白藜芦醇对LPS诱导小鼠腹腔巨噬细胞NO和炎性因子生成的调控

目的探讨白藜芦醇（Res）对内毒素（LPS）诱导小鼠腹腔巨噬细胞核因子-κB（NF—κB）活化及炎性细胞因子（TNF—α、IL—1β、IL-6）基因表达的调节，为Res的临床运用提供理论依据。方法分别用LPS或Res＋LPS处理体外培养的小鼠巨噬细胞，采用电子顺磁共振（EPR）自旋捕集技术直接检测巨噬细胞产生的NO，电泳迁移率改变分析法（EMSA）检测细胞中NF—κB活性，逆转录一聚合酶链反应（RT—PCR）和酶联免疫吸附法（ELISA）检测细胞中TNF—α、IL—1β、IL-6 mRNA和蛋白的表达。结果表明LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量在刺激后2—12h明显高于正常对照组（P〈0．01），而Res＋LPS组NO含量、NF—κB活性和TNF—α、IL-1β、IL-6含量均显著低于LPS组（P〈0．01）。结论提示LPS可诱导巨噬细胞NF—KB活化，导致TNF-α、IL-1β、IL-6基因表达增强，而Res能抑制NF—κB活化而调节TNF—α、IL-1β、IL-6基因的表达。     

肿瘤坏死因子对内皮细胞组织因子表达及转录调控的影响

目的：研究肿瘤坏死因子（TNFα）对内皮细胞组织因子（TF）表达的影响,并探讨TF基因5′上游序列以及核转录因子NF－κB在该基因转录中的调控作用。方法：进行人脐静脉内皮细胞株（EVC304）及原代内皮细胞的培养。用发色底物显色法、RT－PCR和细胞原位杂交分别检测内皮细胞TF活性和mRNA水平,采用基因重组技术构建含有人TF基因不同上游序列荧光素酶报告基因质粒,经脂质体法转染内皮细胞,检测及分析报告基因活性。凝胶电泳迁移率改变法和western印迹法检测内皮细胞NF－κB与DNA结合活性和含量。结果：100u/ml TNFα诱导内皮细胞TF活性和mRNA表达量明显增高。在TF基因上游序列－244／＋121bp存在时,TNFα可使转染内皮细胞荧光素酶表达量明显增加,－111／＋121bp存在时表达量无明显差异,而且比存在－244／＋121bp时的表达量明显降低;同样浓度TNFα作用下,内皮细胞核抽提物与NF－κB探针的结合活性高于正常对照组,核内NF－κB含量明显增加。结论：TNFα可以增强内皮细胞TF活性及基因表达,其中TF基因上游－244／－112bp序列的存在起着重要的调节作用。此外,TNFα也能促进内皮细胞NF－κB的转位和与DNA结合活性增高。     

p38蛋白激酶对脂多糖诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控

目的探讨p38蛋白激酶对脂多糖（LPS）诱导肺泡巨噬细胞NF-κB活化的调控机制。方法分离培养肺泡巨噬细胞。设正常对照组、LPS刺激组、SB203580（p38蛋白激酶抑制剂）＋LPS组、PDTC（NF—κB抑制剂）＋LPS组和SB203580＋PDTC＋LPS组。分别采用免疫细胞化学（SP法）和Western blot检测NF—κB、p38蛋白激酶和NF—κB抑制蛋白（I-κB）的表达。结果与正常对照组相比，LPS刺激肺泡巨噬细胞后胞核NF-κB和p38蛋白激酶染色显著增强，而I—κB的表达显著降低（均P〈0．01）。SB203580、PDTC均可显著降低LPS刺激的肺泡巨噬细胞NF-κB，p38蛋白激酶胞核染色阳性细胞的百分比，并显著增强I—κB的表达（均P〈0．05）。同时应用PDTC和SB203580预孵育肺泡巨噬细胞，与LPS刺激组相比，p38蛋白激酶和NF—κB胞核染色阳性细胞百分比均显著降低（P〈0．05），I-κB的表达显著增强（P〈0．05），但分别与SB203580＋LPS和PDTC＋LPS组相比，差异均无显著性意义（均P〉0．05）。结论LPS刺激肺泡巨噬细胞p38蛋白激酶和NF—κB活化；p38蛋白激酶可能通过调节I-κB降解而调控NF—κB的活化，NF—κB可能是p38信号途径下游的最重要位点。     

