Cl^—1通道阻断剂对A10细胞α1—AR介导的Ca^2＋内流的影响

目的在胚胎大鼠主动脉平滑肌细胞(A10),探讨Cl-通道与Ca2+内流的关系及酪氨酸磷酸化对Ca2+内流的作用.方法采用Fura-2荧光探针双波长测定胞浆游离Ca2+浓度([Ca2+]i).结果Ca2+通道阻断剂nifedipine和SK&F96365可阻止肾上腺素(Adr)触发的Ca2+内流;氯通道阻断剂niflumicacid(NFA)和furosemide呈浓度依赖性抑制Ca2+内流.在Ca2+内流被SK&F96365最大限度抑制后,NFA和furosemide可进一步抑制Ca2+内流;而Ca2+内流被NFA和furosemide分别最大抑制28%和35%后,SK&F96365也可进一步抑制Ca2+内流达53%和52%.genistein呈浓度依赖性抑制Ca2+内流;vanadate浓度依赖性促进Ca2+内流.结论在A10细胞,肾上腺素受体触发的Ca2+内流涉及电压依赖性Ca2+通道(VDC)和受体操纵性Ca2+通道(ROC);氯通道参与了VDC及ROC介导的Ca2+内流;蛋白酪氨酸磷酸化的水平影响Ca2+内流.     

血管平滑肌和内皮细胞Ca2+内流机制及其与Cl-通道的关系

血管平滑肌和内皮细胞的Ｃａ２＋内流机制不同,前者是兴奋性细胞,Ｃａ２＋内流通过电压依赖性（ＶＤＣ）和非电压依赖性Ｃａ２＋通道;后者是非兴奋性细胞,Ｃａ２＋内流主要通过非ＶＤＣ途径。Ｃｌ－通道参与了这两种细胞的Ｃａ２＋调控,平滑肌细胞Ｃｌ－通道开放导致细胞膜去极化,促进ＶＤＣ开放,Ｃａ２＋内流增加;而内皮细胞Ｃｌ－通道开放导致细胞膜超极化,使Ｃａ２＋进入细胞内的电化学趋势增加,胞外Ｃａ２＋经非ＶＤＣ途径内流增加。目前对血管平滑肌和内皮细胞Ｃｌ－通道的分型、特性和功能还不清楚。     

氯通道阻断剂对α1—肾上腺素受体亚型引起的Ca^2＋内流的影响

目的探讨氯通道阻断剂在α１Ａ、α１Ｂ、α１Ｄ肾上腺素受体（ＡＲ）亚型触发的Ｃａ２＋内流中的作用。方法采用Ｆｕｒａ－２荧光探针双波长测定胞浆游离Ｃａ２＋浓度（［Ｃａ２＋］ｉ）。结果在３种亚型的细胞上,肾上腺素（Ａｄｒ）触发的Ｃａ２＋内流均不受ｎｉｆｅｄｉｐｉｎｅ影响; ＳＫ＆Ｆ９６３６５可部分抑制α１Ａ、α１Ｂ－ＡＲ介导的Ｃａ２＋内流,而对ａ１Ｄ－ＣＨＯ细胞无影响。在ＢＢ－ＣＨＯ细胞上,ｎｉｆｌｕｍｉｃ　ａｃｉｄ（ＮＦＡ）和ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ呈浓度依赖性抑制Ｃａ２＋内流;当Ｃａ２＋内流被ＳＫ＆Ｆ９６３６５最大限度抑制后,ＮＦＡ和ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ可进一步抑制Ｃｄ２＋内流。α１Ａ－ＡＲ介导的Ｃａ２＋内流可被ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ抑制,抑制率达 １４％ １５％。 ＮＦＡ可抑制ａ１Ｄ－ＡＲ引起的Ｃａ２＋内流,抑制率为３９％±９％。结论氯通道参与α１Ａ、α１Ｂ及α１Ｄ－ＡＲ引起的经非电压依赖性Ｃａ２＋通道介导的Ｃａ２＋内流,其间存有异同。ＮＦＡ敏感Ｃａ２＋内流及ｆｕｒｏｓｅｍｉｄｅ敏感的Ｃａ２＋内流与ＳＫ＆Ｆ９６３６５敏感的Ｃａ２＋内流存在非同一性。     

