多聚甲醛固定对流式细胞术检测人外周血淋巴细胞亚群的影响

摘要：目的?考察多聚甲醛(PFA)浓度和固定时间对流式细胞术检测人外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比和平均荧光强度的影响。方法?以健康人外周血为研究对象,将六色荧光抗体标记后溶血处理的细胞分别用PBS、1% PFA(10 g/L)和4% PFA(40 g/L)进行重悬或固定,用流式细胞仪在固定0、4、8、12、24、48和72 h后检测CD19-CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、CD3-CD19+B、CD3-CD56+NK细胞占淋巴细胞百分比,及CD45、CD3、CD4、CD8、CD19、CD56的平均荧光强度。结果?与PBS对照组相比,72 h内,PFA浓度及固定时间对外周血T、B、NK淋巴细胞亚群百分比均没有影响(P均>0.05);固定8 h内,PBS对各淋巴细胞亚群平均荧光强度均无影响,1% PFA组CD4平均荧光强度下降,4% PFA组CD45、CD3、CD4、CD8平均荧光强度均下降;固定24 h后,各淋巴细胞亚群平均荧光强度均下降,同时4% PFA固定后平均荧光强度均低于1% PFA(P<0.05)。结论?使用流式细胞术检测人外周血淋巴细胞亚群,细胞染色后若8 h内检测用PBS进行细胞重悬检测效果最好,PFA固定不应超过12 h,1% PFA固定效果优于4% PFA。     

标本保存时间及温度对流式细胞仪检测非健康人外周血淋巴细胞亚群影响研究

目的评价样本保存时间及温度对流式细胞仪检测非健康人外周血淋巴细胞亚群的影响。方法第1组,随机选取患者27例,分别在采血后6h内(A组)、在4℃保存72h(B组)和120h(C组)后进行检测。第2组,随机选取患者18例,分别在采血后6h内检测(D组);在采血后6h内预处理,4℃保存24h后检测(E组);在室温25℃保存36h后预处理,随后检测(F组)。结果第1组,与A组相比,B组和C组的CD3+细胞、CD3+CD4+细胞明显降低,而CD19+细胞及CD16+CD56+细胞明显升高,差异均有统计学意义(P0.05);B组的CD3+CD8+细胞明显升高(P0.05)。第2组,D组、E组和F组之间结果比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论在标本采集后36h内对非健康人的样本进行淋巴细胞亚群检测,结果稳定。     

流式细胞术分析实体瘤T-淋巴细胞亚群

目的为了研究良性和恶性肿瘤T-淋巴细胞亚群变化关系及其对诊断、治疗和预后的价值.方法采用流式细胞术对92例良性和恶性肿瘤的患者进行测定、比较,并求出相关性.结果良性肿瘤患者CD3、CD4和CD8虽然比较恶性肿瘤患者均有增高,但增高的程度不同;虽然较正常人均有不同程度的降低,但降低的程度有所不同,相互之间无显著性差异.结论恶性肿瘤T-细胞亚群的各项检测指标对良、恶性肿瘤诊断以及指导治疗及评价预后有重要实用价值,尤其对恶性肿瘤转归有更加重要的意义,适于测定体内免疫活性.     

流式细胞术分析实体瘤T-淋巴细胞亚群

目的 为了研究良性和恶性肿瘤T-淋巴细胞亚群变化关系及其对诊断、治疗和预后的价值。方法采用流式细胞术对92例良性和恶性肿瘤的患者进行测定、比较，并求出相关性。结果良性肿瘤患者CD3、CD4和CD8虽然比较恶性肿瘤患者均有增高。但增高的程度不同；虽然较正常人均有不同程度的降低．但降低的程度有所不同，相互之间无显著性差异。结论恶性肿瘤T-细胞亚群的各项检测指标对良、恶性肿瘤诊断以及指导治疗及评价预后有重要实用价值．尤其对恶性肿瘤转归有更加重要的意义，适于测定体内免疫活性。     

