重组人血管内皮抑素腺病毒对人癌裸小鼠移植瘤的抑制作用

目的　观察重组人血管内皮抑素腺病毒 (Ad/hEndo)在体内、体外的表达效率 ,以及对裸鼠移植瘤肿瘤血管生成的影响。方法　携带人血管内皮抑素基因的新型重组腺病毒 (Ad/hEndo)及携带β 半乳糖苷酶基因 (LacZ基因 )的重组腺病毒 (Ad/LacZ)为自行构建。Ad/hEndo组 (7只 )瘤内注射 1× 10 9空斑形成单位 (pfu)的Ad/hEndo 10 0 μl,Ad/LacZ注射组 (6只 )瘤内注射 1× 10 9pfu的Ad/LacZ注射 10 0 μl,DMEM液注射组 (5只 )瘤内注射DMEM液 10 0 μl,共注射 5次。人鼻咽癌 (CNE 2 )和人脐静脉内皮细胞 (ECV30 4细胞 )被Ad/hEndo感染后 ,Western印迹和免疫酶联吸附法 (ELISA)检测人血管内皮抑素蛋白的表达。CNE 2细胞株移植到裸鼠背脊部后 ,检测Ad/hEndo对鼻咽癌裸鼠移植瘤生长的抑制作用 ,微血管密度计数 (microvesseldensity ,MVD)分析Ad/hEndo对肿瘤血管生成的影响。结果　Western印迹和ELISA法检测到人血管内皮抑素基因在CNE 2和ECV30 4细胞高效表达。当感染复数 (MOI)为 2 0pfu/细胞时 ,感染 72h后细胞培养上清中人血管内皮抑素蛋白浓度达 5 88 34ng/ml。Ad/hEndo可明显抑制鼻咽癌CNE 2裸鼠移植瘤生长 ,抑瘤率为 4 6 4 3% (Ad/hEndo治疗组对腺病毒携带基因LacZ注射组 ,t=2 2 2 6 ,P <0 0 5 )和 4 9 70 % (     

重组人血管内皮抑素联合TACE治疗中晚期原发性肝癌

目的 观察重组人血管内皮抑素联合TACE治疗中晚期原发性肝癌的疗效。方法 选取70例中晚期原发性肝癌患者,按患者治疗意愿分为对照组(36例)和观察组(34例),对照组给予TACE治疗,观察组在TACE基础上联合重组人血管内皮抑素治疗。治疗结束后,观察比较两组的疗效及毒副反应。结果 观察组疾病控制率为85.3%,显著高于对照组的63.9%(P<0.05);治疗后,两组AFP水平均较治疗前明显降低(P<0.05),而观察组的降低幅度大于对照组;治疗后对照组VEGF水平升高,而观察组则降低,差异有统计学意义(P<0.05)。两组毒副反应的发生率比较无统计学差异(P>0.05)。结论 重组人血管内皮抑素联合TACE治疗中晚期原发性肝癌可以有效提高疗效,且不增加毒副反应,值得进一步探索研究。     

阻断血管内皮生长因子表达对食管癌细胞放射敏感性的影响

目的 观察转染反义VEGF cDNA质粒和反义寡核苷酸后,TE-1食管癌细胞在体外的生长状况、VEGF表达水平及其放射敏感性的变化。方法 分别用反义VEGF cDNA质粒及空载体质粒和反义VEGF寡核苷酸经Lipofectamine^TM2000介导转染TE-1细胞,然后经γ射线照射。采用RT-PCR、Western blotting、流式细胞术、MTT法和克隆形成实验分别检测4组细胞照射前后VEGF基因的表达、凋亡率和细胞周期变化、细胞增殖情况以及转染细胞放射敏感性的变化。结果 将反义VEGF cDNA和反义寡核苷酸成功转入食管癌TE-1细胞后,VEGF表达水平明显降低,细胞增殖反应、细胞周期无明显变化,亦未见明显凋亡发生。照射后4组细胞增殖情况未见明显差异;反义组细胞凋亡率略有上升, 放射敏感性增加。结论 转染反义VEGF cDNA质粒和反义寡核苷酸可抑制食管癌TE-1细胞VEGF表达,联合放射线作用,对TE-1细胞的增殖无明显影响,而对其放射敏感性有增强作用。     

