血管内皮生长因子受体2为靶的反义寡核苷酸筛选及其对乳腺癌MCF-7细胞的抗肿瘤作用

目的筛选出可与血管内皮生长因子受体2（KDR）mRNA高效、特异结合的反义寡核苷酸。探讨其体外抗肿瘤作用。方法先用寡核苷酸库杂交和计算机预测初筛反义寡核苷酸;经寡核苷酸芯片杂交验证,挑选与KDRmRNA有强杂交信号的反义寡核苷酸,用MTT法、逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）和免疫印迹（Western blotting）探讨反义寡核苷酸对乳腺癌细胞系MCF-7细胞增殖和KDR表达的抑制作用。结果在寡核苷酸库杂交筛选出的13条反义寡核苷酸中,有8条（8／13,61.5％）在芯片杂交中显示较强杂交信号;而在计算机预测设计的17条探针中,只有1条显示较强信号。合成杂交信号较强的9条硫代反义寡核苷酸,均能有效抑制MCF-7细胞增殖,并呈剂量依赖性。其中抑制率最高的2条反义寡核苷酸为asON4和asON7,由寡核苷酸库杂交联合芯片杂交筛出,在0.8μmol／L时抑制率分别为51．6％和62．2％;同时,这2条反义寡核苷酸在mRNA水平和蛋白质水平抑制了KDR基因表达,并呈剂量相关性。结论寡核苷酸库杂交筛选和寡核苷酸芯片杂交筛选的结果有较好一致性,将寡核苷酸库和寡核苷酸芯片联用是一种较好筛选反义寡核苷酸方法。KDR反义寡核苷酸有明显的抗肿瘤作用。     

VEGF上调survivin和bcl-2表达及抑制乳腺癌细胞凋亡的机制探讨

目的研究血管内皮细胞生长因子(VEGF)对乳腺癌细胞株MCF-7的凋亡及凋亡相关基因survivin和bcl-2表达的影响,探讨VEGF自分泌作用抑制肿瘤细胞凋亡的机制.方法构建VEGF165真核表达质粒,采用脂质体转染VEGF165 cDNA MCF-7细胞, 通过RT-PCR及ELISA方法鉴定转染克隆MCF-7/hVEGF165细胞中VEGF mRNA及蛋白的表达,Western blot 方法比较MCF-7/hVEGF165及MCF-7、MCF-7/pcDNA3细胞中survivin、bcl-2蛋白表达,流式细胞仪分析细胞凋亡和细胞周期.结果 MCF-7/hVEGF165细胞VEGF mRNA表达量增加,细胞培养上清中VEGF蛋白浓度为(354.50±31.93)ng/L,高于MCF-7细胞的(178.54±16.52)ng/L和MCF-7/pcDNA细胞的(190.75±13.32)ng/L(P<0.01).与MCF-7、MCF-7/pcDNA3组相比较,MCF-7/hVEGF165细胞凋亡百分数显著下降(P<0.05),分别为(2.47±0.51)% (MCF-7/hVEGF165),(7.74±1.56)%(MCF-7/pcDNA3)和(7.35±0.33)%(MCF-7);survivin和bcl-2蛋白表达增高了近3倍,但各组细胞周期变化不明显(P>0.05).结论 VEGF诱导凋亡抑制基因suvivin和bcl-2高表达,可能在自分泌VEGF抑制MCF-7凋亡中发挥重要作用.     

三羟异黄酮对MCF-7/HER-2乳腺癌细胞VEGF表达变化的影响

目的观察三羟异黄酮(genistein)对原癌基因HER-2/neu高表达乳腺癌细胞血管内皮生长因子(vascular endothelial growthfactor,VEGF)表达变化的影响,探讨genistein抗HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的分子机制.方法用基因转染技术建立HER-2/neu高表达的乳腺癌MCF-7细胞(命名为MCF-7/HER-2).5×10-5mol/L genistein处理MCF-7/HER-2细胞24、48、72 h后,应用免疫组织化学、Western blot及RT-PCR法检测genistein对MCF-7/HER-2乳腺癌细胞VEGF表达的变化.结果MCF-7/HER-2细胞与MCF-7细胞相比VEGF蛋白和mRNA表达增加,genistein处理MCF-7/HER-2细胞24、48、72 h后,VEGF的mRNA和蛋白表达量均下调,随着处理时间的延长,VEGF mRNA和蛋白表达量下降越明显.结论genistein能在转录和翻译水平下调HER-2/neu高表达乳腺癌细胞VEGF的表达,这可能是genistein抑制HER-2/neu高表达乳腺癌血管生成的机制之一.     

