促红细胞生成素在大鼠脊髓缺血再灌注损伤中的表达及其意义

目的:观察促红细胞生成素(EPO)在大鼠脊髓缺血再灌注损伤(SCII)中的表达和重组人促红细胞生成素(rhuEPO)预处理对再灌注损伤脊髓神经细胞的作用。方法:将W ister大鼠分为正常组、假手术组、rhuEPO处理组和生理盐水对照组;rhuEPO处理组和生理盐水对照组于术前3h腹腔注射rhuEPO和生理盐水,制备大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型。以免疫组化和W estern blot法检测脊髓组织中EPO的表达变化;以原位末端脱氧核糖核苷酸转移酶介导dUTP标记法(TUNEL法)检测细胞的凋亡情况。结果:EPO在无损伤脊髓中即有少量的表达,SCII后8h表达显著上调,于12、24h(12h与24h组比较差异无显著性意义,P>0.05)达高峰,伤后3d表达逐渐下调,5d仍保持较高水平。rhuEPO处理组SCII后8h、12h及24h时神经细胞凋亡水平明显低于生理盐水对照组,差异有显著性意义(P<0.01)。结论:在脊髓缺血再灌注损伤中EPO呈现时序性表达变化,可能是机体内源性神经保护的机制之一;EPO预处理能明显抑制SCII后神经细胞的凋亡。     

慢性脊髓压迫减压后的缺血再灌注损伤

目的探讨缺血再灌注损伤是否为慢性脊髓压迫症减压后不明脊髓功能丧失的致伤因素。方法成年新西兰白兔96只,随机分为A组（假手术组）,B组（缺血再灌注组）,C组（慢性压迫减压组）。于0h、0.5h、6h、12h、24h,48h各时间点每组分别取4只动物,检测MDA、CAT、SOD、GSH-Px表达水平;每组于0h及48h时各取4只动物取材行凋亡细胞计数。结果B组MDA、CAT、SOD、GSH-Px于0.5h、6h、12h、24h表达水平明显高于A组;C组MDA、CAT、SOD、GSH-Px于各时间点表达水平均明显高于A组,且C组组间各时间点表达水平无明显区别;C组0h及48h时TUNEL阳性细胞数量无明显差异。结论慢性脊髓压迫减压后减压局部并无明显缺血再灌注损伤标志,缺血再灌注并非减压后脊髓功能丧失的原因。     

缺血后处理对双后肢缺血-再灌注大鼠小肠的影响

目的 观察缺血后处理对肢体缺血-再灌注大鼠小肠损伤的保护作用.方法 雄性Wistar大鼠108只随机均分为双后肢缺血-再灌注组(LIR组)、缺血后处理组(IPo组)和假手术组(S组).检测再灌注即刻(T1)、1 h(T2)、3 h(T3)、6 h(T4)、12 h(T5)和24 h(T6)小肠组织中超氧化物歧化酶(SOD)活性、髓过氧化物酶(MPO)活性、丙二醛(MDA)含量和小肠组织的湿/干重比值(W/D),光镜下对小肠黏膜行Chiu's病理分级.结果 与S组比较,LIR组和IPo组各时点小肠黏膜Chiu's病理分级、MDA含量、MPO活性和W/D升高,SOD活性降低(P＜0.05),并随再灌注时间的变化而变化;与LIR组比较,T3～T6时IPo组Chiu's病理分级降低,T2～T6时MDA含量、MPO活性和W/D显著下降,而SOD活性升高(P＜0.05).结论 缺血后处理对大鼠双后肢缺血-再灌注小肠具有保护作用,其保护机制可能与抑制氧自由基及中性粒细胞活化有关.     

