCH）肝星状细胞（HSC）活化状态及其与肝纤维化的关系。方法肾移植术后乙型肝炎病毒（HBV）相关性FCH患者9例，正常者5例作为对照。用免疫组织化学的方法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白（a—SMA）及Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果FCH肝组织α—SMA与Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白表达显著增加，表达分布部位一致，定量分析呈明显正相关（P〈0．01）。结论肾移植术后HBV相关性FCH患者肝纤维化的发生与HSC的活化状态有关。     

Smad蛋白——肝纤维化时TGF-β1信号转导的关键物质

肝纤维化的发生是由于细胞外基质的合成与降解的失衡造成的,而细胞外基质(ECM)的主要来源就是肝星形细胞(HSC),HSC的活化、增殖、数量增加,从而使细胞外基质的合成增加、降解减少、平衡破坏,是肝纤维化发生发展的关键因素。TGF-β1正是促进HSC活化、ECM合成的主要起始因子,而Smads蛋白是TGF-β超家族最重要的胞内效应分子。在肝纤维化的过程中,TGF-β1/Smad信号转导对HSC的作用非常重要,它在ECM表达调节中的作用是研究肝纤维化的关键。本文就TGF-β1/Smad信号转导与调控、及其在肝纤维化发生发展过程中的作用进行阐述。     

TGF-β1/Smads信号通路与肝纤维化

肝纤维化是肝脏对各种刺激的创伤性愈合,主要表现为细胞外基质的过量沉积.肝星形细胞(HSC)被认为是引起肝纤维化的主要细胞,它的活化受到多种细胞因子的调节.TGF-β1在启动和促进HSC向肌成纤维细胞转化的过程中有着重要作用,是目前已知最重要的敛肝纤维化细胞因子之一.此文就TGF-β1/Smads信号通路在肝纤维化发病机制及其治疗方面的作用进行综述.     

神经生长因子诱导肝星状细胞凋亡及其相关机制的研究

目的观察神经生长因子（nerve growthfactor,NGF）对大鼠肝星状细胞（hepatic stellatecell,HSC）凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法体外培养大鼠肝星状细胞株HSC—T6,将HSC—T6与100ng／mlNGF孵育24h后,流式细胞术检测细胞凋亡;细胞免疫化学法检测HSC中凋亡相关基因P^53、Bcl-2、Caspase-3蛋白表达的情况;免疫荧光法检测NGF、神经生长因子低亲和力受体p75NTR表达的情况。结果NGF作用HSC后凋亡率较对照组明显增高[（22．364±9．51）％VS（5．88±1．36）％,P〈0．05]。凋亡相关蛋白P^53、Caspase-3的阳性细胞百分率与对照组比较明显增高[（78．41±4．00）％、（39．26±1．57）％VS（34．96±3．84）％、（9．27±1．01）％,P〈0．05],而Bcl-2表达实验组阳性细胞百分率较对照组降低[（18．12±1．38）％vs（91．53±2．98）％,P〈0．05]。NGF作用HSC后NGF表达增多（6．53±1．40vs1．77±0．17,P〈0．05）,而p75NTR表达无明显变化（3．52±0．36VS4．24±0．38,P〉0．05）。结论NGF可能通过使凋亡相关基因p、Caspase-3表达上调、Bcl-2表达下调,而诱导HSC凋亡。NGF作用HSC后可作为始动因子和效应因子增加NGF的表达,而对p75NTR表达无影响。     

抗氧化剂对大鼠肝星形细胞增殖和凋亡影响的实验研究

目的　了解膳食维生素E和硒对大鼠肝纤维化恢复期肝星形细胞 (HSC)增殖和凋亡的影响。方法　采用腹腔内注射 5 0 %CCl4 制备大鼠肝纤维化模型 ,在饲料中添加适量维生素E(2 5 0mg kg饲料 )和Se(0 . 2mg kg饲料 )进行营养干预 ,在最后一次注射后 3、7、14、2 8天 (恢复期 )各处死 3只大鼠取其肝组织 ,用HE和Siriusred染色结合图象分析检测肝纤维化指标 ,用α SMA免疫组化方法检测激活的HSC细胞 ,用原位凋亡 (TUNEL)技术和α SMA免疫组化双标染色检测HSC凋亡。结果　在恢复期各时间点 ,病理对照组和抗氧化干预组激活的HSC数量呈逐步下降趋势 ,同时 ,从恢复期第 7d开始 ,HSC凋亡细胞数以及肝组织内的胶原量亦同步下降 ;在同一时间点 ,干预组激活的HSC数量低于病理对照组 ,而HSC凋亡数和凋亡率均高于病理对照组。结论　饲料中添加适量维生素E和硒能减轻肝纤维化的程度 ,并可能使恢复期HSC凋亡增加 ,激活HSC数量减少。     

