柠檬醛抑制急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖并诱导其凋亡的作用

目的 探讨柠檬醛(citral)对急性早幼粒细胞白血病(APL)细胞株NB4的生长抑制及诱导凋亡作用.方法 采用CCK-8比色法检测citrall对细胞生长的抑制作用;光学显微镜观察citral作用后细胞形态的变化;DNA Ladder检测药物作用后NB4-细胞有无断裂DNA;应用流式细胞术(FCM)检测不同浓度citral作用后细胞凋亡的比例.结果 Citral对NB4细胞的生长抑制作用呈现时间和剂量依赖性.NB4细胞经10～20 μg/ml citral作用16 h后,细胞呈现典型的凋亡形态特征,光学显微镜下可见凋亡细胞胞体固缩、核固缩、核碎裂及凋亡小体;流式细胞术结果 表明,细胞凋亡率在citral作用16 h时随着药物浓度的增加而逐步增高.结论 Citral抑制NB4细胞增殖呈时间和剂量依赖性,并诱导NB4细胞凋亡.     

小檗胺诱导白血病细胞株NB4细胞凋亡及其机制的研究

目的：探讨小檗胺对白血病细胞系NB4生长的影响及其机制。方法：体外培养人白血病细胞株NB4细胞，经不同浓度小檗胺处理不同时间后，MTT法检测药物对NB4细胞的抑制作用；细胞形态学观察和DNA琼脂糖电泳检测细胞凋亡；流式细胞仪检测DNA含量及细胞周期；巢式PCR及RT-PCR检测PML／RARα融合基因及Survivin基因表达及流式细胞仪检测Caspase3阳性表达率。结果：经不同浓度小檗胺处理不同时间后，NB4细胞生长出现明显的抑制，并呈现明显的时间剂量依赖性，48h IC50为3．860μg／ml；细胞形态学观察可见细胞凋亡现象，DNA琼脂糖电泳显示典型的凋亡梯形图；流式细胞仪检测发现细胞凋亡率明显增加，经48h作用后，凋亡率从2．83％增至12μg／ml时的58．44％；虽未发现药物作用后PML／RARα基因表达量的改变，但检测到NB4细胞经药物作用后Survivin基因表达量的减少和Caspase3表达的增加，Caspase3阳性率从对照组的2．06％增至12μg／ml时的70．89％。经相关性分析，随着细胞Survivin表达水平的下降和Caspase3表达水平的增高，NB4细胞凋亡率相应地增高。结论：小檗胺对NB4细胞有增殖抑制作用，诱导细胞凋亡可能是其抗肿瘤作用的重要机制之一，但不是通过作用于NB4细胞特异性融合基因PML／RARα发挥作用的，其抗凋亡的可能分子机制之一是抑制Survivin基因的表达和增加Caspase3的表达。     

柠檬醛诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡机制的研究

目的探讨柠檬醛诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4凋亡的机制。方法不同浓度的柠檬醛处理NB4细胞48 h后,RT-PCR法检测凋亡相关基因Bcl-2及Bax的mRNA表达变化,流式细胞仪检测细胞caspase-3及核因子kappaB(NF-κB)表达的变化。结果随着柠檬醛浓度增加,RT-PCR结果显示受测细胞的Bax mRNA表达增强,Bcl-2mRNA表达减弱;流式细胞仪检测结果显示受测细胞的caspase-3表达增加,NF-κB表达下降。结论降低NF-κB、Bcl-2表达及促进Bax、caspase-3表达可能是柠檬醛诱导NB4细胞株凋亡的机制之一。     

RNA干扰对NB4细胞凋亡的影响

目的:探讨靶向PML-RARαmRNA的siRNAs对急性早幼粒白血病NB4细胞株凋亡的影响。方法:体外培养人白血病细胞株NB4细胞,以不同浓度的siRNAs分别转染细胞,MTT法检测siR-NAs对NB4细胞的抑制作用,细胞形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡。结果:siRNA转染NB4细胞后,对细胞的增殖有明显的抑制,siRNA1244的24hIC50为46.578nM;细胞形态学观察可见明显的细胞凋亡现象,流式细胞仪检测也证明转染siRNA后细胞凋亡率增加,转染50nM siRNA1244的NB4细胞,24h后凋亡率从4.29%增至59.35%。结论:siRNA1244诱导NB4细胞凋亡效果最为明显,并且与抑制细胞增殖的效应一致,具有抗急性早幼粒细胞白血病效应,它的作用分子机制很可能是下调PML-RARα基因的表达而抑制增殖并诱导凋亡。     

