银杏叶提取物对肝星状细胞增殖及转化生长因子和结缔组织生长因子基因表达的影响

目的: 研究银杏叶提取物对肝星状细胞增殖及细胞因子TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白表达的影响，以探讨银杏叶提取物抗肝纤维化的可能机制。方法: 用不同浓度(0、1、10、100、500 mg/L)的银杏叶提取物处理HSC-T6，用MTT及流式细胞仪检测其对肝星状细胞增殖及细胞周期的影响，用RT-PCR及Western blotting检测培养24 h及48 h后各组细胞中TGF-β1、CTGFmRNA及蛋白的表达。结果： 银杏叶提取物10、100、500 mg/L可抑制肝星状细胞的增殖，与空白对照组相比，G0/G1期DNA含量逐渐增加（P<0.05或P<0.01），S期DNA含量则逐渐降低（P<0.01），增殖指数(PI)逐渐降低(P<0.05 或P<0.01)；24 h各组TGF-β1mRNA及蛋白表达较对照组分别低（28±4）%、（39±4）%、（45±3）% (P<0.01)；（27±4）%、（37±4）%、（41±3）% (P<0.01)；48 h组各组TGF-β1mRNA及蛋白表达较对照组分别低（35±4）%、（49±3）%、（54±3）% (P<0.01)；(33±4)%、(48±3)%、(52±3)% (P<0.01)；4 h各组CTGF mRNA及蛋白表达较对照组分别低（29±6）%、（45±4）%、（56±3）% (P<0.01)；（36±4）%、（48±4）%、（49±3）% (P<0.01)；48 h组各组CTGF mRNA及蛋白表达较对照组分别低（48±6）%、（57±4）%、（69±3）% (P<0.01)；(44±6)%、(58±4)%、(62±3)% (P<0.01)。结论: 银杏叶提取物可能通过抑制肝星状细胞的增殖，抑制细胞因子TGF-β1、CTGF基因的表达发挥其抗肝纤维化的作用。     

心肌细胞结缔组织生长因子的表达及TGF-β1对其表达的影响

目的： 研究纯化的心肌细胞中结缔组织生长因子（CTGF）基因及蛋白的表达，并探讨转化生长因子β1（TGF-β₁）对其表达的影响。方法: 分离培养乳鼠心肌细胞，48 h后用流式分选方法（FACS）分选纯化心肌细胞，纯化的心肌细胞继续培养48 h。分为对照组（空白纯化心肌细胞组）和TGF-β₁刺激组，用RT-PCR方法测定两组细胞中TGF-β₁、CTGF、纤维连接蛋白（FN） mRNA的含量， 用Western blotting法检测两组细胞胞浆蛋白中CTGF、FN含量。结果: 心肌细胞中有较低水平的CTGF表达，在予以 TGF-β₁刺激后细胞内CTGF mRNA与蛋白含量分别提高 2.49 倍(P<0.01) 和3.63 倍（P<0.01），FN mRNA与蛋白含量分别提高 1倍(P<0.01)和4.18倍（P<0.01），而TGF-β1mRNA水平减少34%（P<0.01）。结论: 纯化的心肌细胞有CTGF的基础表达，并且TGF-β1可以明显上调其表达，提示心肌细胞主动参与了心肌纤维化过程。     

Leflunomide对实验性IgA肾病大鼠肾脏TGF-β1、MCP-1表达的影响

目的： 分别从基因和蛋白水平研究leflunomide对实验性IgA肾病（IgAN）大鼠肾组织转化生长因子（TGF-β1）、单核细胞趋化因子（MCP-1）水平的影响，了解其作用机制。 方法：建立IgAN大鼠模型，随机分成leflunomide组、强的松组、模型对照组，并同时设立正常对照组。用免疫组化、RT-PCR的方法分别检测和比较各组肾组织TGF-β1、MCP-1蛋白和基因的表达水平。 结果：Leflunomide组TGF-β1、MCP-1表达均明显低于模型对照组（P<0.05）；leflunomide组与激素组相比，TGF-β1、MCP-1表达无明显差异。 结论：Leflunomide可通过下调TGF－β1、MCP-1 在肾脏的表达，减少局部炎症反应，延缓肾脏纤维化的进程，从而保护肾脏。     