兔脊髓缺血再灌注损伤时Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动因子的变化及其意义

目的:观察兔脊髓缺血再灌注损伤时Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动因子(Bcl-xL/Bcl-2 associated deathpromoter,BAD)的变化情况,探讨BAD变化的意义。方法:45只新西兰白兔随机分为假手术组(A组,5只)、缺血再灌注组(B组,20只)和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase,JNK)抑制组(C组,20只)。手术前2h,A组及B组动物L4硬膜外注射25%二甲基亚砜(DMSO),C组动物注射溶于25%DMSO的JNK抑制剂SP600125。A组动物麻醉后仅腹腔切开,B组及C组采用腹主动脉阻断法(夹闭腹主动脉30min后松开,再灌注至0.5h、2h、8h、24h)建立脊髓缺血再灌注模型。取L4节段以下脊髓组织,电镜观察神经细胞形态学改变,Western blot检测磷酸化JNK(p-JNK)、JNK、磷酸化BAD(p-BAD)、BAD及细胞色素C的表达,免疫共沉淀检测p-BAD、14-3-3、BAD、Bcl-xL及Bcl-2的表达。结果:电镜检查A组及C组再灌注0.5h未见脊髓神经细胞凋亡,B组再灌注0.5h及C组再灌注2h、8h时偶见脊髓神经细胞凋亡,B组再灌注2h、8h、24h及C组再灌注24h时可见部分脊髓神经细胞凋亡,C组神经细胞凋亡率与同时间点B组比较明显降低(P<0.05)。各组JNK、BAD、14-3-3的表达无明显差异。p-JNK、p-BAD、细胞色素C、Bcl-xL和Bcl-2的表达在A组、B组再灌注0.5h和C组再灌注0.5h、2h、8h无明显差异。B组再灌注2h、8h、24h p-JNK、细胞色素C、Bcl-xL、Bcl-2的表达较A组明显增加(P<0.05),且表达强度随着再灌注时间的延长而增强(P<0.05);C组再灌注24h较A组增加(P<0.05),C组再灌注2h、8h、24h表达量与同时间点B组比较明显降低(P<0.05)。B组再灌注2h、8h、24h时p-BAD较A组明显减少(P<0.05),且表达强度随着再灌注时间的延长而减弱(P<0.05);C组再灌注24h较A组减少(P<0.05),C组再灌注2h、8h、24h表达量与同时间点B组比较明显增加(P<0.05)。结论:兔脊髓缺血再灌注时,BAD被激活,诱发了脊髓神经细胞的凋亡。JNK抑制剂可抑制BAD的活性,减少缺血再灌注损伤过程中脊髓神经细胞的凋亡。     

抑肽酶预处理对家兔脊髓缺血再灌注损伤早期脊髓神经功能及病理学的改善

目的 观察抑肽酶预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后早期脊髓神经功能及病理学的影响,为临床应用抑肽酶治疗脊髓缺血再灌注损伤提供实验依据.方法 国产大耳白兔21只,随机分为实验组(8只)、对照组(8只)和假手术组(5只).实验组,缺血60min,再灌注24h,于缺血前10min静脉注射抑肽酶30000kIU/kg,继而用Graseby3500微量泵持续注入抑肽酶10000kIU/(kg·h)直至实验结束.对照组,缺血及再灌注时间、方法同实验组,唯一不同的是对照组用生理盐水代替实验组的抑肽酶.空白组,只暴露腹主动脉,不夹闭,不给药.缺血前、再灌注8h、24h耳缘动脉抽取动脉血3ml形MDA及SOD检查,4h、8h、12h及24h行后肢运动功能评分.再灌注24h处死动物,取动物腰段脊髓(L3-L4)进行病理学处理,光镜、电镜下观察脊髓前角运动神经元数量及形态变化.结果 再灌注后8h、24h,实验组MDA含量明显减少,而SOD活力增加(P<0.05).12h、24h.后肢运动功能改善(P<0.05).病理学观察,脊髓前角运动神经元计数实验组较对照组增高(P<0.05),细胞凋亡减少,形态正常.结论 抑肽酶预处理可以明显降低缺血再灌注后脊髓组织中MDA含量、提高SOD活力、改善后肢运动功能,减少再灌注后细胞的坏死和凋亡,保护神经组织的功能.     

