系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞Caspase-1和Caspase-3mRNA的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血淋巴细胞Caspase-1和Caspase-3的表达水平及其与淋巴细胞凋亡的关系。方法 应用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测34例活动期SLE患者和30例正常人外周血单一核细胞(PBMC)中Caspase-1和Caspase-3mRNA的表达水平。结果 活动期SLE患者PBMC中Caspase-1mRNA的平均表达水平(1.20±0.33)明显高于正常人对照组(0.79±0.25),差异有非常显着性(P<0.01);Caspase-3mRNA的平均表达水平(0.87±0.16)高于正常人对照组(0.66±0.10),差异有显着性(P<0.05).活动期SLE患者PBMC中Caspase-1和Cas-pase-3的阳性表达率与正常人对照组相比差异无显着性(P>0.05).结论 活动期SLE患者外周血淋巴细胞Caspase-1和Caspase-3mRNA表达水平增高,Caspase级联反应可能参与了SLE患者淋巴细胞的凋亡过程。     

系统性红斑狼疮患者转录因子T-bet和GATA3基因的表达

目的 观察转录因子T-bet和GATA3与系统性红斑狼疮(SLE)病情的关系,探讨T细胞在SLE中的发病机制.方法 利用半定量PCR及实时荧光定量PCR技术检测活动期SLE患者、稳定期SLE患者、正常人外周血单一核细胞(PBMC)中T-bet和GATA3mRNA表达状况.结果 GATA3实时荧光定量PCR△Ct值:活动期(8.92±1.29)明显低于稳定期(12.20±1.18)和正常人(11.80±0.80),所以活动期患者GATA3mRNA表达明显高于稳定期患者和正常人,差异具有非常显著性(P<0.01);半定量PCR显示活动期(0.15±0.15)也明显高于稳定期(0.04±0.05)和正常人(0.03±0.03),差异有显著性(P<0.05);两种方法均显示稳定期患者与正常人GATA3表达差异无显著性(P>0.05).T-bet实时荧光定量PCR△Ct值:活动期为10.52±0.82,稳定期为9.93±1.13,正常人为10.23±1.32;半定量PCR:活动期为0.30±0.23,稳定期为0.28±0.14,正常人为0.22±0.11,两种方法均显示活动期患者、稳定期患者、正常人T-bet表达差异无显著性(P>0.05).结论 调控Th2细胞的转录因子GATA3的升高可能与SLE活动有关,而调控Th1细胞的转录因子T-bet可能与SLE活动无关.     

系统性红斑狼疮患者外周血单一核细胞CD80/CD86和CTLA-4mRNA的表达

目的 探讨CD80/CD86和CTLA-4在系统性红斑狼疮(SLE)发病机制中的作用及临床意义。方法 用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测32例SLE患者外周血单一核细胞(PBMC)中CD80、CD86、CTLA-4mRNA的表达水平。结果 活动期SLE患者PBMC中CD86的阳性表达率为90.63%,正常人对照组为60%,两组差异有非常显著性(P<0.01)。CD86的mRNA表达的平均水平(0.6410±0.0174)亦明显高于正常人对照组(0.4510±0.0402),差异有非常显著性(P<0.001);活动期SLE患者PBMC中CTLA-4的阳性表达率为81.25%,其mRNA表达的平均水平为1.0020±0.0624,均明显高于正常人对照组,差异有显著性(P<0.01);活动期SLE患者PBMC中CD80的阳性表达率和CD80mRNA的表达水平与正常人对照组差异均无显著性(P>0.05)。结论 CD86和CTLA-4的异常表达可能在SLE疾病活动和发展过程中起重要作用。     

