蛋白酶激活受体2激动剂对肥大细胞释放组胺的影响

目的 研究PAR-2激动剂(tc-LIGRLO-NH2与SLIGKV-NH2)和胰蛋白酶对结肠肥大细胞释放组胺的影响。方法 结肠组织经酶消化后,细胞成份用全HBSS重新悬浮。激发过程在LP4试管中、37℃条件下完成。组胺水平用以玻璃纤维为基础的荧光方法测定。结果PAR-2激动剂tc-LIGRLO-NH2和SLIGKV-NH2均可诱导人结肠肥大细胞剂量依赖性组胺释放。浓度为100μmol／mL时,tc-LIGRLO-NH2和SLIGKV-NH2可分别引起比基础分泌量多出2．5倍和2倍的组胺释放,而反PAR-2激动剂tc-OLRGIL-NH2和VKGILS-NH2在实验浓度高至300μmol／mL时仍对组胺释放无影响。胰蛋白酶在1．0～100μg/mL间可引起剂量相关性组胺释放,胰蛋白酶抑制剂可抑制之。PAR-2激动剂tc-LIGRLO-NH2的作用从加样后1min开始,3min后完成。细胞经过百日咳毒素和代谢抑制剂预先处理后,几乎失去了对tc-LIGRLO-NH2、SLIGKV-NH2和胰蛋白酶刺激的反应性。结论 PAR-2激动剂和胰蛋白酶是高效的组胺释放刺激剂,其在人结肠炎症性疾病中起一定的作用。     

姜黄素对肝癌HepG2细胞增殖和侵袭转移的影响及相关机制

目的探讨姜黄素对人肝癌HepG2细胞增殖和侵袭转移的影响及其相关机制。方法应用10、20、40、60μmol/L姜黄素处理肝癌细胞株HepG2;采用MTT检测不同浓度的姜黄素对HepG2细胞增殖的影响;运用Transwell侵袭转移实验测定不同浓度的姜黄素对HepG2细胞体外侵袭能力的影响。采用Western blot方法检测经不同浓度姜黄素处理后,HepG2细胞内细胞周期素D1(CyclinD1)、基质金属蛋白酶2(matrix metalloproteinase2, MMP-2)和E-钙黏素(E-cadherin)蛋白表达。结果姜黄素能明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和体外侵袭能力,且具有显著剂量依赖性。肝癌HepG2细胞中CyclinD1、MMP-2蛋白表达随着姜黄素的浓度的增多而明显的降低,而E-cadherin蛋白表达则随着姜黄素剂量的增多而显著升高。结论姜黄素明显抑制肝癌HepG2细胞的增殖和侵袭转移能力,与下调CyclinD1、MMP-2和上调E-cadherin的蛋白表达相关。     

苦参凝胶对银屑病大鼠皮肤损伤组织病理学及IL-6、PAR-2水平的影响

目的 研究苦参凝胶对银屑病大鼠皮肤损伤组织病理学及IL-6、蛋白酶活化受体-2(monoclonal antibody to protease activated receptor 2,PAR-2)水平的影响。方法 将60只Wistar大鼠分为对照组、模型组、维A酸组、苦参凝胶高、中、低剂量组，每组10只，观察各组大鼠一般情况、皮肤损伤病理改变、炎症细胞浸润评分、Baker评分及血清和皮肤组织中IL-6、PAR-2水平。结果 维A酸组和苦参凝胶各剂量组大鼠背部皮肤鳞屑、红斑较模型组有所减轻，苦参凝胶组大鼠症状减轻程度优于维A酸组。维A酸组和苦参凝胶各剂量组大鼠背部皮肤病理改变较模型组有不同程度的改善，苦参凝胶中、高剂量组改善程度优于维A酸组。炎症细胞浸润评分、Baker评分及IL-6、PAR-2水平测试，模型组较对照组明显升高（P<0.05），各治疗组较模型组明显降低（P<0.05），苦参凝胶中、高剂量组较维A酸组明显降低（P<0.05）。结论 苦参凝胶对银屑病大鼠皮肤损伤组织病理学表现及IL-6、PAR-2水平具有改善作用。     

