新生儿感染光滑假丝酵母菌随机扩增DNA多态性分析

目的探讨采用随机扩增DNA多态性(RAPD)技术对临床新生儿血培养标本中分离的光滑假丝酵母菌进行基因分型;分析新生儿感染菌株的同源性,追踪其感染源与传播途径,从而为新生儿假丝酵母菌感染防治提供依据。方法 15例新生儿血培养标本中分离的菌株均经过法国科马嘉假丝酵母菌显色鉴定培养基和法国生物梅里埃API20CAUX酵母菌鉴定试剂盒进行鉴定、纯化,其后采用RAPD多态性分析,获得菌株的RAPD指纹图,应用NTSYS软件计算出相似系(SAB),并进行聚类分析,比较菌株间的同源性。结果 15株菌株中14株被鉴定为光滑假丝酵母菌,1株为白色假丝酵母菌,且鉴定分离的2¹4号的光滑假丝酵母菌相似系数均≥0.8,表明菌株之间基因型相似度较高,具有基因同源性,而第一株菌株与其他13株之间的相似系数均<0.6,不具有基因同源性。结论本研究发现新生儿感染的13株光滑假丝酵母菌具有基因同源性,初步证实了试验分离的光滑假丝酵母菌在住院患儿间进行水平传播,提示了光滑假丝酵母菌易引起新生儿院内交叉感染,预防宜采取综合措施,切断传播途径。     

下呼吸道分离白色假丝酵母菌基因型、药敏试验和临床相关因素分析

目的了解医院近两年来下呼吸道分离白色假丝酵母菌的基因分型和不同基因型药敏试验结果与临床相关因素的关系。方法以随机扩增PCR对60例下呼吸道分离白色假丝酵母菌进行基因分型和药敏试验,分析感染患者的临床资料。结果下呼吸道分离的60株白色假丝酵母菌基因型可分为5型:A型30株(50.0%),B型13株(21.7%),C型10株(16.7%),D型5株(8.0%),E型2株(3.0%);方差分析表明,前3种基因型白色假丝酵母菌对氟康唑、5-氟胞嘧啶敏感性差异有统计学意义(P<0.05);A型白色假丝酵母菌与B型和C型对氟康唑的敏感性差异有统计学意义(P<0.05);B型对5-氟胞嘧啶的敏感性与A型和C型差异有统计学意义(P<0.05);感染C型白色假丝酵母菌的患者死亡率与A、B型比较差异有统计学意义。结论随机扩增PCR法简捷、特异性强、重复性好,可作为白色假丝酵母菌的分型研究;白色假丝酵母菌对不同的药物敏感性可能与特定基因型有一定相关性,其毒力也可能有所不同。     

侵袭性白色假丝酵母菌院内传播的分子机制研究

目的调查北京朝阳医院2000-2010年侵袭性白色假丝酵母菌感染的流行病学特点,研究侵袭性白色假丝酵母菌的遗传多样化和基因型分布,探讨其院内传播的分子机制。方法对82株侵袭性白色假丝酵母菌进行菌种收集统计;采用科玛嘉显色培养基(Chromagar)结合VITEK-2Compact YST卡进行菌种初筛鉴定;PCR扩增其CAI区微卫星序列;应用CAI区SSCP图谱和GeneScan相结合对侵袭性白色假丝酵母菌进行基因型的比较分析;药敏试验采用ATB FUNGUS 3系统和E-test对5种抗真菌药物进行MIC值测定。结果 2000-2010年朝阳医院血流感染病原菌共2320株,检出侵袭性假丝酵母菌148株,占6.4%,其中白色假丝酵母菌检出61株占41.22%,为假丝酵母菌属感染的首位;无菌体液病原菌4093株,检出侵袭性假丝酵母菌属253株,占6.2%,白色假丝酵母菌最多150株,占59.29%;临床独立来源的侵袭性白色假丝酵母菌82株,基于微卫星片段CAI区共有38种基因型;6例患者不同来源标本分离的白色假丝酵母菌基因型完全相同;侵袭性白色假丝酵母菌感染中ICU最高占52.44%,值得重视;侵袭性白色假丝酵母菌对5-氟胞嘧啶、两性霉素B、伏立康唑、泊沙康唑的敏感率均为100.00%;氟康唑为97.56%。结论白色假丝酵母菌仍然占侵袭性假丝酵母菌感染的首位,基因分型显示侵袭性白色假丝酵母菌呈多态性分布,发生侵袭的菌株基因型与定植的基因型有关。     

