大蒜素提高人胰腺癌BXPC3细胞放射敏感性的机制研究

目的：观察大蒜素对人胰腺癌BXPC3细胞的生长及放射敏感性的影响。方法：大蒜素联合X射线处理胰腺癌BXPC3细胞,采用MTT法检测细胞的生长和增殖;细胞流式技术测定细胞周期改变以及细胞凋亡;细胞克隆形成法观察大蒜素对辐射的增敏作用。采用RT-PCR、Western blot分析细胞中Bax、Bcl-2表达变化。结果：12、24和48 h大蒜素处理导致细胞生长抑制的半数抑制浓度（IC₅₀）分别为76.24、58.34和 43.58 μmol/L。与单纯照射组相比,照射联合应用大蒜素明显抑制胰腺癌细胞的生长（t=2.74,P<0.05）,影响细胞周期的变化,显著增加G₂/M期细胞阻滞（t=11.41,P<0.05）;细胞凋亡率明显提高（t=12.36,P<0.05）,伴有Bax表达的增高（t=4.83,P<0.05）和Bcl-2的表达下调（t=3.69,P<0.05）。 结论：大蒜素可以通过诱导细胞周期阻滞及细胞凋亡而抑制胰腺癌BXPC3细胞的生长,具有放射增敏作用,凋亡相关因子Bax、Bcl-2参与了这一过程。     

长期低剂量γ照射对人B淋巴母细胞辐射敏感性的影响

目的 探讨长期低剂量(LDR)γ辐射对人B淋巴母细胞HMy2.CIR(HMy)辐射敏感性的影响及其机制。方法 实验将HMy细胞分为对照组和长期LDR组,其中长期LDR组选用可以显著促进细胞增殖的低剂量γ射线对HMy细胞每周照射3次,每次0.032 Gy,连续照射4周,在长期LDR处理结束后分别对部分对照组和长期LDR组细胞进行2 Gy照射。以CCK-8[内含WST-8,即2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐]法检测细胞增殖和辐射敏感性,流式细胞术检测细胞凋亡率和γ-H2AX表达,RT-PCR法检测细胞周期相关基因cyclinD1、细胞增殖核抗原PCNA,以及凋亡相关基因bcl-2和bax的表达。结果 长期LDR可以显著提高细胞的增殖率(t=9.607,P<0.01), 增加cyclinD1和PCNA基因表达(t=6.869、9.229,P<0.01),增加抗凋亡基因bcl-2表达(t=2.662,P<0.05),降低抑凋亡基因bax的表达(t=19.908,P<0.01)。同时,受长期LDR照射的细胞对攻击剂量(2 Gy)产生适应性,使得细胞辐射敏感性显著降低(t=8.896,P<0.01);与单纯2 Gy照射组相比,LDR+2 Gy组细胞γ-H2AX表达量(t=10.264,P<0.01)和细胞凋亡率(t=4.762,P<0.01)均显著降低。结论 长期LDR辐射可通过促进周期相关基因表达从而促进细胞增殖,并通过减少细胞凋亡来降低其辐射敏感性。     

lncRNA CCAT1靶向miR-130b-3p对人胰腺癌细胞PANC-1放射敏感性的影响

目的 探讨lncRNA CCAT1和miR-130b-3p对体外培养的胰腺癌细胞PANC-1放射敏感性的影响。方法 采用Real-time PCR检测胰腺癌组织及其细胞系和2 Gy X射线照射后PANC-1细胞中CCAT1和miR-130b-3p的相对表达水平。沉默CCAT1表达、抑制miR-130b-3p表达后,应用流式细胞仪、Caspase 3活性检测试剂盒及克隆形成实验检测细胞凋亡率、Caspase 3活性和细胞存活分数,并绘制单击多靶模型拟合曲线;利用starBase v2.0在线预测、荧光素酶报告基因、RNA结合蛋白免疫沉淀实验（RIP）及Real-time PCR实验,验证CCAT1和miR-130b-3p的靶向关系。结果 在放射抵抗的胰腺癌组织、胰腺癌细胞系和2 Gy照射的PANC-1细胞中,CCAT1表达均上调（t=6.322~8.555,P<0.05）,miR-130b-3p表达下调（t=3.950~18.795,P<0.05）。2 Gy照射并沉默CCAT1,PANC-1细胞存活分数降低（t=2.929、5.047、5.234、5.125,P<0.05）,细胞凋亡率增加（t=6.953,P<0.05）,Caspase 3活性升高（t=6.836,P<0.05）。发现CCAT1能靶向调控miR-130b-3p表达,抑制miR-130b-3p表达,PANC-1细胞存活分数增大（t=4.564、6.736、8.656,P<0.05）,细胞凋亡减少（t=5.234,P<0.05）,Caspase 3活性降低（t=10.440,P<0.05）。结论 沉默CCAT1表达能够促进miR-130b-3p表达,从而增加PANC-1细胞放射敏感性。     

