类风湿关节炎患者血清肽酰基精氨酸脱亚氨酶4水平及其意义

目的 通过检测肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI)4在类风湿关节炎(RA)患者血清中的水平,探讨其在RA发病机制中的意义.方法 采用ELISA检测100例RA患者、23例其他风湿病患者、24例健康体检者血清中PADI4及抗环瓜氨酸多肽(CCP)抗体水平.结果 (1)RA患者PADI4水平为(620.10±259.82)μg/L,较其他风湿病患者[(404.41±195.38)μg/L]、健康体检者[(522.19±142.40)μg/L]明显升高,差异有统计学意义(F=8.75,P＜0.001).(2)RA患者PADI4-94(rs 2240340)基因型T/T、C/C、T/C PADI4水平分别为(597.43±255.76)μg/L、(674.63±320.67)/μgL、(628.78±274.13)μg/L;PADI4-104(RS 1748033)基因型T/T、Cμg/C、T/C PADI4水平分别为(571.56±138.34)μg/L、(653.41±300.35)μg/L、(640.07±302.82)μg/L.各基因型间PADI4水平差异无统计学意义(P＞0.05).(3)相关性分析:RA组PADI4水平与RA疾病活动评分(DAS28)、ESR呈正相关(r=0.24,P=0.03;r=0.23,P=0.03),而与抗CCP抗体、抗PADI4抗体、C反应蛋白无相关性(r=0.02,P=0.83;r=-0.17,P=0.10;r=0.14,P=0.18).结论 PADI4可能是RA的一个致病性抗原,参与了RA发病,其水平高低反映病情活动程度.

Abstract：

Objective To detect the levels of serum peptidylarginine deiminase (PADI)4 and explore its significance in rheumatoid arthritis ( RA ). Methods The presence of PADI4, anti-PADI4antibodies and anti-cyclic citrullinated peptide (CCP) antibodies levels were examined by enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Serum samples were obtained from 100 patients with RA, 23 patients with other rheumatic diseases, and 24 healthy controls. The associations between PADI4 and the disease activity score using 28 joint counts ( DAS28 ) score, anti-CCP antibodies, erythrocyte sedimentation rate ( ESR ),C-reactive protein ( CRP), PADI4-94 ( rs 2240340 ) and PADI-104 ( rs 1748033 ) gene polymorphisms and other indexes were analyzed in RA. Results The levels of PADI4 in RA patients were significantly higher than in other rheumatic diseases and healthy controls ( F = 8. 75, P ＜ 0. 001 ). There was no significantly difference in levels of PADI4 among ADI4-94 ( rs 2240340)/PADI-104 ( rs 1748033 ) genotypes. Conclusions PADI4 is associated with disease activity involved in the RA pathogenesis and may be a RA pathogenic antigen.     

肽酰基精氨酸脱亚氨酶-4基因多态性与类风湿关节炎的相关性

目的 肽酰基精氨酸脱亚氨酶基因4-94位点(PADI4-94)和4-104位点(PADI4-104)基因的单核苷酸多态性(SNPs)与类风湿关节炎(RA)易感性的关系.方法 采用聚合酶链反应-连接酶检测反应(PCR-LDR)方法 鉴定116例RA患者和100名健康体检者基因及基因型,计算其频率,用X2检验统计分析.用酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测RA外周血抗PADl4抗体及PADI4蛋白水平.结果①PADI4-94及PADI4-104位点存在A和G 2种等位基因,A/A,G/G和A/G 3种基因型,RA组/健康组PADI4-94等位基因A、G及其A/A、G/G和A/G基因型频率分别是0.460/0.392、0.540/0.608,0.204/0.186、0.283/0.402和0.513/0.412,2组差异无统计学意义(X2=1.996,P=0.157;X2=3.407,P=0.182);RA组/健康组PADI4-104等位基因A、G及其A/A、G/G和A/G基因型频率分别是0.412/0.345、0.588/0.655,0.150/0.144、0.32710.454和0.522/0.402,2组差异无统计学意义(X2=1.937,P=0.164;X2=3.780,P=0.151).③RA组PADI4-94/PADI4-104各基因型间红细胞沉降率(ESR),RA疾病活动关节评分28(DAS28)评分,C反应蛋白(CRP),抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体,PADI4蛋白量及抗PADI4抗体水平差异无统计学意义(P值分别为0.46/0.67,0.62/0.57,0.12/0.23,0.81/0.43,0.78/0.75,0.38/0.31).结论 我国人群PADI4-94和PADI4-104两位点存在多态性,但其与RA的易感性无关.     