热休克蛋白47参与TGF-β1促人胚肺细胞胶原合成

  摘要：目的 观察热休克蛋白47（HSP47）对人胚肺成纤维细胞（HELF）胶原合成及间质细胞标志物的影响,探讨它与肺纤维化的关系。方法 用TGF－β1诱导HELF表达HSP47,观察用5ng/mL TGF-β1作用不同时间和用不同浓度TGF－β1作用于HELF48h; WST法检测TGF-β1对HELF增殖影响;细胞免疫荧光法检测HSP47的表达;免疫印迹技术检测HSP47、Ⅰ型胶原（COLLAGENⅠ）及间质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(VIMENTIN)的表达。结果 正常HELF表达少量HSP47,随着HELF在TGF-β1作用时间的延长和剂量逐渐增加,HSP47、COLLAGENⅠ、α-SMA和VIMENTIN的表达均同步增强（P<0.05）。结论 HSP47在TGF－β1的作用下,促进人胚肺成纤维细胞胶原蛋白的合成,作为胶原特异性分子伴侣在肺纤维化的发生发展过程中发挥至关重要的作用。     

干扰素γ对实验性大鼠肺纤维化、肺组织干扰素γ和转化生长因子β表达的影响

目的：研究干扰素γ（IFN-γ）对博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化实验模型肺泡炎和肺纤维化的影响,并探讨其对肺纤维化影响的可能机制。方法：60只SD大鼠随机分为正常对照组（N组）、模型对照组（M组）和干扰素γ组（R组）,每组各20只大鼠。于造模后3、7、14、28天分批处死动物,留取肺组织,观察肺泡炎和肺纤维化的程度,测定肺组织中的羟脯氨酸含量、IFN-γmRNA、转化生长因子β（TGF-β）mRNA的表达。结果：M组、R组大鼠肺泡炎3、7、14、28天均较N组严重,7天时最重,R组14天时肺泡炎显著高于M组;M组、R组肺纤维化评分及肺羟脯氨酸含量14、28天均高于N组,于28天最重;R组肺组织IFN-γmRNA表达3、7、14、28天均显著高于M组;R组肺组织中TGF-βmRNA表达在3天显著高于M组（P〈0.05）。结论：在博莱霉素诱导大鼠肺纤维化早期给予干扰素γ并不能减轻肺部炎症和肺纤维化,可能与其促进肺组织IFN-γ、TGF-β基因表达有关。     

转化生长因子β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶表达的影响

目的：探讨转化生长因子（TGF）-β1对香烟诱导的大鼠肺泡巨噬细胞γ-谷氨酰半胱氨酸合酶（γ-GCS）和活化蛋白(AP)-1亚单位c-fos mRNA及其蛋白表达的影响。方法:通过支气管肺泡灌洗获取大鼠肺泡巨噬细胞，随机分为对照组、香烟组和TGF-β1组。TGF-β1组加入终浓度为3 μg/L的TGF-β1,2 h后除对照组外，余2组均加入香烟烟雾提取物,对照组加入磷酸盐缓冲液。分别用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）和免疫细胞化学方法检测肺泡巨噬细胞中γ-GCSh(重链亚单位)及c-fos mRNA和蛋白的表达。结果:香烟组γ-GCSh和c-fos mRNA及其蛋白表达水平显著高于对照组(分别P<0.05,P<0.01)。TGF-β1组γ-GCSh mRNA及其蛋白表达水平明显低于香烟组(均P<0.01)；而c-fos mRNA及其蛋白表达水平明显高于香烟组(均P<0.01)。结论:转化生长因子-β1参与香烟所致慢性阻塞性肺疾病肺氧化/抗氧化失衡的发病机制。     