NF-κB在缺血再灌注肝脏枯否细胞活化中的作用

目的 探讨缺血再灌注肝脏枯否细胞（KCs）的活化机制。方法 Wistar大鼠随机分为肝缺血30min再灌注组（HIR－30min组）、肝缺血60min再灌注组（HIR－60min组）及对照组。EMSA、ELISA法检测HIR后KCs NK-κB激活及KCs培养上清液TNF－α含量。结果 肝缺血30min或60min再灌注后0h KCs NF-κB活性均于HIR后3h达到高峰，肝缺血时间越长，KCs NF－κB激活越明显；KCs培养上清TNF－α含量于HIR后0h增高，HIR后6h达到高峰，肝缺血时间越长，KCs培养上清TNF－α含量越高。结论 NF－κB是缺血再灌注肝脏KCs活化的关键因子。     

罗红霉素对LPS诱导的肺泡巨噬细胞NF-κB活化及对TNF-α,IL-10释放的影响

目的:探讨罗红霉素(RM)对内毒素(LPS)诱导下肺泡巨噬细胞(PAM)核因子-κB(NF-κB)活化及对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-10表达的调节作用. 方法:收集大鼠支气管肺泡灌洗液中PAM进行培养,分为正常对照组、模型组和RM治疗组. 用凝胶电泳迁移率改变分析(EMSA)法和放射免疫法分别测定各组核提取物中NF-κB活性和细胞培养上清中TNF-α,IL-10含量. 结果:模型组NF-κB活性明显高于正常对照组,用RM干预后NF-κB活性高于正常对照组(P<0.05),但比模型组低(P<0.05). LPS刺激1~4 h内TNF-α含量高于正常对照组;RM(20 mg/L) 能够抑制培养上清液中TNF-α的升高(P<0.05). NF-κB活性与TNF-α浓度有相关性(r=0.684,P<0.01). LPS刺激在观察早期IL-10高于正常对照组(P<0.05),使用RM干预后IL-10无明显变化(P>0.05). 正常对照组与治疗组TNF-α/IL-10比值在观察期间无明显上升和下降,模型组TNF-α/IL-10比值变化明显. 结论:RM可能通过PAM NF-κB活化的抑制,减少了TNF-α的释放,调节TNF-α/IL-10的比例,对LPS诱导的急性肺损伤模型有保护作用.     

核转录因子NF—κB在血管内皮细胞组织因子表达中的作用

目的：探讨核转录因子NF－κ在肿瘤坏死因子α（TNF－α）,血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）诱导血管内皮细胞组织因子（TF）表达中的作用。方法：用发色底物法测定血管内皮细胞表面TF活性。分别采用凝胶电泳迁移率改变法（EMSA）和Western 鲩迹法检测血管内皮细胞核转录因子NF－κB的DNA结合活性和含量。结果：100U／ml TNF-α,^-6mol/l Ang II作用下,内皮细胞表面TF活性明显增高。分别较对照增高1＝65倍和1．61倍,TNF－α,AngⅡ处理后细胞核内NF－κB含量明显增加,分别为正常对照组的1．77倍和1．52倍。结论：TNF－α,AngⅡ可增强内皮细胞TF活性,这可能与其促进内皮细胞核转录因子NF－κB的核转位和DNA结合活性有关,进一步证实NF－B在内皮细胞TF诱导表达中的重要作用。     

多黏菌素B抗炎作用机制的研究

目的观察多黏菌素B(PMB)和内毒素(LPS)共同处理大鼠肺泡巨噬细胞(PAM)后对核因子-κB(NF-κB)信号通路的变化。方法分离、培养大鼠PAM,分为正常对照组、LPS刺激组及PMB干预组。采用原位杂交(ISN)技术、凝胶电泳迁移率改变(EMSA)及ELISA法,检测刺激后0、15、30、60、120和240min各时相点PAM中IKK-βmRNA及IκB-α的表达、NF-κB的活性和TNF-α的含量。结果LPS刺激组IKK-βmRNA的水平在刺激后15min出现升高,30min达高峰,60min后逐渐下降;IκB-α的水平的变化趋势在各时相点与IKK-βmRNA刚好相反;NF-κB活性的峰值相出现在60min,15min出现升高,120min后逐渐下降;TNF-α的含量峰值相出现在60min,30min出现升高,120~240min后恢复至刺激前水平。PMB干预组NF-κB的活性与TNF-α的含量虽较刺激前和正常对照组升高,但均显著低于LPS刺激组(P<0.01)。IκB-α水平的最低值显著高于LPS刺激组(P<0.01);而IKK-βmRNA的峰值则显著低于LPS刺激组(P<0.01)。结论LPS能诱导PAM中的IKK-β激活、IκB-α降解和NF-κB活化,并促进TNF-α释放。而PMB则能抑制LPS诱导的IKK-β激活、IκB-α降解、NF-κB活化和TNF-α释放。     