高原地区汉、藏、回族人群类风湿关节炎与肽酰基精氨酸脱亚氨酶4基因多态性的相关性

目的探讨肽酰基精氨酸脱亚氨酶(PADI)基因4中-92位点(PADI4-92)、94位点(PADI4-94)和104位点(PADI4-104)的单核苷酸多态性(SNPs)与类风湿关节炎(RA)易感性的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)、测序方法鉴定90例RA患者(汉族、藏族、回族)和90名健康体检者(汉族、藏族、回族)基因及基因型,计算其频率,用χ2检验统计分析。用酶联免疫吸附试验(ELISA)检测RA外周血抗CCP抗体水平。结果PADI4-92、PADI4-94及PADI4-104位点存在A和G、C三种等位基因,A/A、C/C、G/G、A/G,G/C五种基因型,汉族、回族、藏族RA及健康对照组PADI4-94的A/A、G/G和A/G基因型,两组差异无统计学意义(χ2=1.105,P=0.949;χ2=1.105,P=0.949;χ2=0.657,P=0.720);PADI4-104,表现为A/A、G/G和A/G基因型两组差异无统计学意义(χ2=0.617,P=0.734;χ2=0.617,P=0.734;χ2=1.198,P=0.549);PADI4-92,表现为C/C、G/G和G/C基因型,两组差异无统计学意义(χ2=1.105,P=0.949;χ2=1.105,P=0.949;χ2=0.234,P=0.889)。RA组PADI4-94/PADI4-104/PADI4-92各基因型间红细胞沉降率(ESR),RA疾病活动关节评分28(DAS28)评分,生活质量评分,抗环瓜氨酸肽(CCP)抗体水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论汉族、藏族、回族人群PADI4-92、PADI4-94和PADI4-104位点存在多态性,但其与RA的易感性无关。     

肽酰基精氨酸脱亚氨酶4基因与类风湿关节炎关联研究的Meta分析

目的 系统分析和评价肽酰基精氨酸脱亚氨酶( PADI4)基因与类风湿关节炎(RA)的关联性,提供RA遗传背景的循证医学证据.方法 选择研究较为集中的PADI4基因的5个位点(rs11203366、rs11203367、rs874881、rs2240340、rs1748033),对已发表的有关PADI4基因多态性与RA的关联研究进行Meta分析,并利用在线软件,进行连锁分析.结果 分析共纳入21项研究,共计RA患者15 659例,健康对照22 019名.分析结果显示黄种人rs11203366、rsl 1203367、rs2240340、rs1748033位点基因多态性与RA存在关联(P值分别为＜0.01,0.03,＜0.01,＜0.01),白种人rsl 1203366、rs 11203367、rs874881位点基因多态性与RA存在关联(P=0.0002,0.004,0.03),但黄种人rs874881位点基因多态性与RA无关联性(P=0.2),白种人rs2240340、rs1748033位点基因多态性与RA无关联性(P=0.18,0.1).Meta分析研究结论与连锁不平衡分析的结论基本一致,造成某些偏差的原因可能是样本的选择、人群分层以及基因分型方法的差异性.结论 部分PADI4基因多态性与RA易感性相关联,基于单体型的关联研究和Meta分析将为进一步探讨其内在关联机制提供更为明确的方向.     

肽酰基精氨酸脱亚胺酶4单核苷酸多态性与河北汉族人群类风湿关节炎的相关性研究

目的 研究肽酰基精氨酸脱亚胺酶(PADI)4基因padi4_94位点及padi4_104位点的单核苷酸多态性(SNP)与河北汉族人群类风湿关节炎(RA)易感性的关系.方法 采用基于医院的病例-对照研究方法 ,收集河北地区汉族人群无血缘关系的115例RA患者和年龄、性别相当的106名健康体检者的外周血,用DNA测序法对PAD14基因第三内含子区域padi4_94位点及第四外显子区域padi4_104位点2个SNP进行检测.结果 在两组人群中,padi4_94及padi4_104的基因型分布均符合Hardy-weinberg平衡.两个SNP位点构建单倍型,得到3个单倍型,分别为AA、AG和GG,没有GA型.两SNP的AA、AG、GG基因型和A、G等位基因分布在RA病例组与健康对照组相比差异均无统计学意义,经Logistic回归分析无一单倍型为影响RA患病的危险因素.结论 在河北汉族人群中,PAD14基因的pa-di4_94、padi4_104位点存在SNP,此多态性与RA的易感性可能不存在相关性,尚不足以构成RA的独立遗传因素.     

