NgR蛋白在新生SD大鼠视网膜中的表达

目的观察NgR（Nogo-66 receptor）蛋白在出生24hsD大鼠视网膜中的表达。方法使用免疫荧光组织化学技术及激光共聚焦显微镜观察6只出生24h的正常SD大鼠视网膜中NgR蛋白的表达。结果在6只出生24h的正常SD大鼠视网膜神经节细胞及其突起上可以观察到NgR蛋白的表达，且该蛋白主要分布在视网膜神经节细胞核的周围。结论出生24h的SD大鼠视网膜中就已经存在NgR蛋白，为进一步研究哺乳动物中枢神经系统损伤后轴突再生修复奠定了基础。[眼科新进展2007；27（2）：81-83]     

低氧诱导因子-1α在胚胎及出生后大鼠视网膜中的表达变化

目的 观察大鼠视网膜胚胎期及出生后早期发育过程中低氧诱导因子-1α(HIF -1α)的时空表达,探讨其表达变化与视网膜发育的关系。方法 实验大鼠分为孕12、16、20 d 组,出生后1、5、10 d组及成年组,每组各5只,共35只大鼠。用免疫组织化学方法、半定量逆转录聚合酶联反应（RT-PCR）方法检测视网膜H IF-1α蛋白及HIF-1αmRNA的表达。结果 胚胎期大鼠视网膜神经上皮层及视网膜色素上皮层均有HIF 1α阳性表达,出生后发育早期视网膜神经上皮层及视网膜色素上皮层也可见HIF-1α阳性表达,以神经节细胞、内网层更明显。随着发育进展,其阳性表达主要位于视网膜节细胞层。大鼠视网膜HIF-1α蛋白及mRNA的表达在胚胎期最高、出生后发育期逐渐下降、成年期最低,其差异有统计学意义（P<0.01）。结论 大鼠视网膜胚胎及出生后发育过程中HIF-1α的表达存在时空上的变化,这种变化可能与大鼠视网膜胚胎期及出生后早期的发育密切相关。     

米诺环素对压力作用下体外培养视网膜神经细胞凋亡的抑制

目的 观察米诺环素对压力系统作用下大鼠视网膜神经细胞(RNs)的活性及凋亡的影响，探讨其对受损RNs保护的可能机制。 方法 制备大鼠RNs体外加压培养模型，通过细胞形态学观察、四唑盐（MTT）比色法测定细胞活力、吖啶橙/溴化乙锭（AO/EB）染色法检测细胞凋亡率等方法观察不同浓度的米诺环素对上述损伤细胞的保护作用，并用免疫细胞化学法观察iNOS和caspase 3表达的改变。 结果 加压培养后RNs与对照组相比形态改变较明显，细胞活力降低，5393%的细胞发生凋亡。20000 μmol/L的米诺环素治疗组则细胞形态改善，活力显著增高，1729%的细胞发生凋亡；免疫细胞化学法显示细胞内iNOS和caspase-3表达较加压损伤组减少。 结论 一定剂量的米诺环素在体外可有效抑制压力引起的大鼠RNs损伤及凋亡；抑制iNOS和caspase-3的表达可能是其潜在作用机制。     

应用二维电泳法对视网膜色素上皮细胞光损伤后蛋白质组学的初步研究

目的 应用二维电泳法观察光损伤后视网膜色素上皮细胞蛋白质组的表达。 方法 运用冷白光以（2200±300）Lx光照人视网膜色素上皮细胞(ARPE 19)6 h，建立光损伤模型；提取细胞可溶性蛋白并通过二维电泳分离和凝胶图像分析，寻找光损伤细胞的蛋白质谱变化。 结果 软件分析显示全细胞可溶性蛋白在图谱上出现（390±10）个清晰斑点,11个蛋白斑点有明显表达差异。光损伤细胞内8种蛋白表达上调,1种下调，2种蛋白表达缺失。 讨论 二维电泳实验能够找出光损伤RPE细胞与正常细胞的蛋白表达差异，为进一步研究在此改变中发挥重要作用的蛋白质奠定基础。     

