CD28/CTLA-4共刺激分子在再生障碍性贫血免疫发病机制中的作用

目的 研究CD28、CTLA-4在再生障碍性贫血（AA）免疫发病机制中的可能作用。方法 以流式细胞术分别分析23例发病期AA、10例恢复期AA患者和15名正常人骨髓细胞中CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、CTLA-4表达率，Th1、Th2细胞比例，评价CD28、CTLA4表达与Th1／Th2、中性粒细胞绝对值（ANC）之间的关系。结果 ①正常对照组CD3^＋CD4^＋T细胞上CD28、cTLA4表达率及CD28^＋／CTLA-4^＋比值分别为（31．40±10．83）％、（2．45±1．30）％、17．02±13．44，AA患者发病期分别为（39．84±10．89）％、（1．43±0．67）％、43．04±37．61，AA患者恢复期分别为（22．00±9．08）％、（3．46±2．26）％、10．49±7．80；与正常对照组比较，AA患者发病期CD28显著升高（P〈0．05），CTLA-4显著下降（P=〈0．01），CD28^＋／CTLA4^＋比值相应地亦显著升高（P〈0．05），而恢复期上述数值与正常对照组比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。②正常对照组Th1、Th2细胞、Th1／Th2比值分别为（4．21±2．11）％、（1．99±1．27）％、2．46±1．28，AA发病期为（11．13±4．96）％、（2．46±1．65）％、5．20±1．98，恢复期分别为（5．39±4．29）％、（2．53±2．41）％、2．87±1．43；与正常对照组比较，AA发病期Th1增高，Th1、Th2平衡向Thl偏移（P值均〈0．01），恢复期与正常对照组比较，差异无统计学意义。③AA患者CD28^＋／cTLA4^＋比值与Thl／Th2比值呈正相关（P〈0．05），ANC与CD3^＋CD4^＋CD28^＋T细胞数呈负相关（P〈0．01），与CD3^＋CD4^＋CTLA-4^＋T细胞数呈正相关（P〈0．01）。结论 ①AA发病期患者骨髓CD4^＋T细胞表面共刺激分子表达异常，CD28升高，而CTLA-4下降，AA患者骨髓T细胞处于“预激活”状态；②CD28／CTLA-4比值与Th1／T12．比值呈正相关提示：CD28、CTLA-4表达失衡可引起Th细胞格局偏移，Th1型细胞增多。③ANC和CD28、CTLA-4间相关分析进一步说明CD28、CTLA-4与AA的发生、发展有关。     

支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞CD19~+CD23~+和CD4~+CD25~+的表达及意义

目的探讨支气管哮喘患儿外周血淋巴细胞CD19＋CD23＋和CD4＋CD25＋的表达及意义。方法采用流式细胞分析技术及免疫化学发光法分别检测34例哮喘发作期（哮喘发作组）和32例哮喘缓解期（哮喘缓解组）外周血CD19＋CD23＋表达率、CD4＋CD25＋表达率和血清总IgE水平,并与25例体检儿童（对照组）进行比较。结果哮喘发作组外周血CD19＋CD23＋表达率为（19.31±9．08）％分别高于哮喘缓解组（8．63±3．54）％和对照组;哮喘发作组CD4＋CD25＋表达率为（2．79±1．69）％和哮喘缓解组为（3.36±1．17）％均低于对照组;哮喘发作组IgE水平为（177．01±90．38）IU/ml和哮喘缓解组为（160．76±77．54）IU／ml均高于对照组．三组的差异均有统计学意义（F分别=36．62、24．67、24．35,P均〈0．05）。CD19＋CD23＋表达率与IgE呈正相关,CD4＋CD25＋表达率和IgE呈明显负相关,CD19＋CD23＋表达率和CD4＋CD25＋表达率亦呈明显负相关,差异均有统计学意义（r分别：0．22、-0．41、-0．34,P均〈0．05）。结论哮喘急性发作时外周血CD19＋CD23＋和CD4＋CD25＋改变明显。     