4型肽酰基精氨酸脱亚胺酶单核苷酸多态性与河北汉族人群类风湿关节炎的相关性

目的 探讨4型肽酰基精氨酸脱亚胺酶( PADI4)单核苷酸多态性(SNP)与中国河北汉族人群类风湿关节炎(RA)易感性的关系.方法 采用病例-对照研究方法,用聚合酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性( PCR-RFLP)法检测该地区105例RA患者和96名健康者的PADI4 92基因型并与先前报道的PADI4其他位点进行连锁不平衡分析,构建单倍型,进行相关性分析.采用Pearson x2检验及Woolf方法计算并相对危险度及95％可信区间(95％CI).结果 3个位点的碱基均存在二态性,通过对padi4_92、padi4_ 94、padi4_104 3个位点的连锁不平衡分析,构建成5种主要功能单倍体,功能单倍体CCC和GTT所占频率达到了80％,并且均与RA的发病存在相关性.功能单倍体GCC虽然所占频率不到10％,但是却与RA的发病有着强烈的关联,分布明显趋向病例组.结论 PADI4基因SNP单核苷酸多态性以及基因功能单倍体表达多样性均与河北汉族人群RA易感性相关.     

四型肽精氨酸转亚胺基酶功能基因多态性及其表达与类风湿关节炎相关性研究

目的 探讨四型肽精氨酸转亚胺基酶(PADI4)功能基因多态性及其表达与类风湿关节炎(RA)的相关性.方法 采用实时荧光定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法 检测70例RA患者、81名健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)中PAD14基因的表达水平,采用DNA测序和TA载体克隆方法 分析PAD14基凶外显子内第89、90、92、104位点单核苷酸多态性(SNPs).结果 4个SNPs中除了PAD14_92位点外,携带PAD14少见等位基因者发生RA的易感性显著高于携带常见等位基因者;在所研究对象中分别由4个位点上的常见等位基因(ACCC)和少见等位基因(GTGT)组成的功能基因型为主要基因型.与ACCC型比较,携带GTGT型者发生RA危险件显著增高(P<0.01).RA组PAD14基因表达水平显著高于正常对照组(P<0.05),并且在RA组和对照组中携带PAD14少见等位基因者PAD14的表达水平显著高于携带常见等位基因者.结论 PAD14功能基因多态性及其基因表达与中国人RA易感性相关,PAD14功能基因多态性影响基因表达.     

肽酰基精氨酸脱亚氨酶4的研究进展

肽酰基精氨酸脱亚氨酶(peptidylarginine deiminases,PADIs)是一种能催化蛋白质肽链中精氨酸残基脱亚氨基产生瓜氨酸残基的酶,其酶家族共有5个亚型,分别为PADI1、PADI2、PADI3、PADI4和PADI6.     