鞘内移植MSC抑制缺血再灌注损伤脊髓RIPK1表达并改善神经功能修复

目的探讨骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cell, MSC)鞘内移植能否抑制缺血再灌注损伤脊髓受体相互作用蛋白激酶1(receptor interacting protein kinase 1, RIPK1)表达促进神经功能修复。方法用SD大鼠制作脊髓缺血再灌注损伤(spine cord ischemia reperfusion injury, SCII)模型。50只SD大鼠按随机数字表法分为5组(每组10只):正常组(Sham组), 大鼠开腹游离腹主动脉后立即关腹, 不做腹主动脉阻断;对照组(Con组), 造成SCII后鞘内不做任何处理;PBS组, 造成SCII后鞘内注射等容量PBS液;坏死性凋亡抑制剂(necrostatin-1, Nec-1)组, 造成SCII后静脉注射Nec-1;MSC组, 造成SCII后鞘内注射MSC。采用流式细胞仪对MSC表面细胞标志CD29、CD90、CD34、CD45进行鉴定;SCII后第2天, 采用比索比蒂布雷斯纳汉下肢运动功能评分法和下肢体感诱发电位(sensory evoked potentials, SSEP)监测大鼠脊髓神经...     

大鼠肠缺血再灌注时肺组织β-防御素-2 mRNA表达的变化

目的 观察大鼠肠缺血再灌注时肺组织β-防御素-2(BD-2)mRNA表达的变化.方法 72只雄性SD大鼠随机分为2组(n=36):假手术组(S组)和肠缺血再灌注组(II/R组).采用夹闭肠系膜上动脉(SMA)的方法制备肠缺血再灌注模型.II/R组阻断SMA 1 h后再灌注,S组仅分离SMA.分别于再灌注即刻(T0),再灌注15(T1)、30(T2)、60 min(T3)、3 h(T4)和6 h(T5)时处死6只大鼠,取肺组织,光镜下观察肺组织病理学结果,计算肺通透性指数(PPI),检测肺组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量和BD-2 mRNA表达水平.结果 S组肺组织结构未见异常,II/R组出现肺水肿和中性粒细胞浸润.与S组比较,II/R组再灌注各时点PPI升高,BD-2 mRNA表达上调,T0-3时TNF-a含量升高(P＜0.05或0.01).II/R组BD-2 mRNA表达水平与TNF-a含量及PPI的相关系数分别为0.823和-0.615(P＜0.01).结论 大鼠肠缺血再灌注时肺组织BD-2基因表达上调.     

高渗盐水预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤血清一氧化氮和内皮素-1表达水平的影响

目的探讨高渗盐水预处理对大鼠肝脏缺血再灌注损伤一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)表达水平的影响及其相关性分析。方法清洁健康雄性SD大鼠45只,随机分为假手术组、肝脏缺血再灌注组和高渗盐水预处理组3组,每组15只。用Pringle’s法建立大鼠肝脏缺血再灌注模型,检测肝脏缺血30 min再灌注1、6、24 h后血清NO、ET-1的水平,探讨缺血再灌注6 h时的NO、ET-1水平的相关性。结果肝脏缺血30 min再灌注1、6、24 h后,缺血再灌注组和高渗盐水预处理组血清NO水平均明显低于假手术组(P0.01),而血清ET-1水平则均明显高于假手术组(P0.01);高渗盐水预处理组血清NO水平明显高于缺血再灌注组(P0.01),而血清ET-1水平则明显低于缺血再灌注组(P0.01)。各组血清NO和ET-1水平在1、6、24 h之间的变化以6 h最为显著。大鼠血清NO与ET-1水平呈负相关(r=-0.970,P0.01)。结论高渗盐水预处理改变了缺血再灌注损伤后血清NO与ET-1的水平,且二者水平的变化具有相关性,其作用机理可能是通过某种途径激发血清NO的水平、降低ET-1的水平,使两者的动态平衡向良性方向发展而达到保护作用。     