人肺腺癌A549细胞低剂量辐射超敏感性及其机制的研究

目的 观察A549细胞的低剂量辐射超敏感性现象,探讨其发生的机制。方法 A549细胞接受0~2 Gy的⁶⁰Coγ射线照射后,流式细胞仪对其分选计数,克隆形成法检测细胞存活分数,Western blot法检测ATM1981Ser-P蛋白表达,Hoechst 33258荧光染色法、AnnexinⅤ-FITC/PI双染流式细胞仪检测细胞凋亡,PI单染流式细胞仪检测细胞周期。结果 细胞在0~0.3 Gy表现出单位剂量杀伤增强,在0.3~0.5 Gy表现出一定的辐射抗性,0.5 Gy后的区域存活分数随辐射剂量的增加而降低。照射后1 h,ATM激酶在0.2 Gy时开始活化,0.5 Gy时活化达高峰(t=7.96,P<0.05);与0.5 Gy相比1.0和2.0 Gy的活化水平无明显变化(t=0.69、0.55,P>0.05)。照射后24 h,部分细胞发生凋亡,其凋亡曲线与存活曲线相吻合。与未照射组相比,0.1和0.2 Gy组在各时间点(照射后6、12和24 h)的细胞周期无明显变化,而0.3、0.4和0.5 Gy 组,照射后6和12 h细胞发生G₂/M期阻滞(t＝2.87、2.88、4.92和3.70、3.12、8.11,P<0.05),照射后24 h G₂/M期细胞比例下降(t＝3.87、4.77、3.01,P<0.05)。结论 A549细胞存在HRS/IRR现象,其发生可能与ATM激酶、细胞周期变化有关,凋亡是细胞死亡的主要方式。     

西妥昔单抗联合照射对结直肠癌CL187细胞的抑制作用及机制探讨

目的 研究西妥昔单抗(C225)联合外照射对结直肠癌CL187细胞生物学效应的影响,并探讨相关分子机制。方法 结直肠癌CL187细胞分单纯照射组和C225处理的联合照射组,受6 MV X 射线照射0、4和8 Gy后24和48 h,用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法测吸光度(A)值,比较两组细胞死亡率的差异。利用克隆形成实验比较两组细胞增殖能力的差异。采用流式细胞仪,检测细胞周期和细胞凋亡。蛋白免疫印迹法分析两组细胞DNA-PKcs、Ku70和Ku80蛋白表达量的变化。结果 联合照射组较单纯照射组死亡细胞比例增加(t=-6.14、-6.53,P<0.05),细胞克隆形成能力下降。C225增强了射线对细胞的杀伤作用,放射增敏比SER为1.38。联合照射组G₀/G₁期细胞阻滞增加(t=-4.64, P<0.05),细胞凋亡比例增加(t=-9.16, P<0.05),DNA修复相关蛋白DNA-PKcs、Ku70和Ku80蛋白表达量减少。结论 西妥昔单抗增强照射对结直肠癌CL187细胞的杀伤作用,可能是通过影响细胞周期、细胞凋亡和DNA损伤修复基因实现的。     

重离子与X射线照射肺癌细胞A549的生物学效应比较

目的 比较碳重离子与X射线对肺癌细胞的生物学效应。方法 对A549细胞分别进行碳重离子和X射线照射,通过克隆形成实验检测照射后细胞存活情况;流式细胞术检测细胞周期分布;通过Hoechst 33258荧光染料对照射后固定的细胞进行染色,计算凋亡率;采用实时荧光定量PCR方法检测照射后48 h细胞内DNA依赖性蛋白激酶催化亚单位（DNA-PKcs）和H2AX的mRNA表达水平。结果 细胞存活曲线显示,碳重离子造成的细胞存活分数远低于X射线,并将细胞周期阻滞于G₂/M期（t=4.77、14.53、14.54,P<0.05）,导致大部分细胞进入凋亡途径。碳重离子与X射线辐照后DNA-PKcs的表达上调（t=10.91、5.05,P<0.05）。结论 碳重离子照射对肺癌细胞造成生物学效应远高于X射线。     