呼吸道白色假丝酵母菌基因分型与耐药性研究

目的 了解呼吸道白色假丝酵母菌的基因分型和不同基因型白色假丝酵母菌的药敏情况,并探讨基因分型与耐药性之间的关系.方法 采用PCR扩增白色假丝酵母菌基因组DNA的25S rDNA基因内含子区,根据扩增产物片段大小和数目分型,采用ATB FUNGUS3酵母菌药敏试剂盒对不同基因型白色假丝酵母菌进行药敏分析.结果 80株白色假丝酵母菌临床分离株分为3型:A型39株、B型30株、C型11株；A型是主要的基因型,占48.75％,B型占37.50％,C型占13.75％;3种基因型白色假丝酵母菌均未出现对两性霉素B耐药株,C型白色假丝酵母菌未出现对氟胞嘧啶耐药株,A、B、C型白色假丝酵母菌对氟康唑的耐药率分别为5.1％、6.7％、18.2％,对伊曲康唑的耐药率分别为5.1％、13.3％、27.3％,对伏立康唑的耐药率分别为2.6％、3.3％和9.1％,B型和C型白色假丝酵母菌对唑类药物的耐药率高于A型.结论 A型白色假丝酵母菌呼吸道感染基因分布中占首位,白色假丝酵母菌的基因分型对抗真菌药物的选择,控制真菌感染有重要意义.     

肺癌患者感染白色假丝酵母菌的基因分型与药物敏感性分析

目的采用PCR方法对白色假丝酵母菌进行种内分型,并探讨白色假丝酵母菌不同基因型与耐药表型的关系,为临床治疗提供经验与依据为研究目的。方法唐山市人民医院2005-2012年住院肺癌患者分离得到242株白色假丝酵母菌,根据PCR法采用特异引物扩增白色假丝酵母菌基因组DNA的25SrDNA基因的内含子区,以内含子大小及其中可转座Ⅰ型内含子片段的缺失或插入作为分型依据,对白色假丝酵母菌进行种内基因分型,并对肺癌患者感染的白色假丝酵母菌不同基因型的耐药性进行分析。结果临床分离的242株白色假丝酵母菌经PCR方法分为3型,A型166株(450bp)、B型54株(840bp)、C型22株(450、840bp);A型为最常见的基因型,B、C型白色假丝酵母菌对唑类抗真菌药物的耐药率显著高于A型菌株,对其他抗真菌药物的耐药率差异无统计学意义。结论 PCR方法用于白色假丝酵母菌种内的分型具有较高的灵敏性与特异性,不同型别的白色假丝酵母菌耐药性与特定基因型有一定相关性。     

副溶血性弧菌食源性疾病分离株的RAPD分子分型研究

目的：探讨副溶血性弧菌食源性疾病分离株的基因多态性。方法：采用随机扩增多态性分析(RAPD)对副溶血性弧菌食源性疾病分离株进行分子分型，结合SPSS软件构建以上菌株的带型关系系统树状图，对菌株进行基因多态性分析。结果：所采用引物能从副溶血性弧菌扩增出特异性的DNA条带，分型效果较好，所有46株副溶血性弧菌中大部分的RAPD结果经聚类分析可分为3个主要聚类群，较好地反应了不同血清型和不同来源菌株的亲缘关系。结论：可应用RAPD方法进行食源性疾病的流行病学调查和溯源。     