姜黄素对缺血再灌注大鼠肾脏一氧化氮水平的影响

目的探讨姜黄素对缺血再灌注大鼠肾组织一氧化氮（NO）水平的影响。方法制作大鼠肾脏缺血及缺血再灌注（IR）模型,将48只大鼠随机分为假手术组、缺血组、IR1h组、IR6h组各8只;姜黄素中药干预组16只（不同再灌注时间1h、6h各8只）。用药组于肾动脉夹闭前30min给予姜黄素注射液20mg／kg尾静脉输入,开夹再灌注时又给予原药量的1／2;对照组同时给予等量0．9％氯化钠溶液尾静脉输入。另取仅作麻醉、开腹、不阻断肾血流的8只大鼠作为假手术组。不同时间摘取肾脏及颈动脉断开取血,用硝酸还原酶测定血液及肾组织匀浆的NO2%-和NO^3-含量。HE染色观察肾脏损伤程度。结果缺血时及IR后NO表达均明显增强（P〈0．05）,姜黄素干预组上述异常均明显减轻。单纯缺血组肾系数和SCr较假手术组比无明显变化,仅BUN高于对照组,而IR1h、IR6h组肾系数、BUN和SCr水平均高于假手术组,且随再灌注时间延长而显著增加（P〈0．01）。结论姜黄素能降低早期缺血再灌注大鼠血液及肾组织NO水平,其可能在减轻缺血与缺血再灌注组大鼠肾脏高滤过和肾脏肥大、改善肾脏结构和功能中发挥一定作用。     

盐酸曲美他嗪对大鼠肾脏急性缺血-再灌注损伤及氧化应激反应的影响

目的观察盐酸曲美他嗪(trimetazidine,TMZ)预处理对大鼠肾组织急性缺血再灌注损伤及氧化应激反应的影响。方法选择SD大鼠90只,随机均分为A、B两组。A组给予TMZ,剂量10 mg/kg,灌胃5 d后建立缺血再灌注(ischemia-reperfusion injury,IR1)、缺血再灌注后处理(ischemic postconditioning,IPO1)、假手术(sham operated,S1)模型;B组生理盐水灌胃5 d后建立缺血再灌注(IR2)、缺血再灌注后处理(IPO2)、假手术(S2)模型。检测各组末次恢复肾脏血供0、6、12、24、48 h后血肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)、血管细胞黏附分子1(vascular cell adhesion molecule 1,VCAM-1)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)水平。结果与IR1组相比,IR2组6 h的VCAM-1、MDA及24 h、48 h时BUN、SCr、VCAM-1、MDA、肾小管损伤程度评分明显较IR1组上升,SOD下降;IPO2组与IPO1组相比,6 h、12 h、24 h时VCAM-1、MDA均明显升高,SOD下降;24 h BUN、SCr、肾小管损伤程度评分也明显上升;IR1组与IPO1组相比,在24 h时除SCr外,BUN、VCAM-1、MDA、肾小管损伤程度评分均上升,SOD下降,48 h时VCAM-1、肾小管损伤程度评分明显较IPO1组上升,SOD下降;IPO2组与IR1组相比,在12 h、24 h时,VCAM-1、MDA、肾小管损伤程度评分均上升,SOD下降;在48 h时除MDA外,BUN、SCr、VCAM-1、肾小管损伤程度评分明显上升,SOD下降(P均0.05)。结论在大鼠肾脏缺血再灌注损伤发生之前即预防性使用TMZ可减轻氧化应激反应,使血清VCAM-1水平下降,与单纯缺血再灌注后处理(IPO)比较,氧化应激反应明显减轻,VCAM-1水平降低。     

臭氧氧化预处理减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤

目的探讨臭氧氧化预处理对大鼠脊髓缺血再灌注损伤的作用及可能机制。方法将36只健康成年雄性SD大鼠随机分为假手术组、模型组和臭氧预处理组,每组12只。模型组和臭氧预处理组采用夹闭右肾动脉上腹主动脉的方法构建大鼠脊髓缺血再灌注损伤模型,臭氧预处理大鼠于建模前7 d开始以1 mg/(kg·d)腹腔注射臭氧(50 mg/L)-氧气混合气体至建模。分别于恢复灌流后6、12、24和48 h时,对各组大鼠后肢神经运动功能进行评分。末次评分后取脊髓标本,行HE染色观察组织病理学变化,行2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色检测缺血面积,用试剂盒检测丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)水平。结果与假手术组相比,模型组和臭氧预处理组大鼠恢复灌流后6、12、24、48 h神经运动功能评分均降低,差异均有统计学意义(P 0.05);与模型组相比,臭氧预处理组大鼠恢复灌流后6、12、24、48 h神经运动功能评分升高,差异有统计学意义(P 0.05)。与假手术组相比,模型组和臭氧预处理组大鼠脊髓组织缺血面积增大,差异均有统计学意义(P 0.05);与模型组相比,臭氧预处理组大鼠脊髓缺血面积减小,差异有统计学意义(P 0.05)。与假手术组相比,模型组和臭氧预处理组大鼠脊髓组织中MDA水平升高,而SOD和GSH-Px水平降低,差异均有统计学意义(P 0.05);与模型组相比,臭氧预处理组大鼠脊髓组织中MDA水平降低,而SOD和GSH-Px水平升高,差异均有统计学意义(P 0.05)。结论臭氧预处理可有效减轻大鼠脊髓缺血再灌注损伤,其机制可能与抑制脊髓组织氧化应激反应有关。     