慢性再生障碍性贫血患者T淋巴细胞亚群和粒-单核细胞集落形成单位的检测

目的探讨慢性再生障碍性贫血（CAA）发病的免疫因素，为CAA的临床治疗提供依据。方法采用骨髓细胞半固体集落培养法检测粒一单核细胞集落形成单位（GM—CFU），同时用流式细胞仪检测T淋巴细胞亚群。结果CAA骨髓细胞培养GM—CFU产率明显少于正常对照组，（7．9±0．5）个／ml vs （88．7±2．7）个／ml（P〈0．01）；CAA骨髓细胞加正常血清培养GM-CFU的产率与正常对照组比较差异无统计学意义，（82．4±2．6）个／ml vs （88．7±2．7）个／ml（P〈0．05），其中有21例的GM-CFU的产率（60．1±2．1）个／ml与对照相比较明显减少；CAA血清与正常骨髓细胞培养的GM—CFU为（105．6±3．2）个／ml，显著高于正常组。CAA组的CD3^＋、CD4^＋和CD4^＋／CD8^＋均比对照组降低，分别为（49．8±0．6）％ vs （64．3±0．9）％、（29．7±0．4）％ vs （38．6±0．3）％和（1．2±0．1）％ vs （1．7±0．1）％（均P〈0．01）；CD8^＋细胞明显高于正常，（28．9±0．3）％ vs （24．5±0．3）％（P〈0．01）。结论CAA患者普遍存在着T细胞亚群失衡的免疫异常；CAA患者骨髓细胞中可能有抑制患者GM—CFU形成的因素，而血清中存在着升高的粒一单核细胞集落刺激因子等，其临床意义尚需进一步观察。GM-CFU体外培养联合T细胞亚群检测，可作为CAA异常免疫机制的诊断指标。     

原发性胆汁性肝硬化动物模型的建立及外周血T淋巴细胞表面CD40配体分析

目的用聚肌苷酸胞苷酸（polyinosinic polycytidylic acid，PolyI：C）注射C57BIL/6小鼠以研究建立原发性胆汁性肝硬化（PBC）动物模型，探讨CD40配体（CD40L）在外周血T淋巴细胞表面的表达，和在PBC中T淋巴细胞的活化情况。方法20只C57BIM6小鼠随机分对照组和模型组。将polyI：C以5ms／kg的剂量腹腔注射模型组小鼠，对照组注射PBS，每周2次，120d后处死，留取外周血和肝组织，间接免疫荧光法检测血清抗线粒体抗体（AMA），HE染色观察胆管病理变化，生化分析仪测定血清碱性磷酸酶（ALP）含量，流式细胞术分析外周血CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞所占比例及CD40L在T淋巴细胞表面的表达情况。结果PolyI：C注射120d后模型组小鼠均出现AMA阳性，肝组织小胆管周围有不同程度的炎性细胞浸润，血清ALP明显高于对照组（P〈0．001）；对照组胆管及血清ALP均未发生明显变化；模型组小鼠CD40L^＋／CD4^＋、CD40L^＋／CD8^＋T淋巴细胞[（4．35±0．34）％，（1．42±0．10）％）显著高于对照组[（0．78±0．10）％，（0．43±0．04）％，P〈0．01]；而模型组小鼠CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞所占比例[（25．83±1．80）％，（24．84±2．70）％]与对照组[（20．51±3．46）％，（17．84±1．53）％]比较，差异无统计学意义（P〉0．05）。结论PolyI：C腹腔注射C57BIM6小鼠120d可引起PBC病变，活化的CD4^＋、CD8^＋T淋巴细胞在PBC发病中起重要作用。     