小细胞肺癌肿瘤组织VEGF表达及其与预后的关系

[目的]探讨小细胞肺癌(SCLC)肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)的表达水平及其与预后的相关性。[方法]收集1998~2010年行手术治疗的35例SCLC患者,采用免疫组化法检测肿瘤组织中VEGF蛋白的表达水平,并分析其与预后的相关性。[结果]全组患者VEGF阳性表达率为45.7%,且均为弱阳性表达;在成功随访的22例患者中VEGF阳性表达与不表达患者的中位生存期差异无统计学意义(13个月vs 20个月,P=0.784)。[结论]近半数SCLC患者肿瘤组织中存在VEGF弱表达,VEGF表达与预后无明显相关性,抗血管生成的治疗策略在SCLC中有待进一步研究。     

芳香化酶抑制剂来曲唑诱导乳腺癌细胞凋亡实时观测模型的建立

  目的  构建芳香化酶过表达的乳腺癌细胞模型以及芳香化酶抑制剂来曲唑诱导乳腺癌细胞凋亡的实时观测模型。  方法  采用慢病毒包被介导基因转导方法,构建凋亡荧光指示蛋白VC3AI稳定表达的MCF-7-VC3AI和ZR7530-VC3AI工具细胞系,同时将该细胞系过表达芳香化酶,进而构建来曲唑诱导乳腺癌细胞凋亡实时观测模型。采用实时荧光定量PCR、蛋白质印迹法检测和验证细胞中芳香化酶表达,通过MTT法检测细胞增殖。分别观察过表达芳香化酶的MCF-7-VC3AI、ZR7530-VC3AI细胞在雄激素和雌激素作用下的体外增殖能力,以及来曲唑作用下细胞的增殖能力。  结果  实时荧光定量RCR检测结果显示,过表达芳香化酶MCF-7-VC3AI、ZR7530-VC3AI细胞模型中芳香化酶mRNA的表达水平明显高于MCF-7-VC3AI、ZT7530-VC3AI细胞。蛋白质印迹法结果显示,两种细胞模型中,芳香化酶蛋白的表达水平明显升高。MTT法检测结果显示,过表达芳香化酶的细胞模型在雄激素和雌激素刺激下增殖加快。100 nmol/L雄激素作用下,过表达芳香化酶MCF-7-VC3AI细胞的增殖率约为对照组的1.2倍（P < 0.01）,而ZR7530-VC3AI细胞的增殖率约为对照组的1.5倍（P < 0.01）。来曲唑以浓度依赖方式抑制雄激素诱导的细胞增殖。10 μmol/L来曲唑作用下,过表达芳香化酶MCF7-VC3AI细胞增殖率为对照组的80%,而过表达芳香化酶ZR7530-VC3AI细胞增殖率为对照组的68%。  结论  成功建立了来曲唑诱导乳腺癌细胞凋亡的实时观测模型,为研究来曲唑的作用机制奠定了重要的实验基础。      

肿瘤微血管生成模型的应用现状

肿瘤微血管生成研究需要借助相应的实验模型来进行，本文对近年常用的肿瘤微血管生成研究模型的应用作回顾与评价，对有改进的鸡胚绒毛尿囊膜（CAM）微血管生成模型，新建立的血管段培养模型和鼠皮下气囊模型作较详细的介绍和评价。     