血小板反应蛋白1在转化生长因子β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞中的作用

目的：观察血小板反应蛋白1（TSP-1）在转化生长因子β₁(TGF-β₁)诱导大鼠心肌成纤维细胞中的作用。方法: 差速贴壁法分离新生Sprague-Dawley(SD)大鼠心肌成纤维细胞(CFs)。MTT法测CFs生长,羟脯氨酸法测CFs胶原含量,RT-PCR 法测TSP-1mRNA表达。结果: TGF-β₁诱导CFs TSP-1的表达呈浓度-时间依赖性增加(P<0.01)。TGF-β₁（20 μg/L）作用下24 h可诱导CFs增殖和胶原合成(P<0.01)。TSP-1反义寡核苷酸作用后的CFs的MTT A值、胶原含量减少(P<0.01)。结论: TGF-β₁可诱导新生大鼠CFs TSP-1表达,TSP-1反义寡核苷酸对TGF-β1诱导大鼠CFs增殖与胶原合成具有明显的抑制作用,TSP-1在TGF-β₁诱导大鼠心肌纤维化中可能具有重要的作用。     

高糖对大鼠肾小球系膜细胞ERK转导通路的影响

目的： 探讨高糖环境下系膜细胞中ERK转导途径的活性变化及其对TGF-β1 mRNA表达的影响。方法： 分离培养大鼠肾脏系膜细胞，调整培养液浓度为以下3组，即正常糖组、高糖组、甘露醇组。分别于干预24 h、48 h、72 h后用免疫细胞化学法和Western blotting法对系膜细胞中磷酸化ERK1/2（pERK1/2）的表达进行定位、定性及半定量分析，用RT-PCR法检测细胞中TGF-β1 mRNA的表达。结果： 高糖组系膜细胞中pERK1/2蛋白的表达明显高于正常糖组，并由胞浆向胞核内转移，随培养时间延长其表达上升(P<0.01)，高糖组TGF-β1mRNA的含量也明显高于正常糖组(P<0.01)，甘露醇组上述指标与正常糖组差异不显著(P>0.05)。结论： 高糖环境下系膜细胞中ERK信号转导通路可被激活，进而使TGF-β1 mRNA表达上调，这可能是糖尿病肾病系膜细胞受损、肾小球硬化的机制之一。     

γ-干扰素对大鼠肾系膜细胞转化生长因子β/Smad信号通路和基质金属蛋白酶2及其组织抑制因子2表达的影响

目的观察γ-干扰素（IFN-γ）处理培养的大鼠肾系膜细胞（mesangial cell,MsC）的增殖、转化生长因子（TGF）-β／Smad信号通路和基质金属蛋白酶2（MMP-2）及其组织抑制因子2（TIMP-2）基因的转录及蛋白表达的变化,探讨IFN-γ减轻肾纤维化的可能作用机制。方法用不同浓度的IFN-γ刺激MsC,MTT法检测对细胞增殖的影响;100IU／ml IFN-γ作用于MsC后,在不同时间（0、0．5、1、2、4、6、12、24h）收集细胞,分别应用即时逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测其TGF-β/Smad信号通路（Smad3、Smad7）、MMP-2／TIMP-2转录及蛋白表达的变化。结果经IFN-γ处理的MsC,其增殖不受影响;Smad7的基因转录及蛋白表达在IFN-γ作用0．5h后立即升高,仅维持在6h内,而Smad3的升高则在作用6h之后;MMP-2的基因转录及蛋白表达在作用6h时升高,而TIMP-2在6h时则降低。结论IFN-γ可能通过影响MsC的TGF-β／Smad信号通路,增强MMP-2和降低TIMP-2的转录和表达而起到减轻肾组织纤维化的作用。     