CD4+CD25+调节性T细胞在特发性血小板减少性紫癜患者中的变化

目的探讨CD4^＋CD25^＋T细胞在特发性血小板减少性紫癜（ITP）患者发病机制中的作用。方法应用流式细胞术检测ITP患者外周血CD4^＋CD25^＋T细胞、CD4^＋CD25^highT细胞、CD4^＋FOXP3^＋T细胞、CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞的数量；实时荧光定量PCR检测外周血FOXP3 mRNA的表达水平。将ITP患者和正常人CD4^＋CD25^highT细胞与自身CD4^＋CD25^-T细胞混合培养，检测CD4^＋CD25^high T细胞免疫抑制功能。结果ITP患者外周血中CD4^＋CD25^＋T细胞约占CD4^＋T细胞的（15．64±5．82）％，明显高于正常对照组（9．30±3．95）％（P〈0．01），CD4^＋CD25^high T细胞比例为（1．53±0．66）％，与对照组[（1．36±0．55）％]比较差异无统计学意义（P〉0．05）；CD4^＋FOXP3^＋T细胞和CD4^＋CD25^＋FOXP3^＋T细胞分别为（1．82±1．42）％和（1．25±0．94）％，均明显低于对照组[（3．90±1．37）％和（2．65±0．92）％]（P值均〈0．01）。ITP患者外周血FOXP3 mRNA表达水平较正常人明显下调（P〈0．01），CD4^＋CD25^high T细胞的抑制活性较正常人减弱（P〈0．01）。结论ITP患者中CD4^＋CD25^＋T细胞FOXP3表达水平降低，抑制活性减弱。     

流式细胞术检测淋巴细胞亚群抗体用量的探讨

目的探讨应用流式细胞术（FCM）检测人淋巴细胞数绝对值在正常范围（0.8～4）×10^9／L时，荧光抗体的最佳用量。方法：取30例标本，淋巴细胞数量在（O.8～4）×10^9／L不等，用流式细胞术检测CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD19＋及NK细胞，根据荧光抗体用量分为4组，分别为20、10、5、2．5μL，统计分析4组间差异。结果所测白细胞分化抗原（CD）3＋、CD4＋、CD8＋、CD9＋及自然杀伤细胞（NK），结果4组间差异无统计学意义（P〉0．05）。结论对于淋巴细胞数绝对值在正常范围（O.8～4）×10^9／L的全血标本，减少荧光抗体量至2、5μL对CD3＋、CD4＋、CD8＋、CD19＋及NK细胞检测结果无影响，比常用量可减少8倍，对于临床实验室节约试剂成本、减少浪费等有一定参考价值。     

骨髓增生异常综合征患者Th1/Th2细胞平衡改变的临床意义

目的：探讨骨髓增生异常综合征（MDS）患者外周血CD4^＋、CD8^＋细胞亚群平衡的改变，以及与活化T细胞之间关系的临床意义。方法：选择14例难治性贫血患者（RA）和1例难治性贫血伴原始细胞增多患者（RAEB）的外周血，在PMA、Ionomycin、Monensin存在的条件下体外培养，进行细胞膜表面抗原和细胞内因子染色，并用流式细胞仪计数外周血表达CD3^＋ CD8^-IFN-γ^＋细胞（Th1）、CD3^＋CD8^-IL-4^＋细胞（Th2）、CD3^＋CD8^＋IF-γ^＋细胞（Tcl）、CD3^＋CD8^＋IL-4^＋细胞（Tc2）的百分率。结果与活化T细胞之间关系做相关性分析。结果：MDS组患者Th1细胞高于正常对照组（P〈0．05），体内的Th细胞向Th1细胞漂移，产生过多的造血抑制因子如IFN-γ，TNF-β等。Th2，Tc1，Tc2细胞与正常对照组相比无显著差异（P〉0．05）；CD4^＋CD45RO^＋细胞的百分率和Th1细胞的百分率呈正相关，相关系数为r=0．573（P〈0．05），CD4^＋CIN5RA^＋细胞的百分率和Th1细胞的百分率呈负相关，相关系数为r=-0．509（P=0．05），而和Th2，Tc1，Tc2的百分率无明显的相关性（P〉0．05）。结论：MDS患者存在有Th1／Th2细胞因子网络的失衡以及过多的造血抑制因子，且这些因子主要来源于T淋巴细胞。     

哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群的变化及其意义

目的探讨流式细胞仪检测哮喘患儿淋巴细胞亚群的变化及意义。方法采用三色免疫荧光标记法,应用流式细胞仪检测54例哮喘患儿及15名健康儿童外周血CD4^＋、CD8^＋、γ/δTCR^＋T细胞和CD19＋B淋巴细胞的比例,计算CD4^＋/CD8^＋比值,并进一步检测患者辅助性淋巴细胞（Th）1和Th2亚型的变化。结果与对照组相比,哮喘患儿CD4^＋T细胞比例、CD4^＋/CD8^＋比值均明显升高（P均〈0.05）;γ/δTCR^＋T细胞则明显降低（P〈0.01）;Th1细胞比例减少（P〈0.05）,Th2细胞增多（P〈0.01）。结论哮喘患儿外周血淋巴细胞亚群比例发生明显改变,CD4^＋T和Th2细胞比例增高以及γ/δTCR^＋T细胞降低是其特征之一;流式细胞仪检测可为哮喘病情监测和治疗方案拟定提供依据。     