应用多种血管内皮模型研究大肠癌细胞及其球体的侵袭特性

应用人羊膜基膜──内皮细胞模型、人胎儿主动脉内膜器官培养等多种血管内皮模型，通过浸润力、粘附性定量检测与形态学观察相结合的方法，比较研究了两种人大肠癌细胞及其多细胞球体（ｍｕｌｔｉｃｅｌｌｕｌａｒＳｐｈｅｒｏｉｄ）对血管内皮（ＨＥＣ）、基膜（ＨＡＢＭ）及其间质（Ｓｔｒｏｍａ、ＳＴ）的体外侵袭作用。结果表明，ＨＲ－８３４８细胞及其球体对血管内皮具有较强的粘附作用（粘附率分别为２５．９±３．６％、３３．１±４．２％）．但对不同基质的粘附率有显著性差异（ＨＡＢＭ＞ＨＥＣ＞ＳＴ，Ｐ＜０．０１）。在相同实验条件下，球体比相同细胞数量的单细胞具有更高的浸润力（Ｐ＜０．０１），提示癌细胞球体具有高侵袭特性。     

肿瘤基质血管内皮细胞模型的建立及生物学特性研究

 目的 建立肿瘤基质血管内皮细胞模型并探讨其生物学特性。方法 用人卵巢癌细胞SKOV3培养上清液诱导人内皮细胞ECV304，获得能稳定生长的ECV304-SKOV3细胞。观察其形态改变，检测其生长情况，免疫细胞化学测定其增殖细胞核抗原(PCNA)、bcl-2、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、粘合素(TN)表达变化，逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定其端粒酶活性，并分析其核型、蛋白合成能力、对常用抗癌药物的反应性。结果 ECV304-SKOV3细胞出现畸形核、有微绒毛的腔隙，染色体众数略有增加。细胞群体倍增时间较亲代细胞BCV304缩短；分裂指数增高；表达PCNA、bcL-2、MMP-9增强(t≥2．4671，P<0．05)，而TN减弱(t=2．2473，P<0．05)；S期细胞数增加，G0／G1期细胞数减少(x²=923．313，P<0．01)，增殖指数(PI)明显增高(x²=570．197，P<0．01)。对作用于S期或S期和M期的抗癌药物较ECV304敏感，且与SKOV3癌细胞一致(F≥24．14，P<0．01)。蛋白质合成能力增强(t=-12．2465，P<0．001)。端粒酶活性强于亲代细胞ECV304(t=-25．2990，P<0．001)。结论 DCV304-SKOV3细胞较亲代细胞DCV304增殖快，核型发生变化，存活能力强，功能活跃，某些血管形成因子表达增强，具有肿瘤基质血管内皮细胞的某些特性，可作为肿瘤基质血管内皮细胞模型用于进一步研究。     

靶向VEGF的不对称siRNA抑制乳腺癌MCF-7细胞的增殖

目的:探讨靶向血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)基因的siRNA对乳腺癌MCF-7细胞的抑制效果。方法:设计靶向VEGF的4种小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA),包括对称siRNA(siRNA21/21,siRNA23/23)与不对称siRNA(asymmetric siRNA,aiRNA;aiRNA21/23,aiRNA19/21)。siRNA转染入MCF-7细胞后,MTT及流式细胞术检测MCF-7细胞增殖及凋亡情况,RT-PCR、ELISA法检测MCF-7细胞中VEGF基因和蛋白的表达。结果:与对照组相比,aiRNA21/23、siRNA23/23、aiRNA19/21、siRNA21/21这4种siRNA都能有效抑制VEGF mRNA的表达[(71.4±5.01)%、(40.0±3.11)%、(37.2±2.79)%、(11.1±0.99)%vs(2.4±0.11)%,P<0.01],且抑制MCF-7细胞的增殖[(44.7±5.38)%、(38.5±5.67)%、(33.6±2.18)%、(33.1±3.18)%vs(2.2±0.28)%,P<0.01],其中以不对称aiRNA21/23的抑制效果最明显。与对照组比较,aiRNA21/23显著促进MCF-7细胞的凋亡[(49.9±4.02)%vs(4.7±0.91)%,P<0.01]。结论:靶向VEGF基因的siRNA可抑制MCF-7细胞的增殖、促进细胞凋亡,尤以不对称siRNA的效果最明显。     

