新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞中ATP存在的证据

目的:研究体外培养的新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞中存在ATP的证据,即细胞中是否存在ATP囊泡,体外培养液中能否检测到所释放的ATP。方法:采用出生1～3 d的Sprague-Dawley大鼠,进行体外血管纹缘细胞培养、纯化、鉴定。特异性标记ATP囊泡的喹丫因染色后在荧光显微镜下观察缘细胞中的ATP囊泡。采用生物发光法检测缘细胞细胞外液中所释放的ATP的浓度。结果:体外培养的新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞,经流式细胞法检测上皮细胞标志性的角蛋白和波形蛋白的纯度,证实培养所获得的细胞为缘细胞。经喹丫因染色后在荧光显微镜下可见缘细胞细胞质中存在大量的绿色星点状染色。采用生物发光法检测缘细胞细胞外液中ATP的浓度,通过细胞荧光值可计算出ATP的浓度。结论:新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞中存在ATP囊泡,并能分泌ATP。     

大鼠耳蜗发育过程中突触素的表达差异

目的 研究大鼠耳蜗发育过程中突触素(synaptophysin,SYN)的表达差异,探讨SYN表达与听觉功能发育成熟的关系及耳蜗中三磷酸腺苷(adenosine triphosphate,ATP)的来源.方法 选取健康SD大鼠25只,按出生后天数将其分为出生后1、5、10、14、28天组(即:P1、P5、P10、P14和P28组),每组5只,运用免疫组化的方法比较各组大鼠耳蜗中SYN的表达差异.结果 P1、P5和P10组大鼠顶回的Corti器、Kolliker器未发现SYN表达;P10组底回及蜗管中段、P14组和P28组Corti器的内、外螺旋束、Deiters细胞内侧缘有特异性表达;各组大鼠耳蜗螺旋神经元(spiral ganglion neuron,SGN)胞浆中均有SYN表达.结论 大鼠耳蜗发育过程中SYN的表达存在差异,这种差异有利于神经末梢和靶细胞间构型建立,对听觉系统发育中形成正确的听觉信息编码可能起着关键作用.毛细胞、支持细胞中的ATP可能以非囊泡或以非SYN特异性染色的囊泡形式储存.     

耳蜗缘细胞中三磷酸腺苷囊泡的研究现状

耳蜗外侧壁包括螺旋韧带和血管纹。国内外研究发现耳蜗血管纹缘细胞中存在大量的各种形状的囊泡结构，这些囊泡由单层或双层膜包被，并常含有绒毛状电子致密物，此囊泡可能与离子的转运、三磷酸腺苷（adenosine triphosphate，ATP）的释放密切相关。有人证实囊泡中的ATP不是来源干线粒体。有学者观察到了囊泡明显的胞吐活动，但是不能确定ATP是否通过胞吐作用分泌至内淋巴。缘细胞中的ATP囊泡是否就是溶酶体，还有待更深入的研究证实。现结合国内外文献，就耳蜗缘细胞中ATP囊泡的研究现状做一综述。     

新生大鼠耳蜗K(o)lliker器支持细胞ATP释放的机制

目的 观察体外培养的新生大鼠耳蜗K(o)lliker器支持细胞是否存在并释放ATP,初步探讨其释放机制.方法 选取出生后ld的Sprague-Dawley大鼠,分离耳蜗膜迷路,采用机械分离与酶消化相结合的方法获得单离的K(o)lliker器支持细胞.观察膜迷路和K(o)lliker器支持细胞的喹丫因染色情况.采用生物发光法,通过影响K(o)lliker器支持细胞ATP代谢、改变细胞内外Ca2浓度、抑制细胞内磷脂酶信号通路及添加缝隙连接半通道阻断剂,观察K(o)lliker器支持细胞释放ATP浓度的变化.结果 用喹丫因染色体外培养的K(o)lliker器支持细胞,发现胞质中存在大量绿色星点状染色.采用生物发光法检测的ATP标准曲线呈明显的对数线性关系.随着巴佛洛霉素A1浓度增加,K(o)lliker 器支持细胞培养液中ATP浓度逐渐降低,而随着己二酸二癸酯浓度的增加,培养液中ATP浓度逐渐升高;在一定浓度范围内,随着细胞外Ca2浓度增加,K(o)lliker器支持细胞ATP的释放减少,而随着细胞内游离Ca2浓度增加,K(o)lliker器支持细胞释放ATP量增加;培养液中加入甘珀酸钠或乌热酸抑制半通道后可以显著的降低ATP释放.此外,抑制细胞内磷脂酶信号通路也可以减少ATP的释放.结论 体外培养的新生大鼠耳蜗K(o)lliker器支持细胞存在并释放ATP,细胞内、外液中Ca2+浓度的变化可能通过调节半通道的开放而影响其ATP的释放.     