静脉滴注重组人血管内皮抑素联合动脉灌注化疗治疗晚期恶性肿瘤的临床观察

目的 探讨静脉滴注重组人血管内皮抑素联合动脉灌注化疗治疗晚期恶性肿瘤的疗效及安全性.方法 选取41例晚期恶性肿瘤患者人组研究,分为治疗组和对照组,均给予相应的肿瘤供血动脉灌注化疗,治疗组在灌注化疗后当天开始给予重组人血管内皮抑素静脉滴注治疗,连用14 d,间隔7 d为1个周期,对照组仅行动脉灌注化疗治疗,于2个治疗周期后比较疗效和生活质量评分,同时比较不良反应.结果 重组人血管内皮抑素治疗组治疗后疾病控制率、K氏评分显著升高,差异有统计学意义(P<0.05);有效率和不良反应与对照组差异无统计学意义(P>0.05).结论 采用静脉滴注重组人血管内皮抑素联合动脉灌注化疗治疗晚期恶性肿瘤,患者的疾病控制率和生活质量有明显的提高,而治疗相关不良反应不大,值得临床推广及进一步研究.     

下调血管内皮生长因子A对食管癌ECA-109细胞的辐射增敏作用

目的 下调食管癌ECA-109细胞的血管内皮生长因子A（VEGFA）表达，观察其辐射敏感性的改变并初步探讨其发生机制。方法 将食管癌ECA-109细胞分成VEGFA转染组、空载组、X射线组和VEGFA转染组联合X射线组。运用qPCR法检测VEGFA基因的表达；Western blot法检测VEGFA蛋白的表达；细胞增殖实验（CCK8法）测定细胞的增殖变化；克隆形成法分析不同照射剂量（0、2、4、6、8 Gy）细胞的辐射敏感性；流式细胞术分析细胞凋亡变化；免疫荧光法检测γ-H2AX焦点的数量。结果 ECA-109细胞VEGFA转染组与空载组比较，VEGFA基因表达明显减少（t=11.98，P<0.05）、VEGFA蛋白表达显著下调（t=12.38，P<0.05）；ECA-109转染组细胞相较于空载组细胞，其增殖（A₄₅₀值）明显受到抑制（t=2.78、7.25、21.93、13.21，P<0.05）；与空载组比较，VEGFA转染组ECA-109细胞的D₀、D_q、SF₂值下降（t=5.83、8.56、7.68，P<0.05），放射增敏比SER_D0、SER_Dq分别为1.41、2.09，凋亡比例明显增加、且联合X射线后ECA-109细胞的凋亡比例进一步增加（t=17.63、22.48、33.87，P<0.05）；ECA-109细胞VEGFA转染组和空载组在X射线照射后2 h内细胞核形成的γ-H2AX焦点数量均明显增加，24 h后空载组细胞核的γ-H2AX焦点数量恢复照射前水平，而转染组中的γ-H2AX焦点数量仍高于照射前水平（t=7.00，P<0.05）。结论 下调VEGFA能抑制食管癌细胞的增殖，减少细胞集落形成并促进其凋亡，增加食管癌ECA-109细胞的辐射敏感性，其机制与DNA损伤修复密切相关。     

奥沙利铂及重组人血管内皮抑素经肝动脉灌注联合TACE治疗原发性肝癌

目的 观察奥沙利铂及重组人血管内皮抑素联合经肝动脉灌注(TACE)治疗原发性肝癌的疗效及不良反应.方法 2010年6月至2012年6月43例原发性肝癌患者采用TACE术中经肝动脉灌注奥沙利铂及重组人血管内皮抑素治疗,并根据肿瘤血管丰富程度分组,术后观察患者不良反应,并定期行实验室指标及肝脏CT/MRI/DSA评价治疗效果及不良反应.结果 富血管肿瘤组治疗的总有效率显著高于乏血管肿瘤组患者(85.7％比33.3％,P＜0.05),临床随访数据表明多数富血管的患者通过联合药物灌注治疗有效,生存时间6个月以上者达57.1％(16/28),对于乏血管肿瘤患者的治疗中病情进展的仅为26.7％(4/15).结论 TACE术中经肝动脉灌注奥沙利铂联合重组人血管内皮抑素治疗原发性肝癌安全有效.     