人胎盘部位滋养细胞肿瘤细胞系的建立及其鉴定

背景与目的：胎盘部位滋养细胞肿瘤(placental site trophoblastic tumor,PSTT)是一种特殊类型的妊娠滋养细胞肿瘤。该研究旨在建立人PSTT细胞系,鉴定其基本特性。方法：通过手术切除的PSTT组织标本原代培养,纯化并传代,建立人PSTT细胞系。鉴定方法包括：观察细胞形态,CCK-8法绘制细胞生长曲线,进行染色体核型分析,细胞与肿瘤组织短串重复序列(short tandem repeat,STR)分析,以及免疫组织化学染色。结果：建立稳定传代的人PSTT细胞系PSTT-1。PSTT-1细胞单层贴壁生长,失去接触抑制性,呈多突起的纺锤形结构。体外培养生长良好,每5 d传代1次,目前已传至30余代。染色体核型分析结果为正常女性核型：46,XX。PSTT-1与肿瘤组织STR分析结果高度匹配。PSTT-1细胞表达β-catenin、CD146、人绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotrophin,hCG)、人胎盘生乳素(human placental lactogen,hPL)和Muc4。结论：该研究成功建立人PSTT细胞系PSTT-1,为PSTT的研究提供了体外实验模型。     

新藤黄酸抑制人乳腺癌细胞株MCF-7增殖的实验研究

目的 探讨新藤黄酸对人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖抑制情况及其作用机制。方法 0.5～20μg／ml新藤黄酸处理MCF-7细胞72h,四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测MCF 7细胞增殖抑制率;流式细胞术Annexin V-FITC/PI双染色检测细胞凋亡率;线粒体膜电位检测试剂盒（JC-1）检测线粒体跨膜电位变化;Western blotting检测Fas、FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9、Bax和Bcl-2蛋白表达水平。结果 0.5～20μg／ml新藤黄酸均能够抑制MCF-7细胞增殖,且增殖抑制作用呈浓度依赖,半数抑制浓度（IC₅₀）为1763 μg／ml。0.5～3.0μg／ml新藤黄酸即可诱导MCF-7细胞凋亡,凋亡作用呈时间和浓度依赖。0.5μg／ml新藤黄酸处理MCF 7细胞48h后早期凋亡率为3.7％,总凋亡率为7.2％,72h早期凋亡率为6.7％,总凋亡率为13.7％;3μg／ml新藤黄酸48h后早期凋亡率为69.5％,总凋亡率为71.7％,72h早期凋亡率为76.9％,总凋亡率为81.5％。0.5、1.0、1.5 μg／ml新藤黄酸导致线粒体跨膜电位下降的细胞比例升高,促凋亡相关蛋白 FasL、caspase-3、caspase-8、caspase-9表达水平呈浓度依赖性上升,Fas和Bax蛋白表达水平变化不大,抗凋亡蛋白Bcl-2表达水平则呈浓度依赖性下降。结论 新藤黄酸通过诱导人乳腺癌细胞株MCF-7凋亡,抑制细胞增殖,其诱导凋亡的分子机制与死亡受体及线粒体凋亡途径密切相关。     

iRNA沉默Chk1基因对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响及其作用机制的探讨

目的 探讨siRNA沉默检测点激酶1（Chk1）基因对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响及其作用机制。方法 采用RNAi技术将乳腺癌细胞MCF 7中Chk1基因沉默,用Western blotting检测转染前后MCF 7细胞中Chk1蛋白表达情况;采用MTT比色法和流式细胞术分析Chk1基因沉默对乳腺癌细胞MCF 7增殖和周期的影响。结果 Chk1 siRNA转染后,MCF-7细胞中Chk1蛋白表达下降约82％,明显低于未转染组和脂质体转染组（P＜0.05）。Chk1 siRNA转染组转染48h的MCF-7细胞增殖活性下降,其增殖抑制率为44.7％,明显高于脂质体转染组的5.26% （P＜0.05）。流式细胞仪检测显示,Chk1 siRNA转染组G2／M期比例为（11.3±0.7）％,明显低于未转染组（44.2±1.9）％和脂质体转染组（45.3±2.1）％,差异均有统计学意义（P＜0.05）。 结论 siRNA沉默Chk1基因可明显抑制人乳腺癌细胞MCF-7增殖,并且其抑制增殖作用与减弱G2／M期阻滞有关。     