Cl~-通道阻断剂对5-HT和CPA引起的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞Ca~(2+)内流的影响

目的　在培养的兔脑椎基底动脉平滑肌细胞上观察5 HT和CPA诱导的Ca2 + 内流的特性 ,电压依赖性Ca2 + 通道 (VDC)抑制药尼莫地平 ,非电压依赖性Ca2 + 通道抑制药SK&F963 65及Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB对两种激动剂引起 [Ca2 + ]i 反应的影响 ,以探讨脑血管平滑肌细胞中 5 HT引起Ca2 + 内流的特性、Cl-通道与Ca2 + 内流的关系。方法　采用生物荧光双波长影像分析系统瞬即测定单细胞胞质[Ca2 + ]i 技术。结果　① 5 HT和CPA均能诱导平滑肌细胞[Ca2 + ]i 呈双相升高 ,并且 5 HT诱导的Ca2 + 释放是环匹阿尼酸 (CPA)敏感Ca2 + 池的一部分 ;②尼莫地平对 5 HT和CPA触发的Ca2 + 内流无明显影响 ,而SK&F963 65可阻止二者触发的Ca2 + 内流 ;③Cl-通道阻断剂DIDS、NPPB呈浓度依赖性抑制Ca2 + 内流 ,在SK&F963 65最大限度抑制Ca2 + 内流后 ,DIDS、NPPB可进一步抑制Ca2 + 内流 ;而Ca2 +内流被DIDS、NPPB分别最大抑制后 ,SK&F963 65也可进一步抑制Ca2 + 内流。结论　 5 HT引起的Ca2 + 内流是经SK&F963 65敏感的非VDC ,其中包含Ca2 + 释放引起的Ca2 + 内流 (CRAC)成分与非CRAC成分 ,并且这两部分Ca2 +内流均与DIDS、NPPB敏感的Cl-通道开放有关     

酪氨酸激酶抑制剂对hTrp3蛋白介导的α_(1B)-AR引起的Ca~(2+)内流的影响

目的　探讨Trp3(transientreceptorpotential 3)蛋白是否参与α1B AR引起的Ca2 + 内流以及酪氨酸激酶对其调控作用。方法　采用脂质体转染 ,将hTrp3cDNA分别转染到HEK2 93细胞和已有α1B受体稳定表达的HEK2 93细胞 ;Westernblot方法检测Trp3蛋白表达情况 ;Fura 2 /AM荧光分光光度法 ,测定胞浆游离Ca2 + 浓度。结果　HEK2 93细胞上可检测到hTrp3的内源性表达 ,转染后其表达增加。α1B HEK2 93细胞转染hTrp3cDNA后 ,α1B AR引起的Ca2 +内流显著增加 (P <0 0 1) ;转染hTrp3cDNA对thapsigargin诱导的Ca2 + 内流无作用。 5～ 30 μmol·L-1genistein对转染细胞α1B AR诱发的Ca2 + 内流有抑制作用 ,最大抑制率达(75 2± 12 6 ) %。结论　Trp3cDNA转染可能主要通过非CRAC(calciumreleaseactivatedcalcium )途径增加α1B AR引起的Ca2 + 内流 ,这一过程很大程度上依赖酪氨酸激酶的调控     

褪黑素(MT)对大鼠睾丸细胞色素C、线粒体Ca2+的影响

目的:观察精索静脉曲张(VC)大鼠睾丸细胞色素C(Cyt—C)、线粒体C a2 的变化并探讨M T对上述指标的影响。方法:制备精索静脉曲张大鼠模型后检测指标。结果:精索静脉曲张大鼠模型制备成功,模型睾丸组织Cyt—C、线粒体C a2 均显著低于正常组和治疗组(P<0.05)。结论:VC时Cyt—C、线粒体C a2 含量降低,而M T对其有保护作用。     

