米诺环素对戊四氮致疒间大鼠海马神经元凋亡的保护作用

目的探讨米诺环素对神经元凋亡的保护作用及与剂量的关系。方法采用戊四氮(PTZ)建立的癫疒间大鼠模型,用灌胃法给不同剂量的米诺环素后麻醉大鼠,灌注取脑进行石蜡切片制备及免疫组化检测,采用HPIAS-1000高清晰度彩色病理图文分析系统进行图像分析,观察大鼠海马区细胞凋亡变化。结果对照组与PTZ组比较,对照组凋亡数目少(P<0.05);MT1组与PTZ组比较,细胞凋亡无差异(P﹥0.05);MT2组与PTZ组比较,MT2组细胞凋亡数少(P<0.05);MT3组与PTZ组比较,MT3组细胞凋亡多(P<0.05)。各干预组之间比较,MT2组细胞凋亡较MT3组、MT1组都少(P<0.05)。结论米诺环素在适当的浓度范围内有神经元保护作用。     

米诺环素对实验性自身免疫性脑脊髓炎大鼠凋亡相关蛋白表达的影响

目的 探讨米诺环素对实验性自身免疫性脑脊髓炎(experimental autoimmune encephalomyelitis,EAE)大鼠CNS内Fas和Bcl-2蛋白表达的影响.方法 将大鼠随机分为3组,并以豚鼠全脊髓匀浆(guinea pig spinal cord homogenate,GPSCH)为抗原免疫建立EAE模型.治疗组给予米诺环素,而对照组和模型组给予生理盐水灌胃;免疫组化检测Fas和Bcl-2的表达.结果 Fas的表达各组平均光密度和阳性细胞数模型组高于治疗组(P<0.05);Bcl-2的表达除脑干阳性细胞数外,平均光密度及细胞数治疗组高于模型组,对照组低于模型组(P<0.05).结论 米诺环素可能通过介导Fas和Bcl-2的表达,干预凋亡调节免疫反应对EAE起治疗作用.     

米诺环素对癫痫大鼠海马小胶质细胞的抑制作用

目的探讨米诺环素对癫痫大鼠海马小胶质细胞的抑制作用。 方法将40只雄性SD大鼠按随机数字表法分为4组：生理盐水组、青霉素组、米诺环素治疗组和米诺环素预处理组,每组各10只。大鼠腹腔注射青霉素G 740万～760万单位/kg以建立大鼠癫痫模型。免疫荧光组织化学技术检测大鼠造模后第1、3天海马小胶质细胞免疫反应性,Western blotting检测海马肿瘤生长因子-α(TNF-α)蛋白表达情况。 结果(1)癫痫发作可激活小胶质细胞。与青霉素组比较,大鼠癫痫发作后第1、3天米诺环素治疗组、米诺环素预处理组海马小胶质细胞活化、增生受抑制,差异均有统计学意义（P≤0.05）,且米诺环素预处理组抑制性更突出。(2)大鼠癫痫发作后第1、3天青霉索组、米诺环素治疗组、米诺环素预处理组TNF-α蛋白表达水平明显高于生理盐水组,差异均有统计学意义(P≤0.05);与青霉素组比较,米诺环素治疗组、米诺环素预处理组TNF-α蛋白表达水平降低,差异均有统计学意义(P≤0.05),且以米诺环素预处理组更明显。 结论米诺环素可有效抑制癫痫大鼠海马小胶质细胞活化、增生和炎症因子TNF-α的释放。     

糖尿病大鼠海马内PAI-1的变化及米诺环素对其的影响

目的 探讨纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)在2型糖尿病大鼠海马中的表达情况以及米诺环素对PAl.1表达的影响.方法 高糖高脂饮食加小剂量链脲佐菌素造2型糖尿病模型,将SD大鼠随机分为正常组、糖尿病模型组、米诺环素治疗组,造模成功1周后,米诺环素组每天腹腔注射米诺环素45mg/kg,糖尿病模型组和正常组腹腔注射等量的牛理盐水,连续给药2周,然后取大鼠海马组织,免疫组化检测各组大鼠海马中PAI-1的表达.结果 免疫组化结果分析示正常组、糖尿病组、米诺环素组阳性神经元的平均光密度值(MOD值)分别为0.109±0.007、0.195±0.009、0.161±0.012,与正常组比较,糖尿病组和米诺环素组PAI-1表达的差异均有统计学意义(P＜0.01),糖尿病组和米诺环素组比较差异也有统计学意义(P＜0.01).结论 2型糖尿病大鼠海马神经元内PAI-1的表达异常增高,米诺环素可减少大鼠海马神经元内PAI-1的表达,这可能是米诺环素保护糖尿病认知功能障碍的机制之一.     