ＲｈｏＡ小干扰ＲＮＡ抑制乳腺癌细胞株ＭＣＦ-７及其裸鼠皮下移植瘤的实验研究

目的　观察ＲｈｏＡ小干扰ＲＮＡ（ｓｉＲｈｏＡ）对乳腺癌细胞株ＭＣＦ-７增殖、迁移、周期和凋亡的影响以及对裸鼠移植瘤生长的影响。方法　ｓｉＲｈｏＡＬｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ２０００介导下转染乳腺癌细胞ＭＣＦ-７,转染４８ｈ后,采用Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ技术检测ＲｈｏＡ蛋白的表达,ＭＴＴ实验检测ｓｉＲｈｏＡ转染细胞的增殖变化,损伤刮擦实验检测ｓｉＲｈｏＡ转染细胞的迁移能力,流式细胞仪检测ｓｉＲｈｏＡ转染细胞的周期和凋亡,裸鼠移植瘤实验检测ｓｉＲｈｏＡ对肿瘤生长的影响。结果　成功转染ｓｉＲｈｏＡ的肿瘤细胞,Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ显示ＲｈｏＡ蛋白表达在ＭＣＦ-７细胞中明显下降;ｓｉＲｈｏＡ对ＭＣＦ-７细胞的增殖、迁移均有显著的抑制作用并能促进肿瘤细胞凋亡及细胞周期中Ｓ期细胞减少,Ｇ１／Ｇ０期细胞增加;裸鼠移植瘤内重复注射ｓｉＲｈｏＡ后肿瘤生长明显减缓。结论　ｓｉＲｈｏＡ能够明显抑制ＲｈｏＡ基因在乳腺癌细胞ＭＣＦ-７中的表达,部分逆转ＭＣＦ-７的恶性生物学行为并抑制裸鼠移植瘤的生长。     

核仁素表达下调对阿霉素所致乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡的影响

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤,我国的乳腺癌发病率呈急剧上升的趋势.核仁素是真核生物核仁中最主要的一种磷酸蛋白质,具有多种生物学功能,包括调控核糖体的合成与成熟,调控细胞的增殖、生长、胚胎发生、胞质分裂、染色体复制和核仁发生等过程.我们探讨了下调核仁素表达对乳腺癌细胞增殖抑制和凋亡的影响,现将结果报告如下.     

Apogossypolone对乳腺癌MCF-7细胞株放射增敏的体外实验研究

[目的]探讨Apogossypolone(ApoG2)对乳腺癌MCF-7细胞株的放射增敏作用及其作用机制。[方法]①MTT法检测ApoG2单药对MCF-7细胞的抑制率,确立细胞半数抑制浓度(IC50)。②根据MTT结果选取低浓度(相似文献   

葫芦素B在体内外对乳腺癌细胞的生长抑制作用

目的:体内外观察葫芦素B(cucurbitacin B)对人乳腺癌细胞系MCF-7的增殖抑制和诱导凋亡作用,为临床应用提供依据.方法:用浓度分别为0.001、0.01、0.1、1、10以及100μmoL/L的葫芦素B处理MCF-7细胞,24、48和72 h后用MTT法检测细胞增殖.用O.1和10μmol/L的葫芦素B处理MCF-7细胞24h,之后用流式细胞仪检测细胞周期分布和细胞凋亡率,并用倒置显微镜和荧光显微镜观察细胞凋亡.建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型,观察葫芦素B的体内抑瘤作用.结果:MTT结果显示葫芦素B对MCF-7细胞的增殖抑制作用具有明显的剂量和时间依赖性.流式细胞仪检测提示,随着葫芦素B浓度增高,处于S期和G2/M期细胞的比例逐渐升高,同时伴随G0/G1期细胞的减少以及细胞凋亡率的逐渐升高.统计学分析提示,各实验组之间以及实验组与对照组之间均有显著差异(P相似文献   