流式细胞术检测体液T淋巴细胞亚群的临床应用

目的探讨胸水、腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群的检测方法及临床价值。方法采用流式细胞术检测良、恶性疾病患者的50例胸水、46例腹水、47例肺泡灌洗液(BALF)中T淋巴细胞亚群的水平并分组进行比较。结果 1)胸水:结核性胸膜炎组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(27.36±6.41)%、Th细胞占T淋巴细胞的(67.98±7.41)%、Th/Ts比值为2.60±0.64,肺部恶性肿瘤组胸水Ts细胞占T淋巴细胞的(67.97±4.20)%、Th细胞占T淋巴细胞的(37.61±4.80)%、Th/Ts比值为0.47±0.10,与结核性胸膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著下降(P0.01)而Ts显著升高(P0.01);2)肺泡灌洗液:肺良性疾病组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(44.54±9.56)%、Th细胞占T淋巴细胞的(49.28±12.88)%、Th/Ts比值为1.13±0.29,肺部恶性肿瘤组肺泡灌洗液Ts细胞占T淋巴细胞的(65.11±7.77)%、Th细胞占T淋巴细胞的(34.57±6.65)%、Th/Ts比值为0.54±0.19,与良性病变组比较,恶性组Th下降(P0.05),Th/Ts比值显著下降(P0.01),而Ts显著升高(P0.01)。3)腹水:结核性腹膜炎组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(33.11±3.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(66.69±3.78)%、Th/Ts比值为2.03±0.28,恶性组腹水Ts细胞占T淋巴细胞的(56.64±9.34)%、Th细胞占T淋巴细胞的(35.86±3.30)%、Th/Ts比值为0.65±0.10,与结核性腹膜炎组比较,恶性组Th、Th/Ts比值显著下降(P0.01),而Ts显著升高(P0.01)。结论胸腹水、肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群检测可用于分析性质并有助于评估患者局部免疫功能状态。     

强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞亚群分析

目的 了解强直性脊柱炎患者外周血淋巴细胞亚群变化规律,探讨患者体内的免疫功能状态.方法 采用三色流式细胞学检测技术分析75例患者及50例健康对照的外周血T细胞亚群、B细胞与NK细胞水平,并对其结果进行比较分析.结果 强直性脊柱炎组总T细胞、T4细胞、T8细胞的百分含量依次为(65.74±9.99)%、(35.70±6.92)%和(23.02±5.35)%;T4/T8比值1.70±0.51,总T细胞、T4细胞、T8细胞的绝对含量依次为(1.25±0.63)、(0.47±0.27)和(0.31±0.19)×109/L.B细胞和NK细胞的百分含量分别为(11.84±4.50)%和(15.43±6.28)%;B细胞和NK细胞的绝对含量分别为(0.22±0.15)和(0.27±0.15)×109/L.与健康对照组比较,患者总T细胞、B细胞和NK细胞绝对含量增加(P＜0.01或P＜0.05),但各淋巴细胞亚群的百分含量无明显改变(P>0.05).与腰背痛组、B27+无临床症状组、B27+非强直组比较,各淋巴细胞亚群的百分含量和绝对含量均略有增高,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 强直性脊柱炎患者机体免疫功能存在一定程度的紊乱,且以总T细胞、B细胞、NK细胞功能亢进为特点.临床腰背痛患者、B27+无症状者、B27+非强直患者均表现出与临床强直患者相似的免疫功能紊乱.     

流式细胞术检测肺结核患者血清中T淋巴细胞亚群的变化

目的 探讨肺结核患者血清中T淋巴细胞亚群的改变。方法采用先进的流式细胞术分别测定了29例结核菌阴性及49例结核菌阳性的初治活动性肺结核患者血清T淋巴细胞亚群计数。结果初治活动性肺结核患者血清中CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋降低，而CD3^＋、CD8^＋升高，与正常对照组比较，CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋差异有显著性（P〈0．05）；老年结核患者的CD3^＋、CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋均较青年结核病患者低，其中CD4^＋／CD8^＋差异有显著性；病变范围广泛者的CD3^＋、CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋较病变范围小者低，CD3^＋差异有显著性；痰菌阳性者与阴性者比较，CD4^＋／CD8^＋下降，CD8^＋升高，但差异无显著性。结论初治活动性肺结核患者的T细胞亚群变化存在其自身特点。对肺结核患者T淋巴细胞亚群的检测有助于判断病情、了解抗结核治疗效果及预后。     