重组人血管内皮抑素联合肝动脉灌注化疗栓塞治疗中晚期肝癌的临床应用

目的 研究重组人血管内皮抑制索(内皮抑素)联合肝动脉TACE治疗中晚期肝癌的临床疗效及安全性.方法 选取40例中晚期肝癌患者,随机分成两组.治疗组常规TACE加重组人内皮抑素-碘化油乳剂栓塞;对照组单纯给予常规TACE.所有患者术后1年内不定期复查CT或MRI,以及DSA检查.观察肿瘤复发或转移情况以及有无肿瘤新生血管形成.比较瘤体缩小情况,AFP变化,6个月、1年的生存率以及生活质量.同时比较两组术后不良反应.结果 治疗组1年生存率、AFP下降程度显著高于对照组,治疗组与对照组1年生存率分别为75%(15/20)和60%(12/20);AFP下降值平均差为300μg/ml;肿瘤新生血管、转移抑制明显.结论 内皮抑索联合TACE治疗中晚期肝癌,患者1年生存率显著提高,AFP下降明显,肿瘤新生血管、转移抑制明显,且安全,具有较好的临床应用前景,值得临床进一步研究.     

重组人血管内皮抑素诱导大鼠心肌细胞凋亡的体内实验研究

目的探讨重组人血管内皮抑素(rh-ES)对大鼠心肌的毒性作用及其可能机制。方法 24只成年雌性Wistar大鼠随机分为rh-ES低、中、高剂量组[分别予3、6、12mg/(kg·d)rh-ES腹腔注射]及对照组(腹腔注射等体积生理盐水),每组6只。各组在第4周和第8周末次给药后采用脊椎脱臼法分别处死3只大鼠,在光镜及电镜下观察病理形态学及超微结构改变,TUNEL法检测大鼠心肌细胞凋亡情况,CD34标记内皮细胞免疫组化法检测大鼠心肌组织的微血管密度(MVD)改变。结果光镜及电镜下对照组和低、中剂量组无明显心肌损伤的病理形态及超微结构改变。高剂量组光镜下可见心肌损伤的病理形态及超微结构改变。TUNEL法检测显示,给药8周后中剂量组和高剂量组凋亡指数明显高于对照组,差异有统计学意义(P=0.033、P=0.000),其中高剂量组凋亡指数最高。心肌组织微血管计数提示,给药4周及8周后高剂量组(MVD)增加,显著高于对照组(P<0.05)。结论 rh-ES对大鼠心肌细胞具有毒性作用,细胞凋亡机制参与了心肌损伤的病理过程。     

抗血栓药物对食管癌细胞放射增敏作用的实验与研究

目的：增加肿瘤细胞对放射线的敏感性，降低正常组织的并发症。方法：尼莫地平片、阿斯匹林、复方丹参、和低分子右旋糖酐、血塞通注射液．在乏氧条件下，当这五种混合药液浓度为10mg/ml时，其增值比可达1．21(Do比值)静1．76(Dq比值)：当浓度增高到15mg／ml时，增值比达1．27(Do比值)和1．92(Dq比值)。而有氧条件下增敏比1．70，结果：五种混合药液可以对肿瑶乏氧细胞有一定的增敏作用，对有氧细胞基本没有增敏效应。其作用机制可以有效地扩张血管，改善微循环，可使正常组织细胞亚致死损伤的修复，提高正常组织细胞和肿瘤细胞的氧合。     