Peripheral neural cell sensitivity to mTHPC-mediated photodynamic therapy in a 3D in vitro model

Background:

The effect of photodynamic therapy (PDT) on neural cells is important when tumours are within or adjacent to the nervous system. The purpose of this study was to investigate PDT using the photosensitiser, meta-tetrahydroxyphenyl chlorin (mTHPC), on rat neurons and satellite glia, compared with human adenocarcinoma cells (MCF-7).

Methods:

Fluorescence microscopy confirmed that mTHPC was incorporated into all three cell types. Sensitivity of cells exposed to mTHPC-PDT (0–10 μg ml^–1) was determined in a novel 3-dimensional collagen gel culture system. Cell death was quantified using propidium iodide and cell types were distinguished using immunocytochemistry. In some cases, neuron survival was confirmed by measuring subsequent neurite growth in monolayer culture.

Results:

MCF-7s and satellite glia were significantly more sensitive to PDT than neurons. Importantly, 4 μg ml^–1 mTHPC-PDT caused no significant neuron death compared with untreated controls but was sufficient to elicit substantial cell death in the other cell types. Initially, treatment reduced neurite length; neurons then extended neurites equivalent to those of untreated controls. The protocol was validated using hypericin (0–3 μg ml^–1), which caused neuron death equivalent to other cell types.

Conclusion:

Neurons in culture can survive mTHPC-PDT under conditions sufficient to kill tumour cells and other nervous system cells.     

Control of mammary tumor cell growth in vitro by novel cell differentiation and apoptosis agents

The use of breast tumor differentiating agents to complement existing therapies has the potential to improve breast cancer treatment. Previously we showed quinidine caused MCF-7 cells to synchronously arrest in G1 phase of the cell cycle, transition into G0 and undergo progressive differentiation. After 72–96 h cells became visibly apoptotic. Using several analogs of quinidine we determined that MCF-7 cell cycle exit and differentiation are typical of quinoline antimalarial drugs bearing a tertiary amine side chain (chloroquine, quinine, quinidine). Differentiated cells accumulated lipid droplets and mammary fat globule membrane protein. Apoptosis was assayed by a nucleosome release ELISA. Quinidine and chloroquine triggered apoptosis, but not quinine, a quinidine stereoisomer that displayed weak DNA binding. The apoptotic response to quinidine and chloroquine was p53-dependent. A 4–15-fold induction of p21(WAF1) protein was observed in cells treated with quinidine or chloroquine prior to apoptosis, but p21(WAF1) was not increased in cells that differentiated in response to quinine. Chloroquine was most active in stimulating MCF-7 apoptosis, and quinine was most active in promoting MCF-7 cell differentiation. We conclude, distinct mechanisms are responsible for breast tumor cell differentiation and activation of apoptosis by quinoline antimalarials. Alkylamino-substituted quinoline ring compounds represented by quinidine, quinine, and chloroquine will be useful model compounds in the search for more active breast tumor differentiating agents.     