P物质对大鼠垂体前叶细胞游离Ca2+影响的研究

目的:探讨SP是否影响培养的大鼠AP细胞[Ca2+]i,在第二信使信息转导途径上进一步阐述SP产生生物学效应的机制。方法:原代培养成年雌性S-D大鼠的AP细胞48h,加入SP孵育不同时间,采用Fura-2/AM检测[Ca2+]i。结果:当SP浓度为100nmol/L,孵育时间由10min增加到30min时[Ca2+]i增加,但孵育时间为40min、50min时,[Ca2+]i呈现减少趋势,即最大反应的孵育时间为30min。当孵育时间为20min、30min、40min、50min时,[Ca2+]i分别为211±16nmol/L、369±51nmol/L、358±24nmol/L、239±36 nmol/L,与10min(117±17nmol/L)相比较,呈显著性差异(P<0.05)。结论:通过Fura-2/AM可精确反映[Ca2+]i,SP兴奋AP细胞SPR后可通过Ca2+来完成其部分的生物学效应,说明了SP对生殖轴(下丘脑-垂体前叶-卵巢/睾丸)有调控作用。     

氯通道阻断剂对H_2O_2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响

目的观察氯通道阻断剂对H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡的影响,探讨氯通道在RIN-mβ细胞凋亡中的作用。方法采用H2O2诱导的胰岛RIN-mβ细胞凋亡模型,观察氯通道阻断剂(DIDS、NPPB和NFA)对细胞存活率、形态学变化、凋亡的影响。结果氯通道阻断剂单用时对胰岛RIN-mβ细胞活力无明显影响,但能明显提高H2O2处理的胰岛RIN-mβ细胞的存活率。与模型对照组相比,氯通道阻断剂DIDS、NPPB和NFA对抗组细胞存活率明显增加(P<0.01),细胞凋亡率明显降低(P<0.01)。结论氯通道阻断剂对H2O2诱导的RIN-mβ细胞损伤和凋亡具有明显的保护作用。     

Cl~-通道及Ca~(2+)通道阻断剂对ATP触发的牛脑血管平滑肌细胞Ca~(2+)内流作用的影响

采用Fura 2荧光测定胞浆游离Ca2 + 浓度([Ca2 + ]i)变化技术 ,在培养的牛脑中动脉平滑肌细胞上 ,观察电压依赖Ca2 + 通道 (VDCC)抑制药尼莫地平 ,非电压依赖Ca2 + 通道 (NVDCC)SK&F96365以及Cl-通道抑制药呋塞米 ,印防己毒素对ATP引起的[Ca2 + ]i 反应的影响 .实验表明ATP可使 [Ca2 + ]i 呈现双相升高反应 ,即快速峰相及随后持续稳定的平台相 .尼莫地平 ,SK&F96365及印防己毒素对ATP触发的Ca2 + 内流无明显影响 ,而呋塞米能呈浓度依赖性地抑制ATP触发的Ca2 + 内流 .提示ATP触发的牛脑中动脉平滑肌细胞Ca2 + 内流是经SK&F96365不敏感的NVDCC ,与呋塞米敏感的Cl- 通道开放有关 .     

雌激素对大鼠主动脉组织细胞色素C、线粒体Ca2+、胞浆游离Ca2+水平的影响

目的:研究雌激素对大鼠主动脉组织细胞色素C、线粒体Ca2 、胞浆游离Ca2 水平的影响,以探讨雌激素对心血管系统的保护作用.方法:将30只雌性大鼠随机分为三个组,假手术组(A组)、去卵巢组(B组)及去卵巢 雌二醇治疗组(C组),每组各10只.正常饮食后处死大鼠,对主动脉组织细胞色素C、线粒体Ca2 、胞浆游离Ca2 的水平进行测定.结果:去卵巢模型组同去卵巢 雌二醇治疗组相比,线粒体Ca2 、细胞色素C含量明显降低(P＜0.05;P＜0.01),而胞浆内细胞色素C含量则明显升高(P＜0.05).结论: 雌激素可能是通过调节细胞色素C、线粒体Ca2 、胞浆游离Ca2 水平,清除自由基、从而减少氧化应激对心血管系统的损伤作用.     