医院内侵袭性假丝酵母菌感染的流行病学趋势及变迁

目的研究北京朝阳医院2000-2010年分离的侵袭性假丝酵母菌,了解医院侵袭性假丝酵母菌感染的流行病学趋势及变迁。方法对侵袭性假丝酵母菌进行菌种收集统计;采用科玛嘉显色培养基和VITEK-2Com-pact YST卡进行菌种初筛鉴定;用26SrDNA D1/D2区SSCP图谱分析进行精准分子鉴定;采用CAI区SSCP图谱和GeneScan相结合对侵袭性白色假丝酵母菌进行基因分型;药敏试验采用ATB FUNGUS 3系统和E-test对5种抗真菌药进行MIC值测定。结果 2000-2010年共检出血流感染病原菌2320株,其中假丝酵母菌属148株占6.4%;无菌体液标本4093株,其中假丝酵母菌属253株占6.2%;侵袭性假丝酵母菌感染中ICU最高,值得重视;临床独立来源的82株白色假丝酵母菌,基于微卫星片段CAI区共有38种基因型,基因型18-26(9.76%)、16-21(8.54%)、21-21(7.32%)、11-18(4.88%)、18-18(4.88%)、11-20(4.88%)、25-33(4.88%)分布占优势;6例患者不同部位分离的白色假丝酵母菌基因型完全相同;体外药物敏感率氟康唑为93.2%、伏立康唑为94.5%、两性霉素B为100.0%、卡泊芬净为100.0%、5-氟胞嘧啶为97.3%。结论侵袭性白色假丝酵母菌仍然是主要病原菌,但非白色假丝酵母菌感染有不同程度的上升趋势,基因分型显示侵袭性白色假丝酵母菌呈多态性分布,发生侵袭的菌株基因型与定植的基因型有关。     

阴沟肠杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立阴沟肠杆菌(ECL)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱.方法以优化的随机引物和反应体系对临床分离的159株ECL进行RAPD法基因分型,并按DNA条带数及片段大小绘制指纹图谱.结果 159株临床分离ECL共得121种RAPD指纹图谱.结论 RAPD技术可将临床分离ECL分型121种.     

新生儿科分离白假丝酵母菌多位点序列分型研究

目的分析白假丝酵母菌多位点序列分型(MLST)与标本来源、药物敏感性之间的关系,探讨菌株间的亲缘关系及其分子流行病学特征。方法收集2015年4—5月某院新生儿科病房分离的白假丝酵母菌,采用试剂盒对菌株进行体外药物敏感性测试,并采用MLST方法对菌株进行分型,分析菌株间的同源性及分子流行病学特征。结果共分离15株白假丝酵母菌,来自4例患儿和1名医务人员,15株白假丝酵母菌经MLST获得3个序列型(ST),其中13株为ST1997,另外2株分别为ST1359和ST1933。经eBURST软件对ST分型进行聚类分析,ST1997菌株属于Group 13,ST1359菌株属于Group 1,ST1933菌株属于Group 20。同一患者外周血和外周静脉导管分离的白假丝酵母菌属于同一克隆株。结论新生儿科病房存在白假丝酵母菌血流感染的暴发,应积极制定相应的预防控制措施,加强对新生儿科病房的医院感染管理。     

重庆市老年中心铜绿假单胞菌流行病学分型研究

目的对重庆市老年中心引起医院感染的铜绿假单胞菌(PAE)进行流行病学分型研究,了解其流行与耐药,以便更好地控制其引起的医院感染.方法采用随机扩增多态性DNA(RAPD)基因分型方法对重庆市老年中心分离的24株PAE进行RAPD基因分型.结果24株PAE共得RAPD 14型,分型率100%;同一病区不同患者分离出的PAE未检出相同基因型的PAE,3个不同病区间未检出相同RAPD型别的PAE;7例感染个体连续收集的PAE有5例RAPD指纹图谱完全一致,2例出现跳跃性指纹图谱,且与其他分型指纹图谱不相同.结论RAPD能满足对PAE进行分子流行病学分型;通过分型可判断内原性、外源性或突变PAE引起的感染.     

1015株念珠菌感染的病原菌分类和药敏分析

目的了解医院念珠菌感染的病原菌分类及对氟康唑的敏感性. 方法采用微量稀释法和改良纸片法测定临床标本分离的各类念珠菌对氟康唑的敏感性. 结果共分离出1 015株念珠菌,其中白色念珠菌占49.4%,热带念珠菌占19.1%,克柔念珠菌占10.1%,光滑念珠菌占10.5%,其他念珠菌占10.9%;对氟康唑的耐药率白色念珠菌为1.6%、热带念珠菌为0%、克柔念珠菌为25%、光滑念珠菌为40%、其他念珠菌为8.4%. 结论念珠菌在临床标本中的分布已发生变化,白色念珠菌比例下降但还是最常见念珠菌感染的病原菌,非白色念珠菌比例有所上升,氟康唑对白色念珠菌、热带念珠菌有极好的抗菌活性,而对克柔念珠菌、光滑念珠菌的抗菌活性较差,临床经验用药应依据药敏结果合理选用.     