人参皂甙Rg3诱导乳腺癌细胞系 MCF-7凋亡的实验研究

背景与目的:人参皂甙Rg3[20(R)-GinsenosideRg3]是从红参中提取的微量中药单体。近年研究表明人参皂甙Rg3尚具有抑制肿瘤细胞的增殖、抗肿瘤细胞浸润和转移等作用。肿瘤的发生和发展是一个极其复杂的过程,有多种转移相关的蛋白因子参与,并涉及多种转移途径和分子机制。人参皂甙Rg3抗肿瘤机制的研究为目前中药抗肿瘤研究热点之一。本研究的目的在于探讨Rg3抑制乳腺癌细胞的作用及其诱导凋亡的机制。材料与方法:四甲基偶氮唑蓝(3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide,MTT)法检测人乳腺癌细胞MCF-7的细胞增殖活力;荧光染色观察凋亡细胞的形态学变化;流式细胞术分析细胞周期及细胞凋亡;琼脂糖凝胶电泳测定DNA梯状带。结果:Rg3与MCF-7细胞生长抑制率之间有浓度依赖关系,相关系数(r)=0.953,Rg3处理细胞48h的IC50为71.91μg/ml;荧光显微镜下观察到经Rg3作用后,MCF-7细胞出现染色质凝集、核片段化、凋亡小体等凋亡形态学特征;流式细胞术检测表明Rg3能诱导细胞凋亡及调节细胞周期,用150μg/ml的Rg3处理细胞48h后,S期和G2-M期的细胞比率增加,G0-G1的细胞比率下降。细胞凋亡率从对照组的(0.45±0.25)%上升到(34.86±4.65)%。DNA琼脂糖凝胶电泳结果显示,服150μg/ml的Rg3处理细胞24h和48h后,能够使细胞产生明显的梯形电泳图谱(DNAladder)。结论:Rg3可通过诱导MCF-7细胞凋亡而发挥其抑制细胞增殖的作用。     

4-氨基吡啶与多西紫杉醇抗人乳腺癌细胞MCF-7 作用及相互关系探讨*

目的:通过研究钾离子通道阻断剂4- 氨基吡啶（4-AP ）对肿瘤化疗药物多西紫杉醇（docetaxel ,DOC ）的抗人乳腺癌细胞MCF-7 作用的影响,探讨4-AP 能否增强DOC 的作用。方法:用MTT 比色法分析DOC 、4-AP 以及两药联合应用对人乳腺癌细胞MCF-7 增殖的影响;用流式细胞术PI 单染法及Annexin V-FITC/PI双染法检测上述两种药物对人乳腺癌细胞MCF-7 的细胞周期及早期凋亡的影响。结果:DOC 能明显抑制人乳腺癌细胞株MCF-7的增殖,并呈剂量和时间依赖性。4-AP 对MCF-7 细胞增殖亦具有一定的抑制作用,在用药后24h、48h 及72h 的抑制率分别为11.9%±1.7% 、42.1%±3.2% 、44.2%±1.6% 。且5mmol/L 4-AP 可使DOC 的作用增强,使25μ mol/L DOC 对人乳腺癌细胞株MCF-7 最大杀伤作用时间从72h 提前至24h。5 μ mol/L DOC 能够使MCF-7 G2/M期细胞比率明显增加（53.58%±1.44% 与对照组8.83%±0.44% 相比,P<0.01）,使G0/G1 期细胞减少（11.48%±0.14% 与对照组63.89%±0.98% 相比,P<0.01）,说明DOC 主要在G2/M期阻滞MCF-7 细胞的增殖。5mmol/L 4-AP 作用于MCF-7 使其G0/G1 期细胞比率增加,G2/M期细胞明显减少,甚至消失（0.42%±0.17% 与对照组8.83%±0.44% 相比,P<0.05）。 而两药联用可见4-AP 使MCF-7 G2/M期细胞比率有所减少,而G0/G1 期细胞比率有所增加。DOC 单独作用于人乳腺癌细胞株MCF-7 细胞24h 后,能明显增加晚期凋亡和死亡率（由6.97%±0.75% 增加到20.77%±0.75% ,P<0.05）;而两药联合时,与对照组相比,早期凋亡比例由4.60%±0.91% 增加到12.20%±0.82%（P<0.05）,晚期凋亡和死亡细胞比例由6.97%±0.75% 增加到58.42%±0.31%（P<0.05）,提示4-AP（5mmol/L ）能明显增加DOC 诱导的MCF-7 早期凋亡。结论:DOC 和4-AP 分别在G2/M期和G0/G1 期抑制MCF-7 细胞增殖,4-AP 通过促进DOC 诱导细胞凋亡发挥抑制MCF-7 细胞增殖的作用。