低剂量米诺环素对脑缺血再灌注大鼠RGMa表达的影响

目的探讨静脉用低剂量米诺环素对大鼠脑缺血再灌注损伤后神经功能恢复及排斥性导向分子(repulsive guidance molecule A,RGMa)表达的影响。方法成年雄性Sprague-Dawley大鼠54只,随机分为假手术组,缺血再灌注组和米诺环素组。采用大脑中动脉线栓法制作局灶性脑缺血再灌注模型。再灌注第2周,分别采用免疫组织化学及Western blot法检测缺血脑组织内RGMa及生长相关蛋白-43(growth associated pro-tein-43,GAP-43)蛋白的表达。缺血再灌注第2、7、14和28天,采用改良的神经功能缺损评分(modified neu-rological severity score,m NSS)及楼梯实验(staircase test)评估大鼠神经功能。结果同缺血再灌注组相比,低剂量米诺环素使缺血侧大脑皮层RGMa蛋白表达降低(0.53±0.08 vs.1.17±0.15,P0.05),GAP-43蛋白表达明显增高(0.94±0.10 vs.0.57±0.09,P0.05),大鼠m NSS评分显著下降并改善大鼠的前肢运动功能(P0.05)。结论静脉用低剂量米诺环素(3 mg/kg)能促进大鼠缺血再灌注损伤后神经功能的恢复,其机制可能与下调RG-Ma蛋白及上调轴突再生相关蛋白GAP-43的表达有关。     

神经生长因子对红藻氨酸诱导癫痫发作大鼠海马神经细胞凋亡的影响

目的　探讨外源性神经生长因子 (NGF)对癫痫发作所致海马神经细胞凋亡有无抑制作用。方法　采用红藻氨酸 (KA)诱导癫痫大鼠模型 ,以原位末端标记法 (TUNEL)标记 DNA片段 ,检测凋亡细胞在大鼠海马CA1区的动态变化及 NGF对其的影响。结果　海马 CA1区凋亡细胞在实验 2 4 h出现 ,4 8h明显增多 ,于 72h达高峰 ,7d时最少。给予 NGF脑室内注射后 ,在各相应时间点凋亡细胞数均明显减少 (P<0 .0 1)。结论　外源性 NGF能抑制癫痫发作所致的海马神经细胞凋亡 ,NGF对癫痫脑损伤有保护作用。     

米诺环素对脑积水大鼠星形细胞增生的影响

目的 研究米诺环素对脑积水大鼠星形细胞增生的影响.方法 成年雄性SD大鼠100只,应用显微外科技术向枕大池内注入25％无菌高岭土混悬液0.1ml诱导脑积水.取75只造模成功大鼠随机分为实验组和对照组,实验组再分为5个亚组(3、7、14、21、28 d),每个亚组10只,配对对照组5只大鼠.分别于术后3、7、14、21和28 d行MRI检查.实验组给予米诺环素,对照组给予等量生理盐水.Morris水迷宫实验后取脑组织行苏木精-伊红染色、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)免疫组化检查.结果 不同时间组脑积水大鼠室周白质和海马中均出现GFAP阳性星形细胞.实验组脑积水大鼠GFAP阳性星形细胞数目明显少于对照组(均P ＜0.01).两组Morris水迷宫实验差异无统计学意义(P＞0.05).结论 米诺环素对脑积水大鼠室周白质和海马星形细胞活化增生具有抑制作用.     

米诺环素对大鼠脊髓挤压伤后运动功能恢复的影响

目的探讨米诺环素对大鼠脊髓挤压伤后运动功能恢复的影响。方法成年Sprague-Dawley(SD)大鼠36只,分为空白对照组:只打开脊柱椎板,不损伤脊髓;米诺环素治疗组:制作脊髓挤压伤模型,腹腔注射米诺环素;盐水对照组:制作脊髓挤压伤模型,腹腔注射等剂量的生理盐水。于脊髓挤压伤后第3天取大鼠脊髓标本,进行组织水肿、损伤面积的测量,并行组织切片,进行细胞凋亡Caspase-3染色,观察细胞凋亡情况。同时于各个时间点进行大鼠后肢运动功能评分(basso-beattie-bresnahan,BBB评分)。结果与生理盐水组比较,米诺环素治疗组损伤面积更小,细胞凋亡数量更少,组织水肿更轻,运动功能恢复更好。结论米诺环素可以促进大鼠脊髓挤压伤后运动功能的恢复。     