抗PADI4抗体检测方法的建立及其在类风湿关节炎中的临床意义

目的检测类风湿关节炎（RA）患者血清中抗肽酰基精氨酸脱亚胺酶4（PADI4）抗体水平，并探讨其在RA中的临床意义。方法选取RA患者109例，系统性红斑狼疮（SEE）患者67例，干燥综合征（pSS）患者48例、系统性硬化症（SSc）患者41例、骨关节炎（OA）患者34例、皮肌炎／多发性肌炎（DM／PM）患者23例、强直性脊柱炎（AS）患者19例，健康对照106名。以重组的人PADI4蛋白为抗原，用酶联免疫吸附法（ELISA）检测患者血清中抗PADI4抗体水平。并研究其与RA患者发病年龄、病程、疾病活动指数DAS28评分、抗环瓜氨酸肽（CCP）抗体、C反应蛋白（CRP）、红细胞沉降率（ESR）、类风湿因子（RF）、免疫球蛋白（IgG、IgM、IgA）、关节x线分期等指标的关系。结果①RA患者血清中抗PADI4抗体的阳性率为45．0％，明显高于其他风湿性疾病患者和健康对照组（P值均〈0．01）。抗PADI4抗体对RA诊断的敏感性为45．0％，特异性为93．5％。②RA患者血清中抗PADI4抗体滴度明显高于其他风湿性疾病患者以及健康对照组（P均〈0．01）。③抗PADI4抗体阳性患者的DAS28评分、抗CCP抗体、ESR、RF、IgG、IgM水平均高于抗PADI4抗体阴性患者（P值均〈0．05）。相关性分析显示抗PADI4抗体水平与DAS28评分（r=0．333，P〈0．01）和抗CCP抗体（r=0．248，P〈0．05）具有相关性。并且阳性组患者出现皮下结节及关节X线Ⅲ期以上改变的比率也明显高于阴性组患者。结论RA患者血清中可以检测到抗PADI4抗体，该抗体在RA中具有很高的特异性，并且与疾病活动及病情严重程度相关，提示PADI4蛋白可能作为自身抗原在RA的发病和病理过程中起重要作用。     

大鼠胶原诱导关节炎模型滑膜肽基精氨酸脱亚胺酶4表达

目的探讨肽基精氨酸脱亚胺酶4(peptidylarginine deiminase 4,PADI4)在大鼠胶原诱导关节炎模型的表达。方法2012年7月至2013年5月中国医科大学附属盛京医院实验中心将关节炎模型建立成功且关节炎指数大于2分的18只大鼠随机分为胶原诱导关节炎(collagen-induced arthritis,CIA)3周模型组、4周模型组及6周模型组各6只,另有6只大鼠为对照组。分别予以生理盐水1 mld(对照组)、0.5 mgml鸡Il型胶原(CIA模型组)皮内注射,并于免疫后3、4、6周按组别处死。比较各组大鼠体重、关节炎指数、足趾容积及PADI4表达的变化情况。结果 CIA模型组关节炎发展迅速,关节炎指数、足趾容积相对于正常对照组明显增高,PADI4表达亦增多,体重减轻。结论 PADI4与大鼠胶原诱导关节炎模型有明显的相关性。     

葡萄糖-6-磷酸异构酶mRNA在RA患者外周血单个核细胞中的表达及意义

目的探讨葡萄糖-6-磷酸异构酶（glucose-6-phosphate isomerase，GPI）mRNA在类风湿关节炎（RA）患者外周血单个核细胞（PBMCs）中的表达及其与RA疾病活动性的关系。方法对30例RA活动期患者、30例RA缓解期患者、30例其他风湿性疾病患者及30名健康体检者，采用反转录聚合酶链反应（RT—PCR）半定量检测PBMCs中GPImRNA的表达水平。结果RA活动期患者GPImRNA的表达水平明显高于RA缓解期患者、其他风湿性疾病患者及正常对照组（P〈0．05），在RA活动组和RA缓解组，差异亦有统计学意义（P〈0．05）。结论GPImRNA在部分RA患者中高表达，其可能在RA发病机制中起作用，并与疾病的活动性相关。     

运用基因芯片初步研究类风湿关节炎患者外周血单个核细胞基因表达谱特征

目的运用基因芯片技术研究类风湿关节炎(RA)基因表达谱特征,从全基因组角度探讨RA相关致病基因。方法提取5例活动期RA患者和3名健康对照者外周血单个核细胞(PBMC)中总RNA,Illumina寡核苷酸基因芯片分析每个样本的48 000个基因变化。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)验证芯片结果。结果RA患者与健康对照者相比2倍上调基因122个,2倍下调基因29个。分子及生物功能分析显示上调表达的基因涉及传递蛋白、蛋白翻译合成、代谢、转录调控、信号转导、趋化因子、细胞周期和凋亡相关基因等种类。结论RA涉及多环节的病理过程,基因芯片技术有利于进一步揭示RA分子机制,发现新的治疗靶标。     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞蛋白质组学研究

