三氧化二砷通过Akt信号通路抑制HGC-27细胞的增殖并促进其凋亡

目的探讨三氧化二砷对HGC-27细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制。方法用1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L的三氧化二砷作用于胃癌细胞HGC-27、MKM28、SGC7901,同时以只加入二甲基亚砜(DMSO)溶液的细胞作为对照组,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖情况,筛选出受到抑制作用最大的细胞继续研究,并计算三氧化二砷半数抑制浓度。用三氧化二砷半数抑制浓度作用于人胃癌细胞,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测细胞中活化的含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved Caspase-3)、蛋白激酶B(Akt)、磷酸化蛋白激酶B(p-Akt)表达水平。用50 ng/ml的Akt信号通路激活剂胰岛素样生长因子-1(IGF-1)及半数抑制浓度的三氧化二砷联合作用于人胃癌细胞作为联合组,以半数抑制浓度的三氧化二砷作用组作为对照,MTT检测细胞增殖情况,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blotting检测Cleaved Caspase-3、Akt、p-Akt表达水平。结果 1μmol/L、2μmol/L、4μmol/L、8μmol/L、16μmol/L的三氧化二砷能够抑制胃癌细胞HGC-27、MKM28、SGC7901的生长,抑制作用从强到弱依次为:HGC-27、MKM28、SGC7901,半数抑制浓度依次为:(9.34±1.57)μmol/L、(12.92±1.08)μmol/L、(13.24±1.34)μmol/L,后续实验选用9μmol/L的三氧化二砷作用于HGC-27细胞。9μmol/L的三氧化二砷作用后细胞凋亡率从(6.35±2.14)%提高到(39.32±6.54)%,细胞中Cleaved Caspase-3升高,p-Akt水平降低。联合组细胞较单用三氧化二砷组细胞增殖能力增强,细胞凋亡数量减少,细胞中Cleaved Caspase-3水平降低,p-Akt水平升高。结论三氧化二砷能够抑制胃癌细胞增殖,促进胃癌细胞凋亡,激活Akt信号通路能够部分逆转三氧化二砷对胃癌细胞增殖、凋亡的影响。     

睾酮和比卡鲁胺对雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNcap-FCG生长的影响

目的 观察不同浓度的睾酮及雄激素拮抗剂比卡鲁胺对雄激素依赖性前列腺癌细胞株LNcap-FCG生长的影响。方法 体外培养前列腺癌细胞株LNcap-FCG，加入睾酮，使各组终浓度为10^-10、10^-9、10^-8、10^-7、10^-6、10^-5mol／L。另外，在以上浓度的各睾酮组中同时加入比卡鲁胺，使比卡鲁胺的终浓度为10、50μmol／L，应用5-溴脱氧尿核苷掺入法测定细胞的生长水平。结果 培养72h后，对照组LNcap-FCG细胞的吸光度（A）值为1.2411，睾酮在低浓度（10^-10、10^-9、10^-8、10^-7mol／L）时对LNcap-FCG细胞的生长起促进作用，A值分别为1.4247、1.5463、1.5110、1.4609；而在较高浓度（10^-6、10^-5mol／L）时，则对LNcap-FCG细胞的生长起抑制作用，A值分别为1.1239、0.9967；比卡鲁胺在两种浓度时对LNcap-FCG细胞的生长皆有抑制作用，而且浓度越高抑制作用越强，与对照组比较，差异均具有统计学意义。结论 在体外培养条件下，睾酮对LNcap-FCG细胞的生长依浓度关系呈双向作用，比卡鲁胺依浓度关系抑制LNcap-FCG细胞的生长。     