辛醇预处理对红藻氨酸诱导的癫疒间大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的观察缝隙连接阻断剂辛醇预处理对红藻氨酸(KA)诱导的癫疒间大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响。方法 160只雄性SD大鼠随机分为KA组、辛醇组、生理盐水(NS)组和二甲基亚砜(DMSO)组,应用KA右侧杏仁核注射制作癫疒间大鼠模型;制模前30 min辛醇组腹腔注射辛醇溶液;制模后3 h、6 h、12 h、24 h和7 d应用原位末端标记(TUNEL)法和免疫组化染色法分别检测各组大鼠海马CA3区TUNEL和GFAP阳性细胞数。结果 KA组制模后6 h海马CA3区有TUNEL阳性细胞表达,并逐渐增多,7 d达高峰;辛醇组制模后在6 h～7 d TUNEL阳性细胞数明显少于KA组(均P<0.01);KA组海马CA3区GFAP阳性细胞数随时间而逐渐增多,各时间点明显多于辛醇组(均P<0.01)。结论辛醇神经保护作用的机制可能与抑制细胞缝隙连接间通讯,切断凋亡信号传播,以减少神经元凋亡有关。     

辛醇预处理对红藻氨酸诱导的癫(癎)大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白表达的影响

目的 观察缝隙连接阻断剂辛醇预处理对红藻氨酸(KA)诱导的癫(癎)大鼠海马神经元凋亡和胶质纤维酸性蛋白(GFAP)表达的影响.方法 160只雄性SD大鼠随机分为KA组、辛醇组、生理盐水(NS)组和二甲基亚砜(DMSO)组,应用KA右侧杏仁核注射制作癫(癎)大鼠模型;制模前30 min辛醇组腹腔注射辛醇溶液;制模后3h、6h、12 h、24 h和7d应用原位末端标记(TUNEL)法和免疫组化染色法分别检测各组大鼠海马CA3区TUNEL和GFAP阳性细胞数.结果 KA组制模后6h海马CA3区有TUNEL阳性细胞表达,并逐渐增多,7d达高峰;辛醇组制模后在6 h～7 d TUNEL阳性细胞数明显少于KA组(均P＜0.01);KA组海马CA3区GFAP阳性细胞数随时间而逐渐增多,各时间点明显多于辛醇组(均P＜0.01).结论 辛醇神经保护作用的机制可能与抑制细胞缝隙连接间通讯,切断凋亡信号传播,以减少神经元凋亡有关.     

杏仁核内注射KA诱导的边缘叶发作大鼠海马中caspase-9的表达

目的 :红藻氨酸 (kainicacid ,KA)诱导的大鼠边缘叶发作模型 ,检测半胱氨酸天冬酶 9(caspase 9)在癫大鼠海马神经元表达。方法 :立体定位杏仁核注射KA诱导癫发作 ,以持续记录脑电、局部脑血流 (regionalcerebralbloodflow ,r CBF) ,用TUNEL染色和cresylviolet染色观察海马神经元存活和凋亡 ;用免疫荧光和Westernblot检测海马caspase 9的表达。结果 :发作终止 4h时caspase 9出现裂解片段 ,8h时出现TUNEL阳性细胞 ,2 4h时达高峰。脑室内注射caspase 9抑制剂z LEHD fluoromethylketone(z LEHD fmk)可减少TUNEL阳性细胞 ,增加存活神经元 ;发作后在KA注射同侧海马的CA3区神经元caspase 9免疫反应性增强 ;对侧海马未见TUNEL阳性细胞及caspase 9的上述变化。发作前后r CBF无明显变化。结论 :癫发作可诱导caspase 9的激活。caspase 9可能是癫潜在的治疗靶点。     