3-甲基腺嘌呤增强食管鳞癌Eca-109细胞放射敏感性的研究

目的 研究自噬在照射致人食管鳞癌Eca-109细胞死亡过程中的作用。方法 选用食管鳞癌Eca-109细胞,分为对照组、5 mmol/L给药组、10 mmol/L给药组、单纯照射组、照射+5 mmol/L组、照射+10 mmol/L组,共6组。采用Western blot检测不同处理组自噬标志物LC3B表达水平;GFP-LC3转染食管鳞癌Eca-109细胞后监测自噬体数量变化;MTT法检测不同处理组细胞活力;荧光染料Hoechst 33342观察不同处理组细胞凋亡的形态学变化;流式细胞术检测不同处理组细胞周期和细胞凋亡;克隆形成实验检测食管鳞癌Eca-109细胞不同处理组放射敏感性。结果 Western blot显示,照射后自噬水平升高,自噬抑制后LC3BⅡ和LC3BⅡ/LC3BⅠ比值明显下降(F=25.64,P<0.05);GFP-LC3转染食管鳞癌Eca-109细胞后,可见照射后自噬体荧光斑点明显增多,自噬抑制后自噬体明显减少(F=127.36,P<0.05);抑制自噬协同照射后细胞活力明显低于单纯照射组(F=129.54,P<0.05);抑制自噬后也增加了照射诱导的凋亡率和G₂/M期阻滞细胞比;线性二次模型拟合剂量存活曲线显示,抑制自噬能增加食管鳞癌Eca-109细胞的放射敏感性。结论 抑制自噬能提高食管鳞癌Eca-109细胞的放射敏感性,协同杀伤肿瘤细胞,提示抑制自噬或可用于辅助食管鳞癌的放射治疗。     

西妥昔单抗对人食管癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R放射敏感性的研究

目的 观察西妥昔单抗(C225)对人食管鳞癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R的影响。方法 分次照射建立人食管鳞癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R;相差显微镜下观察细胞的形态学差异;G显带法进行染色体分析;克隆形成实验验证KYSE-150和KYSE-150R细胞的不同放射敏感性;采用不同浓度的C225处理KYSE-150R细胞,研究对KYSE-150R细胞放射敏感性的影响。结果 KYSE-150R细胞的群体倍增时间为(25.9±0.6)h,长于亲代细胞的KYSE-150(23.6±0.2) h(t=6.6,P＜0.01);KYSE-150R细胞的染色体数目由69.3±1.9 增加到73.7±1.2(t=-8.83,P<0.01),并且观察到有染色体畸变;KYSE-150R细胞SF₂、D₀、D_q及N 值均高于KYSE-150细胞, 加入5 μg/ml的C225后,其SF₂、D₀、D_q、N与单纯照射组KYSE-150R细胞相比有显著降低;加入C225后KYSE-150R细胞G₀/G₁、G₂/M期比例增加,S期比例减少(t=-4.478~4.308, P<0.05)。结论 C225对人食管鳞癌放射抗拒性细胞株KYSE-150R有放射增敏作用。     

大蒜素提高人胰腺癌BXPC3细胞放射敏感性的机制研究

目的：观察大蒜素对人胰腺癌BXPC3细胞的生长及放射敏感性的影响。方法：大蒜素联合X射线处理胰腺癌BXPC3细胞,采用MTT法检测细胞的生长和增殖;细胞流式技术测定细胞周期改变以及细胞凋亡;细胞克隆形成法观察大蒜素对辐射的增敏作用。采用RT-PCR、Western blot分析细胞中Bax、Bcl-2表达变化。结果：12、24和48 h大蒜素处理导致细胞生长抑制的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为76.24、58.34和 43.58 μmol/L。与单纯照射组相比,照射联合应用大蒜素明显抑制胰腺癌细胞的生长（t=2.74,P<0.05）,影响细胞周期的变化,显著增加G₂/M期细胞阻滞（t=11.41,P<0.05）;细胞凋亡率明显提高（t=12.36,P<0.05）,伴有Bax表达的增高（t=4.83,P<0.05）和Bcl-2的表达下调（t=3.69,P<0.05）。 结论：大蒜素可以通过诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡而抑制胰腺癌BXPC3细胞的生长,具有放射增敏作用,凋亡相关因子Bax、Bcl-2参与了这一过程。     

Effect of photodynamic therapy and endostatin on human glioma xenografts in nude mice

The aim of this study was to investigate the effect of endostar (a recombinant human endostatin) and photodynamic therapy (PDT) on gliomas. To establish glioma xenografts, human U251 glioma cells were injected into the brain of nude mice. Mice with MRI-confirmed glioma received hematoporphyrin monomethyl ether (HMME)-mediated PDT, daily injection of endostar or their combination, respectively. After treatment, tumor volume, the expression of HIF-1α, VEGF-A and apoptosis marker, and animal survival were examined. PDT and endostar treatment can prolong survival. Changes in induction of apoptosis, tumor growth and survival were more significant in PDT + endostar group. After PDT, HIF-1α and VEGF-A expressions were markedly increased. After endostar treatment, HIF-1α and VEGF-A expressions were significantly reduced. PDT in combination with endostar can significantly inhibit the growth of glioma xenografts. This approach may represent a promising strategy in the treatment of glioma.     