流式细胞仪检测肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群对肺部疾患的诊断价值

目的用流式细胞术免疫荧光三色分析法检测肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群,探讨其对肺部恶性肿瘤的意义。方法采用流式细胞术与CD4-FITC/CD8-PE/CD3-PerCP三色荧光抗体检测肺泡灌洗液T淋巴细胞亚群,以SSC/CD3-PerCP圈出T淋巴细胞群,分析肺良性与恶性疾病患者肺泡灌洗液中TH(CD3 CD4 )及Ts(CD3 CD8 )细胞占T淋巴细胞的百分比。结果肺良性疾病组Ts细胞占T淋巴细胞的(44.54±9.56)%,TH细胞占(49.28±12.88)%,TH/Ts比值为1.13±0.29;肺恶性肿瘤组Ts细胞占T淋巴细胞的(65.11±7.77)%,TH细胞占(34.57±6.65)%,TH/Ts比值为0.54±0.19。与良性病变组比较,恶性组TH下降(P<0.05),TH/Ts比值显著下降(P<0.01),而Ts显著升高(P<0.01)。结论流式细胞术可用于检测肺泡灌洗液中T淋巴细胞亚群,有助于分析患者肺泡局部细胞免疫功能。     

系统性红斑狼疮患者外周血淋巴细胞亚群分析

目的研究系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞亚群的变化。方法应用流式细胞仪检测了65例SLE患者(其中活动期30例,非活动期35例)及32例健康体检者外周血淋巴细胞亚群。结果与健康对照组相比,活动期患者的CD4+、NK细胞(CD16+CD56+)百分率明显降低(P<0.05),CD8+、B(CD19+)细胞百分率明显升高(P<0.05),CD4+/CD8+比值显著降低(P<0.05)。SLE患者活动期与非活动期比较,CD4细胞数低于稳定期,CD8细胞数明显高于稳定期。结论 SLE患者外周血淋巴细胞亚群细胞的变化与疾病的病情变化相关联。     

恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群分析

目的探讨恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群的分布特点。方法采用流式细胞术分析比较80例恶性肿瘤患者及40例健康对照组的外周血T淋巴细胞亚群。结果恶性肿瘤患者存在免疫受抑制情况,CD3+、CD4+T淋巴细胞百分率明显减少,与对照组比较差异有统计学意义(P0.05)。CD8+T淋巴细胞百分率升高,CD4+/CD8+比值降低,与对照组比较有差异有统计学意义(P0.05)。结论恶性肿瘤患者外周血T淋巴细胞亚群异常,监测其T淋巴细胞亚群水平对评估患者的细胞免疫功能及疾病的诊断、预后有积极的临床意义。     

支原体肺炎患儿淋巴细胞亚群的变化及意义

目的观察支原体肺炎患儿外周血淋巴细胞亚群的变化及临床意义。方法采用流式细胞仪检测20例支原体肺炎患儿和14例健康儿童淋巴细胞亚群（CD3^＋、CD3^＋CD4^＋、CD3^＋CD8^＋、CD4^＋／CD8^＋、CD3^-CD19^＋、CD3^-CD（16＋56）^＋）。两组年龄、性别差异无统计学意义。结果支原体肺炎患儿CD3^＋细胞明显降低（P〈0．01）、CD3^＋CD8^＋细胞降低（P〈0．05）、CD3^-CD19^＋细胞升高（P〈0．01），较对照组差异有统计学意义；CD3^＋CD4^＋、CD4^＋／CD8^＋、CD3^-CD（16＋56）^＋细胞较对照组差异无显著意义（P〉0．05）。结论支原体肺炎患儿存在细胞免疫失调，主要表现为CD3^＋、CD3^＋CD8^＋细胞降低，CD3^-CD19^＋细胞升高。     

流式细胞术计数淋巴细胞亚群的全血质控品的研究

目的 研究流式细胞术（FCM）计数血液淋巴细胞亚群的全血质控品。方法 流式细胞术多色分析方法计数不同保存剂处理后、不同时间内血液中淋巴细胞亚群。结果 成功研制出FCM计数血液淋巴细胞亚群的全血质控品。在2～8℃冰箱内保存72d内，各种白细胞的光散射特点及CD45保持稳定，淋巴细胞、单核细胞和中性粒细胞群与细胞碎片分离良好，可通过光散射或荧光／光散射两种方式设门分析淋巴细胞亚群。本质控品在不同保存时间的变异较小，FCM计数血液淋巴细胞亚群的室内批间变异系数〈6．5％，全国56个实验室的室间质评变异系数〈13％。结论 本全血质控品可用于临床FCM计数血液淋巴细胞亚群全过程的室内质量控制和室间质量评价，对提高淋巴细胞亚群计数的质量，保证结果的准确性有重要意义。     