Neuroprotective effect of neuregulin-1β on spinal cord ischemia reperfusion injury

Objective: This study was designed to see if neuregulin-1β (NRG-1β) plays a protective role in spinal cord ischemia and reperfusion injury (SCII).Design: Animal research.Setting: China.Participants: NA.Interventions: Forty-eight SD rats were randomly divided into control group (n = 16), SCII model group (n = 16) and NRG-1β-treated group (n = 16). In control group, the abdominal aorta was isolated but not clipped. The rats in NRG-1β-treated group were treated with 10μg/kg NRG-1β during developing SCII model.Outcome Measures: Neurological scores were evaluated. At 3, 6, 12 and 24 h after the reperfusion, rats were killed. Pathological changes of spinal cord were assessed with HE staining, and immunohistochemical staining of matrix metalloproteinases-9 (MMP-9) and tissue inhibitor of metalloproteinase-1 (TIMP-1). MMP-9 and TIMP-1 mRNA levels were assessed using real-time PCR.Results: NRG-1β reduced the damage of SCII in the rats. The expression of MMP-9 protein and mRNA in NRG-1β treatment group was significantly lower than the model group (P < 0.05) at 6 h, 12 h and 24 h after the perfusion. The expression of TIMP-1 protein and mRNA in the treatment group was significantly higher than the model group at 12 h and 24 h after the perfusion.Conclusion: NRG-1β reduced the reperfusion damage in rat model of SCII, in which process MMP-9 and TIMP-1 were probably involved.     

红花注射液对大鼠脊髓损伤后继发性损伤的影响

目的探讨脊髓损伤（spinal cord injury,SCI）后红花注射液对脊髓的保护效果。方法将18只SD大鼠随机分为假手术组（A组）,脊髓打击损伤组（B组）、红花溶液组（C组）,每组6只。观察3组大鼠SCI后1 h、24 h、48 h的脊髓组织病理学变化,检测这3个时间点乳酸（lactic acid,LD）含量、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）活性、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase,SOD）活性、丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量。结果术后C组LD含量、LDH活性比B组低,差异有统计学意义（P〈0.05）,特别是在术后48 h（P〈0.01）;与B组相比较,C组术后24 hMDA含量明显较低,SOD活性明显升高,差异具有统计学意义（P〈0.05）。结论红花注射液能减轻脊髓继发性损伤,对SCI后的脊髓神经功能具有一定的保护作用。     

The effects of a small-dose ketamine-propofol combination on tourniquet-induced ischemia-reperfusion injury during arthroscopic knee surgery

Study ObjectiveTo determine the effects of a small-dose ketamine-propofol combination used for sedation during spinal anesthesia on tourniquet-induced ischemia-reperfusion injury.Study DesignProspective randomized study.SettingTraining and research hospital.Patients60 adult, ASA physical status 1 and 2 patients, ages 20–60 years, scheduled for elective arthroscopic knee surgery for meniscal and chondral lesions.InterventionsThe initial hemodynamic parameters were recorded and blood samples were collected at baseline (T1); then spinal anesthesia was performed. In Group I (n=30), a combination of 0.5 mg/kg/hr of ketamine and 2 mg/kg/hr of propofol was administered; Group II (n=30) received an equivalent volume of saline as an infusion. A pneumatic tourniquet was applied.MeasurementsMalondialdehyde (MDA), superoxide dismutase (SOD), and catalase levels were measured one minute before tournique deflation in the ischemic period (T2), then 5 (T3) and 30 (T4) minutes following tourniquet deflation in the reperfusion period.Main ResultsNo differences were noted between groups in hemodynamic data (P > 0.05) or SOD levels (P > 0.05). In Group I, MDA levels at T2 were lower than in Group II (P < 0.05). In Group I, catalase levels were lower at T2 and T4 than they were in Group II (P < 0.05).ConclusionSmall-dose ketamine-propofol combination may be useful in reducing tourniquet-induced ischemia-reperfusion injury in arthroscopic knee surgery.     