人眼后极部视网膜光感受器细胞分布特征

目的 观察人眼后极部视网膜光感受器细胞分布特征，探讨其细胞密度随离心度变化的规律以及与视敏度的关系。 方法 取20个钻取角膜后剩余的眼杯，固定，进行视网膜铺片，用微分干涉显微镜观察后极部视网膜细胞形态和密度，首先观察光感受器细胞内节，以中央凹为始点向颞侧周边逐渐推进。 结果 视锥细胞最高密度位于中央凹，细胞密度范围134 000~267 000个/mm²，细胞平均数为198 090 个/mm²。细胞密度个体差异［CV值(标准差／均数)表示］极大，CV值为18.2%，从中央凹向外细胞密度及个体差异均迅速减少。视杆细胞高密度区约位于离心度4 mm左右，细胞密度最高值范围72 610~182 350/mm²，3~5 mm之间细胞保持高密度。 结论 光感受器细胞内节单层排列，其计数可反映细胞的绝对值。中央凹极高视锥细胞密度为提供敏锐中心视力的基础，其极大的个体差异与发育有关。视杆细胞杆体在离心度4 mm左右存在高密度带，此高密度带的存在是此处视网膜有较好暗视力的基础。     

巢蛋白和神经胶质纤维酸性蛋白在大鼠视网膜发育中的动态表达

目的 观察巢蛋白(nestin)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在大鼠视网膜发育中的动态变化.方法 48只Wistar大鼠,其中24只大鼠分为出生后1 d,1、2、3、4、7、12、20周8组,每组3只.制作眼球矢状位冰冻切片,采用共聚焦激光显微镜观察nestin和谷氨酰胺合成酶(GS)以及GFAP和GS免疫荧光染色情况.18只大鼠分为出生后id,1、2、3、4、12周,每组3只.提取大鼠视网膜总RNA,实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测nestin、GFAP和GS mRNA表达.选择6只出生后7～12 d新生鼠,取眼球体外培养Müller细胞,行GS和(或)nestin免疫荧光染色,共聚焦激光显微镜观察荧光染色情况.结果 出生后1 d,nestin免疫阳性细胞贯穿神经视网膜全层,主要定位于视网膜前体细胞放射状排列的细长纤维中,在视网膜内侧出现GFAP阳性的星形胶质细胞.出生后1周出现表达GS的Müller细胞,同时表达nestin,但不表达GFAP;GFAP阳性细胞仍然位于视网膜内侧.出生后2～12周,nestin在Mfiller细胞上的表达逐渐减少直至消失,GFAP在星形胶质细胞中的表达强度投有显著变化.体外培养的Müller细胞表达nestin,不表达GFAP.Nestin和GFAP mRNA在视网膜中的表达与免疫荧光染色结果相一致.结论 随大鼠视网膜不断发育,Müller细胞上nestin表达逐渐减少,成年大鼠视网膜Müller细胞不再表达nestin;新生鼠和成年鼠Müller细胞均不表达GFAP.     

巢蛋白和神经胶质纤维酸性蛋白在大鼠视网膜发育中的动态表达

目的 观察巢蛋白(nestin)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在大鼠视网膜发育中的动态变化.方法 48只Wistar大鼠,其中24只大鼠分为出生后1 d,1、2、3、4、7、12、20周8组,每组3只.制作眼球矢状位冰冻切片,采用共聚焦激光显微镜观察nestin和谷氨酰胺合成酶(GS)以及GFAP和GS免疫荧光染色情况.18只大鼠分为出生后id,1、2、3、4、12周,每组3只.提取大鼠视网膜总RNA,实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测nestin、GFAP和GS mRNA表达.选择6只出生后7～12 d新生鼠,取眼球体外培养Müller细胞,行GS和(或)nestin免疫荧光染色,共聚焦激光显微镜观察荧光染色情况.结果 出生后1 d,nestin免疫阳性细胞贯穿神经视网膜全层,主要定位于视网膜前体细胞放射状排列的细长纤维中,在视网膜内侧出现GFAP阳性的星形胶质细胞.出生后1周出现表达GS的Müller细胞,同时表达nestin,但不表达GFAP;GFAP阳性细胞仍然位于视网膜内侧.出生后2～12周,nestin在Mfiller细胞上的表达逐渐减少直至消失,GFAP在星形胶质细胞中的表达强度投有显著变化.体外培养的Müller细胞表达nestin,不表达GFAP.Nestin和GFAP mRNA在视网膜中的表达与免疫荧光染色结果相一致.结论 随大鼠视网膜不断发育,Müller细胞上nestin表达逐渐减少,成年大鼠视网膜Müller细胞不再表达nestin;新生鼠和成年鼠Müller细胞均不表达GFAP.     