Serotyping of Cryptococcus neoformans strains isolated from clinical specimens in Thailand and their susceptibility to various antifungal agents

One hundred and thirty-nine strains of Cryptococcus neoformans were isolated in Thailand from clinical specimens including 97 AIDS patients: 67 from Northern, 48 from Central, 17 from Northeastern and 7 from Southern regional hospitals. Six out of the 139 strains were serotype B and the remaining 133 were A. There was no correlation between serotypes and regional distribution. To our knowledge, this is the first report of serotyping studies on C. neoformans in Thailand. Studies on random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis showed that this method is useful for the differentiation of C. neoformans var. gattii (serotypes B and C) and C. neoformans var. neoformans (serotypes A and D). They also indicated that Thai isolates of C. neoformans var. gattii (serotype B) were a homogeneous group on the basis of their genotypes. Antifungal susceptibility tests using 5 antifungal agents including amphotericin B, fluconazole, flucytosine, itraconazole and micronazole against 50 selected strains of C. neoformans showed that they were sensitive to all of the antifungal agents tested except for one strain that was resistant to flucytosine.     

Aspergillus ustus infections among transplant recipients

Aspergillus ustus is a mold that rarely infects humans; only 15 systemic cases have been reported. We report the first outbreak of invasive infection caused by A. ustus among hematopoietic stem cell transplant (HSCT) recipients. Six patients with infections were identified; 3 infections each occurred in both 2001 and 2003. Molecular typing by using randomly amplified polymorphic DNA (RAPD) and antifungal drug susceptibility testing were performed on clinical and environmental isolates recovered from our hospital from 1999 to 2003. The highest overall attack rate in HSCT patients was 1.6%. The overall death rate was 50%, and death occurred within 8 days after diagnostic culture collection. Clinical isolates exhibited decreased susceptibility to antifungal drugs, especially azoles. RAPD and phylogenetic analysis showed genetic similarity between isolates from different patients. Based on the clustering of cases in space and time and molecular data, common-source acquisition of this unusual drug-resistant species is possible.     

深部真菌感染的菌群分布及耐药性

目的了解医院感染患者深部真菌感染的菌群分布及4种抗真菌药物的体外抗菌活性,为临床合理应用抗真菌药物提供帮助。方法常规培养分离真菌,用VITEK全自动微生物分析仪鉴定到种,药敏试验采用Rosco抗真菌药敏纸片扩散法及NCCLS M27-A肉汤稀释法。结果医院感染患者分离的9种156株深部真菌,以白色假丝酵母菌和热带假丝酵母菌为主,分别占57.69%、31.41%;临床感染标本的分离率以呼吸内科、心血管外科、神经内科为主,分别占26.28%、12.18%、9.62%;感染标本来源以呼吸道和泌尿道为主,占71.15%和16.67%;Rosco纸片扩散法对氟康唑、两性霉素B、伊曲康唑、酮康唑的耐药率分别为:23.08%、2.56%、12.18%、17.31%,MIC90分别为64.0、2.0、8.0、16.0mg/L。结论医院感染患者的深部真菌菌株以白色假丝酵母菌和热带假丝酵母菌为主,念珠菌属对常用抗真菌药物的耐药性有一定的差异,两性霉素B的抗菌活性最强,氟康唑的耐药性越来越高,临床应根据药敏试验结果合理应用抗真菌药物。     

念珠菌属的分布及其对五种抗真菌药物的耐药性分析

目的检测念珠菌对5种抗真菌药物体外敏感性，了解念珠菌耐药性变化趋势。方法用沙氏培养基进行真菌分离，采用念珠菌显色培养基作菌种鉴定，用ATBFUNGUS3药敏试剂盒测定抗真菌药物对临床分离的念珠菌最低抑菌浓度（MIC）。结果白色念珠菌的耐药率为最低，它除对伊曲康唑耐药率为10．8％外，其余均低于5．4％；而以克柔念珠菌的耐药率最高，它对氟康唑和伊曲康唑的耐药率大于33.3％。结论不同念珠菌对常用抗真菌药物耐药性存在差异，白色念珠菌对抗真菌药物的耐药性要低于非白色念珠菌。因此真菌的培养鉴定和药敏试验对临床合理选择抗真菌药物十分重要。     