IFI 16及其信号转导途径在系统性红斑狼疮发病中的作用

目的 探讨干扰素诱导蛋白IFI 16及其Janus激酶/信号转导和转录激活因子(JAK-STAT)信号转导途径在系统性红斑狼疮(SLE)发病中的作用。方法 逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测35例SLE患者和16例正常人外周血单一核细胞(PBMC)中IFI 16的表达水平。体外培养PBMC,用JAK2抑制剂AG490抑制JAK-STAT信号转导途径,再用RT-PCR检测PBMC中IFI 16的表达水平。结果 与对照组比较,活动期、非活动期组IFI 16 mRNA的表达水平明显增高,差异均有统计学意义(P<0.001)。而活动期与非活动期组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。在用AG490抑制JAK-STAT信号转导途径后,活动期与非活动期组PBMC中IFI 16 mRNA的表达水平均明显下降,差异均有统计学意义(P<0.001),而正常组用药前后比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 IFI 16在SLE患者的异常高表达提示IFI 16基因可能为SLE的致病基因之一。     

可诱导共刺激分子在系统性红斑狼疮患者外周血T淋巴细胞的表达

目的 探讨可诱导共刺激分子(ICOS)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血T淋巴细胞的表达。方法 应用双色荧光抗体染色技术经流式细胞仪检测了33例SLE患者和16例正常人对照者外周血中T淋巴细胞表面ICOS的自然表达水平,同时收集SLE患者的实验室检查指标,并用SLE疾病活动指数(SLEDAI)来判定SLE患者疾病活动程度,比较分析不同组别SLE患者ICOS表达水平与SLEDAI的相关性。结果 活动期SLE组T淋巴细胞ICOS表达水平明显高于正常人对照组(P<0.01)和非活动期SLE组(P<0.01),非活动期SLE组与正常人对照组T淋巴细胞ICOS表达水平则差异无统计学意义(P>0.05)。活动期组与非活动期组SLE患者T淋巴细胞ICOS表达水平均与SLEDAI呈显著正相关(r=0.71,P=0.001、r=0.56,P=0.03)。结论 活动期SLE患者T淋巴细胞ICOS表达增高,ICOS可能与SLE的发病机制有关。     

TLR7及TLR9在SLE患者外周血单个核细胞内的表达

目的:检测Toll样受体7(TLR7)mRNA及TLR9 mRNA在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞内的表达.方法:运用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)半定量方法检测40例SLE患者(活动期25例,稳定期15例)和30名健康对照者外周血单个核细胞TLR7和TLR9 mRNA表达水平.结果:活动期SLE患者外周血单个核细胞TLR7 mRNA表达显著高于稳定期患者和正常人(Ps<0.01);活动期TLR9 mRNA表达与稳定期无统计学差异(P>0.05),但高于正常人(P<0.01).两者表达量与SLEDAI积分均呈正相关.结论:TLR7及TLR9在SLE的发病中可能起一定作用.     

SLE患者T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域甲基化状态的探索

目的 探讨系统性红斑狼疮(SLE)T淋巴细胞穿孔素基因启动子区域DNA甲基化状态及其在发病机制中的作用.方法 分离9例活动期SLE患者和7例正常人对照外周血CD4⁺与CD8⁺T细胞,并分别提取DNA.采用亚硫酸氢钠-测序法对CD4⁺与CD8⁺T细胞穿孔素基因启动子区域DNA甲基化水平进行检测.结果 在穿孔素基因启动子区域,正常对照组CD4⁺T细胞平均甲基化水平显著高于CD8⁺T细胞(P<0.05).活动期SLE患者CD4⁺T细胞平均甲基化水平显著低于正常对照组(P<0.05),而CD8⁺T细胞与正常对照组的差异则无统计学意义(P>0.05).结论 活动期SLE患者的CD4⁺T淋巴细胞的穿孔素基因启动子区域处于低甲基化状态.     