同种异体骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠脊髓损伤的时效性分析

目的：观察脊髓损伤后不同时间点骨髓间充质干细胞（bone mesenchymal stem cells,BMSCs）移植治疗后大鼠行为学变化、脊髓的病理改变及脑源性神经营养因子（brain—derived neurotrophic factor,BDNF）和神经生长因子（nervegrowthfactor,NGF）表达变化,探讨BMSCs的最佳移植时间。方法：80只健康成年SD大鼠随机分为8组,每组10只。A组为假损伤组,暴露胸10段脊髓但不造成冲击伤,B、C、D、E、F、G、H组以改良Allen法建立脊髓损伤模型。造模成功后,C、D、E、F、G、H组分别于损伤后0h、6h、24h、3d、5d和7d,将lxl0。体外培养的BMSCs用微量注射器注入于脊髓损伤局部,B组为单纯造模组,用等量细胞培养液代替。各组分别于损伤后1、2、4周进行脊髓运动功能BBB（Basso,Beattie,Bresnahan）运动学评分;分别取各组脊髓损伤组织0．5cm,制作HE染色病理切片,观察其形态学改变;Elisa法检测各组大鼠脊髓BDNF和NGF表达情况。结果：假手术组1、2、4周大鼠脊髓功能BBB评分均明显高于其余7组（P〈0．01）;术后l周细胞移植各组评分与单纯造模组相比差异无统计学意义（P〉0．05）;术后2周和4周细胞移植各组评分高于单纯造模组（P〈0．05）;损伤后2周BBB评分从高到低依次为F、E、G、D、H、C组,但6组组间比较差异无统计学意义（P〉0．05）;损伤后4周BBB评分,F组与其余5组（C,D,E,G,H组）比较差异有统计学意义（P〈0．05）,但其余5组组间差异无统计学意义（P〉O．05）。EUSA检测结果显示,F组BDNF和NGF含量均高于其他7组（P〈0．05）。大鼠脊髓标本切片HE染色,假手术组脊髓组织结构完整清楚,无中性粒细胞浸润;其余7组局部组织水肿明显,灰白质交界处模糊,周围可见不同程度胶质细胞增生及炎细胞浸润。结论：大鼠脊髓损伤后同种异体BMSCs移植对脊髓功能恢复有一定疗效,损伤后3d可能是BMSCs最佳移植时间。     

甲基泼尼松龙与葛根素联用对预防脊髓缺血再灌注损伤的作用

 目的 探讨甲基泼尼松龙(methylprednisolone, MP)联用葛根素对预防脊髓缺血再灌注损伤的作用。方法 80只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组、治疗组,每组20只。空白组仅暴露腹主动脉,其他三组均通过夹闭肾下腹主动脉30 min造成脊髓缺血再灌注损伤。阳性药组在损伤前30 min于鼠尾静脉注射30 mg/kg的MP,治疗组注射10 mg/kg的MP及30 mg/kg的葛根素,模型组注射与阳性药组MP等容量的生理盐水。3 h后采用向大鼠耳缘静脉注射10 ml空气的方法每组各处死10只,而后取其脊髓标本匀浆后测定超氧化物歧化酶(SOD)、钠-钾三磷酸腺苷酶(Na-K ATP)的表达水平。每组余10只大鼠在麻醉清醒即刻、再灌注12 h、24 h后按BBB评价标准对后肢功能进行评分,于24 h后采用同样方法处死每组剩余大鼠并取脊髓标本观察脊髓神经元形态。结果 模型组、阳性药组、治疗组于再灌注3 h后的SOD、Na-K ATP表达水平明显低于空白组,阳性药组和治疗组明显高于模型组,且阳性药组和治疗组比较无明显差异。BBB评分阳性药组和治疗组明显高于空白组和模型组,且阳性药组和治疗组无明显差异。再灌注24 h后,脊髓神经元显微镜下观察显示阳性药组和治疗组损伤程度相当,均明显低于模型组。结论 MP与葛根素联用对预防脊髓缺血再灌注损伤具有明显的保护作用。     