PAR-2在人胰腺肿瘤细胞中的表达及其相关机制的研究

目的:通过对蛋白酶激活受体-2(PAR-2)在人胰腺癌细胞及癌旁组织中表达态势的研究,以期明确PAR-2在胰腺癌中表达特点,并探索其相关机制。方法:收集胰腺癌标本,采用免疫组织化学(SP法)检测胰腺癌PAR-2基因的表达;培养胰腺癌细胞,采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测胰腺癌PAR-2基因的表达。结果:胰腺癌组PAR-2 mR-NA的表达高于对照组(P<0.01)。PAR-2在胰腺癌中的表达与患者年龄、性别无关(P>0.05),但癌细胞远处转移者显著高于无转移者(P<0.01)。结论:胰腺癌的发生与发展与PAR-2正相关。PAR-2在胰腺癌中的表达与患者年龄、性别无关;但与淋巴结转移正相关。     

miR-181b对肝癌HepG2细胞增殖以及Bcl-2和SP1蛋白表达的影响

目的: 研究miR-181b对人肝癌G2细胞(HepG2)中B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和转录因子SP1蛋白及mRNA表达的调节作用,探讨miR-181b对HepG2细胞增殖的影响。方法: 用人工合成的miR-181b相应的双链互补DNA片段,插入miRNASelect^TM pEGP-miR载体中,经测序鉴定后克隆microRNA的高表达质粒;用脂质体将miR-181b高表达质粒转染进HepG2细胞,经嘌呤霉素筛选获得阳性克隆。用RT-PCR技术和Western blotting方法分别检测该细胞系中Bcl-2和SP1的mRNA和蛋白表达情况。用MTT法检测HepG2细胞增殖的变化情况。结果: Western blotting结果显示miR-181b能够减少Bcl-2和SP1蛋白质的表达,RT-PCR分析显示Bcl-2和SP1 mRNA表达减少。MTT显示转染后细胞的生长速率比未转染的细胞明显减慢。 结论: miR-181b抑制HepG2肝癌细胞增殖, 提示可能与其下调Bcl-2和SP1 的表达有关。     

青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及联合化疗药物的抗肝癌效应

目的: 研究青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的作用,并检测其是否影响HepG2细胞对化疗药物的敏感性。方法: 采用CCK-8法观察不同浓度青蒿琥酯对HepG2细胞生长增殖的影响;克隆形成实验检测青蒿琥酯对HepG2细胞克隆形成的影响;Hoechst 33258染色观察青蒿琥酯作用HepG2细胞后细胞形态的变化;PI单染流式细胞术检测青蒿琥酯对HepG2细胞周期以及亚二倍体率的影响;Annexin V-PI双染测定青蒿琥酯对HepG2细胞凋亡的影响;CCK-8法检测青蒿琥酯对HepG2细胞化疗药物敏感性的影响。结果: (1)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,能有效抑制其增殖,随着浓度的升高,增殖抑制率越高,IC₅₀值为19.2 μmol/L。(2)青蒿琥酯作用HepG2细胞7 d后,能有效抑制HepG2细胞形成的克隆数。(3)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,Hoechst 33258染色可见实验组细胞胞核固缩、边聚和裂解、凋亡小体形成等凋亡形态学变化。(4)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,PI单染流式细胞术检测细胞周期发现实验组细胞明显阻滞于G₂期。(5)青蒿琥酯作用于HepG2细胞48 h后,PI单染实验检测实验组出现明显的亚二倍体凋亡峰;Annexin V-PI 双染实验检测实验组细胞出现明显的早期凋亡细胞群。(6)青蒿琥酯分别联合化疗药物5-氟尿嘧啶、卡铂和表柔比星作用于HepG2细胞48 h后,能明显增强化疗药物对肿瘤细胞的抑制作用,增敏倍数分别为3.33、2.02和1.71。结论: (1)青蒿琥酯对人肝癌HepG2细胞有增殖抑制作用,并诱导其凋亡。(2)青蒿琥酯能提高人肝癌HepG2细胞对5-氟尿嘧啶、卡铂和表柔比星的敏感性。     

类胰蛋白酶通过激活PAR-2促进肠黏膜上皮IEC-6细胞损伤

目的:观察类胰蛋白酶(tryptase)对小肠黏膜上皮细胞IEC-6的作用及机制。方法:体外培养IEC-6细胞,随机分为对照(control)组、tryptase处理组、蛋白酶激活受体2(PAR-2)抑制剂(FSLLRY-NH2,FS)处理组以及tryptase+FS处理组。采用MTT法检测细胞生存率;测定分泌的乳酸脱氢酶(LDH)活性;Western blotting测定PAR-2和cleaved-caspase 3的表达。结果:与对照组比,100μg/L和1 000μg/L类胰蛋白酶导致细胞生存率明显降低(P0.05)。与对照组相比,10μg/L到1 000μg/L类胰蛋白酶导致LDH的活性明显增加(P0.05)。与对照组相比,100μg/L和1 000μg/L类胰蛋白酶导致细胞的PAR-2及cleaved-caspase 3表达明显升高(P0.05)。与1 000μg/L tryptase处理组比较,FS能够明显增加细胞生存率、降低LDH活性及cleaved-caspase 3表达(P0.05)。结论:类胰蛋白酶通过激活PAR-2促进IEC-6细胞损伤,且这种损伤呈浓度依赖性。     