慢性荨麻疹患者外周血单一核细胞CC型趋化因子的表达

目的 研究CC型趋化因子家族中调节激活正常T细胞表达和分泌的细胞因子(RANTES)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、单核细胞趋化蛋白-3(MCP-3)和巨噬细胞炎症蛋白(MIP-1α)的mRNA在慢性荨麻疹患者外周血单一核细胞中的表达情况及其相互关系;探讨CC型趋化因子的水平与慢性荨麻疹患者血清总IgE和嗜酸粒细胞阳离子蛋白水平的相关性.方法 逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测31例慢性荨麻疹患者和22例正常人对照外周血单一核细胞中RANTES、MCP-1、MCP-3和MIP-1α的mRNA的表达水平.结果 ①与正常人对照相比,慢性荨麻疹患者外周血单一核细胞中RANTES、MCP-1、MCP-3和MIP-1α的mRNA表达水平均明显增高(P<0.001).②慢性荨麻疹患者中RANTESmRNA的表达水平与MCP-1、MCP-3、MIP-1α的水平呈正相关(P<0.05),MCP-1与MIP-1α的mRNA表达水平之间亦呈正相关(P<0.01),但MCP-1与MCP-3之间、MCP-3与MIP-1α之间的mRNA表达水平无显著相关(P>0.05).③慢性荨麻疹患者中RANTES的mRNA表达水平与血清总IgE和嗜酸粒细胞阳离子蛋白的水平呈负相关(P<0.05);MCP-1、MCP-3和MIP-1α的mRNA表达水平与血清总IgE和嗜酸粒细胞阳离子蛋白的水平之间无显著相关(P>0.05).结论 慢性荨麻疹患者外周血单一核细胞中RANTES、MCP-1、MCP-3和MIP-1α的mRNA表达水平的上调可能与荨麻疹的发病有关.     

DNA甲基转移酶与CD11a基因在SLE患者中的表达

目的 探讨DNA甲基转移酶(DNMT)的表达异常在SLE发病中的作用.方法 以半定量RT-PCR方法检测了SLE缓解期、活动期及正常人外周血单核细胞(PBMC)中DNMT及CD11a基因表达水平,并进行相关性分析.结果 SLE缓解期患者PBMC中DNMT1的表达水平显著低于正常人对照组(t=5.90,P<0.0001);活动期的表达水平也显著低于对照组(t=2.26,P=0.0001);缓解期与活动期比较差异无统计学意义(t=1.75,P=0.089).SLE缓解期、活动期及对照组PBMC中DNMT3A的表达水平差异无统计学意义,DNMT3B的表达水平极低.SLE缓解期PBMC中CD11a表达水平明显高于对照组(t=5.35,P<0.0001);活动期的表达水平显著高于缓解期(t=2.99,P=0.006)和正常人对照组(t=6.57,P<0.0001).DNMT1的降低与SLE疾病活动指数(SLEDAI)间无显著相关性(r=-0.34,P>0.05),CD11a的升高与SLEDAI间呈显著正相关(r=0.48,P<0.05),DNMT1与CD11a间无显著相关性(r=-0.18,P>0.05).结论 DNMT1表达水平降低在SLE的发病中可能起作用.但不是决定DNA甲基化状态的惟一因素.     

糖皮质激素对SLE患者Th1/Th2类细胞因子mRNA表达及产生的影响

目的 探讨糖皮质激素治疗对系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)中Th1/Th2类细胞因子mRNA表达及产生的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应和酶联免疫吸附试验检测糖皮质激素治疗前后SLE患者PBMC中Th1类细胞因子干扰素γ(IFN-γ)和Th2类细胞因子白介素4(IL-4)、白介素10(IL-10)mRNA表达和产生的变化.结果 经糖皮质激素治疗后SLE患者PBMC产生IFN-γ,IL-4和IL-10水平分别为(74.08±15.85)pg/mL,(246.43±45.25)pg/mL,(549.52±67.00)pg/mL;mRNA平均表达水平分别为0.3298±0.2181,0.4951±0.2938,0.8671±0.6620.治疗前IFN-γ,IL-4和IL-10水平分别为(113.5±27.6)pg/mL,(272.97±33.78)pg/mL,(625.32±104.61)pg/mL;mRNA平均表达水平分别为1.4094±0.6317,0.6872±0.4713,1.1758±0.6255;治疗后各细胞因子水平均较治疗前显著降低(P<0.01);但IFN-γ较IL-4,IL-10降低更为显著.结论 糖皮质激素可通过影响SLE患者细胞因子mRNA表达和产生,调节Th1/Th2类细胞因子网络平衡,可能为糖皮质激素治疗SLE的机制之一.     