基于TNFR/RIPK1通路探索紫草素对大鼠脊髓损伤的作用及机制

目的:初步探讨紫草素对大鼠急性脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)后神经功能恢复的影响及作用机制。方法:将96只Sprague-Dawley(SD)雄性大鼠分为4组:假手术组,即A组;假手术+紫草素组,即B组;脊髓损伤+二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide,DMSO)组,即C组;脊髓损伤+紫草素组,即D组;每组24只。C、D组采用钳夹法制作大鼠急性SCI 模型。所有大鼠硬膜下置管,A 组不给药,B组和D组造模后30 min 经导管注射紫草素100 mg·kg^-1,C组注射等量 DMSO,每日1次,至取材时间点。各组分别于造模后6、12 h和3 d 每组取8只大鼠,行 Basso-Beattie-Bresnahan(BBB)评分及造模后1、3、7、14、21 d行斜板实验,再处死动物取脊髓组织。造模后1 h 每组大鼠腹腔注射碘化丙啶(propidine iodide,PI)1 mg·kg^-1,术后24 h取材检测脊髓组织 PI 红染细胞数;24 h 时取材采用苏木素-伊红(haematoxylin eosin,HE)染色观察脊髓损伤情况,尼氏(Nissl)染色观察神经元存活数量,使用Western-blot技术检测 B细胞淋巴瘤-2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)蛋白及凋亡相关蛋白受体相互作用蛋白激酶1(receptor-interacting protein kinase 1,RIPK1)的表达水平。结果:造模后A组和B组各时间点的 BBB 评分均正常,C、D组各时间点均低于A、B组,D组造模后12 h和3 d的 BBB 评分高于同时间点C组(P<0.05)。造模后12 h,D组PI 红染细胞较C 组明显减少,神经元崩解减轻(P<0.05)。造模后24 h,A 组和 B 组脊髓组织 HE 和 Nissl 染色正常,D 组脊髓组织损伤程度和存活神经元数量均优于 C 组(P<0.05)。Bcl-2、RIPK1蛋白在A 组、B 组表达很低; RIPK1 在C组表达明显增高,在D组表达明显下降,差异有统计学意义(P<0.05);Bcl-2蛋白在D 组表达高于C 组(P<0.05)。结论:紫草素可减轻大鼠急性SCI后的病理变化,改善行为学评分,促进脊髓神经功能恢复。其具体机制可能与抑制TNFR/RIPK1信号通路介导的坏死性凋亡有关。     