巢蛋白和神经胶质纤维酸性蛋白在大鼠视网膜发育中的动态表达

目的 观察巢蛋白(nestin)和神经胶质纤维酸性蛋白(GFAP)在大鼠视网膜发育中的动态变化.方法 48只Wistar大鼠,其中24只大鼠分为出生后1 d,1、2、3、4、7、12、20周8组,每组3只.制作眼球矢状位冰冻切片,采用共聚焦激光显微镜观察nestin和谷氨酰胺合成酶(GS)以及GFAP和GS免疫荧光染色情况.18只大鼠分为出生后id,1、2、3、4、12周,每组3只.提取大鼠视网膜总RNA,实时定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测nestin、GFAP和GS mRNA表达.选择6只出生后7～12 d新生鼠,取眼球体外培养Müller细胞,行GS和(或)nestin免疫荧光染色,共聚焦激光显微镜观察荧光染色情况.结果 出生后1 d,nestin免疫阳性细胞贯穿神经视网膜全层,主要定位于视网膜前体细胞放射状排列的细长纤维中,在视网膜内侧出现GFAP阳性的星形胶质细胞.出生后1周出现表达GS的Müller细胞,同时表达nestin,但不表达GFAP;GFAP阳性细胞仍然位于视网膜内侧.出生后2～12周,nestin在Mfiller细胞上的表达逐渐减少直至消失,GFAP在星形胶质细胞中的表达强度投有显著变化.体外培养的Müller细胞表达nestin,不表达GFAP.Nestin和GFAP mRNA在视网膜中的表达与免疫荧光染色结果相一致.结论 随大鼠视网膜不断发育,Müller细胞上nestin表达逐渐减少,成年大鼠视网膜Müller细胞不再表达nestin;新生鼠和成年鼠Müller细胞均不表达GFAP.     

Nogo-66受体mRNA在成年大鼠视神经中的 表达及意义

目的观察Nogo-66受体（NgR）mRNA在成年大鼠视神经的表达并探讨其意义。方法取8只成年大鼠视神经及坐骨神经，将拟杂交的组织切片分为3组：视神经实验组、坐骨神经对照组、视神经阴性对照组。采用原位杂交技术观察NgR mRNA在视神经和坐骨神经中的表达。结果大鼠视神经切片中NgR mRNA均表达阳性，阳性信号沿视神经长轴排列；所有大鼠坐骨神经切片中NgR mRNA的表达均为阴性。结论在成年大鼠视神经中NgR mRNA广泛表达，而坐骨神经中不表达，提示NgR 阳性表达及分布与视神经再生能力低下密切相关。(中华眼底病杂志,2005,21:246-248)     

双丹明目胶囊对糖尿病大鼠模型视网膜VEGF家族表达的影响

目的：观察双丹明目胶囊对糖尿病大鼠模型视网膜VEGF家族因子VEGF-a、VEGF-b、VEGF-c蛋白表达的影响。

方法：将40只雄性SD大鼠,采用随机数字法分为A空白组、B模型组、C双丹明目组、D阳性对照组4组,每组10只20眼。将B、C、D三组实验大鼠采用STZ 50mg/kg的剂量一次性大鼠尾静脉注射法建立糖尿病视网膜病变大鼠模型,造模后1wk开始连续灌胃用药,灌胃后4wk,处死动物,免疫组化法检测视网膜组织中VEGF-a、VEGF-b、VEGF-c的表达。

结果：成模后用药第4wk,模型组、双丹明目组、阳性对照组视网膜中VEGF-a、VEGF-b、VEGF-c蛋白表达平均灰度值均低于正常组,平均光密度均高于正常组,其中模型组与正常组比较,差异均具有统计学意义(P<0.01); 双丹明目组、阳性对照组VEGF-a、VEGF-b、VEGF-c表达的平均灰度值均高于模型组(P<0.05),平均光密度值均低于模型组(P<0.01)。

结论：双丹明目胶囊能明显降低VEGF家族中VEGF-a、VEGF-b、VEGF-c在糖尿病模型大鼠视网膜中的表达,对其视网膜有一定的保护作用。     

An Immunofluorescence–Histochemistry Study of the Nogo Receptor in the Rat Retina During Postnatal Development

We investigated expression of the Nogo receptor (NgR) in the retina of rats between postnatal day 0 (PND 0) and adulthood (PND 63). Frozen sections of eyeball were prepared from each of six rats on PND 0, PND 3, PND 7, PND 14, PND 21, PND 35, PND 49, and PND 63. Immunofluorescence–histochemistry and laser-confocal microscopy were used to observe the expression of NgR protein. NgR is positive in the retina at all stages. It was distributed around ganglion cell nuclei and disposed linearly in the optic nerve. The NgR was expressed in rat retina at the time of birth and was present throughout postnatal development. Drs. Xiaolei, Jian, Chunlin, and Rongdi are from the Third Military Medical University, Department of Ophthalmology, Daping Hospital, Chongqing, China. E-mail: yinxiaolei971221@163.com The authors have stated they do not have a significant financial interest or other relationship with any product manufacturer or provider of services discussed in this article. The authors also do not discuss the use of off-label products, which includes unlabeled, unapproved, or investigative products or devices. We investigated Nogo receptor (NgR) expression in the retina of rats from postnatal day 0 to adulthood.     