安体舒通改善自发性高血压大鼠心肌纤维化

目的：观察安体舒通对自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats,SHR）心肌纤维化的影响及可能机制。方法:将16只14周龄雄性SHR随机分为安体舒通组和对照组,每组8只，分别以安体舒通30 mg·kg-1·d-1 及等量生理盐水灌胃12周，同时取8只同龄雄性SD大鼠作为正常对照组，用免疫组化的方法对结缔组织生长因子（connective tissue growth factor,CTGF）、转化生长因子β1（transforming growth factors beta-1,TGFβ1）、 胶原Ⅰ和 Ⅲ（collagenⅠand Ⅲ）在大鼠左室心肌的分布及表达进行半定量分析；用RT-PCR的方法检测TGFβ1、CTGF mRNA在心肌表达水平；用Masson染色法观察左室心肌胶原形态，图像分析测量胶原容积分数（collagen volume fraction,CVF）；用碱水解法测定左室心肌羟脯氨酸(hydroxyproline,Hypro)含量。结果:（1）SHR对照组左室重量指数（left ventricular index,LVI）、CVF、Hypro、collagenⅠ和Ⅲ、CTGF、TGFβ1蛋白及mRNA表达明显高于SD大鼠组（P<0.01）；相对于SHR对照组，安体舒通组则显著降低（P<0.05）；（2）相关分析表明：CTGF与TGFβ1、CVF、Hypro和LVI呈高度正相关（P<0.01）。结论:安体舒通能明显改善SHR心肌纤维化，其作用可能是通过阻断盐皮质激素受体和抑制CTGF的表达而实现的。     

红霉素对吸烟大鼠肺内TGF-β1和γ-GCS表达的影响

目的： 探讨红霉素对吸烟大鼠肺内转化生长因子-β₁（TGF-β₁）和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶（γ-GCS）的影响以及在慢性阻塞性肺疾病治疗中的抗氧化作用。方法: Wistar大鼠30只，随机抽取20只被动吸烟4周后，10只继续吸烟8周作为吸烟组、10只吸烟加红霉素灌胃作红霉素治疗组，另10只作对照组。测定气道阻力和肺顺应性，采用免疫组织化学法、免疫细胞化学法和原位杂交法检测气道上皮细胞TGF-β₁和γ-GCS蛋白、肺泡巨噬细胞两者蛋白及其mRNA表达。结果: 吸烟组大鼠气道阻力增高，肺顺应性降低，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均明显增高（P<0.05），红霉素治疗组气道阻力有所降低、肺顺应性增高，TGF-β₁和γ-GCS蛋白及其mRNA表达均低于吸烟组，但高于对照组（P<0.05）。吸烟组TGF-β₁与γ-GCS表达呈正相关（P<0.05），而红霉素治疗组无明显相关性。结论: 红霉素干预后吸烟大鼠肺内TGF-β₁和γ-GCS表达降低，提示红霉素可能在COPD治疗中发挥一定的抗氧化作用。     

黄芪注射液对哮喘大鼠p38 MAPK和Th1/Th2类细胞因子变化的影响

目的： 探讨黄芪注射液对哮喘大鼠气道炎症和Th1/Th2类细胞因子（IFN-γ/IL-4）变化的影响及其可能机制。方法：雄性SD大鼠40只随机分成5组，即正常对照组、哮喘模型组和黄芪低、中、高剂量干预组。分别采用酶联免疫吸附法（ELISA）、逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和蛋白质印迹检测支气管肺泡灌洗液（BALF）中IL-4、 IFN-γ含量、肺组织中IL-4 mRNA、 IFN-γ mRNA表达和磷酸化p38 MAPK的变化，并观察BALF中炎症细胞和肺组织病理学改变。结果：哮喘模型组大鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4含量和肺组织中IL-4 mRNA、磷酸化p38 MAPK表达水平升高，IFN-γ、IFN-γ mRNA水平降低，与正常对照组比较，显著差异（P<0.01）。黄芪低、中、高剂量干预组大鼠BALF中炎症细胞计数、IL-4含量和肺组织中IL-4 mRNA、磷酸化p38 MAPK表达水平均明显降低，IFN-γ、IFN-γ mRNA水平明显上升，与哮喘模型组比较，均具有显著差异（P<0.01）。黄芪处理能明显减轻哮喘大鼠肺组织病理学改变，但黄芪低、中、高剂量干预组之间比较，无显著差异（P>0.05）。肺组织磷酸化p38 MAPK的表达与EOS计数、IL-4、IL-4mRNA之间分别呈显著正相关（r=0.63，r=0.69，r=0.71，P<0.01），与IFN-γ和IFN-γ mRNA之间分别呈显著负相关（r=-0.65，r=-0.68，P<0.01）。结论：p38 MAPK可能参与了支气管哮喘的发病过程。黄芪注射液对哮喘大鼠具有保护作用，其机制可能与抑制p38 MAPK磷酸化、纠正IFN-γ/IL-4平衡失调、减轻炎症细胞浸润有关。     