核因子-κB在重症急性胰腺炎肝损伤中的作用研究

目的 探讨该因子－κB（nuclear factor-kappa,B,NF－κB）在重症急性胰腺炎（SAP）肝损伤发病机制中的作用。方法 38只健康雌性Wistar大鼠随机分为SAP组，PDTC（二硫代氨基甲酸吡咯烷）预处理组及正常组3组。SAP模型经胆胰管内加压注射5％牛磺胆酸钠溶液0．1ml/100g完成。PDTC预处理组在建立SAP模型前1h腹腔内按100mg/kg体重注入PDTC。建模后3、6、12h3个时间点将大鼠处死，血样检测天冬氨酸转氨酶（AST),留取肝组织苏木精－伊红染色不观察肝组织受损情况，应用SP免疫组化汉检测SAP肝组织NF－κB，用RT－PCR的方法检测肿瘤坏死因子－α（TNF－α）、是素－6（IL－6）、细胞间粘附分子－1（ICAM－1）mRNA的表达。结果 SAP肝组织苏木精－伊红染色未见明显的肝细胞坏死和肝细胞凋亡出现。PDTC预处理组与未处理组未见差别。SAP组AST明显升高，与正常组相比有显著性差异，PDTC预处理后各时间点AST均较未处理组下降。正常肝组织偶见NF－κB活化的肝细胞，在SAP肝组织可见肝细胞NF－κB活化。经PDTC预处理后肝组织NF－κB 化的阳性肝细胞数与未经PDTC处理者相比明显减少。SAP时肝组织TNF－α、IL－6、ICAM－1mRNA的表达明显增加，经PDTC预处理后相应各时间点均降低。但SAP肝组织ICKAM－1mRNA各时间点均无明显改变。结果 重症急性胰腺炎时存在肝损伤，TNF－α、IL－6mRAN表达参与肝损伤,SAP肝损伤时NF－κB活化并上调TNF－α、IL-6mRNA的表达，抑制NF－κB活化可下调这些细胞因子的表达，减轻肝脏损伤。     

人参皂甙对脂多糖诱导小鼠肺泡巨噬细胞分泌肿瘤坏死因子的作用及机制探讨

目的：研究人参皂甙Rg1和Rb1对脂多糖（LPS）诱导小鼠肺泡巨噬细胞（AM）过度分泌肿瘤坏死因子（TNF－α）的影响,并探讨人参皂甙的作用机制。方法;体外培养小鼠AM,分为对照组、LPS组、RG1 LPS组、Rg1组和Rb1 LPS组,Rb1组。分别收集培养细胞及上清液,测定上清TNF－α水平、上清LPS水平以及细胞中1－κB表达情况。结果：LPS可使AM分泌大量TNF－α（P＜0．01）,并使I－κB表达明显减少（P＜0．01）。Rg1 LPS组与LPS组相比,上清TNF－α水平显著下降（P＜0．01）,细胞内I－κB表达明显增加（P＜0．01）。Rgl LPS组上清游离LPS水平明显高于LPS组（P＜0．05）。Rb1的作用结果与Rg1相似。结论：人参皂甙Rg1和Rb1在体外能抑制AM过量分泌TNF－α,其可能作用机制为通过阻断LPS与AM膜的结合,抑制LPS诱导的细胞内I－κB的低表达,从而使TNF－α的分泌水平下降。     

己酮可可碱对内毒素致小鼠急性肺损伤的保护作用

目的探讨己酮可可碱(PTX)对内毒素所致小鼠急性肺损伤(ALI)的防治作用及可能机制。方法建立小鼠急性肺损伤模型,随机分为生理盐水(NS)对照组、PTX组、内毒素(LPS)组、PTX LPS组。实验0、1、2、4、8及12h测定肺湿重/干重比值(W/D)、肺组织匀浆中肿瘤坏死因子α(TNFα)和白细胞介素8(IL8)浓度、肺组织核因子κB(NFκB)的表达,观察肺组织病理改变。结果PTX LPS组与LPS组比较,PTX干预后可明显减轻小鼠ALI程度、降低肺组织匀浆中TNFα、IL8的含量、抑制肺组织NFκB的表达。结论PTX可能通过部分抑制NFκB活化、减少TNFα和IL8的产生,从而对内毒素诱导的急性肺损伤产生保护作用。     