脊髓减压联合电针对急性上颈段重度脊髓压迫损伤影响的实验研究

目的:探究脊髓减压联合电针对急性上颈段重度脊髓压迫损伤大鼠的治疗效果和可能的作用机制。方法:SPF级Wistar大鼠30只随机分为5组(对照组A、B,实验组C、D、E),每组6只,采用经寰枕间隙置入球囊导管加压造成脊髓压迫损伤的方法构建脊髓损伤模型。A组无任何干预,空白对照,B组置入球囊导管后不加压,做假手术对照,C、D、E组加压48 h后松球囊脊髓减压,C组取百会、大椎穴进行电针干预,连续波,频率2 Hz,治疗时间15 min,持续治疗14 d,D组于大鼠尾静脉注射甲强龙进行甲强龙冲击治疗,E组不再行任何治疗干预。14 d后5组大鼠全部行腹主动脉取血和脊髓损伤组织取材,采用BBB评分法对5组大鼠的运动功能进行评价,ELISA法检测损伤组织及血清中血小板活化因子(platele-activating factor,PAF)的含量,Western blot法检测损伤组织中Caspase-9的表达。结果:BBB评分:对照组A、B在实验组压迫后1、48 h,实验组治疗后24 h,3、7、14 d等6个时间点上均为(21.000±0.000)分,实验组评分始终低于对照组,C、D组评分显著高于E组(P0.05),C、D组评分相近(P0.05)。ELISA法测PAF结果显示:A、B、D、E组血清中PAF浓度相近(P0.05),C组血清中PAF浓度较其余4组低(P0.05),A、B组组织中PAF浓度结果相近(P0.05),C组组织中PAF浓度较A、B组高(P0.05),D组组织中PAF浓度较A、B、C组高(P0.05),E组组织中PAF浓度较其余4组高(P0.05);Western blot法检测结果显示:A、B组Caspase-9的表达量相近(P0.05),C组表达较A、B组高(P0.05),D组表达量较A、B、C组高(P0.05),E组表达较A、B、C、D组高(P0.05)。结论:脊髓减压联合电针治疗急性上颈段重度脊髓压迫损伤较脊髓减压联合甲强龙和单纯脊髓减压效果更佳,其作用机制可能与降低脊髓损伤组织中PAF的含量与下调其Caspase-9蛋白的表达有关。     

补阳还五汤对大鼠急性上颈脊髓损伤后血小板活化因子的影响

目的 :观察补阳还五汤对大鼠急性上颈脊髓损伤(SCI)模型大鼠脊髓组织血小板活化因子(DAF)表达的影响。方法:将SPF级别3月龄Wistar大鼠60只,雌性,随机分成假手术组、模型组、甲强龙组、补阳还五汤组(即中药组),每组15只。造模后第1天,甲强龙组经尾静脉注射治疗共24 h,首剂量30 mg/kg,之后剂量5.4 mg/kg·h,每4 h给药1次;中药组以中剂量补阳还五汤颗粒剂,配制成含颗粒剂2.00 g/ml的水溶液,每日3.5 g/kg灌胃,相当于成人用量的1倍;模型组和假手术组予等体积生理盐水灌胃,均每日2次,用药2周。治疗后第1、3、7、14天分别以BBB分级法评价神经功能恢复情况;采用双抗体夹心法(ELISA法)于术后1、7、14 d检测脊髓损伤节段PAF的表达。结果:治疗后第1天,模型组、甲强龙组和中药组BBB评分明显降低,与假手术组比较差异有统计学意义(P0.01),但3组间比较差异无统计学意义(P0.05)。治疗后第7、14天评分结果,中药组与甲强龙组大鼠四肢运动功能评分明显高于模型组(P0.01),而中药组与甲强龙组比较差异无统计学意义(P0.05)。治疗后7、14 d,中药组与甲强龙组大鼠PAF值与模型组比较明显下降(P0.01),而中药组与甲强龙组比较差异无统计学意义(P0.05)。结论:急性上颈脊髓损伤后以补阳还五汤治疗,可以改善SCI大鼠四肢运动功能,其作用机制可能与通过降低脊髓组织中PAF表达明显有关。     

热休克蛋白70在大鼠急性打击损伤脊髓中的表达

目的观察急性打击损伤大鼠脊髓组织中热休克蛋白70（heat shock protein70，HSP 70）的表达。方法65只大鼠随机分为3组：正常对照组5只、手术对照组和脊髓损伤组各30只，采用改良Allen法建立脊髓损伤动物模型。手术对照组和脊髓损伤组分别于处置后的2h、6h、12h、24h、48h、72h这6个时间点各采集5只大鼠的脊髓。应用免疫组织化学染色方法观察不同时点各组脊髓中热休克蛋白的表达变化。结果在大鼠正常胸段脊髓中没有基础性HSP70的表达。打击造成急性脊髓损伤后2h，脊髓组织内出现HSP70的表达，损伤后24～48h脊髓组织中HSP70染色达到高峰，并维持至损伤后72h。结论在遭遇损伤性刺激后，脊髓组织在随后的2～72h内HSP70的表达明显增加；HSP70可能在阻止脊髓的继发性损伤方面发挥一定的作用。