大麻受体激动剂WIN-55,212-2对肝癌细胞HepG2增殖和凋亡的影响

目的:探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖和凋亡的作用,并对其机制进行初步探讨。方法:将细胞分成对照组、不同剂量大麻受体激动剂WIN-55,212-2(WIN)处理组。MTT法测定WIN对HepG2细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法检测HepG2细胞凋亡DNA片段,流式细胞术检测分析各组细胞凋亡率变化,Western blot分析各组细胞caspase-3和c-myc的蛋白表达,分光光度法检测caspase-3、8、9的活性。结果:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长和c-myc的蛋白表达,诱导肝癌细胞凋亡,上述效应具有剂量依赖性。而且WIN可能通过诱导细胞caspase-3的蛋白表达和激活caspase-3、8、9活性进而诱导肝癌细胞凋亡。结论:大麻受体激动剂WIN能抑制肝癌细胞生长,诱导肝癌细胞凋亡,并与caspases和c-myc的蛋白表达相关。     

扶正解毒通络方对人肝癌HepG2 细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制研究

目的:探讨扶正解毒通络方对人肝癌HepG2 细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:MTT 法观察细胞增殖能 力;RT鄄PCR 检测细胞内Bax 和Bcl鄄2 mRNA 水平;免疫印迹(Western blot)检测细胞中Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、SIRT3、P53 及Fas 蛋白水平。结果:扶正解毒通络方能明显诱导减少HepG2 细胞内Bcl-2 基因转录,增加Bax 基因转录;扶正解毒通络方 能明显诱导减少HepG2 胞内Bcl-2 蛋白表达,增加Bax、活化的caspase-3、SIRT3、P53 及Fas 蛋白表达。结论:与正常对照组比 较,正常血清组人肝癌细胞HepG2 细胞内Bax、Bcl-2、活化的caspase-3、基因及蛋白表达水平无明显改变;与正常血清组比较, 扶正解毒通络方低、中和高剂量含药血清和阳性对照组HepG2 细胞内Bcl鄄2 基因转录减少,蛋白表达减少;Bax 基因转录增 加,蛋白表达增加,活化的caspase鄄3 蛋白表达增加。     

大鼠脑缺血再灌注后脑组织PAR-1表达与MDA含量的相关性研究

目的：观察脑缺血再灌注（cerebral ischemia reperfusion,CIR）后脑组织中PAR-1的表达与MDA含量变化之间的关系。方法：40只SD大鼠随机分缺血再灌注（CIR）后3h、6h、12h、1d、2d、3d、7d及假手术组8个组每组5只大鼠。于脑缺血2h后再灌注相应时间断头取脑,免疫组化法和脑组织匀浆法观察蛋白酶激活受体-1（protease—activated receptor-1,PAR-1）和丙二醛（malondialdehyde,MDA）变化情况。结果：随着CIR时间延长,PAR-1表达和MDA含量增多,呈正相关关系（r=0．844,P〈0．05）。结论：CIR后PAR-1表达增多可加重脑损伤。     

靶向泛素连接酶SIAH2的shRNA对人肝癌细胞株HepG2细胞周期和凋亡的影响

 目的：探讨shRNA介导的泛素连接酶SIAH2(seven in absentia homolog 2)基因表达抑制对人肝癌细胞株HepG2细胞周期和凋亡的影响。方法：用已构建的pGenesil-SIAH2重组质粒转染HepG2细胞,荧光显微镜下观察转染效率。采用RT-PCR和Western blotting 技术检测重组质粒对SIAH2 mRNA和蛋白表达的影响,MTS比色法测定重组质粒转染对细胞体外增殖能力的影响,流式细胞术检测重组质粒转染后细胞周期和凋亡的变化。结果：与对照组相比,pGenesil-SIAH2能显著抑制SIAH2 mRNA和蛋白的表达水平;pGenesil-SIAH2转染组细胞增殖速度明显减慢;pGenesil-SIAH2组细胞明显阻滞于G1期,细胞凋亡率明显升高。结论: pGenesil-SIAH2能有效抑制HepG2增殖,使细胞周期阻滞在G1期,并诱导其早期凋亡。上述研究为以SIAH2为靶点的肝癌基因治疗提供实验依据。     

糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B对人肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其分子机制