和厚朴酚对鼻咽癌细胞生长及其放射敏感性的影响

目的 研究和厚朴酚对人鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞生长和放射敏感性的影响。方法 采用四甲基偶氮唑盐比色法(MTT法)检测CNE-1和CNE-2细胞生长;流式细胞术检测细胞周期变化;磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测细胞凋亡;Western blot法测定相关蛋白表达水平;采用细胞克隆形成法观察和厚朴酚对细胞放射敏感性的影响。结果 和厚朴酚明显抑制CNE-1和CNE-2细胞生长,且存在着明显剂量和时间依赖性,半数抑制浓度(IC₅₀)在CNE-1和CNE-2细胞分别为2.84和2.68 μmol/L(24 h),2.50 和2.20 μmol/L(48 h)。2.5 μmol/L和厚朴酚处理24 h后,CNE-1细胞的早期凋亡、晚期凋亡和坏死细胞分别达到24.53%、23.05%和7.13%,与未经处理的对照组之间差异均有统计学意义(t=-41.17、-8.18、-6.08, P<0.05)。4和3 μmol/L的和厚朴酚分别使CNE-1细胞和CNE-2细胞中促凋亡蛋白Bax和凋亡效应蛋白Caspase 3的表达水平出现2.31倍和1.89倍(t=-15.92、-17.15,P<0.05)及4.43倍和1.85倍(t=-29.39、-13.47,P<0.05)的增加,同时抗凋亡蛋白Bcl-2蛋白的表达降低45.05%和36.50%(t=26.94、66.14,P<0.05)。和厚朴酚24 h预处理可以明显提高CNE-1和CNE-2细胞对X射线的放射敏感性,SER分别为1.41和1.88。3 Gy X射线照射明显增加两种细胞的G₂/M期细胞数量(t=-14.96、-19.26, P<0.05),和厚朴酚降低了辐射导致的G₂/M期细胞阻滞(t=7.65、4.98,P<0.05),同时Cyclin B1蛋白表达明显增加(t=-33.07、-73.49,P<0.05)。结论 和厚朴酚诱导人鼻咽癌CNE-1和CNE-2细胞凋亡和细胞坏死而导致细胞生长的抑制。干预X射线诱导G₂/M期细胞阻滞可能是和厚朴酚预处理提高两种鼻咽癌细胞放射敏感性的重要作用机制。     

Tat-SmacN7对人乳腺癌细胞系的放射增敏作用

目的 观察Tat-SmacN7对人乳腺癌SK-BR-3细胞放射敏感性的影响并探讨其机制。方法 取对数生长期乳腺癌SK-BR-3细胞,分为对照组、γ射线照射组、Tat-SmacN7组和Tat-SmacN7联合γ射线照射组（联合组）。MTT法检测Tat-SmacN7对SK-BR-3细胞的毒性;克隆形成实验检测Tat-SmacN7的存活分数;单击多靶模型拟合细胞存活曲线并计算放射增敏比（SER）;流式细胞术检测Tat-SmacN7联合γ射线照射对细胞凋亡的影响;Western blot法检测细胞凋亡抑制蛋白XIAP和cIAP-1蛋白表达水平。结果 Tat-SmacN7随浓度升高对SK-BR-3细胞的增殖抑制率增大,药物浓度与细胞增殖率呈正相关（r=0.924,P<0.05）,IC₅₀为（62.62±1.19）μmol/L,IC₂₀为（5.66±0.67）μmol/L;5 μmol/L Tat-SmacN7能增加SK-BR-3细胞的放射敏感性,联合组与照射组放射增敏比为1.48;6 Gy γ射线照射后48 h,联合组凋亡率显著高于照射组（t=7.01,P<0.05）;与对照组相比,Tat-SmacN7组XIAP表达水平降低,联合组XIAP和cIAP-1蛋白表达水平均降低。结论 Tat-SmacN7通过促进人乳腺癌细胞SK-BR-3细胞的凋亡,增加其辐射敏感性,这一特性与XIAP的表达有关。     

榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞放射敏感性影响及其机制的研究

目的 探讨榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞放射敏感性的影响及其分子机制。方法 克隆形成实验检测10、20 μg/ml榄香烯乳对人肺腺癌A549细胞的放射敏感性影响。细胞分为空白对照组、单纯照射组(4 Gy X射线照射)、单纯药物组(给予10、20 μg/ml榄香烯乳);联合照射组(给予10、20 μg/ml 榄香烯乳24 h后4 Gy X射线照射)。Western blot检测DNA-PKcs、Bcl-2及P53蛋白的表达变化,并分析DNA-PKcs与Bcl-2、P53表达之间的相关性。结果 10 μg/ml榄香烯乳的放射增敏比SER_D0、SER_Dq 为1.54±0.20和1.43±0.15;20 μg/ml榄香烯乳SER_D0、SER_Dq 为1.63±0.32及1.75±0.19。与单纯照射组相比,10、20 μg/ml榄香烯乳联合照射组细胞的DNA-PKcs蛋白表达明显减少(t=7.52、8.33, P<0.05),Bcl-2蛋白表达明显减少(t=10.74、11.33, P<0.05),P53蛋白表达明显增加(t=-9.25、-7.66P<0.05)。DNA-PKcs与P53蛋白表达显著负相关(r=-0.569,P<0.05),与 Bcl-2蛋白表达显著正相关(r=0.755, P<0.05)。结论 榄香烯乳可增加人肺腺癌A549细胞的放射敏感性,其机制与下调DNA-PKcs表达抑制DNA双链损伤修复和上调p53,下调Bcl-2表达促进细胞凋亡有关。     

FAM83A对胰腺癌细胞PANC-1干细胞样表型和放射敏感性的影响

目的 探讨FAM83A对胰腺癌细胞PANC-1干细胞样表型和放射敏感性的影响,旨在为胰腺癌靶向治疗提供新思路。方法 慢病毒感染构建稳定沉默FAM83A的PANC-1细胞株,qPCR和Western blot进行验证;流式细胞仪检测干细胞标记物CD133阳性的细胞数;肿瘤细胞成球实验检测PANC-1细胞成球能力;MTT检测吉西他滨对PANC-1稳转株细胞活力的影响;平板克隆形成实验检测X射线照射对PANC-1稳转株细胞增殖的影响;流式细胞术检测吉西他滨和X射线照射对PANC-1稳转株细胞凋亡的影响;Western blot检测PANC-1稳转株细胞中Wnt/β-catenin信号通路表达变化。结果 沉默FAM83A后PANC-1细胞中FAM83A蛋白表达（0.83±0.08）和mRNA表达（0.29±0.03）较阴性对照组FAM83A蛋白表达（1.95±0.19）和mRNA表达（0.98±0.09）显著降低（t=9.410、12.600,P<0.05）;沉默FAM83A后CD133阳性PANC-1细胞率（8.97±0.62）%较阴性对照组（21.60±2.60）%显著降低（t=8.184,P<0.05）,且细胞成球数（8±1）较阴性对照组（25±3）亦显著降低（t=9.311,P<0.05）,PANC-1细胞干细胞样表型显著被抑制;沉默FAM83A联合50 μmol/L吉西他滨处理PANC-1细胞72 h后细胞活力（32.33±3.05）%较吉西他滨处理组（63.06±5.98）%显著降低,细胞凋亡率（76.52±8.34）%较吉西他滨处理组（40.88±4.91）%显著增加,差异有统计学意义（t=6.378、7.929,P<0.05）;沉默FAM83A联合X射线照射后,PANC-1细胞活力（43.25±4.21）%较X射线照射组（78.13±7.98）%明显降低,细胞凋亡率（44.56±5.32）%较X射线照射组（15.15±1.95）%明显增加,差异有统计学意义（t=6.694、8.990,P<0.05）;沉默FAM83A后细胞中Wnt/β-catenin信号通路蛋白Active-β-catenin表达降低,p-β-catenin表达增加,且细胞核中β-catenin表达也降低,差异有统计学意义（t=10.290、8.521、8.969,P<0.05）,而Total β-catenin无明显变化,细胞中Wnt/β-catenin信号通路活性明显被抑制。结论 沉默FAM83A可能通过Wnt/β-catenin信号抑制胰腺癌细胞干细胞样表型,增强细胞对化疗药物吉西他滨及放射敏感性,FAM83A将可为胰腺癌临床治疗提供新靶点。