尿多酸肽诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株凋亡的实验研究

目的探讨尿多酸肽(CDA-Ⅱ)对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)细胞NB4及耐维甲酸的NB4-R1细胞的凋亡作用。方法以NB4和NB4-R1细胞作为体外模型,观察CDA-Ⅱ作用前后细胞的形态和生长增殖情况。流式细胞术检测细胞凋亡特征。Western印迹法检测凋亡调控蛋白蛋白激酶C(PKCδ)及Caspase-3的水解活化。结果 CDA-Ⅱ作用于NB4和NB4-R1细胞后,细胞生长受到抑制;形态上观察到分化和凋亡现象;Annexin V-PI法发现,用药24 h后NB4和NB4-R1细胞凋亡比例分别上升至(58.7±3.1)%和(87.8±0.5)%;PKCδ和Caspase-3水解活化。结论 CDA-Ⅱ作用于细胞后,水解活化Caspase-3,裂解PKCδ生成活性片段,诱导细胞凋亡。     

齐墩果酸对体外培养的人白血病NB4细胞增殖的影响

目的用体外培养法探讨齐墩果酸（oleanolic acid,OA）对人急性早幼粒细胞白血病NB4细胞生长的抑制作用。方法 40、60、80和100μmol.L-1的OA分别处理体外培养的人白血病NB4细胞24、48和72小时后,MTT法检测OA对NB4细胞增殖的影响。结果 OA在体外具有明显的细胞毒性,可抑制NB4细胞增殖,且呈现时间和剂量依赖性。结论 OA在体外可有效抑制人白血病NB4细胞的生长。     

氧化砷诱导早幼粒细胞白血病细胞凋亡的体内研究

细胞凋亡已成为当前肿瘤研究的热点之一［１］,氧化砷和硫化砷等砷化合物治疗急性早幼粒细胞白血病（ＡＰＬ）为促进凋亡治疗恶性肿瘤这一新的治疗途径提供了成功的范例［２］。我院自１９９４年１２月起应用三氧化二砷（Ａｓ２Ｏ３）治疗了３６例ＡＰＬ复发的患者,其中...     

淫羊藿苷对NB4白血病细胞株增殖和凋亡的影响及其作用机制

目的:研究淫羊藿苷(ICA)对急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株增殖和凋亡的影响,探讨其作用机制。方法:选取处于对数生长期的 NB4细胞,随机分为空白对照组和不同浓度(4、8、16、32和64 μmol·L^-1)ICA组,采用MTT法检测作用不同时间(24、48和72h)后各组 NB4细胞增殖活性,流式细胞术检测各组细胞24h时细胞周期进程及48h时凋亡情况,采用Western blotting法检测各组NB4细胞48h时凋亡相关蛋白的表达水平。结果:细胞培养不同时间(24、48和72h)后,各ICA组细胞增殖抑制率高于空白对照组(P<0.05),随ICA浓度增加和作用时间延长,细胞增殖抑制率升高(P<0.05)。各浓度ICA(4、8、16、32和64μmol·L^-1)组NB4细胞48 h后细胞凋亡率分别为(6.52±4.12)%、(10.07±2.36)%、(15.41±3.64)%、(25.18±1.24)%和(29.41±1.43)%,与空白对照组[(2.39±1.87)%]比较差异均有统计学意义(P< 0.05)。各浓度ICA(8、16、32和64μmol·L^-1)组NB4细胞24 h后 S期NB4细胞百分率降低,G₁期细胞百分率升高,与空白对照组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。Western blotting 检测,与空白对照组比较,各浓度ICA组NB4细胞Bcl-2蛋白表达水平明显降低(P<0.05),而Bax蛋白表达水平明显升高(P<0.05)。结论:ICA通过抑制Bcl-2蛋白表达水平和上调Bax蛋白表达水平诱导急性早幼粒细胞白血病NB4细胞株凋亡。     

葛根提取物诱导急性非淋巴细胞性白血病细胞凋亡的实验研究

为了探讨葛根提取物诱导白血病细胞凋亡的作用及机制。以１８例急性非淋巴细胞性白血病（ＡＮＬＬ）患者骨髓及ＨＬ－６０细胞分别与葛根提取物、高三尖杉酯碱（ＨＨＴ）、阿糖胞苷（Ａｒａ－ｃ）及ＨＡ（ＨＨＴ＋Ａｒａ－ｃ）共同培养２４ｈ,应用细胞形态学、ＤＮＡ凝胶电泳、ＤＮＡ片段百分率测定等观察以上处理对白血病细胞凋亡的影响;对其中１０例处理前后的骨髓细胞用免疫组化法进行ｂｃｌ－２、ｃ－ｍｙｃ（Ｂ细胞淋巴瘤／白     