B淋巴细胞激活因子及其受体mRNA与系统性红斑狼疮关联性研究

目的:研究建立实时荧光定量(RFQ)-PCR法测定B淋巴细胞激活因子(BLyS)及其受体mRNA含量的方法,探讨其在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单一核细胞(PBMC)中表达的检测价值。方法:在BLyS及其受体基因保守区设计特异性的引物和荧光探针,用反转录(RT)-PCR扩增目的片段实时检测产物的荧光强度,用所建立的RFQ-PCR方法检测23例SLE患者、23名正常人外周血BLyS及其受体mRNA表达。结果:SLE患者B淋巴细胞成熟抗原(BCMA)、穿膜蛋白活化物(TACI)和B淋巴细胞活化因子受体(BAFF)-RmRNA的表达明显高于正常人(P<0.01),活动期患者的表达高于缓解期(P<0.01),抗ds-DNA抗体阳性和尿蛋白阳性的SLE患者BCMA、TACI和BAFF-RmRNA的表达高于阴性患者(P<0.01)。结论:RFQ-PCR检测BLyS及其受体mRNA含量的方法具有较好的灵敏度和重复性;SLE患者BLyS、TACI和BAFF-RmRNA表达含量升高,提示BLyS、TACI和BAFF-R可能与SLE的发病有关。     

系统性红斑狼疮患者外周血多形核粒细胞磷脂酶A2、5-脂氧化酶和白三烯A4水解酶mRNA的表达

目的:探讨磷脂酶A2(cPLA2)、5-脂氧化酶(5-LO)和白三烯A4水解酶(LTA4-H)在系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血多形核粒细胞(PMNs)中的表达水平,及其在SLE发病机制中的作用及意义。方法:应用反转录(RT)-PCR检测28例活动期SLE患者和25名正常人PMNs中cPLA2、5-LO和LTA4-HmRNA的表达水平。结果:活动期SLE患者cPLA2、5-LO和LTA4-H的阳性表达率与正常对照组相比差异无统计学意义;但活动期SLE患者PMNs中的5-LOmRNA的平均表达水平(0.891±0.263)明显高于正常对照组(0.641±0.138),LTA4-HmRNA的平均表达水平(0.6582±0.2804)也明显高于正常对照组(0.3392±0.0751),二者差异均有显著性(P<0.01);活动期SLE组cPLA2的平均表达水平(0.630±0.268)与正常对照组(0.504±0.192)处于同一表达水平,差异无显著性。结论:活动期SLE患者外周血多形核粒细胞中5-LO和LTA4-HmRNA的表达增加,通过诱导白三烯B4(leukotrieneB4,LTB4)的产生参与SLE的发病过程。为特异性5-LO抑制剂或LTB4受体拮抗剂治疗SLE提供了理论依据。     

甲基结合蛋白MeCP2与mbd2在SLE患者中的表达

目的　探讨甲基结合蛋白MeCP2及去甲基化酶mbd2基因的表达异常在SLE发病中的作用。方法　以RT-PCR方法检测SLE缓解期、活动期患者与正常人外周血单一核细胞（PBMC）中MeCP2及mbd2基因的表达水平,并进行相关性分析。结果　SLE活动期、缓解期及正常人对照组PBMC中MeCP2的表达差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。SLE缓解期患者PBMC中mbd2的表达水平显著高于正常人对照组（t = 12.8,P ＜ 0.01）;SLE活动期患者PBMC中mbd2表达显著高于SLE缓解期（t = 20.0,P ＜ 0.01）。SLE患者PBMC中mbd2的表达与SLEDAI评分呈正相关（r = 0.737,P = 0.0001）。正常人对照组PBMC中mbd2的表达与MeCP2的表达呈正相关（r = 0.550,P = 0.0222）。结论　在正常情况下,MeCP2和mbd2的表达相互制约,在SLE患者中这种关系被破坏。     