深部真菌感染及耐药性分析

目的:了解某医院真菌感染的现状,并对其耐药性进行分析,为临床合理使用抗真菌药物提供依据。方法:某医院门诊及住院患者的各类真菌培养2137份标本进行药敏试验。结果:共分离出真菌162株,162株病原真菌以内科系统为主共114株占70.37%;检出深部真菌最多的部位是呼吸道,占真菌标本的72.02%;真菌以白色假丝酵母菌、热带假丝酵母菌和克柔假丝酵母菌为主,分别占60.49%、19.13%、13.58%;药敏结果:5-氟胞嘧啶、两性霉素B 94%以上敏感,白色假丝酵母菌对氟康唑的耐药率很高,均在69%以上,5种常见抗真菌药物对其他病原真菌的敏感率均在90%以上。结论:加强临床病原性真菌分离株,对抗真菌药物的耐药性检测,然后根据药敏试验结果科学合理选用抗真菌药物十分重要。     

弗氏柠檬酸杆菌随机扩增多态性DNA法基因分型

目的建立弗氏柠檬酸杆菌(Citrobacter freundii)随机扩增多态性DNA(RAPD)法基因分型图谱. 方法以优化的反应体系及单一随机引物L8,对临床分离的116株C.freundii进行RAPD分析,并按指纹图上DNA条带数及片段大小绘制基因分型图谱. 结果 116株临床分离C.freundii共得78种RAPD型. 结论 RAPD法可将C.freundii分型78种.     

702株假丝酵母菌属感染的菌种鉴定及药敏结果分析

目的了解深部真菌感染的病原学分类及药敏试验结果，以探讨预防与治疗措施。方法使用博赛科玛嘉CHROMagar作为假丝酵母菌属分离培养基，DADE WalkAway-40鉴定仪、RY-ID真菌鉴定板鉴定假丝酵母菌属菌种，药敏试验采用ROSCO纸片扩散法。结果共分离出702株真菌，其中白色假丝酵母菌占70．0％，光滑假丝酵母菌占20．8％，热带假丝酵母菌占6．3％；各种真菌对6种抗真菌药物均出现不同程度的耐药。结论真菌感染仍以白色假丝酵母菌为主，但在非白色假丝酵母菌中光滑假丝酵母菌比例有所上升；两性霉素B、氟康唑、伊曲康唑和制霉菌素敏感率高，而5-氟胞嘧啶及酮康唑的耐药率相对高些，临床经验用药应根据药敏结果合理选用。     

产头孢菌素酶大肠埃希菌的随机扩增多态性DNA分型研究

目的对产头孢菌素酶大肠埃希菌的耐药现状进行分析研究,对耐药株进行基因分型流行病学研究。方法对临床分离的157株大肠埃希菌进行头孢菌素酶（AmpC）检测,采用K—B琼脂扩散法,按照美国CLSI规定判断结果,判断细菌的耐药性;对产AmpC酶菌株以随机扩增多态性DNA分型法（RAPD）进行基因分型;接合试验证实酶基因有无可转移性。结果产AmpC酶大肠埃希菌占8．9％（14／157）;14株产AmpC酶菌株经过RAPD扩增分为13型。结论本院已经发现产质粒介导AmpC酶菌株,其耐药性能够水平传播。药敏检测结果显示对大多数新型广谱β-内酰胺类抗生素耐药,对亚胺培南敏感。RAPD证实他们大多来自不同的克隆株。RAPD是从分子水平对耐药细菌进行流行病学研究的一种经济、快速、可靠的基因分型方法。     

重症监护室MRSA耐药性及RAPD分析

目的:调查重症监护室耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的耐药及分子流行病学情况,为控制感染提供科学依据。方法:ICU分离的金黄色葡萄球菌采用mecA基因检测法确定MRSA,对筛选出的MRSA采用纸片法检测其耐药性,用随机扩增多态性DNA(RAPD)进行分子流行病学分析。结果:MRSA的分离率为58.5%,对多种抗生素均耐药,没有发现耐万古霉素和替考拉宁的菌株。24株MRSA经RAPD分型,均获得稳定的条带,可分为四型,以Ⅱ型为主,共检出15株。结论:ICU分离MRSA菌株具有多重耐药性,应根据药敏试验结果合理选用抗生素进行治疗;通过RAPD分型研究,可了解MRSA的基因型流行特征,为控制感染提供分子流行病学依据。