白细胞介素-1α诱导玻璃体视网膜新生血管 形成及血管内皮细胞生长因子表达

目的观察白细胞介素-1α(interleukin-1α, IL-1α)诱导SD大鼠玻璃体视网膜新生血管形成以及对血管内皮细胞生长因子(vascular endothe lium growth factor,VEGF)表达的影响。方法8只SD大鼠,左眼为实验处理组,玻璃体内各注射IL-1α2．0 ng,右眼为对照组,同样方法 玻璃体内注射等量磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution, PBS )。术后每天用直接检眼镜观察眼底,第7 d摘取眼球,眼后段作常规病理切片,采用免疫组织化学方法检测VEGF的表达情况。结果实验处理组视网膜前有大量新生血管和增生膜形成, 在视网膜神经节细胞层、新生血管管壁及视网膜前增生膜中有V EGF的阳性表达,而对照组则无新生血管形成, 仅在感光细胞外节段层有VEGF的弱表达。结论IL-1α能促进SD大鼠玻璃体视网膜新生血管形成和VEGF表达升高。(中华眼底病杂志,2001,17:135-137)     

Nogo-A和NgR在大鼠视网膜缺血再灌注损伤中的表达

目的：观察轴突生长抑制因子Nogo-A及其受体NgR在视网膜缺血再灌注（retinal ischemia-reperfusion,RIR）急性损伤中的表达,研究两者在RIR损伤中的作用及相关性。 方法：SD大鼠90只随机分为：正常对照组（n=6）;假手术组(n=42);RIR组（n=42）,假手术组及RIR组分为再灌注后0,6,12,24,48,72,168h亚组,每组6只;采用结扎单侧颈总动脉的方法制备大鼠RIR模型,HE染色观察组织形态学改变,免疫组织化学检测Nogo-A和NgR蛋白的表达。 结果：假手术组各时间点Nogo-A及NgR表达与正常组相比无统计学差异（P>0.05）,实验组大鼠与假手术组相比：Nogo-A的表达在12h开始升高（P<0.05）,48h达到高峰（P<0.01）,72h下降（P<0.05）,168h达到正常基线水平（P>0.05）;NgR的表达在6h即出现上升,持续至48h达到最高峰（P<0.01）,72h下降,168h达到正常基线水平。实验组大鼠Nogo-A与NgR的表达呈正相关（P<0.01）。 结论：Nogo-A和NgR在RIR各时间点均有表达,其表达水平沿时间点呈抛物线形,在再灌注48h时均达到峰值,NgR先于Nogo-A表达,两者协同作用,与RIR损伤后抑制节细胞轴突修复再生有关。     

VEGF和PEDF在糖尿病大鼠视网膜脉络膜中的表达

目的:通过免疫组织化学法比较正常大鼠及糖尿病大鼠视网膜、脉络膜组织中VEGF和PEDF的表达情况及相互关系。方法:选取健康雄性Wistar大鼠,随机分成糖尿病组和正常对照组(M0),用链脲佐菌素大剂量一次性腹腔注射诱导1型糖尿病模型。成模后大鼠随机平均分成1mo(M1),2mo(M2),3mo(M3)及5mo(M5)组,免疫组织化学法检测VEGF和PEDF在各组大鼠视网膜及脉络膜的表达。结果:M1大鼠VEGF在视网膜及脉络膜的表达均与M0无明显差别;M2大鼠VEGF在脉络膜有阳性表达(33.3%),在视网膜的表达与M0无明显差别;M3大鼠VEGF在脉络膜有阳性表达(55.6%),在视网膜的表达与M0比较有明显差别(33.3%);M5大鼠VEGF在视网膜及脉络膜阳性表达(88.9%);M1和M2大鼠视网膜PEDF表达与M0比较无明显差别,各组脉络膜均无PEDF表达;M3和M5大鼠视网膜PEDF表达均较M0减弱,且随病程延长表达逐渐减弱(P<0.05),各组脉络膜均无PEDF表达;随着糖尿病病程延长,VEGF/PEDF比值逐渐增大,与M0相比有显著统计学差异(P<0.01)。结论:随着糖尿病病程的延长,VEGF在视网膜及脉络膜的表达均逐渐增强,而PEDF与之相反,在视网膜的表达逐渐减弱,且VEGF/PEDF比值逐渐增大,提示VEGF和PEDF均与糖尿病病程密切相关。     