红藻氨酸诱导的大鼠癫痫模型中海马神经元caspase-9活性的变化

目的 :观察红藻氨酸 (kainicacid ,KA)诱导的癫大鼠海马神经元caspase 9活性的变化。方法 :应用KA腹腔注射诱导大鼠癫模型 ,检测癫大鼠海马神经元caspase 9的活性。caspase 9活性的测定采用荧光底物分析法。结果 :注射KA后 1h大鼠海马神经元caspase 9活性开始升高 ,但与对照组相比 ,无统计学差异 ;注射KA后 3h大鼠海马神经元caspase 9活性达到高峰 ,与对照组相比P <0 0 5 ;然后开始下降 ,于注射KA后 12h接近于正常对照组水平。结论 :在KA腹腔注射诱导的大鼠癫模型中 ,海马神经元caspase 9活性仅在早期表达升高 ,提示caspase 9活性升高可能启动了癫大鼠海马神经元的损伤     

红藻氨酸致痫大鼠海马突触素的表达变化及辛醇的干预作用

目的 观察红藻氨酸(kainic acid,KA)致痫大鼠海马突触素(synaptophysin,SYP)表达的动态变化及辛醇的干预作用.方法 将65只健康雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、辛醇干预组、二甲基亚砜(DMSO)组,空白对照组5只,余各组20只.采用KA注射于大鼠右侧杏仁核方法制备癫痫模型.造模前30 min给予大鼠腹腔注射辛醇进行干预,并观察辛醇干预前后大鼠行为学改变,采用免疫组化检测造模后不同时间点海马区SYP的表达水平.结果 辛醇干预组大鼠出现湿狗样摇动(WDS)的潜伏期明显长于模型组(P＜0.01),Patel评分显著低于模型组(P＜0.01);模型组大鼠海马区SYP的表达于造模后1周逐渐升高,3周时达高峰,4周后开始下降;辛醇组大鼠海马区SYP的表达在各时间点均明显低于模型组(P＜0.01).结论 辛醇可抑制KA致痫后大鼠海马区SYP表达的增高,具有明显的抗痫效应,提示辛醇抗痫机制可能与抑制SYP表达有关.     

托吡酯对癫痫大鼠海马细胞外液氨基酸和神经元凋亡的影响

目的研究托吡酯对癫癎大鼠海马区细胞外液氨基酸和神经元凋亡的影响.方法采用戊四氮(PTZ)致癎模型,大鼠癫癎发作后连续给予托吡酯(TPM)80 mg·kg-1·d-1和卡马西平40 mg·kg-1·d-1,共14 d.以TUNEL方法标记DNA片段,原位检测海马凋亡的神经细胞.脑内微透析技术采集大鼠海马细胞外液,反相高效液相色谱技术测定氨基酸类神经递质的含量.结果TPM组、卡马西平组与对照组比较,凋亡细胞数存在显著差异(P＜0.001),TPM组与卡马西平组相比无显著差异(P＞0.05).TPM可明显升高海马细胞外液γ-氨基丁酸(GABA)水平,并降低谷氨酸(Glu)浓度.结论TPM可减轻大鼠癫癎发作后的神经元损伤,这种作用可能是氨基酸变化的结果;但在我们的实验中,没有发现TPM对癫癎后脑损伤比卡马西平有更明显的神经保护作用.     

雌激素影响海人酸杏仁核点燃大鼠癫(癎)发作机制的初步探讨

目的:探讨雌激素(E)和姜黄素(C)影响癫发作的机制。方法:用E和C单独及联用连续处理去势雌性大鼠5d,第6天以海人酸(KA)杏仁核点燃法制备癫大鼠模型,观察大鼠癫发作的行为学表现,用免疫组化方法检测海马组织c-Jun蛋白的表达。结果:E加C组(EC KA组)大鼠癫重度发作的严重程度较E组(E KA组)明显减轻(P<0.05)。E KA组海马中c-Jun蛋白表达最多,C组(C KA组)及对照组(KA组)均表达较少且没有任何差异;EC KA组海马的CA1区c-Jun蛋白表达较E KA组明显减少(P<0.05)。结论:C能一定程度上减轻E引起的癫发作加重,它可能通过抑制c-Jun/核转录因子激活蛋白-1(activate-protein1,AP-1)活性,使E作用的AP-1通路受阻,从而减轻了E的促神经元兴奋作用。     