PCNA在CLD新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达及意义

目的探讨增殖细胞核抗原（proliferatingeellnuelearantigen,PCNA）在CLD新生鼠肺成纤维细胞中的动态表达及意义。方法足月新生SD大鼠于生后12h内分别持续吸入85%高氧和空气,于3、7、14、21天随机处死后动物,无菌条件下采集肺组织,进行LF细胞的原代培养,应用MTT法检测细胞增殖活力。免疫组化法检测PCNA蛋白表达;Real-time PCR法检测PCNAmRNA含量。结果 MTT结果显示,高氧使得LF增殖活力增强;生后3d空气组和高氧组PCNA蛋白及mRNA的表达无统计学差异。生后7d时高氧组PCNA蛋白及mRNA的表达较空气组增加（P〈0.05）;14d、21d时增加明显（P〈0.01）。结论体内高氧使LF增殖活力增加,最终导致肺间质纤维化。     

HMGB1在TNF-α诱导大鼠滑膜细胞株RSC-364增殖中的作用及机制

目的：探讨HMGB1在TNF-α诱导的大鼠滑膜RSC-364细胞增殖中的作用及机制。方法: 将常规培养的RSC-364细胞分为正常对照组和10 μg·L-1TNF-α刺激组，分别于6 h、12 h、24 h收集细胞。RT-PCR检测HMGB1、STAT1和STAT3 mRNA的表达；免疫细胞化学和流式细胞术检测HMGB1、PCNA、 STAT1和STAT3蛋白表达。结果：① TNF-α能显著上调HMGB1 mRNA和蛋白的表达，同时PCNA蛋白表达也增强（P<0.05或P<0.01）。② TNF-α 作用12 h 后，STAT1 mRNA和蛋白的表达明显增强，24 h表达最高（P<0.01）。③ TNFα 作用6 h-24 h对STAT3 mRNA和蛋白的表达无明显影响（P>0.05）。④ HMGB1蛋白表达与PCNA 、STAT1蛋白表达呈正相关；STAT1与PCNA蛋白表达亦呈正相关。结论：TNF-α可能通过诱导RSC-364细胞高度表达HMGB1，促进滑膜细胞增殖；STAT1可能参与了其信号转导及调控过程。     

不同预缺血时间对肾小管间质纤维化的影响

目的：在建立缺血所诱发的肾小管间质纤维化大鼠模型基础上，探讨不同预缺血时间对肾脏纤维化的影响。方法:双侧肾蒂夹闭40 min后恢复灌注，制作缺血再灌注损伤模型，8 d前用同样方法分别造成肾脏预缺血10 min、20 min和30 min。预缺血后1 d、4 d、8 d和第2次缺血后5 周收集血样和肾脏标本。Masson特殊染色法观察小管间质纤维化程度；Western blotting法测定α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、TGF-β1和磷酸化Smad2蛋白表达；免疫组织化学法观察肾脏α-SMA 和TGF-β1的分布。结果:术后5周单纯缺血再灌注组（I/R）和10 min 缺血预处理组（I-10/I）出现了相似程度的小管间质纤维化病变；30 min缺血预处理组（I-30/I）的肾脏纤维化明显加重，并伴有肾脏重量的增加、肾功能的减退和α-SMA、TGF-β1、phospho-Smad2蛋白表达进一步上调；相反，20 min缺血预处理组（I-20/I）的肾脏纤维化显著减轻甚至消失，与假手术对照组（sham）相比上述蛋白的表达无显著差异。结论:长时间的肾脏缺血可以引起小管间质纤维化，提前进行缺血预处理影响此病理改变，其作用结果与预缺血的时间长短密切相关，时间适中的预缺血能保护肾脏免于纤维化结局，其保护机制有待进一步研究。另外，肌成纤维细胞增多（α-SMA阳性）和TGF-β1/Smad信号通路激活可能参与缺血性小管间质纤维化病变过程。     