 目的：研究糖蛋白非转移性黑色素瘤蛋白B（glycoprotein nonmetastatic melanoma protein B,GPNMB）对肝癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响及其分子机制。方法：以人HepG2细胞为研究对象,构建GPNMB的小干扰RNA（small interfering RNA,siRNA）以及过表达载体,转染入细胞后分别采用MTT法、流式细胞术和Transwell小室法观察其对HepG2细胞增殖、凋亡及侵袭能力的影响。结果：增殖实验结果表明GPNMB可促进HepG2细胞的增殖;流式细胞术检测发现GPNMB对HepG2细胞凋亡几乎无影响;细胞侵袭结果表明GPNMB可促进HepG2细胞的侵袭;当整合素β1亚基基因被siRNA沉默后,GPNMB对HepG2细胞增殖和侵袭的促进作用均受到明显抑制。结论: GPNMB可能通过与整合素β1亚基相互作用促进肝癌细胞的增殖和侵袭能力,提示GPNMB可以作为治疗肝癌的潜在靶点。     

Effects of model organophosphorous pesticides on DNA damage and proliferation of HepG2 cells

Organophosphorous compounds (OPs) are commonly used pesticides. The primary mechanism of OP toxicity is the inhibition of acetylcholine esterase in the nervous system leading to a variety of acute and chronic effects. Recent studies have revealed several other targets of OPs that disturb noncholinergic biological systems. We investigated whether low concentrations of model OPs-methyl parathion (PT), methyl paraoxon (PO), and dimefox (DF)-induce DNA damage and/or affect cell proliferation in human hepatoma HepG2 cells. Genotoxicity of OPs was evaluated using the comet assay. The effect on cell proliferation was tested using the MTT assay and proliferation marker Ki-67 immunocytochemistry. The effects of OPs on mRNA expression of the DNA damage responsivegenes p53, p21, GADD45alpha, and MDM2 were determined using qRT-PCR. PT induced DNA damage at lower concentrations (1 microg/mL) than PO (100 microg/mL), whereas DF did not induce DNA damage. PT and PO caused a reduction of cell proliferation at their highest concentrations (100 microg/mL), while DF increased cell proliferation at all concentrations used (0.01-100 microg/mL). PT and PO upregulated expression of DNA damage responsive genes, while DF upregulated expression of p53, downregulated expression of p21, and had no effect on the expression of MDM2 and GADD45alpha. We conclude that PT and PO are genotoxic, while DF shows mitogenic activity. An important finding of this study is that PT had higher genotoxic potential than PO, which warrants for further investigations to correctly evaluate the hazards of exposure to these chemicals.     

微重力对干细胞增殖分化影响的研究进展

微重力环境会影响干细胞的生长、增殖和分化。既往的部分研究表明,微重力环境下培养的间充质干细胞的生长速度较正常重力条件下培养更快,其原因可能是细胞团体积的增大。但是有研究指出微重力能够通过影响细胞周期抑制间充质干细胞增殖。在分化方面,微重力能够抑制间充质干细胞的成骨分化,促进其成脂肪分化,但是对其成软骨分化影响仍存争议。有研究者对微重力培养的间充质干细胞进行基因测序提示其成骨分化相关基因表达降低,同时伴有成脂肪分化的基因表达增高。微重力可能通过整合素/丝裂原活化蛋白激酶和PPAR-这两条信号通路抑制干细胞成骨分化作用,而微重力如何影响成软骨分化以及成脂分化的机制仍缺乏相关研究。同时,微重力能够有效地维持间充质干细胞的多能性和自我更新能力。微重力对于间充质干细胞的影响为组织工程的进一步发展提供了探索依据。     

CRNDE过表达促进人肝癌细胞系HepG2增殖和迁移

目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)结直肠差异性表达基因(CRNDE)对HepG2细胞增殖和迁移能力的影响及作用机制。方法构建CRNDE过表达质粒,进行慢病毒包装后感染HepG2细胞。实验分别设置阴性对照组(LV5/NC)和CRNDE过表达组(LV5/CRNDE)。应用2.5μg/mL嘌呤霉素干预4~5周,筛选出CRNDE过表达HepG2细胞系;CCK8和细胞划痕实验检测细胞的增殖及迁移能力变化;real-time PCR和Western blot检测两组细胞E-cadherin、N-cadherin、Bax和Bcl-2 mRNA及蛋白表达变化。结果与LV5/NC组相比,LV5/CRNDE组CRNDE表达显著升高(P<0.01),且LV5/CRNDE组细胞的增殖和迁移能力均显著提高(P<0.01);同时,LV5/CRNDE组细胞E-cadherin和Bax表达均明显降低(P<0.01),而N-cadherin和Bcl-2表达则明显升高(P<0.01)。结论CRNDE可通过促进N-cadherin和Bcl-2表达,抑制E-cadherin和Bax表达,进而增强HepG2细胞的增殖和迁移能力。     