目的 运用蛋白质组学的方法,比较正常人及早期活动性类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞(PBMCs)蛋白质的差异表达,寻找RA疾病相关致病蛋白质.方法 选取9例早期活动期RA患者以及9名健康成年志愿者,用淋巴细胞分离液分离PBMCs,抽提PBMCs中的蛋白,采用同相pH梯度(IPG)双向凝胶电泳(2-DE)分离正常人及RA患者PBMCs总蛋白质.凝胶经考马斯亮蓝染色显色后,PDQuest图像分析软件进行比较分析、识别差异表达的蛋白质,对差异蛋白质点用基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)进行鉴定,运用反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法验证部分差异蛋白质.结果 获得RA患者及正常人PBMCs蛋白质双向凝胶电泳图谱,平均蛋白质点数分别为556和579,匹配率分别为89.4%和 88.5%,通过比较分析,差异表达蛋白质点数为23,选取18个点进行质谱鉴定,成功鉴定14个蛋白质,其中a-肌动蛋白、纤维蛋白素原a-链、载脂蛋白A-I(ApoA-I)等9个蛋白质点在RA中表达上调,硫氧还蛋白-2、谷胱甘肽S-转移酶等6个蛋白质点在RA中表达下调,这些差异蛋白质的功能涉及物质代谢、抗氧化、信号传导、能量产生及细胞骨架.并用RT-PCR方法验证差异蛋白质ApoA-I.其结果与上述蛋白质差异表达结果相符.结论 在RA患者PBMCs中存在着差异表达蛋白质,这些差异蛋白质可能是RA发病的内在因素.其RT-PCR结果与蛋白质差异表达相符,证明蛋白质组研究的可靠性.     

类风湿关节炎患者外周血单个核细胞和血浆中miR-155和miR-146a的表达

目的 通过检测miR- 155和miR-146a在类风湿关节炎(RA)患者外周血单个核细胞( PBMC)和血浆中的表达,探讨miR-155和miR-146a表达在RA发病中的作用.方法 RA患者34例,其中高活动组23例,低活动组11例;健康对照组15名.取外周血分离PBMC和血浆,提取和纯化miRNA,实时定量聚合酶链反应(PCR)检测miR-155和miR-146a的表达,以小分子RNA U6作为内对照,计算标准化后的2-ΔCt值表示miRNA的相对表达含量.采用SPSS 13.0软件包进行方差齐性分析和t检验.结果 RA患者PBMC和血浆miR-155的表达分别是对照组的1.74倍(0.08±0.08与0.05±0.03,t=-2.225,P＜0.05)和4.65倍(5.9±6.7与1.3±2.0,t=-3.677,P＜0.05);miR-146a的表达分别是对照组的1.68倍(1.3±1.2与0.8±0.6,t=-2.154,P＜0.05)和2.47倍(741±1001与300±295,t=-1.669,P＞0.05);RA患者中高活动组和低活动组PBMC中miR-155和miR-146a的表达差异无统计学意义;而血浆miR-155和miR-146a的表达高活动组明显高于低活动组,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 miR-155和miR-146a在RA患者PBMC和血浆中异常高表达,且血浆miR-155和miR-146a的表达与RA活动度相关,提示血浆miR-155和miR-146a可以作为RA及RA活动度的预测指标.     

白细胞介素-18在类风湿关节炎外周血单个核细胞中的表达

目的　探讨类风湿关节炎 (RA)外周血白细胞介素 18(IL 18)的表达及其与Th1/Th2平衡和疾病活动的关系。方法　以 β actin为内参照 ,用半定量反转录多聚酶链反应 (RT PCR)法测定 16例RA患者及 15名正常对照外周血单个核细胞 (PBMC)中IL 18、IL 4、IFN γmRNA水平 ,观察IL 18与IL 4、IFN γ及疾病活动指标红细胞沉降率 (ESR)、C反应蛋白 (CRP)的相关性。结果　①RA患者PBMC中IL 18mRNA表达与正常组相比增高非常显著 (1 82± 0 39比 0 45± 0 30 ,P <0 0 0 1)。②RA组IFN γ、IL 4均显著高于对照组 ,但IL 4/IFN γ显著低于对照组。③相关分析显示 :RA组IL 18mRNA与IFN γ、ESR显著正相关 (16例 ,r分别为 0 836 ,0 75 3,P均 <0 0 5 )。结论　RA患者外周血IL 18mRNA表达水平显著高于正常对照组 ,且与RA患者外周血IFN γ的产生及疾病活动性相关。