阿德福韦酯抗病毒治疗对慢性乙肝患者免疫功能的影响

目的探讨阿德福韦酯抗病毒治疗对慢性乙型肝炎患者外周血淋巴细胞各亚群的影响。方法对41例慢性乙型肝炎患者采用流式细胞术检测阿德福韦酯(ADV-dpv)治疗前、治疗12周和24周后与11例对照者外周血T淋巴细胞亚群进行比较,并结合血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)和总胆红素(TbiL)水平及乙肝病毒DNA(HBV-DNA)载量水平进行统计学分析。结果治疗前各组患者外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+绝对计数值明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05)。各组患者血清中ALT、TBiL水平及HBV-DNA载量水平与T淋巴细胞亚群失衡存在一致性,表现为慢性乙型肝炎(CHB)组和慢性重型肝炎(SH)组的ALT高于肝炎肝硬化(LC)组,差异有统计学意义(P<0.05),LC组和SH组患者外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+绝对计数值明显低于CHB组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。ADV-dpv治疗12周和24周患者外周血T淋巴细胞CD3+、CD4+、CD8+绝对计数值明显高于治疗前,差异有统计学意义(P<0.05);各组患者ALT和TBiL水平及HBV-DNA载量较治疗前明显好转。结论慢性乙型肝炎在发展为重度和肝硬化的过程中外周血T淋巴细胞随病情的进展显著减少,经ADV-dpv抗病毒治疗后,肝功能明显改善,HBV-DNA复制明显减少,外周血淋巴细胞亚群绝对细胞数CD3+、CD4+、和CD8+进行性升高,T细胞亚群的状态呈逐渐改善的趋势。     

流式细胞术分析神经系统疾病患者脑脊液T淋巴细胞亚群

目的用流式细胞术分析脑脊液中T淋巴细胞及其亚群,探讨不同类型神经系统疾病患者脑脊液中T淋巴细胞亚群百分率差异,寻找在疾病诊断和治疗监测中有意义的实验室检测指标。方法采用流式细胞术测定神经系统疾病患者脑脊液和外周血T淋巴细胞亚群。结果采用流式细胞术分析脑脊液中T淋巴细胞亚群时,运用侧向散射光(SS)vs.CD45能更准确的确定淋巴细胞群;但流式细胞术只适用于检测神经系统免疫相关疾病患者脑脊液中T淋巴细胞亚群,不适用于分析神经系统变性疾病患者。中枢神经系统炎性疾病和脊髓炎患者脑脊液中CD3+T淋巴细胞、CD3+CD4+T淋巴细胞和CD3+CD8+T淋巴细胞百分率最高,脱髓鞘疾病患者脑脊液T淋巴细胞亚群百分率最低,但各类神经系统疾病患者脑脊液中T淋巴细胞百分率无明显差异(P>0.05)。细菌性脑膜炎患者脑脊液中CD3+T淋巴细胞和CD3+CD4+T淋巴细胞百分率最高,明显高于脱髓鞘疾病患者(P=0.032),但与病毒性脑膜炎患者比较差异无统计学意义(P>0.05)。各类神经系统疾病患者脑脊液中CD4/CD8比值明显高于外周血,其中细菌性脑膜炎和脊髓炎患者脑脊液中CD4/CD8比值最高,脱髓鞘疾病脑脊液中CD4/CD8比值最低,但差异均无统计学意义(P>0.05)。脑脊液IgG生成指数与脑脊液中CD3+CD4+T淋巴细胞百分率有一定相关性(r=0.324,P=0.032)。结论流式细胞术分析神经系统炎性疾病较脑脊液常规检测具有优势,敏感性更高,可同时分析脑脊液免疫状况。流式细胞术分析在神经系统相关炎性疾病具有重要意义,CD3+CD4+T淋巴细胞高百分率与神经系统炎性疾病密切相关。但流式细胞术对于神经系统变性疾病的临床应用有限。     