白藜芦醇对视网膜色素上皮细胞增殖的影响

 目的:探讨白藜芦醇（resveratrol,Res）对视网膜色素上皮细胞增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法:用0、50、100、150、200和300 μmol/L Res作用于ARPE-19细胞24、48 和72 h后,CCK-8法检测Res对ARPE-19细胞增殖的影响,0、100、150和200 μmol/L Res作用ARPE-19细胞48 h,PI单染流式细胞术检测细胞周期,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡,免疫荧光化学法检测PCNA蛋白表达,实时荧光定量PCR（real-time PCR）法检测PCNA、P21和P27的mRNA表达水平。结果:CCK-8 结果显示,Res抑制ARPE-19细胞增殖,呈时间和剂量依赖性;流式细胞术显示,Res使S期细胞百分比显著上升且各组凋亡率没有区别;免疫荧光显示, Res抑制PCNA蛋白表达,荧光减弱;real-time PCR显示, Res浓度依赖性地抑制PCNA的mRNA表达,而诱导表达P21和P27的mRNA。结论: Res能抑制ARPE-19细胞的增殖,使细胞阻滞在S期,其机制可能与白藜芦醇诱导P21与P27的mRNA表达、抑制PCNA的mRNA表达有关。     

丹参酮IIA对低氧条件下人肝癌HepG2细胞增殖、凋亡的影响及与HIF-1α、VEGF和野生型P53蛋白表达的关系

 目的:探讨低氧条件下丹参酮IIA（Tan IIA）对人肝癌HepG2细胞增殖和凋亡的影响及其分子机制。方法:用氯化钴（CoCl2）创建低氧模型,实验分为常氧对照组、低氧对照组和低氧+Tan IIA处理组。不同浓度的Tan IIA 分别作用于低氧下人肝癌HepG2细胞24 h、48 h和72 h,采用MTT法测定Tan IIA 对低氧下HepG2细胞增殖的抑制作用。不同浓度的Tan IIA 分别作用于低氧条件下HepG2细胞24 h和48 h后,Hoechst 33258染色法检测细胞核的形态学变化并计算凋亡率。不同浓度的Tan IIA 作用于低氧条件下人肝癌HepG2细胞48 h后,Western blotting检测低氧诱导因子1α (HIF-1α)、血管内皮生长因子（VEGF）和野生型P53的蛋白表达情况。结果:低氧条件下Tan IIA以时间和剂量依赖方式抑制HepG2细胞的生长和增殖。Tan IIA 作用于低氧下的HepG2细胞后,可见典型的凋亡细胞形态学特征,细胞凋亡率呈时间、剂量依赖性的增加。Western blotting免疫印迹法显示常氧对照组的HIF-1α和VEGF表达较低,而低氧对照组的HIF-1α、VEGF蛋白表达较常氧组升高,低氧下随着Tan IIA 浓度的升高,HIF-1α和VEGF蛋白的表达明显降低,野生型P53蛋白的表达随着Tan IIA 浓度的升高而升高。结论: 低氧条件下,Tan IIA能抑制肝癌HepG2细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与抑制HIF-1α和VEGF蛋白表达,上调P53蛋白表达有关。     

SLeX对肝癌HepG2细胞迁移和侵袭的影响

目的:探讨唾液酸化路易斯寡糖X(sialyl Lewis X,SLeX)在肝癌HepG2细胞中的表达及其对HepG2细胞迁移能力和侵袭能力的影响。方法:实时荧光定量PCR和Western blot法检测α1,3-岩藻糖基转移酶Ⅶ(α1,3-fucosyltransferase Ⅶ,FUT7)在HepG2细胞和L-02细胞中的表达,Western blot及免疫细胞化学染色检测SLeX在HepG2细胞和L-02细胞中表达,应用Transwell小室检测SLeX单克隆抗体封闭后HepG2细胞侵袭和迁移能力的改变。结果:FUT7和SLeX在HepG2细胞中表达,而在L-02细胞中无表达;0.05、0.5和5 mg/L的SLeX单克隆抗体封闭后,HepG2细胞的迁移率逐渐下降,与对照组相比差异显著(P0.05),侵袭穿膜细胞数明显少于对照组(P0.05);SLeX单克隆抗体封闭组间两两比较迁移率与侵袭细胞数的差异均有统计学意义(P0.05)。结论:SLeX在肝癌HepG2细胞中高表达,与HepG2细胞迁移能力和侵袭能力密切相关。