Nogo受体在早期糖尿病大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用

目的:探讨Nogo受体(nogo receptor,NgR)在糖尿病(diabetes mellitus,DM)大鼠视网膜神经节细胞凋亡中的作用及机制。方法:链脲佐菌素诱导SD大鼠DM模型,实验分4组,对照组;DM组;siNgR组:DM大鼠玻璃体内给予NgR反义核苷酸序列;siRNA空白组:DM大鼠玻璃体内给予阴性核苷酸序列。1mo后TUNEL染色检测视网膜神经节细胞(retinal ganglion cell,RGC)凋亡,试剂盒检测视网膜丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量,Western-blot检测视网膜NgR及caspase-3含量。结果:对照组、DM组、siRNA空白组及siNgR组MDA含量分别为3.74±0.49,7.21±0.96,6.41±1.34及4.02±0.53nmol/mg prot。与对照组相比,DM组及siRNA空白组视网膜RGC凋亡增加,NgR及caspase-3表达上调,MDA含量升高(P<0.05),而siNgR组视网膜RGC数量、NgR及caspase-3表达、MDA含量较对照组均无明显变化(P>0.05)。结论:NgR表达增加是糖尿病RGC凋亡的重要原因之一,其机制可能与NgR诱导视网膜氧化应激、上调caspase-3表达有关。     

视细胞移植术后RCS鼠视网膜 γ-氨基丁酸的分布观察

目的通过纯视细胞移植, 观察重建视网膜神经传导通 路中抑制性神经递质γ氨基丁酸(γ-Aminobutyric Acid,GABA)的分布和变化。方法取同龄Wistar/皇家外科学院鼠(royal college of surgeon rat,RCS)为供/受体，准分子激光切削法制备视细胞层，外路途径移入RCS鼠的视网膜下腔，术后2周取RCS鼠手术眼，手术对照眼，RCS鼠对照眼，Wistar鼠眼。分别做冰冻切片，免疫组织化学染色法染色，普通光学显微镜下观察。测量内丛状层(inner plexiform layer,IPL)和节细胞层(ganglion cell layer,GCL)的光密度，计数无长突细胞的数量， 方差分析组间差异,配对t检验RCS鼠手术眼组内差异。结果在视细胞移植术后2周，移植视细胞存活，外丛状层重建 ，与手术对照眼，RCS对照眼相比，受体RCS鼠重建视网膜中内丛状层GABA免疫反应阳性 的神经纤维光密度测量值差异有显著性的意义 P < 0．001，而与Wi star鼠眼比较无明显区别。和手术对照眼，RCS对照眼，Wistar鼠组比，GABA能无长突细胞 (amacrine cell)明显增多(P<0．05)。节细胞层GABA阳性免 疫反应光密度测量值和上述几组比变化不明显(P>0．05)。接受移植的RCS鼠各部位的无长突细胞在移植部二侧和对侧赤道，后极部之间的差异无显著性 的意义( P = 0．3436)。结论视细胞移植不仅可以使RCS鼠视网膜重建正常的解剖结构，而且在移植后的视网膜中观察到抑制性神经递质GABA的分布接近正常，无长突细胞反应性增生。(中华眼底病杂志,2001,17:128-131)     

双丹明目胶囊对DR大鼠视网膜血管形态学及VEGF表达的影响

目的:观察糖尿病视网膜病变大鼠模型视网膜血管的病理变化及VEGF表达变化,初步评价双丹明目胶囊抑制视网膜血管新生效应。方法:将双丹明目胶囊作用于糖尿病视网膜病变大鼠,通过与正常组、模型对照组、阳性对照组的比较,电镜下观察双丹明目胶囊对糖尿病视网膜病变大鼠视网膜组织的影响,HE染色后光镜下观察视网膜结构,并采用免疫组织化学法检测大鼠视网膜中VEGF的表达。结果:经双丹明目胶囊治疗2mo后,双丹明目组大鼠视网膜组织轻度水肿,毛细血管周细胞水肿,线粒体轻度肿胀,结构稍欠清晰,部分内皮细胞轻度增生。除正常组外各组视网膜VEGF表达增加,以模型对照组最为明显,且双丹明目组和阳性对照组与模型对照组VEGF的表达有明显差异(P<0.01)。结论:双丹明目胶囊能有效地改善糖尿病大鼠视网膜微血管改变,减轻视网膜各层结构水肿、坏死情况,改善超微结构改变,可以抑制DR大鼠视网膜VEGF表达。