湿疹患者外周血CD4+CD25+FOXP3+调节性T细胞和血清IL-4,IL-10,TGF-β检测及临床研究

目的通过对湿疹患者外周血单个核细胞（PBMC）中转录调节因子3（FOXP3）阳性的天然调节性T细胞（nTreg,CD4^＋CD25^＋Foxp3^＋）表达率及其血清白介素4（IL-4）、白介素10（IL-10）、转化生长因子β（TGF—β）水平的检测结合心理评定并与对照组进行对比分析,探讨其在湿疹发病过程中的作用及患者发病的可能机制。方法应用流式细胞术（flow cytometry,FCM）和ELISA法对湿疹患者（n=32）、对照组（n=32）分别进行PBMC中nT表达率及血清IL-4,IL-10,TGF-β水平进行检测,同时应用症状自评量表（SCL-90）进行心理评定。结果湿疹患者PBMC中nTreg细胞表达率（％）为4．86±1.69,明显低于对照组6．10±2．21;血清IL-4（96．21±20．07pg／ml）,IL-10（12．6±1．95pg／ml）含量高于对照组相应检测值53．93±13．10,9．82±1．34pg／ml;TGF-β 15．76±3．11ng／ml含量明显低于对照组（24．39±4．44ng／ml）,各项检测指标两纽之间比较差并均有统计学意义（P〈0．01）,患者心理健康状态与对照组比较也有显著性差异。结论nTreg数量降低减弱了对Th2细胞的抑制作用是湿疹患者发病的关键环节,Th1／Th2失衡、细胞因子分泌异常在疾病的发生发展中起重要作用,是湿疹发病和慢性化的重要原因,加强对湿疹患者的心理疏导以减少对患者精神、躯体造成的伤害,提高疗效具有重要临床意义。     

不同来源人造血干/祖细胞在NOD/SCID小鼠体内归巢能力的差异

目的 比较不同来源的人造血干／祖细胞在NOD／SCID小鼠体内归巢能力的差异性，并探讨其体内归巢能力与膜表面归巢相关分子CXCR4表达水平的相关性。方法 采用流式细胞术（FACS）检测新鲜脐血、冻存脐血、动员后外周血（mPB）及骨髓来源的CD34^＋细胞表面CXCR4表达水平；将荧光染料CFSE标记的人CD34^＋细胞移植人接受照射的NOD／SCID小鼠，移植后20小时检测已归巢于NOD／SCID小鼠骨髓及脾脏中不同来源的人CD34^＋细胞，计算其相应的骨髓及脾脏归巢效率；并将小鼠股骨制成组织切片，荧光显微镜下观察人CD34^＋细胞在小鼠骨髓腔内的分布。结果 新鲜脐血、冻存脐血、mPB和骨髓CD34^＋细胞膜表面CXCR4表达阳性率分别为（49.52±1．12）％。（46．12±2．29）％，（48．50±2．48）％和（65．39±1．27）％，CD34^＋细胞在NOD／SCID小鼠骨髓的归巢效率分别为（3．00±0．44）％，（2．84±0．46）％，（4．06±0．70）％及（5．76±0．52）％；在脾脏的归巢率分别为（1．88±0．12）％，（1．80±0．15）％，（1．90±0．22）％，（2．16±0．34）％。归巢的CD34^＋细胞主要分布于小鼠股骨的骨内膜区域。结论 脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平低于mPB和骨髓。经冻存复苏后脐血CD34^＋细胞膜表面CXCR4水平略有下调。脐血CD34^＋细胞在照射NOD／SCID小鼠的骨髓归巢效率低于mPB和骨髓。     