表皮生长因子受体siRNA对食管鳞癌细胞的放射增敏研究

目的 探讨用小干扰RNA(siRNA)抑制表皮生长因子受体(EGFR)基因表达对食管鳞癌Eca109细胞放射敏感性的影响.方法 化学合成3种序列EGFR siRNA (EGFR siRNA1、EGFRsiRNA2、EGFR siRNA3),设随机序列阳性siRNA组、随机序列阴性siRNA组、空白对照组,通过脂质体转染法转入Eca109细胞.以CCK8法检测细胞增殖,采用RT-PCR和Western blot检测干扰前后的Eca109细胞EGFR mRNA和蛋白表达.用细胞克隆形成实验分析EGFR siRNA联合X射线照射对Eca109细胞的放射敏感性影响.结果 EGFR siRNA1、EGFR siRNA2、EGFR siRNA3转染Eca109细胞后的EGFR mRNA的阳性表达率为26.74％、9.52％、4.61％,较空白对照组的42.44％明显下降(F=112.11,P＜0.01),EGFR siRNA1、EGFR siRNA2、EGFR siRNA3对Eca109细胞EGFR mRNA表达抑制效率可高达72.84％、53.01％和56.21％;CCK8实验显示siRNA3干扰EGFR后Eca109细胞生长受到抑制,增殖抑制率为28.2％;成克隆分析的EGFR siRNA3转染Eca109细胞加照射组D0、Dq、SF2值均低于单纯照射组,放射增敏比(SER)为1.50.结论 EGFRsiRNA转染Eca109细胞后能有效抑制EGFR基因表达,提高其放射敏感性.     

Cks1表达对人食管癌EC9706细胞辐射敏感性的影响

目的 通过多种转染方法改变人食管癌细胞EC9706中Cks1的表达,探究Cks1的表达对细胞辐射敏感性的影响。方法 通过3种转染方式构建人食管癌EC9706细胞模型,分别为Cks1正义转染组（以亲本组和空载组为对照）、Cks1 RNAi组（以亲本组和阴性对照组为对照）和Rescue组（转染了抗Cks1 RNAi的突变载体,以亲本组和RNAi组作为对照）。Western blot法检测转染后EC9706细胞中Cks1蛋白的表达量;6 Gy γ射线照射转染后的EC9706细胞,MTT法和克隆形成实验检测EC9706辐射敏感性的变化。结果 Western blot检测结果表明,转染成功改变了Cks1的表达量。正义转染实验中,相对于亲本组和空载组,Cks1正义转染组Cks1表达量提高（t=17.10、14.95,P<0.05）;RNA干扰实验中,相对于亲本组和阴性对照组,RNAi组表达量降低（t=3.85、6.37,P<0.05）;Rescue实验中,Rescue组较RNAi组表达量明显回升（t=7.72,P<0.05）,接近亲本组的表达水平（P>0.05）。MTT实验结果表明,6 Gy γ射线照射后,Cks1正义转染组细胞的增殖能力显著高于亲本组（t=3.42、4.74、4.02,P<0.05）和空载组（t=3.39、4.44、4.37,P<0.05）。RNAi组细胞的增殖能力显著低于亲本组（t=7.33、8.27,P<0.05）和阴性对照组（t=6.98、7.34,P<0.05）。Rescue组细胞的增殖能力显著高于RNAi组（t=11.61、9.99,P<0.05）,与亲本组相近（P>0.05）。克隆形成实验结果表明,Cks1正义转染组细胞克隆形成能力显著高于亲本组（t=13.95,P<0.05）和空载组（t=14.72,P<0.05）,RNAi组细胞的克隆形成能力显著低于亲本组（t=20.14,P<0.05）和阴性对照组（t=10.01,P<0.05）,Rescue组细胞的克隆形成能力显著高于RNAi组（t=10.57,P<0.05）,与亲本组相近（P>0.05）。结论 Cks1的表达与食管癌细胞辐射敏感性密切相关,Cks1表达量越高,食管癌细胞辐射敏感性越低。     