口山酮抑制肝星状细胞活化作用及其机制研究

目的研究去甲基雏菊叶龙胆酮（DMB）对肝星状细胞（HSC）活化的影响及其机制。方法培养大鼠肝星状细胞株HSC-T6,分别加入1、3或10μM DMB孵育12-48 h。细胞组织化学检测α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）表达;酶联免疫吸附试验测定I型胶原的合成;逆转录PCR检测转化生长因子-β1（TGF-β1）和结缔组织生长因子（CTGF）mRNA水平。结果体外培养的HSC-T6表现为激活状态,表达α-SMA和合成I型胶原。处理DMB能显著降低体外培养的HSC-T6表达α-SMA细胞数目和I型胶原的合成,且呈浓度依赖性。而且,DMB能浓度依赖性降低HSC TGF-β1和CTGF mRNA水平。结论DMB能抑制HSC的活化,其作用与抑制TGF-β1-CTGF促纤维化通路有关。     

Smad蛋白与肝纤维化研究新进展

肝星形细胞(HSCs)是产生细胞外基质(ECM)的主要细胞,ECM堆积可导致肝结构改变和肝功能异常.转化生长因子-β(TGF-β)是促进HSC活化、增殖,合成ECM的关键分子,而Smad蛋白是TGF-β重要的胞内效应蛋白,在肝纤维化信号转导中起着重要作用.此文就Smad与肝纤维化关系及以Smad为靶点的肝纤维化潜在的治疗价值方面进行综述.     

凋亡与肝纤维化

肝细胞和肝星形细胞(hepatic stellate cell,HSC)的凋亡与肝纤维化的形成、发展和减退有关。肝细胞凋亡产生的凋亡小体被吞噬细胞吞噬,且肝细胞凋亡本身可引起或加重炎症,均导致肝纤维化发生;HCS则通过细胞凋亡来减退肝纤维化。因此,肝细胞和肝星形细胞凋亡对肝纤维化有重要作用。     

维生素E对CC14作用下HSC增殖和ECM影响

目的观察维生素E（VE）对四氯化碳（CC14）作用下大鼠肝星状细胞（HSC）增殖和细胞外基质（ECM）产生的影响。方法采用原位灌注方法分离大鼠HSC。结果CC14作用下大鼠HSC3H-脯氨酸（3H-Pro）的掺入显著增加,Ⅲ型前胶原（PCⅢ）、透明质酸（HA）、板层素（LN）及纤维连接素（FN）的分泌水平明显提高。200nmol/LVE预处理4h可有效抑制CC14作用下大鼠HSC^3H-胸腺密啶（^3H-TdR）、^3H-Pro的掺入,VE保护能使CC14作用下HSC分泌PCⅢ、HA、LN和FN减少与HSC产生丙二醛（MDA）下降,二者呈正相关。结论VE可抑制CC14作用下大鼠HSC增殖和通过抗氧化损伤抑制HSCECM的分泌。     