子宫内膜异位症患者腹腔液T淋巴细胞亚群的改变及临床意义

目的:探讨子宫内膜异位症患者腹腔液T淋巴细胞亚群的改变及临床意义。方法:用流式细胞术检测子宫内膜异位症和子宫肌瘤患者的腹腔液T淋巴细胞亚群。结果:内异症患者腹腔液CD3+、CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值均明显低于对照组,差异有显著性(P<0.01),内异症腹腔液CD8+T细胞与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。内异症组腹腔液CD3+、CD4+、CD8+T细胞及CD4+/CD8+比值与子宫肌瘤组相比差异均无显著性(P>0.05)。与对照组相比,子宫肌瘤组腹腔液CD4+T细胞差异无显著性(P>0.05),而CD3+T细胞和CD4+/CD8+比值明显降低(P<0.01),CD8+T细胞明显升高(P<0.05)。轻度和重度子宫内膜异位症患者腹腔液CD3+、CD4+T细胞及CD4+/CD8+比值低于对照组,而CD8+T细胞高于对照组,差异均有显著性(P<0.05)。轻度和重度子宫内膜异位症相比,两组腹腔液CD3+、CD4+和CD8+T细胞差异均无显著性(P>0.05),重度组腹腔液CD4+/CD8+比值低于轻度组,差异有显著性(P<0.05)。结论:子宫内膜异位症的发生、发展与患者腹腔液的细胞免疫功能低下有关,检测腹腔液淋巴细胞亚群的变化对探讨其发病机理、预防和治疗均有重要的临床价值。     

上海地区健康成年人外周血T淋巴细胞亚群参考区间调查

目的通过对上海地区333名健康成年人外周血T淋巴细胞亚群计数,调查正常人群T淋巴细胞亚群的参考区间,建立95%可信区间的参考区间,并分析和探讨其变化特点,为机体免疫状态的分析和临床诊疗提供参考。方法采用多参数三色免疫荧光标记外周血T淋巴细胞,使用BD FACSCalibur流式细胞仪检测并分析,获得T淋巴细胞亚群的百分比和绝对值。结果女性的CD3+百分比、CD4+/CD8+比值、CD3+CD4+百分比和CD4+CD45RA+百分比分别为(72.6%±8.1%)、1.57(0.74~4.70)、(44.8%±8.0%)和(1.71%±6.3%),均高于男性分别为(70.9%±8.5%)、1.43(0.51~4.12)、(40.6%±9.3%)和(15.1%±6.8%)。男性的淋巴细胞绝对值计数、CD8+CD28+的绝对值计数分别为(2 069.8±474.1)个/μL、(237.5±95.7)个/μL,均高于女性(1 932.8±469.7)个/μL、(218.1±111.1)个/μL。T淋巴细胞亚群的百分比在不同年龄组之间随年龄增大而发生变化,年龄相差越大,差异越大,其中50岁组与其他组别比较差异有统计学意义。333名健康成年人外周血淋巴细胞绝对值计数为(1 069.1~2 935.6)个/μL,T淋巴细胞亚群百分比计数为:CD3+细胞55.3%~87.6%,CD3+CD4+细胞25.2%~57.6%,CD3+CD8+细胞15.0%~42.1%,CD4+CD25+细胞2.5%~10.5%,CD4+CD45RA+细胞5.0%~27.2%,CD8+CD28+细胞4%~19.3%,CD4+/CD8+比值0.7~2.9。结论健康成年人T淋巴细胞亚群的百分比分布存在性别和年龄差异,由于这种差异不大,可以合并数据建立上海地区健康成年人外周血T淋巴细胞亚群的参考区间。     

出血热肾病综合征患者淋巴细胞亚群动态变化

目的探讨出血热肾病综合征(HFRS)患者淋巴细胞亚群百分比动态变化的意义。方法应用流式细胞仪检测42例HFRS患者的79份外周血标本淋巴细胞亚群百分比。结果在HFRS各病期中,T淋巴细胞(CD3+)、CD3+CD4+淋巴细胞百分比、CD4+/CD8+比值在发热期开始减低,低血压少尿期降至最低(P<0.05);CD3+CD8+淋巴细胞、B淋巴细胞(CD3-CD19+)百分比在发热期开始升高(P<0.01)。结论HFRS患者各病期淋巴细胞亚群比例严重失衡,动态检测淋巴细胞亚群有助于疾病的分期、治疗和预后判断。     