N-乙酰半胱氨酸对肺微血管内皮细胞核因子κB活性影响的体外研究

目的探讨N-乙酰半胱氨酸（NAC）对人肺微血管内皮细胞（HPMEC）核岗子κB（NF—κB）结合活性和环氧合酶-2（COX-2）表达的影响机制。方法体外培养HPMEC细胞株,采用四甲基偶氮唑盐（MTT）检测NAC对HPMEC增殖活化的抑制作用,分别采用NAC（1mmol／L）处理1h,肿瘤坏死因子α（TNF-α）（100ng／mL）处理1h。NAC＋TNF-α联合处理。凝胶电泳移动抑制实验检测HPMECNF—κB的结合活性;免疫蛋白质印迹检测相应的HPMEC胞质内NF—κB抑制蛋白（IKB—α）的表达;免疫细胞化学观察HPMECNF—κB表达的核内转移;激光共聚焦检测NAC对HPMEC中COX-2表达的影响。结果NAC对HPMEC的增殖活化有明显抑制作用,NAC＋TNF-α联合处理组吸光度值明显低于TNF-α处理组,差异均有统计学意义（均P〈0．05）。TNF—α刺激后具有诱导HPMECNF—κB结合活性．且IKB-α表达明显减弱,NAC处理组IKB-α表达高于TNF—α处理组,差异有高度统计学意义（P〈0．01）。TNF—α处理1h后．HPMECNF—κB的主要表达从细胞质转移至细胞核内;NAC预处理后联合TNF—α刺激,HPMECNF—κB表达主要位于细胞质．出现核内转移极少。HPMEC经TNF-α处理后细胞内COX-2表达明显高于NAC＋TNF—α联合处理组以及正常对照组．差异均有统计学意义（均P〈0．05）;而NAC＋TNF-α联合处理组与正常对照组比较。差异无统计学意义（P〉0．05）。结论NAC可抑制HPMEC增殖活化;NAC可抑制HPMECNF—κB结合活性、减少核内转移发生和COX-2的表达。     

核因子κB活性抑制对再灌注早期供肝损伤的保护作用

目的：研究NF－κB活性抑制对再灌注早期供肝损伤的保护作用。方法：改良Kamada法建立同种大鼠原位肝脏移植模型，实验分对照组和二硫代氨基甲酸吡咯烷（PDTC组），对照组供肝于4℃乳酸林格液中保存6h,PDTC组供肝于乳酸林格冷保存液中加入0.1mol/L PDTC，于再灌注早期分析测定供肝组织中NF－κB的结合活性（EMSA法）、TNF-α和ICAM－1的mRNA转录水平（RT－PCR）以及ALT和LDH的活性变化。结果：供肝组织的NF－κB在移植后再灌注早期明显激活；再灌注1h,PDTC组的NF－κB活性较对照组显著降低，但6h后两组NF－κB活性未见明显差异。再灌注早期TNF－α和ICAM－1mRNA转录水平上调以及ALT和LDH活性升高，但PDTC组明显低于对照组（P＜0.05)。结论：供肝组织中NF－κB的活性抑制可显著降低再灌注早期供肝组织中炎症介质的转录表达，并有效改善供肝的再灌注损伤。针对NF－κB的靶向治疗可能是供肝保护的一条新途径。     

全氟化碳对脂多糖诱导肺泡上皮细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素1相关蛋白表达的影响

【摘要】 目的 探讨全氟化碳（PFC）对脂多糖（LPS）诱导人肺泡上皮A549细胞炎性反应及单免疫球蛋白白介素 1受体相关蛋白（SIGIRR）表达的影响。方法 实验分为正常细胞组、全氟化碳+脂多糖（PFC+LPS）组、全氟化碳（PFC）组及脂多糖（LPS）组。各组细胞经相应处理24 h后,用酶联免疫吸附法（ELISA）检测培养上清中的TNF α、IL 6和IL 10含量,用蛋白免疫印迹法（Western blot）检测核转录因子 κB （NF κB）和SIGIRR的表达。结果 ELISA结果显示,LPS组TNF α、IL 6水平较正常细胞组升高（P＜005）;PFC+LPS组TNF α、IL 6水平较LPS组下降（P＜005）;与正常细胞组相比,PFC组IL 10水平升高（P＜005）,PFC+LPS组IL 10水平较LPS组升高（P＜005）。Western blot 结果显示,与正常细胞组相比,LPS组核内磷酸化NF κB p65表达上调（P＜005）,PFC+LPS组核内磷酸化NF κB p65表达水平较LPS组降低（P＜005）;与正常细胞组相比,LPS组SIGIRR表达水平下调（P＜005）,PFC+LPS组SIGIRR表达水平较LPS组上调（P＜005）。PFC本身对TNF α、IL 6含量及NF κB p65表达无影响,但PFC可促进A549细胞释放IL 10及上调SIGIRR表达（P＜005）。结论 PFC可减轻A549细胞对LPS诱导的炎性反应,促进抗炎因子IL 10分泌及上调负调控分子SIGIRR表达是可能的分子机制。     