血小板反应蛋白1反义寡核苷酸抑制TGF-β1诱导大鼠心肌纤维化

目的 观察血小板反应蛋白1（TSP-1）反义寡核苷酸在转化生长因子β1(TGF-β1)诱导大鼠心肌成纤维细胞中的作用。方法 差速贴壁法分离新生大鼠心肌成纤维细胞(CFs)。反义、正义、TSP-1寡核苷酸与TGF-β1(20?g/L)共培养24h ,采用MTT法测CFs生长数目,羟脯氨酸法测胶原含量,RT-PCR 法测TSP-1和VEGF的mRNA表达。结果TGF-β1可以明显促进CFsTSP-1mRNA的表达且呈浓度-时间依赖性(P<0.01)。VEGFmRNA的表达呈浓度-时间依赖性降低(P<0.01)。TSP-1反义寡核苷酸作用后的MTT A 值、胶原蛋白含量减少，VEGF的表达明显增高(P<0.01)。结论TSP-1反义寡核苷酸可抑制TGF-β1诱导的大鼠心肌成纤维细胞增殖、胶原合成和升高VEGF的表达。TSP-1反义寡核苷酸可能具有抗心肌纤维化的作用。     

柴胡皂甙D通过调控TGF-β1/Smads信号通路抑制人胚肺成纤维细胞增殖和胶原蛋白产生

目的研究柴胡皂甙D(SSD)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人胚肺成纤维细胞(HELF)增殖、转分化以及TGF-β1/果蝇抗生物皮肤生长因子蛋白家族(Smads)信号通路的影响。方法体外培养HELF,设立正常对照组、 1 ng/mL TGF-β1处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合0.5μmol/L SSD处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合1μmol/L SSD处理组、 1 ng/mL TGF-β1联合2μmol/L SSD处理组。采用CCK-8法检测HELF的增殖情况,荧光定量PCR法检测Smad2、 Smad3、 Smad7的mRNA水平, Western blot法检测α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、 1型胶原蛋白(Col1)、 Smad2、 Smad3、磷酸化的Smad2(p-Smad2)、 p-Smad3、 Smad7的蛋白水平。结果与正常对照组比较, TGF-β1处理组细胞增殖明显, Col1、α-SMA蛋白水平增加, Smad2和Smad3 mRNA和蛋白磷酸化水平显著增加, Smad7 mRNA和蛋白水平显著降低;与TGF-β1处理组比较,不同浓度SSD处理组细胞增殖降低,可逆转以上各指标的改变,呈一定的量效关系。结论 SSD通过调控TGF-β1/Smads信号通路,发挥抗肺纤维化的作用。     

ROCKⅠ及TGF-β1在慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠肺小动脉的表达

目的：观察Rho激酶（ROCKⅠ）及转化生长因子β₁ (TGF-β₁)在慢性血栓栓塞性肺动脉高压大鼠肺小动脉表达的动态变化。方法: 雄性Wistar大鼠64只,随机分为8组,每组8只：初始对照组、栓塞3 d组、1周组、2周组、4周组、8周组、12周组、终末对照组。采血制备血栓,颈静脉注入,2周后第2次栓塞,全程腹腔注射氨甲环酸。达实验设定日期后,测各组大鼠平均肺动脉压（mPAP）、肺动脉相对中膜厚度（PAMT）、管壁面积/管总面积(WA/TA) 、右室肥厚指数（RVHI）,原位杂交检测ROCKⅠmRNA表达,免疫组化检测TGF-β1蛋白表达。结果: 栓塞4周组至12周组大鼠随时间延长mPAP明显增高（均P<0.01）;PAMT、WA/TA在4周后随时间延长显著增高（4周组P<0.05,8周、12周组P<0.01）;8周后RVHI较对照组明显增高(8周组P<0.05,12周组P<0.01);栓塞后ROCKⅠmRNA原位杂交染色强度随时间延长出现增高趋势（3 d组至2周组P<0.05,4周组至12周组P<0.01）, TGF-β₁蛋白免疫组化染色强度随时间延长出现增高趋势（1周组、2周组P<0.05,4周组至12周组P<0.01）。相关分析表明,ROCKⅠmRNA 及TGF-β₁蛋白与mPAP、RVHI及血管重构指标均呈正相关(均P<0.01);ROCKⅠmRNA与TGF-β₁蛋白表达呈正相关(r=0.612,P<0.01) 。结论: ROCKⅠ和TGF-β₁均可能参与慢性血栓栓塞性肺动脉高压、肺血管重构的病理生理过程,此过程中Rho/Rho激酶信号通路可能是TGF-β1发挥生物学效应的重要途径之一。     