系统性红斑狼疮患者T淋巴细胞CD70基因表达及其启动子区域甲基化状态的研究

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者T淋巴细胞CD70mRNA和蛋白的表达及CD70基因启动子DNA甲基化的状态。方法 分离15例活动期SLE患者、15例非活动期SLE患者和15例健康对照外周血CD4+与CD8+细胞,用实时定量逆转录PCR（RT-PCR）方法检测CD4+和CD8+细胞CD70 mRNA转录水平,流式细胞仪检测CD4+CD70+ 细胞和CD8+CD70+细胞百分率,亚硫酸氢钠基因测序法检测CD4+细胞和CD8+细胞CD70基因启动子区域甲基化水平。组间比较采用单因素方差分析,组间两两比较采用SNK-q检验。 结果 ①活动期、非活动期SLE患者CD4+细胞CD70 mRNA转录水平分别为0.82 ± 0.12和0.73 ± 0.11,明显高于健康对照组（0.45 ± 0.09）,F = 53.017,P < 0.01,活动期SLE患者CD4+细胞的CD70 mRNA转录水平显著高于非活动期SLE患者（P < 0.05）。活动期、非活动期SLE患者外周血CD4+CD70+细胞百分率分别为80.30% ± 11.04% 和66.80% ± 3.98%,明显高于健康对照组（12.48% ± 3.45%）,F = 311.517,P < 0．01,活动期SLE患者CD4+CD70+细胞百分率显著高于非活动期SLE患者（P值 < 0.05）。SLE患者外周血CD70+CD4+细胞百分率与SLE疾病活动度呈显著正相关（r = 0.792,P = 0.000）。活动期、非活动期SLE患者组的CD4+细胞CD70基因启动子序列-600 ~ -300 bp 区域平均甲基化水平分别为0.32 ± 0.05和0.36 ± 0.05,明显低于健康对照组（0.62 ± 0.05）,F = 152.64,P < 0.01,活动期平均甲基化水平明显低于非活动期SLE患者组（P < 0.05）。结论 CD4+细胞CD70基因启动子区域处于低甲基化状态,这种低甲基化状态可能是CD70过度表达的直接原因。     

系统性红斑狼疮患者B淋巴细胞刺激因子及其受体BAFF-R的表达

目的 探讨系统性红斑狼疮（SLE）患者外周血单一核细胞（PBMC）中B淋巴细胞刺激因子（BLyS）及其受体BAFF—R（属于肿瘤坏死因子家族的B细胞活化因子受体）的表达情况。方法 采用半定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）以及免疫印迹法（westem blot）分别检测28例SLE活动期患者及24例SLE稳定期患者PBMC中BLyS与BAFF—RmRNA及蛋白的表达水平，并以21例健康志愿者作对照；同时将两者mRNA及蛋白的表达水平与SLE疾病活动程度进行相关分析。结果 SLE活动期、稳定期患者PBMC中BLyS与BAFF—R mRNA及蛋白的表达水平均明显高于正常人（P〈0．01），活动期患者的表达高于稳定期患者（P〈0．01）；BLyS mRNA及蛋白的表达与狼疮活动指数（SLEDAI）呈显著正相关（P〈0．01），BAFF—R mRNA及蛋白的表达与SLEDAI无明显相关性（P〉0．05）。结论 BLyS及其受体BAFF—R可能参与了SLE的发病机制。     