A20的泛素修饰抑制NF—κB活性

转录因子NF—κB的失控能介导肿瘤和多种炎症性疾病,包括锌指蛋白A20在内的几种蛋白质紧密的控制着它的活化。近来A20针对前炎症反应细胞因子肿瘤坏死因子（TNF）、多种Toll样受体（TLR）介导的NF—κB的活化的下调机制的研究取得进展。在TNF—α途径：A20发挥两个相对的活性,相继的TNF受体相互作用蛋白（RIP）的去泛素化和泛素化,从而靶向蛋白酶体导致RIP降解,抑制了抑制性κB激酶（IKK）的活化,从而终止了TNF诱导的NF—κB的活化;在TLR途径：A20通过其N末端卵巢肿瘤（OTU）域从肿瘤坏死因子受体相关因子6（TRAF6）去除泛素链,从而终止了TLR诱导的NF—κB的活化。     

核因子κB及其在失血性休克时对血液循环的影响

核因子κB（nuclear factor-klappa B,NF-κB）是一种具有转录激活功能的蛋白质，正常情况下，以非活化形式存在于细胞质中，当其接受特定的信号刺激后，转位进入细胞核，启动多种基因的转录，失血性休克时，可通过活性氧、内毒素（LPS）、TNF－α和IL－1β激活NF－κB，从而启动TNF－α、IL－1β、多种趋化因子、IL－8、诱生型一氧化氮合酶（iNOS）等炎性酶，细胞间粘附分子1（ICAM－1）等黏附分子和E选择素（E－sel）等多种蛋白因子的基因转录，通过这些蛋白因子及二级炎性介质的作用，影响血液循环的各个环节。     

丹红注射液对脂多糖诱导THP-1巨噬细胞促炎因子分泌的影响及机制

目的观察丹红注射液对脂多糖（LPS）诱导的THP-1巨噬细胞促炎因子分泌的影响,并探讨其机制。方法160nmol／L佛波酯孵育THP-1巨噬细胞24h后分为对照组、脂多糖组、丹红组和脂多糖＋丹红组,酶联免疫吸附法检测培养液中促炎因子的含量,Western blot检测核因子κB（NF—κB）、p65和rroll样受体4（TLR4）的蛋白表达水平。结果丹红注射液明显抑制LPS诱导的巨噬细胞肿瘤坏死因子α（TNF-α）、白细胞介素6（IL-6）和白细胞介素1β（IL-1β）释放,下调核因子NF—κB和TLR4的表达。结论丹红注射液抑制脂多糖诱导的炎症反应,可能与其抑制TLR4和NF—κB的表达有关。     

熊果酸对肝星状细胞内AP－1、NF－κB表达的影响

目的：明确NOX对血管紧张素II（AngⅡ）诱导的HSC转录因子激活蛋白－1（AP－1）和核因子－κB（ NF－κB）的调控作用及熊果酸（ UA）干预后的影响。方法将培养激活的 HSC－T6细胞株分为： AngⅡ组,给予AngⅡ（1μmol／L）刺激细胞;空白对照组：不加任何药物;各干预组分别给予UA（50μmol／L）、NOX抑制剂DPI（20μmol／L）预处理30 min,再加入AngⅡ处理不同时间。采用活性氧检测试剂盒和荧光酶标仪检测其余各组细胞内荧光强度;用电泳迁移率（ EMSA）测定细胞内AP－1、NF－κB的活性。结果 HSC－T6经药物作用30 min后,AngⅡ组DCF荧光强度比空白对照组明显升高（ P＜0.05）,分别给予UA、DPI干预后细胞内DCF荧光强度均显著低于AngⅡ组（P＜0.05）,AngⅡ＋UA组与AngⅡ＋DPI组相比较DCF荧光强度无明显差异（P＞0.05）;用AngⅡ刺激HSC－T6细胞1 h后,AngⅡ组AP－1、NF－κB的活性明显高于空白对照组（ P＜0.05）,分别给予UA、DPI干预后,细胞内AP－1、NF－κB的活性均显著低于AngⅡ组;AngⅡ＋UA组与AngⅡ＋DPI组相比较AP－1、NF－κB的活性无明显差异（ P＞0.05）。结论 NOX产生的ROS介导AngⅡ刺激HSC转录因子AP－1和NF－κB的活化,熊果酸通过抑制HSC内ROS的生成阻断AP－1、NF－κB的活化。