姜黄素对肝星状细胞增殖能力影响

目的 探讨姜黄素对体外培养大鼠肝星状细胞细胞株(CSFSC-2G)增殖能力及细胞外基质分泌的影响.方法 四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度姜黄素(5,10,15,20,40 μmol/L)在不同培养时间作用下肝星状细胞(HSC)的增殖能力;酶联免疫吸附实验法检测不同浓度姜黄素作用下HSC Ⅰ型胶原(Collagen Ⅰ,Col Ⅰ)和Ⅲ型胶原(Collagen Ⅲ,Col Ⅲ)合成及分泌能力;流式细胞术检测姜黄素对HSC凋亡的影响.结果 不同浓度的姜黄素(5,10,15,20,40 μmol/L)均可抑制HSC增殖,并呈现明显剂量依赖关系;含20 μmol/L姜黄素培养基培养24 h后,HSCCol Ⅰ、Col Ⅲ吸光度(A)值分别为(0.418±0.019),(0.554±0.043),均明显低于阴性对照组,差异有统计学意义(P<0.05);含20 μmol/L姜黄素培养基培养48 h后,HSC处于G0/G1期的HSC细胞占(39.98±8.07)%,S期细胞占(55.79±9.13)%,G2/M期细胞占(4.23±0.12)%;凋亡率为(20.31±2.55)%,高于阴性对照组凋亡率(0.22±0.11)%,低于秋水仙素阳性药物对照组凋亡率(29.75±2.64)%,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 姜黄素可抑制HSC细胞的增殖并促进其凋亡,有可能成为防治肝纤维化的理想药物.     

川芎嗪与阿米洛利联用对大鼠肝星状细胞氧应激所致纤维化的抑制作用

目的探讨阿米洛利（Arniloride）与川芎嗪（Ligustrazine）联用对大鼠肝星状细胞（hepaticstellateceils,HSC）氧应激所致纤维化的作用。方法使用FeNTA建立HSC氧应激模型。检测HSC的增殖、I型胶原、丙二醛（MDA）水平、超氧化物歧化酶（SOD）活力;药物对HSC的毒性作用。结果阿米洛利和川芎嗪可以明显抑制HSC增殖,可明显降低MDA和I型胶原的水平和提高SOD活力,且合用组优于单用组。结论作用于HSC不同靶点的抗纤维化药物合用优于单用。     

肝星状细胞中Notch1的表达及其意义

目的研究Notch通路中Notch1在大鼠肝星状细胞(HSC-T6)的表达及其意义。方法细胞免疫组化检测细胞内Notch1的表达并采用MTT、real-time PCR及Western blot等多种技术检测HSC-T6细胞在Notch1沉默后增殖、凋亡和细胞外基质的变化;并利用细胞免疫荧光染色检测α-SMA的表达。结果 Notch1蛋白表达于HSC-T6细胞的胞质并随着HSC活化而增加。与正常组相比,TGF-β1组的细胞表现出Notch通路的激活,即Notch1及其下游分子Hes1的mRNA和蛋白表达量均表达上调;随着Notch1的沉默,MTT结果提示Notch1沉默组的细胞增殖率明显下降,但Western blot结果提示凋亡相关蛋白Caspase3表达量却未改变;同时细胞免疫荧光结果显示α-SMA表达下调且伴有Ⅰ型胶原及Notch下游分子Hes1表达下调,而E-cadherin表达量则明显上调。结论沉默Notch1可抑制TGF-β诱导的肝星状细胞活化,提示Notch1可促进肝纤维化进程。     

硫普罗宁注射液干预大鼠肝星状细胞致肝纤维化形成作用的研究

目的 探讨硫普罗宁注射液抗肝纤维化的作用及其机制。方法 肝星状细胞的分离采用胶原酶循环灌流法。硫普罗宁注射液（25mg／ml、50mg／ml、100mg／ml、200mg／ml、400mg／ml）作用不同时间（24h、48h、72h）后，采用MTT法OD值检测细胞活化增殖情况。硫普罗宁注射液（200mg／m1）作用24h和48h后，流式细胞术检测细胞增殖周期。采用溴乙锭／吖啶橙荧光染色法结合显微镜下形态学观察及流式细胞术检测硫普罗宁注射液对活化的肝星状细胞凋亡的影响。结果 硫普罗宁注射液各浓度组OD值较对照组明显降低（P〈0.05），硫普罗宁注射液200mg／ml组作用24h和48h流式细胞术检测出C2-M期的细胞数均明显高于正常对照组（P〈0．01），硫普罗宁注射液各浓度组荧光染色法和流式细胞术均未检测到肝星状细胞凋亡。结论 硫普罗宁注射液主要是通过抑制肝星状细胞增殖的C2-M期而产生抗肝纤维化作用的。