5-Hydroxytryptamine induces transient Ca influx through Ni-insensitive Ca channels in rat vascular smooth muscle cells

The effects of Ni²⁺, a non-selective cation channel inhibitor, on 5-hydroxytryptamine (5-HT)- and angiotensin II (Ang II)-induced intracellular Ca²⁺ dynamics in rat aortic smooth muscle cells were investigated. Ni²⁺ (1 mM) significantly inhibited the transient increase in intracellular Ca²⁺ concentration ([Ca²⁺]_i) induced by Ang II (100 nM) in aortic smooth muscle cells, as measured using fura-2. However, Ni²⁺ did not suppress the transient increase in Ca²⁺ influx induced by 5-HT (10 μM), while significantly suppressed the sustained increase. Ca²⁺ influx evoked by high KCl (80 mM), thapsigargin (TG) (1 μM) or depletion of intracellular Ca²⁺ store was almost completely suppressed by Ni²⁺. Ni²⁺ had no effect on 5-HT-induced inositol triphosphate production and Ca²⁺ release from the intracellular store(s). These results suggest that 5-HT, but not Ang II, induces transient Ca²⁺ influx through Ni²⁺-insensitive Ca²⁺ channels, which are distinguishable from the voltage-dependent or store-operated Ca²⁺ channels.     

蛋白酪氨酸激酶抑制剂对脑血管平滑肌细胞Ca~(2+)池操纵性Ca~(2+)内流的影响

目的　研究蛋白酪氨酸激酶和蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂对牛脑血管平滑肌细胞 (CSMC)Ca2 + 池操纵性Ca2 + 内流的影响。方法　采用培养的CSMC ,在生物荧光双波长影像分析系统用Fura 2 /Am荧光探针测定单个细胞内游离Ca2 + 浓度。结果　 (1)蛋白酪氨酸激酶抑制剂 (genistein ,2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低内皮素 1(ET 1,10 -7mol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为5 6%± 2 .9%、2 5 6%± 3 9%、48 9%± 3 7% ;蛋白酪氨酸磷酸酶抑制剂 (vanadate ,2 ,4,8μmol·L-1)能浓度依赖性升高CPA刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,增加比率分别为8 2 %± 3 9%、18 8%± 4 9%、46 6%± 6 9% ;(2 ) genistein(2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低ATP(10 μmol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为 6 7%±2 6%、2 4 6%± 6 5 %、5 1 3 %± 6 9% ;vanadate (2 ,4,8μmol·L-1)能浓度依赖性升高ATP刺激引起的CSMCCa2 +内流 ,增加比率分别为 4 8%± 2 0 %、2 8 5 %± 4 6%、49 6%± 3 3 % ;(3 ) genistein (2 5 ,5 ,10 μmol·L-1)能浓度依赖性降低环匹阿尼酸 (Cyclopiazonicacid ,CPA ,10 μmol·L-1)刺激引起的CSMCCa2 + 内流 ,抑制率分别为 6 5 %± 3 0 %、2 2 5 %± 5 2 %、     

组织和细胞中Ca~(2+)浓度测定方法的研究进展

组织和细胞内的Ca2+与信号传导以及生理病理应答反应具有重要的联系,因此测定其含量及动态变化具有重要的研究意义。近年来Ca2+的测定技术和相关机制研究在国内外发展迅速,包括45Ca跨膜流动测定方法、X射线微区分析方法、离子选择微电极方法、核磁共振波谱方法、原子吸收分光光度法测定方法、荧光探针方法等,该文就相关方面介绍这些方法的特点和主要应用情况。     

Inhibitory effects of cilnidipine on peripheral and brain N-type Ca2+ channels expressed in BHK cells