核因子-κB对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞增殖、凋亡及TGF-β1表达的影响

目的: 探讨核因子-κB(NF-κB)对TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞（ASMCs）增殖、凋亡和转化生长因子β₁（TGF-β₁）表达的影响。方法: 体外培养ASMCs，以肿瘤坏死因子-α（TNF-α）及NF-κB特异性抑制剂二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)作为工具药,将ASMCs分为对照组、TNF-α组和TNF-α+PDTC组。逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测TGF-β₁ mRNA表达，Western blotting检测NF-κB、TGF-β₁的表达，免疫细胞化学染色法检测PCNA、Bcl-2蛋白表达及定位，四甲基偶氮唑蓝(MTT)微量比色法测定ASMCs增殖，Annexin V/PI双标记流式细胞仪分析法检测细胞凋亡。结果: （1）TNF-α组ASMCs的NF-κB活性显著高于对照组(P<0.01),TNF-α+PDTC组NF-κB活性显著低于TNF-α组 (P<0.01)。（2）TNF-α组ASMCs增殖显著高于对照组(P<0.01),TNF-α＋PDTC组的增殖反应显著低于TNF-α组(P<0.01)；TNF-α+PDTC组细胞凋亡率显著高于TNF-α组及对照组(P<0.01)。（3）TNF-α组ASMCs的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著高于对照组(P<0.01)，TNF-α+PDTC组的PCNA、Bcl-2蛋白表达量均显著低于TNF-α组(P<0.01)。（4）TNF-α组ASMCs的TGF-β₁的mRNA及蛋白表达水平均显著高于对照组及TNF-α＋PDTC组（P<0.01）。结论: NF-κB活化可能参与调控TNF-α诱导的大鼠气道平滑肌细胞的增殖、凋亡及TGF-β₁的表达和分泌。     

大黄素阻断SMAD2/3信号通路抑制人肺动脉平滑肌细胞增殖和迁移

目的 探讨大黄素对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导的人肺动脉平滑肌细胞(HPASMC)增殖、迁移的影响。方法 体外培养HPASMC,取对数生长期的细胞,分为对照组、TGF-β1处理组、TGF-β1联合大黄素处理组。采用CCK-8法检测HPASMC活性,Transwell^TM小室实验和划痕实验检测HPASMC迁移能力;免疫荧光实验检测骨桥蛋白(OPN)、增殖细胞核抗原(PCNA)的表达,Western blot法检测HPASMC的OPN、PCNA的蛋白水平及SMAD家族成员2(SMAD2)和SMAD3的磷酸化水平。结果 与对照组相比,TGF-β1处理组的OPN、PCNA蛋白表达增加,HPASMC增殖和迁移能力增强,SMAD2、SMAD3的磷酸化增强。与TGF-β1组相比,TGF-β1联合大黄素处理组HPASMC的增殖和迁移能力降低,OPN、PCNA蛋白表达减少,SMAD2、SMAD3蛋白磷酸化明显降低。结论 大黄素可抑制HPASMC中TGF-β1上调OPN、PCNA蛋白的表达,抑制TGF-β1诱导的PASMC增殖和迁移,可能与抑制SMAD2/3信号通路有关。