乌司他丁对重度脓毒症患者淋巴细胞亚群的影响

目的探讨乌司他丁对重度脓毒症患者淋巴细胞计数及各亚群比例变化的影响。方法观察重度脓毒症患者的APECHEⅡ评分及SOEA评分,以及淋巴细胞计数和各亚群细胞比例的变化情况。结果经治疗患者较高的APECHEⅡ评分及SOEA评分水平降低,淋巴细胞计数回升,比例改善,以乌司他丁组改善更明显。革兰氏阳性细菌感染患者表现出更明显而持久的淋巴细胞亚群改变。结论重度脓毒症患者淋巴细胞计数下降且各亚群比例异常,乌司他丁有助于纠正该异常。     

不同流式细胞分析系统对外周血淋巴细胞亚群分析结果的影响

目的 探讨部分临床实验室FCM淋巴细胞亚群分析参考范围应用的合理性及不同生产厂家的流式细胞仪和试剂组合对淋巴细胞亚群分析结果的影响.方法 根据国内临床实验室常用的3个流式细胞仪型号(Beckman Coulter Epics XL、Beckman Coulter Cytomics FC500、BD FACS Calibur),分别选取3家北京地区临床流式细胞室(A、B、c室),按照各室的实际检测方案分别测定50份健康人静脉血标本,以验证各室淋巴细胞亚群分析参考范围是否合理.调查3家实验室室内全血质控品使用情况,并将商品化全血质控品分发各室,按照各自的实际实验方案在20个工作日内与常规标本平行处理、检测和分析.针对不同生产厂家的试剂,在同一流式细胞仪(型号为Beckman Coulter Epics XL)上用a、b、c、d 4种不同的试剂组合对20份患者标本进行检测,其中试剂组合a为美国Beckman Coulter公司同厂配套试剂和仪器,试剂组合b、c、d的检测结果分别与试剂组合a比较,计算b、c、d试剂组合偏倚>10%的概率.采用相同试剂和溶血素(美国Beckman Coulter公司)对24份患者标本进行前处理,分别在2台不同厂家和型号的流式细胞仪(型号为Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur)上检测,比较相同试剂处理标本后不同仪器对淋巴细胞亚群分析结果的影响.采用同厂配套试剂和仪器,比较Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur两个流式细胞检测系统对20份患者标本检测结果的影响.结果 A室的自然杀伤(NK)细胞及CD+4 T淋巴细胞/CD+8 T淋巴细胞(T4/T8),B、c两室的T4均有大于10%的结果落在相应的参考范围之外,超出相应参考范围的概率分别为16%(9/50)、24%(12/50)、22%(11/50)、12%(6/50).3家实验室20个工作日内的室内质控均在参考范围内.与试剂组合a比较,试剂组合b、c的所有项目偏倚均较大,其中偏倚>10%的概率最低为试剂组合b的T8,为70%(14/20);最高为试剂组合b、c的T淋巴细胞(T3)、T4,均达到100%(20/20).试剂组合d的T3、T8和B淋巴细胞(B)偏倚较大,偏倚>10%的概率分别为35%(7/20)、85%(17/20)、75%(15/20).不同生产厂家的试剂、仪器处理和分析标本的结果,与采用同一生产厂家的试剂、仪器处理和分析的结果相比,T3、T4、T8、B、NK均存在较大偏倚,偏倚>10%的概率分别为71%(17/24)、80%(19/24)、38%(9/24)、33%(8/24)、92%(22/24).Beckman Coulter Epics XL和BD FACS Calibur两个流式细胞检测系统相比较,T8、NK和B的偏倚均较大,偏倚>10%的概率分别为55%(11/20)、70%(14/20)、55%(11/20).结论 流式细胞实验室需要建立自己的参考范围并定期验证,以便合理进行调整.建议定期采用全血质控品,并累计质控数据.各实验室应选择同厂配套试剂处理标本.