We investigated differences in electrophysiological characteristics between peripheral and central N-type Ca²⁺ channels, containing _1B-a and a_1B-c, respectively. In addition, we examined the inhibitory effects of cilnidipine, a dihydropyridine (DHP) derivative, on both channels. Both _1B subunits were transiently expressed in BHK cells, and then analyzed using the whole-cell patch-clamp technique. The current–voltage relationship showed that _1B-c currents were activated at more negative potentials than _1B-a currents. The voltage-dependent steady-state inactivation and activation showed that the V_1/2 values for inactivation and activation of _1B-c (−88.5±1.3 and −33.2±1.3 mV) were both significantly more negative than those for _1B-a (−83.3±1.3 and −27.9±2.3 mV). Despite the different electrophysiological characteristics of these two N-type channels, cilnidipine blocked both with similar potency within the range 0.1 to 10 μM. Furthermore, cilnidipine had no effect on the I–V relationships or the steady-state inactivation curves. Our data indicate that the spliced positions of _1B-a and a_1B-c may affect not only their voltage-sensing abilities but also the kinetics of channel activation and inactivation. The data also suggest that cilnidipine binds to sites independent of those controlling voltage-sensing and channel kinetics in these _1B subunits.     

Ca~(2+)运动对α_1-肾上腺素受体引起内源性ClC-3氯通道表达的作用

目的　研究Ca2 +运动对α1 肾上腺素受体引起ClC 3氯通道表达的作用。方法　在A10细胞上 ,用RT PCR和Westernblot检测ClC 3mRNA和蛋白质表达情况。结果　苯肾上腺素 ( 10 μmol·L-1)和thapsigargin( 0 1μmol·L-1)可促进ClC 3mRNA和蛋白质的表达 ;SK&F963 65 ( 10 μmol·L-1)和genistein( 10 μmol·L-1)可抑制苯肾上腺素引起的ClC 3的表达 ,nifedipine( 10 μmol·L-1)无此作用。结论　在A10细胞上 ,通过钙池操纵性Ca2 +通道 (SOCC)的Ca2 +内流参与了α1 肾上腺素受体引起的内源性ClC 3氯通道的表达 ,而通过电压依赖性Ca2 +通道 (VDCC)的Ca2 +内流可能与此无关。蛋白酪氨酸激酶参与了ClC 3氯通道的表达     

Fendiline mobilizes intracellular Ca2+ in Chang liver cells

1. The effects of the antianginal drug fendiline (N-[3,3-diphenylpropyl]-alpha-methyl-benzylamine) on intracellular free Ca2+ levels ([Ca2+](i)) in Chang liver cells were evaluated using fura-2 as a fluorescent Ca2+ indicator. 2. Fendiline (1-100 micromol/L) increased [Ca2+](i) in a concentration-dependent manner, with an EC50 of 25 micromol/L. 3. The [Ca2+](i) response was composed of an initial rise and a slow decay to a sustained phase. Removal of extracellular Ca2+ partly reduced the [Ca2+](i) signals. 4. Fendiline (10 micromol/L)-induced release of intracellular Ca2+ was reduced by 65% following pretreatment with 1 micromol/L thapsigargin (an endoplasmic reticulum Ca2+ pump inhibitor) to deplete Ca2+ stored in the endoplasmic reticulum. 5. After pretreatment with 10 micromol/L fendiline in Ca2+-free medium for several minutes, addition of 3 mmol/L Ca2+ induced an increase in [Ca2+](i) of a magnitude four-fold greater than control. This increase in [Ca2+](i) was not reduced by 10 micromol/L SKF96365, econazole, nifedipine or verapamil. 6. Fendiline (10 micromol/L)-induced release of intracellular Ca2+ was not altered by inhibition of phospholipase C with 2 micromol/L 1-(6-((17beta-3-methoxyestra-1,3,5(10)-trien-17-yl)amino) hexyl)-1H-pyrrole-2,5-dione (U73122). 7. The results of the present study show that fendiline induces an increase in [Ca2+](i) in Chang liver cells by releasing stored Ca2+ in an inositol 1,4,5-trisphosphate-independent manner and by causing extracellular Ca2+ influx.