丹参酮与三氧化二砷协同诱导NB4细胞株分化的体外研究

目的评估丹参酮ⅡA（Tanshinone ⅡA,Tan ⅡA）与三氧化二砷（As2O3）联合应用对急性早幼粒细胞白血病（NB4）细胞增殖、分化的效应。方法以不同浓度的As2O3、Tan ⅡA单独及联合作用于NB。细胞,观察细胞的生长状况、形态学改变,用流式细胞术（FCM）检测细胞膜表面CD11b,分析NB4细胞的增殖、分化情况。结果TanⅡA、As2O3单独均能抑制NB4细胞生长,以1．0μmol·L^-1 As2O3作用更显著,两药联合应用可增强对NB。细胞增殖的抑制作用;经Tan ⅡA处理的NB4细胞,其形态改变更多显示一定程度的成熟粒细胞的特征;NB4细胞表面CD11b检测显示Tan ⅡA的诱导分化能力更强,以0．5μg·mL^-1组为著,联合应用As2O3可拮抗其诱导分化能力,相反TanⅡA则可促进As2O3对NB4细胞的诱导分化作用。结论两药对NB4细胞均有增殖抑制作用,且具有协同效应;两药对NB4细胞诱导分化作用表现为：As2O3可以拮抗Tan ⅡA对NB4细胞的诱导分化能力,而Tan ⅡA则促进As2O3对NB4细胞的诱导分化作用。     

中药518对人白血病细胞K562、NB4作用研究

目的 研究中药518地K62、NB4细胞的作用;并比较518A、518B药效。方法 用台盼蓝染色、光镜观察、流式细胞仪方法,观察518A、518B处理K562、NB4细胞后形态学、生化指标的改变。结果 台盼蓝染色法证实518A、518B对K562、NB4细胞有抑制作用,抑帛率与药物浓度正相关;光镜下可见给药后细胞形态学改变;流式细胞仪检测显示中药518对K562细胞作用48h后出现凋亡峰。结论 518A、518B对K562、NB4细胞有抑制增殖作用,诱导K562细胞凋亡,518A药效优于518B。     

冬凌草甲素对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其机制

目的探讨冬凌草甲素对白血病NB 4细胞的诱导凋亡作用及其机制。方法以不同质量浓度(8、16、24和32μm o l/L)的冬凌草甲素作用于体外培养的NB 4细胞。应用四氮唑蓝(M TT)比色法检测细胞生长抑制率,流式细胞术(FCM)检测细胞凋亡率;采用Hoechst 33258荧光染色法和琼脂糖凝胶电泳观察细胞凋亡;采用蛋白印迹(W estern b lot)和比色法测定细胞凋亡前后caspase-3表达水平及其活性的变化。结果冬凌草甲素(16μm o l/L以上浓度)对白血病NB 4细胞具有显著的增殖抑制及诱导凋亡作用,并且呈现出一定的时间-效应和剂量-效应关系。Hoechst 33258荧光染色观察到典型的核浓缩、核碎裂等细胞凋亡的形态学变化,琼脂糖凝胶电泳观察到细胞凋亡时的DNA“梯形”条带;W estern b lot检测结果表明32 kD a的caspase-3酶原被激活,出现20 kD a的亚单位活化片段,同时在细胞凋亡过程中,caspase-3活性显著增高。结论冬凌草甲素能够通过激活caspase-3的表达而诱导NB 4细胞发生凋亡,可为冬凌草甲素进一步应用于临床治疗急性白血病提供实验依据。     

PPARγ激动剂对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其作用机制

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)激动剂罗格列酮(rosiglitazone,RGZ)对白血病NB4细胞的诱导凋亡作用及其作用机制。方法以不同浓度的RGZ作用于体外培养的NB4细胞0、24、48及72h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,用Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡,并对细胞凋亡前后P53蛋白的表达水平进行检测。结果RGZ可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系,在细胞凋亡的同时,P53蛋白的表达水平明显升高。结论PPARγ激动剂RGZ能显著抑制NB4细胞的生长并诱导细胞发生凋亡,升高促凋亡蛋白P53的表达水平可能是RGZ诱导NB4细胞发生凋亡的重要作用机制之一。     