耳蜗血管纹缘细胞三磷酸腺苷释放机制

三磷酸腺苷（adenosine triphosphate,ATP）被认为是耳蜗中一种重要的信号分子,可以作为共同递质和（或）神经调节物质发挥耳蜗的各种生理功能。目前已证实新生大鼠耳蜗血管纹缘细胞内的ATP囊泡为溶酶体,可以释放ATP。然而,缘细胞释放ATP的机制还未完全阐明,本文结合国内外文献就耳蜗缘细胞中ATP释放机制的研究现状做一综述。     

卡那霉素耳中毒后豚鼠耳蜗热休克蛋白的表达

目的　观察卡那霉素对热休克蛋白 70 (HSP70 )在豚鼠耳蜗中表达的影响。方法　取听力正常豚鼠随机分为实验组和对照组各 5只 ,分别给予 2 5 0mg·kg-1·d-1卡那霉素和生理盐水肌注 ,10天后处死。左耳铺片 ,右耳石蜡包埋切片。用免疫组织化学方法检测各组石蜡切片HSP70表达情况 ,通过计算机图像分析系统分析HSP70表达强度。结果　对照组中Corti器、血管纹、螺旋韧带、内螺旋缘、螺旋神经节HSP70表达呈弱阳性 ;耳蜗铺片显示内 ,外毛细胞正常。实验组中Corti器、血管纹、螺旋韧带、内螺旋缘HSP70表达呈强阳性 ,而在螺旋神经节呈弱阳性 ;耳蜗铺片显示外毛细胞大部分缺损。结论　卡那霉素能够诱导HSP70在豚鼠耳蜗中表达     

谷氨酸-天冬氨酸转运体在豚鼠耳蜗的分布

目的研究谷氨酸-天冬氨酸转运体(glutamate—aspartate transporters，GLAST)在正常豚鼠耳蜗内的分布，为探讨GLAST在防止耳蜗谷氨酸(Glu)神经毒性中的作用提供形态学基础。方法选取健康红目豚鼠6只，采用免疫组织化学方法，以山羊抗GLAST抗体为标记物，观察正常豚鼠耳蜗中GLAST的表达及分布。结果在正常豚鼠耳蜗的内、外毛细胞，内、外毛细胞周围的支持细胞，螺旋神经节细胞，血管纹边缘细胞和螺旋缘上皮，均有GLAST阳性表达。结论GLAST在正常豚鼠耳蜗内主要分布于内、外毛细胞，内、外毛细胞周围的支持细胞，螺旋神经节细胞、血管纹边缘细胞和螺旋缘上皮，其功能尚需进一步的研究。     

IL-2、TNF-αmRNA在迷路炎豚鼠耳蜗中的表达

目的探讨迷路炎时,豚鼠耳蜗IL-2、TNF-α mRNA的表达变化及其与迷路炎的关系.方法随机将24只豚鼠分为实验组和对照组,实验组18只、36耳,将1mg.ml-1内毒素(lipopolysaccharide,LPS)0.2ml缓慢注入中耳腔,对照组6只、12耳注入等量生理盐水,观察6h、48h、14d耳蜗的病理变化;用原位杂交技术检测IL-2、TNF-α mRNA在耳蜗的表达,用Tiger 920图像分析软件分析图象.结果(1)耳蜗形态学改变鼓室注药后6h,实验组豚鼠耳蜗的血管纹、螺旋韧带、蜗螺旋轴静脉等即可见充血、水肿、炎细胞浸润,Corti器支持细胞和感觉细胞轻度肿胀、变性;48h时加重;14d时耳蜗各部分结构恢复正常.对照组豚鼠耳蜗各部分结构无改变;(2)IL-2 mRNA的表达对照组耳蜗无IL-2 mRNA表达;鼓室注射LPS后6h,实验组耳蜗的螺旋神经节、螺旋缘呈阳性表达,血管纹、螺旋韧带呈可疑阳性;而48h、14d无表达;(3)TNF-α mRNA的表达对照组耳蜗无TNF-α mRNA表达;鼓室注射LPS后6h,TNF-α mRNA广泛表达于实验组耳蜗的螺旋神经节、Corti器、螺旋缘、血管纹、螺旋韧带等部位,48h表达明显增强(P＜0.01),14d时仅螺旋神经节呈弱阳性染色.结论IL-2、TNF-α可能与急性迷路炎的发生有关,TNF-α则可能起着更为重要的作用.     

实验性微栓塞缺血豚鼠耳蜗cNOS的表达变化

目的 探究一氧化氮（nitricoxide，NO）在一过性微栓塞耳蜗缺血性损伤中的作用。方法 20只豚鼠随机分为实验组和对照组各10只，实验组动物通过磁微粒栓塞造成实验性耳蜗缺血模型；以扫描电镜观察缺血耳蜗听纤毛变化；以免疫组织化学方法观察原生型一氧化氮合酶（constitutive nitric oxide synthase，cNOS）在两组耳蜗的表达变化。结果 实验性耳蜗缺血造成内外毛细胞听纤毛散在的粘结、倒伏或缺失，内毛细胞听纤毛病变明显；内皮型一氧化氮合酶（endothelial NOS，eNOS）表达分布于蜗轴及内侧螺旋板内神经纤维、螺旋神经节、内侧螺旋缘、Corti器细胞及血管纹／螺旋韧带区；神经型一氧化氮合酶（neuron NOS，nNOS）主要分布于蜗轴及内侧螺旋板内神经纤维、螺旋神经节细胞，在Corti器细胞、血管纹细胞及内侧螺旋缘上皮细胞有较弱的表达；实验性缺血组豚鼠耳蜗与正常对照组耳蜗原生型一氧化氮合酶的表达无差异。结论 微栓塞耳蜗缺血引起散在听毛细胞损伤；两种原生型NOS在耳蜗固有表达，分布有交叉，功能存在相互代偿，但未发现因微栓塞缺血而引起变化。