红藻氨酸诱导大鼠癫痫发作的电生理机制研究

目的　探讨红藻氨酸 ( KA)诱导大鼠复杂部分性癫痫发作的 EEG特点以及可能的电生理起搏点位置。方法　在立体定位指引下 ,将 EEG记录电极植入 1 2只大鼠双侧海马、额叶皮质或杏仁核中 ,其中 8只为实验组 ,4只为对照组。手术后 1周在大鼠清醒状态下 ,连续描记 KA或盐水注射后 EEG 1 2 0 min,观察 EEG波形、波幅以及频率的变化特点并记录每次电发作的起搏点位置。结果　 ( 1 ) KA注射后大鼠 EEG表现出多种形式的放电波形 ,典型波形有单棘波、多棘波、多相棘波、正相棘波、棘节律、节律性慢波、棘慢波等。 ( 2 )大鼠在凝视发作以及自动症发作时海马、杏仁核和额叶皮质均有异常放电。 ( 3) KA注射后大鼠电发作起搏点不固定。 ( 4 )各导放电频率多数情况下一致 ,偶有不一致现象。 ( 5 )存在亚临床放电。结论　 ( 1 ) KA注射后大鼠 EEG表现为多种形式的电发作活动 ;( 2 )大鼠在复杂部分性发作过程中不仅有边缘系统参与 ,也有边缘外额叶皮质参与 ;( 3)KA模型中 ,电发作起搏点不固定 ,KA注射后大鼠脑内可能存在一个异常的神经元网络 ,在网络中存在放电不均衡现象。     

戊四氮所致慢性癫癎大鼠海马神经元选择性凋亡的研究

目的 :探讨选择性凋亡在戊四氮所致慢性癫疒间形成中的作用。方法 :采用免疫组化及原位末端标记双标技术观察海马γ 氨基丁酸 (GABA)能神经元、谷氨酸 (Glu)能神经元各自凋亡情况。结果 :GABA能神经元凋亡数明显高于Glu能神经元凋亡数 ,两者比较有显著性差异。结论 :在癫形成期间脑内可能通过某种机制引发了细胞程序性死亡过程 ,选择性地引起GABA能神经元凋亡占优势 ,打破了兴奋与抑制性神经递质之间的平衡 ,从而促发癫     

活化素A对致痫小鼠行为、脑电及海马神经元损伤的影响

目的观察重组人活化素A(rhACT)对匹鲁卡品(PC)致癎小鼠行为、脑电及海马神经元损伤的影响.方法利用脑立体定位手段将rhACT注入侧脑室,1 h后腹腔注射PC.采用发作程度评分、脑电记录观察rhACT对癫癎发作与放电的影响;利用尼氏染色及组织原位凋亡检测观察rhACT对注射PC后24及48h海马神经元损伤的影响.结果预先脑室注射rhACT后PC诱导的癫癎发作显著减轻,癎样放电明显受抑制;24及48h海马神经元未见明显损害.结论rhACT可能有抗K诱导的癫癎发作及保护海马神经元的作用.     

Endogenous BDNF Protein Is Increased in Adult Rat Hippocampus after a Kainic Acid Induced Excitotoxic Insult but Exogenous BDNF Is Not Neuroprotective

Systemic administration of the excitotoxin kainic acid to adult rats results in a well defined pattern of loss of the CA1 and CA3 pyramidal neurons of the hippocampus. Prior to this neuronal loss, brain-derived neurotrophic factor (BDNF) mRNA is substantially increased. We show here that BDNF protein is increased after excitotoxic insult in specific areas of the hippocampus, reaching maximal levels 24 h after the insult. BDNF protein levels in the hippocampus increase in direct relation to the severity of seizure. Up to 7 days after injection of kainic acid, levels of full-length Trk B protein were unchanged, whereas levels of truncated TrkB protein were significantly increased by 12 h. To determine whether elevations in BDNF protein levels are potentially beneficial to hippocampal neurons exposed to an excitotoxic stress, we infused exogenous BDNF prior to and during the period of neuronal death caused by kainic acid. We find that administration of high levels of exogenous BDNF does not affect severity of seizure, but does in fact, exacerbate the injury caused by kainic acid, specifically to CA3 pyramidal neurons. Although there was a trend toward sparing of CA1 pyramidal neurons on the side infused with BDNF, this was not significant. In the same paradigm, infusion of exogenous NT-3 had no effect.     

海人藻酸致痫大鼠海马Caspase-3酶活性变化

目的：检测KA致痫后鼠海马Caspase-3酶活性动态变化。方法：运用FIENA法特异性体外检测Caspase-3的活性，结果：KA致痫后6h，鼠海马即有Caspase-3活性显增高，一周内保持高水平，10天开始下降，而正常鼠海马几乎无活性Caspase-3检出。结论：Caspase-3参与癫痫后神经细胞的凋亡损害，特异性Caspase-3酶抑制剂能预防癫痫后凋亡的发生。