不同锑剂对早幼粒细胞白血病凋亡诱导作用比较

目的：通过不同锑剂对早幼粒白血病细胞株NB4细胞的凋亡诱导作用的比较，力求找到有效治疗早幼粒细胞白血病锑剂药物。方法：采用细胞生长曲线、形态学及NBT（硝基四氮唑蓝）还原试验判定NB4细胞的生长、分化及功能；细胞周期分析和DNA电泳研究细胞凋亡。结果：三价锑剂能够诱导早幼粒白血病细胞凋亡，且具有时间剂量依赖性，而五价锑剂对早幼粒白血病细胞没有凋亡诱导作用。结论：三价锑剂能够有效地诱导早幼粒白血病细胞凋亡，提示酒石酸锑钾作为临床治疗寄生虫病有效药物，可以老药新用，有望用于临床治疗早幼粒细胞白血病。     

三种维甲酸同分异构体对急性早幼粒细胞白血病细胞株NB4增殖及…

研究了三种维甲酸同分异构体，即全反式维甲酸、９顺式维甲酸和１３顺式维甲酸在体外对人急性早幼粒细胞白血病细胞株ＮＢ４细胞的增殖和分化作用。形态学、细胞生长曲线、细胞周期动力学、细胞膜表面分化抗原、硝基蓝四唑试验等多参数研究的结果表明，维甲酸诱导细胞分化早期伴有细胞的增殖；ＡＴＲＡ诱导ＮＢ４细胞分化的效应优于１３ＣＲＡ，而９Ｃ－ＲＡ又优于ＡＴＲＡ。     

丹参酮A与全反式维甲酸协同诱导急性早幼粒细胞白血病细胞株的分化和凋亡

目的　研究丹参酮 A(Tanshinone A,Tan A)联合全反式维甲酸 (ATRA)对早幼粒细胞白血病细胞 (NB4 )诱导分化及凋亡的协同效应。方法　 0 .5 μg/ m l Tan A分别联合 0 .5 μg/ ml、0 .2 5 μg/ ml和 0 .12 5 μg/ml ATRA作用 NB4细胞 5 d,观察 NB4细胞形态学变化 ,检测硝基蓝四氮唑 (NBT)还原能力 ;流式细胞术检测CD11b,CD33的表达 ,并进行细胞周期和细胞凋亡分析。结果　 Tan A联合 ATRA可协同诱导 NB4细胞分化和凋亡。联合作用组第 5 d细胞生长抑制率均超过 80 % ;90 %左右的 NB4细胞分化 ,其中杆状和分叶核细胞比例超过6 5 % ;NBT还原能力显著升高。流式细胞术分析显示 CD11b表达升高 ,CD33表达降低 ;G0 / G1 期细胞增加 ,有明显的细胞凋亡 ,与 Tan A或 ATRA单独作用组相比均有显著性差异 (P<0 .0 1)。Tan A与 ATRA(0 .12 5 μg/ m l～0 .5 μg/ m l)联合对 NB4细胞的影响没有明显的浓度依赖倾向。结论　 Tan A联合 ATRA对 NB4细胞诱导分化和凋亡有协同作用 ;在 ATRA一定浓度范围内 ,这种协同作用无 ATRA剂量依赖性。     

三尖杉酯碱通过下调Mcl-1蛋白诱导NB4细胞凋亡

［摘要］目的：考察三尖杉酯碱（HT）对人急性早幼粒白血病（APL）细胞株NB4细胞的生长抑制作用和凋亡诱导作用,并探讨其杀伤白血病细胞的作用机制。方法：采用台盼兰染色法,细胞计数,考察HT对NB4细胞的生长抑制作用和细胞毒性作用;采用AO-EB荧光染色法和细胞形态学观察,考察HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;采用PI染色的流式细胞术,考察HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;采用Western Blotting技术,考察HT对NB4细胞凋亡相关蛋白的影响;采用siRNA干扰技术,沉默目的蛋白证明推论;提取APL患者血液样本,验证HT的凋亡诱导作用及作用机制。结果：HT能够呈剂量依赖和时间依赖地抑制NB4细胞生长并杀伤NB4细胞,HT处理72h后GI50为（32.0±2.5） nmol/L;HT能够呈现剂量依赖和时间依赖的诱导NB4细胞凋亡,HT处理6h后其诱导凋亡百分率为66%;HT诱导NB4细胞凋亡,引起PARP蛋白裂解,并不下调Bcl-2,不影响Bax和Bak的表达,但显著下调Mcl-1蛋白水平;siRNA沉默Mcl-1的蛋白表达可以显著提高HT对NB4细胞的凋亡诱导作用;HT诱导APL患者白血病样本细胞凋亡,并下调Mcl-1蛋白。结论：HT通过抑制细胞生长和诱导细胞凋亡杀伤NB4细胞,HT可能通过下调Mcl-1蛋白发挥诱导NB4细胞凋亡的抗白血病作用。