Abstract：

Objective To investigate the appropriate setting up of normal reference ranges of lymphocyte subsets in some flow cytometry laboratories and to study the effects of different flow cytometers and various reagents by different manufacturers on the analysis of peripheral blood lymphocyte subsets. Methods Three FCM labs (named A, B and C) in Beijing region were selected representing 3 commonly used flow cytometers (Beckman Coulter Epics XL, Beckman Coulter Cytomics FC500, BD FACS Calibur). 50 samples from healthy donors were distributed to 3 labs and tested according to individual lab's standard operating procedure to verify whether the normal reference ranges of peripheral blood lymphocyte subsets established were appropriate. The application of internal quality control was also investigated. Commercial blood quality control reagents were given to the 3 FCM labs and tested within 20 working days paralleled with routine samples. In addition, 20 patients' samples were prepared using 4 different combinations of reagents ( a , b , c and d). The results from combination a, which used the Beckman Coulter reagents and instrument, were compared to the results from combination b, c and d, which used reagents from different manufacturers. Then the prepared samples were tested on Beckman Coulter Epics XL to evaluate the effects of different combinations of reagents on the results of peripheral blood lymphocyte subsets analyzed by the same instrument. Furthermore, 24 patients' samples prepared by same reagents from Beckman Coulter company were tested on both Beckman Coulter Epics XL and BD FACS Calibur respectively to assess the effects of different instruments on peripheral blood lymphocyte subsets. 20 patients' samples prepared by same reagents and instruments were analyzed by Beckman Coulter Epics XL analytic system and BD FACS Calibur analytic system respectively to assess the effects of the two analytic systems on the lymphocyte subsets. Results Over 10% of the results for NK and T4/T8 in lab A as well as T4 in labs B and C fell outside of their normal reference ranges. The probabilities exceeding corresponding normal reference ranges were 16% ( 9/50 ), 24% ( 12/50 ), 22% (11/50) and 12% ( 6/50 ), respectively. The results using internal blood quality control in 3 FCM labs within 20 working days were all within the reference ranges of the quality control provided by the kit. The biases from b and c reagent combinations were substantial compared with that of reagent a combination. Among the biases from b and c reagent combinations, the lowest probability of bias exceeding 10% was T8 of combination b, which had probability of 70% (14/20). The highest probabilities of hias exceeding 10% were T3 and T4 of b and c reagent combinations, which reached 100% (20/20) . Furthermore, the biases of T3, T8 and B of d reagent combination compared with that of reagent a combination were also substantial. The probabilities of bias exceeding 10% were 35% (7/20) ,85% (17/20) and 75% (15/20), respectively. Comparing the results of samples prepared and analyzed by reagents and instruments from different manufacturers to that of samples prepared and analyzed by the same company's reagents and instruments showed that there were great discrepancies in T3, T4 , T8 , B and NK. The probabilities of bias exceeding 10% were 71% ( 17/24), 80% (19/24) ,38% (9/24), 33% (8/24) and 92% (22/24), respectively. The biases of T8, NK and B were substantial when compared the results from Beckman Coulter Epics XL analytic systems and BD FACS Calibur analytic systems. The probabilities of bias exceeding 10% were 55% (11/20 ), 70% ( 14/20 ) and 55% (11/20), respectively. Conclusions FCM labs should set up their own normal reference range for peripheral blood lymphocyte subsets. The normal reference range should be verified periodically. It is important to apply internal blood quality control regularly and accumulate the quality control results. The reagents and instrument for preparing peripheral blood samples should be from the same manufacturers.     

中国人血液淋巴细胞免疫表型参考值调查

目的建立健康中国成人血液淋巴细胞免疫表型分析参考值.方法用Simultest IMK-Lymphocyte试剂盒的荧光抗体对102例健康中国成人血液进行染色,以FACSort流式细胞仪进行分析,Simulset程序获取数据并分析结果,SPSS软件进行统计.结果 18～65岁健康中国成人淋巴细胞参考值范围CD+3细胞是50%～84%(955～2 860/μl),CD-3CD+19细胞为5%～18%(90～560/μl),CD+3CD+4细胞为27%～51%(550～1 440/μl),CD+3CD+8细胞为15%～44%(320～1 250/μl),CD-3、CD+16和/或CD+56细胞为7%～40%(150～1 100/μl),CD+3CD+4/CD+3CD+8比值为0.71～2.87.随着年龄增长CD+3CD+4细胞略有升高,CD+3CD+8细胞略有降低.NK细胞在大年龄组女性低于男性,且有统计学差异(P＜0.05).与高加索人和美国人相比,中国人的CD+3CD+8细胞和NK细胞(CD-3,CD+16和/或CD+56)的相对值(百分率)与绝对值均高,CD-3CD+19细胞和CD+3CD+4细胞仅相对值较低,但绝对值不少.CD+3CD+4/CD+3CD+8比值向低值漂移.结论种族、性别、年龄和环境因素可影响健康人淋巴细胞表型分布.