韶关市农村留守儿童孤独感状况调查

目的了解广东省韶关市农村地区留守儿童孤独感现状及其影响因素。方法对韶关市某地区两所农村小学3～6年级学生中的489名留守儿童采用儿童孤独量表和自编调查表进行问卷调查。结果17．6％留守儿童存在孤独感，不同性别孤独感发生率无差异性，不同年龄及不同年级间孤独感发生率差异均有极显著性（P〈0.01）；随年级增加，孤独感发生率呈下降趋势（X^2趋势=5．970，P〈0.05）。留守儿童孤独感与健康状况、学习成绩、学习困难程度、父母教育方式、父母间关系和老师教育方式等因素显著相关（P〈0.01～0．05）。结论农村地区留守儿童中存在一定程度的孤独感问题，老师和家长应以正确的态度和方法对待留守儿童，以减少其孤独感的发生。     

Determination of loss of quality of life

Physiatrists are a valuable resource in legal settings, where assessment of functional capacity to perform work and of future medical needs must be determined. Physiatrists help determine what future medical care is needed to restore and maintain an individual at the maximum level of life function. This article focuses on the use of a quality of life (QOL) rehabilitation model, rather than a medical model, for enhancing functional performance, modifying environments, and facilitating patient coping. We discuss use of the QOL model to describe and influence a patient's physical, psychological, cognitive, vocational/economic, and social/leisure domains.     

产科新生儿不同部位经皮测黄报警预值的可靠性观察

目的对比观察产科新生儿不同部位经皮胆红素（TCB）报警预值的可靠性。方法132例产科新生儿采取随机数字分组法分为正常产组和剖宫产组各66例,新生儿均于产后第4天同一时间点应用KJ8000经皮测黄仪分别测量额、胸、腹、额胸、额胸腹TCB值,TCB〉12．9mg／dl者,取得亲属同意抽取静脉血检测血清胆红素（SB）,对比分析不同部位TCB及其与sB值的差异。结果两组分别有17例或21例达到TCB报警预值。两组TCB或sB相同方法及相同部位比较,差异无统计学意义（P〉0．05）;两组TCB不同部位对比,额部值最低、胸部值最高,且与其他部位同组对比差异均有统计学意义（P〈0．01）;两组sB值对比差异无统计学意义（t=1．53,P〉0．05）,与不同部位TCB对比均以胸部数值差异无统计学意义（P〉0．05）,而与其他部位TCB两组差异均有统计学意义（P〈0．01）。结论正常产与剖宫产新生儿术后sB对比差异无意义;TCB动态监测以胸部结果更接近SB。     

The characteristics of interpretation of results of analysis of protein amount in urine of pregnant women

The adequacy of implementation of present proteinuria diagnostic thresholds under examination of pregnant women was examined. The analysis was applied to all urine samples of pregnant women from December 2009 to March 20010. The amount of protein in urine was concurrently evaluated by turbidimetric analysis with sulfosalicylic acid, colorimetric analysis with pyrogallol red, "dry chemistry" technology (the diagnostic strips). It is established that the mentioned techniques of analysis of protein in urine provide independent results. The results of colorimetric analysis are characterized by better precision and adequacy. However, in case of pregnant women the diagnostic threshold of protein concentration should be shifted from 0.120 to 0.150 g/l.     

超声评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响

目的 探讨超声在评价放疗对颈动脉溃疡斑块形成的影响的价值。方法 回顾性收集经病理学证实为头颈部肿瘤、放疗前后的颈动脉超声资料以及其他基线资料完整的患者93例,比较放疗前后放疗侧颈动脉和非放疗侧颈动脉粥样硬化斑块和溃疡斑块的总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积。结果 放疗前后颈动脉超声检查的平均间隔时间为（6.1±1.9）年;放疗前放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积与非放疗侧比较差异均无统计学意义（P均>0.05）;放疗后放疗侧斑块总数量、平均内膜-中膜厚度、最大斑块面积、溃疡斑块的总数量、最大溃疡斑块的面积、最大溃疡口的面积均较非放疗侧加重,差异有统计学意义（P均<0.05）。结论 放疗可导致头颈部肿瘤患者颈动脉粥样硬化斑块的形成和进展,且斑块具有易损性特点。