寻常性银屑病患者外周血单一核细胞TLR2,TLR4,TLR9表达的初步研究

目的研究寻常性银屑病患者外周血单一核细胞(PBMCs)Toll样受体2(TLR2) mRNA,TLR4 mRNA和TLR9 mRNA的表达情况。方法采用实时荧光定量PCR方法检测30例寻常性银屑病患者(其中发病与感染相关者10例,与感染无关者20例)和25例正常人PBMCs内TLR2,TLR4,TLR9 mRNA的水平。结果与感染有关银屑病组、与感染无关银屑病组较正常对照组TLR9 mRNA水平差异有显著性(P值分别为0.036和0.016),与感染无关银屑病组与正常对照组比较差异无显著性(P>0.05);TLR2和TLR4的水平在三组之间差异无显著性(P>0.05)。结论TLR9的表达在与感染相关银屑病患者中显著升高,提示感染因素,特别是细菌CpGDNA在寻常性银屑病中的作用可能通过TLR9介导。     

IκK-α/β、IκB-αm RNA在系统性红斑狼疮患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的:探讨系统性红斑狼疮(SLE)患者外周血单个核细胞中核因子(NF)-κB信号通路中IκB激酶(IκK)-α、IκKβ、IκB-α mRNA的定量表达水平,及与SLE病情活动程度的相关性。方法:采集110例SLE患者和50名正常人外周血,抽提总RNA并反转录成cDNA,运用实时定量PCR法在基因测序仪上检测IκK-α、IκK-β、IκB-α mRNA的表达水平。结果:①SLE患者组的IκK-α、IκK-β mRNA定量表达水平显著高于正常对照组(P0.01);未使用糖皮质激素的初发SLE患者IκK-α、IκK-β mRNA定量表达水平显著高于已使用糖皮质激素的SLE患者(P0.05);②SLE患者组的IκB-α mRNA定量表达水平显著低于正常对照组(P0.01);未使用糖皮质激素的初发SLE患者IκB-αmRNA定量表达水平显著低于已使用糖皮质激素的SLE患者(P0.01);③IκB-α mRNA的表达与IκK-α、IκK-β mRNA表达水平呈负相关(P=0.000);④IκB-α mRNA的表达与SLE疾病活动指数(SLEDAI)积分呈负相关(P0.01)。结论:SLE患者体内NF-κB信号通路处于高活性状态,且与疾病活动程度相关,阻抑NF-κB过度活化可能有利于SLE的治疗。     

甲氨蝶呤对寻常性银屑病患者外周血CD14~+单核细胞Toll样受体2,4表达的影响

目的 探讨Toll样受体(TLR)2、TLR4在寻常性银屑病发病巾的作用及甲氨蝶呤对其表达的影响,探讨甲氨蝶呤治疗寻常性银屑病的机制.方法 采用流式细胞术检测43例寻常性银屑病患者治疗前、甲氨蝶呤治疗4周后、8周后外周血CD14~+单核细胞TLR2、TLR4的表达情况,以30例正常人作为对照组.结果 治疗前寻静性银屑病患者外周血中CD14~+单核细胞TLR2表达率为(92.6±4.3)%,TLR4表达率为(48.5±4.6)%,均较正常人对照组明显增高(P值均＜0.01).进行期寻常性银屑病患者TLR2、TLR4的表达率分别为(97.5±4.1)%、(55.3±5.8)%,静止期患者分别为(87.6±5.6)%、(40.7±7.1)%,两组之间TLR2、TLR表达率差异均有统计学意义(P值均＜0.05).经甲氨蝶呤治疗后TLR2、TLR4的表达率分别为(79.6±6.7)%、(34.6±5.9)%,明显低于治疗前(P值均＜0.05).TLR2和TLR4表达率与银屑病PASI评分无明显相关性(r值分别为0.24,0.27,P值均＞0.05).结论 TLR2、TLR4及其介导的天然免疫应答在银屑病发病机制中可能起重要作用,而甲氨蝶呤可能通过抑制TLR2、TLR4表达而发挥作用.