重组人血管内皮抑制素对大鼠放射性心肌纤维化的影响

目的 建立放射性心脏纤维化大鼠模型,观察重组人血管内皮抑制素（恩度）对心肌纤维化的影响,初探转化生长因子-β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）与心肌纤维化的相关性。方法 将40只SD大鼠按随机数表法分为4组,每组10只,A组为健康对照组;B组为恩度干预组,恩度（6 mg/kg）腹腔连续注射14 d;C组为单纯照射组,心脏照射25 Gy/5次,连续5 d;D组为照射+恩度干预组,恩度给药方法同B组、心脏照射方法同C组。照射后第1、3个月各麻醉处死5只大鼠。Masson染色评估心肌纤维化情况,Western blot检测心肌TGF-β1、CTGF及胶原蛋白Ⅰ（COL-Ⅰ）型表达。结果 照射后1和3个月,B组未见明显的心肌纤维化表现,C组和D组可见胶原纤维分布于心肌细胞间质。照射后1个月,半定量分析结果显示A组的心肌胶原容积分数（CVF）为（5.20±0.75）%,C组（10.12±2.17）%和D组（10.32±1.36）均高于A组（t=4.74、4.93,P<0.01）,C组和D组的CVF差异无统计学意义（P>0.05）;照射后3个月C组的CVF（13.17±2.67）%仍比A组（5.23±1.32）%高（t=4.49,P<0.01）,C组的CVF低于D组（16.92±3.58）%（t=3.19,P<0.05）。照射后1个月,A组TGF-β1的表达量为0.441±0.063,C组0.817±0.079高于A组（t=5.81,P<0.01）;照射后3个月,A组TGF-β1的表达量为0.501±0.110,C组0.832±0.150高于A组（t=4.19,P<0.01）,D组1.403±0.133高于C组（t=7.24,P<0.01）。照射后1、3个月,各组间CTGF及COL-I的变化趋势与TGF-β1的变化趋势相似。结论 射线可引起心肌纤维化的形成,重组人血管内皮抑制素可能会加重晚期放射纤维化的形成。     

磁共振灌注成像在重组人血管内皮抑制素联合放化疗治疗局部晚期鼻咽癌中的临床研究

目的 比较鼻咽部磁共振灌注成像（PWI）参数的变化,评价血管内皮抑素联合放化疗的抗血管生成作用,评估其治疗疗效的早期反应。方法 前瞻性研究2011年12月30日至2013年3月31日,22例局部晚期鼻咽癌患者接受重组人血管内皮抑制素联合诱导化疗序贯同步放化疗治疗（试验组）,选取诱导化疗序贯同步放化疗的25例局部晚期鼻咽癌患者入对照组。诱导化疗前后、同步放化疗后行鼻咽部灌注核磁共振扫描（PWI）得出相关参数血容量（BV）、血流量（BF）、平均通过时间（MTT）。结果 试验组中,在诱导化疗后及放疗后鼻咽部病灶区域的BV、BF值较诱导化疗前均有明显下降（F=3.05、3.85,P<0.05）,MTT值差异无统计学意义（P>0.05）。对照组中,鼻咽部病灶区域相关参数BV、BF、MTT在治疗过程中的变化差异均无统计学意义（P>0.05）。试验组鼻咽部病灶区域的BF在放疗后下降明显低于对照组（0.72±0.56 vs 1.92±1.26,t=-3.056,P=0.012）。结论 血管内皮抑素在改变肿瘤血液动力学变化方面起到了一定的作用,其治疗相关性不良反应患者可以耐受。磁共振灌注成像有可能更早、更敏感地评估抗血管生成治疗减少肿瘤的疗效。临床试验注册号 中国临床试验注册中心,ChiCRT-ONRC-12002394.