槲皮素对结肠癌HT-29细胞增殖及周期的影响

目的:探讨槲皮素(Qu)对结肠癌HT-29细胞增殖和凋亡影响的分子机制．方法:以40×10-6,80×10-6,160×10-6mol／L的槲皮素作用结肠癌HT-29细胞,以溶剂为对照组,采用MTT试验、流式细胞分析、免疫细胞化学和RT-PCR等方法观察槲皮素对结肠癌细胞增殖,细胞周期,细胞凋亡,及Caspase-3 蛋白表达、Caspase-3、bcl-2、bax mRNA表达的影响．结果:40×10-6mol／L Qu明显促进HT-29细胞增殖(P<0．05),80×10-6,160×10-6mol／L Qu 明显抑制细胞增殖(P<0．05或P<0．01),呈时间 (?)效应．40×10-6,80×10-6,160×10-6mol/L槲皮素作用HT-29细胞72 h,其增殖率分别为 (111．8±9．6)％,(64．6±8.3)％和(26．1±5．7)％, G0／G1期细胞分别为(32．7±5．4)％、(58．1± 18．3)％和(71．6±20．8)％,S期细胞分别为(48．6 ±17．5)％、(27．4±13．4)％和(15．4±10．1)％,细胞凋亡率分别为(7．0±1．3)％、(15．6±3．6)％和(26．4±6．2)％,80×10-6,160×10-6mol／L能明显提高G0／G1期细胞(P<0．01),明显降低S期细胞(P<0．01),细胞凋亡明显增加(P<0．01)．80 ×10-6,160×10-6mol／L的Qu增加细胞中bax mRNA,Caspase-3 mRNA及其蛋白的表达,降低 bcl-2 mRNA的表达．40×10-6mol／L的Qu增加 Caspasc-3 mRNA表达,但其蛋白表达未见明显增加,细胞增殖明显增加．结论:槲皮素能促进结肠癌HT-29细胞增殖, 也能诱导细胞凋亡,其机制可能是通过上调 Caspase-3和bax表达,降低bcl-2表达来实现的．     

熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的 体外观察熊果酸对肝星状细胞增殖与凋亡的影响,探讨熊果酸诱导肝星状细胞凋亡的可能作用机制. 方法 将不同浓度熊果酸作用于肝星状细胞HSC-T6及肝细胞L02,分别在药物作用24、48、72 h后用四甲基偶氮唑盐法检测熊果酸对HSC-T6及L02细胞增殖的影响;流式细胞仪检测熊果酸对HSC-T6凋亡的影响;光学显微镜观察熊果酸作用后细胞形态学变化情况;免疫细胞化学法检测HSC-T6中Bcl-2、Bax和Caspase-3蛋白的表达情况. 结果 各种浓度的熊果酸均可抑制HSC-T6细胞的增殖,且呈剂量-时间依赖性;当熊果酸浓度为25、50、75μmol/L时可促进L02细胞增殖,浓度＞75μmol/L则表现为抑制L02细胞增殖.在病理形态学方面,熊果酸作用HSC-T6细胞48 h后,光学显微镜下可见细胞缩小变圆、核浓缩等.25、50、75 μmol/L熊果酸作用HSC-T6细胞48 h后,流式细胞仪检测显示细胞凋亡率分别为10.30%±3.85%、21.87%±4.46%、31.33%±6.18%,比对照组(2.93%±1.60%)明显升高(P＜0.01).免疫细胞化学显示Bax及Caspase-3蛋白表达较对照组升高(P＜0.05),且呈剂量依赖性,而Bcl-2蛋白表达水平与对照组无明显差异(P＞0.05).结论 在体外熊果酸可较明显地抑制HSC-T6细胞增殖,诱导其凋亡;对L02细胞的生长具有双向调节作用.熊果酸诱导HSC-T6细胞凋亡可能与降低Bcl-2/Bax比值、激活Caspase-3蛋白有关.     

同型半胱氨酸硫内酯诱导半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12途径对内皮细胞凋亡的影响

目的探讨同型半胱氨酸硫内酯(HTL)是否通过半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)12凋亡途径影响内皮细胞生长。方法体外培养内皮细胞ECV304,先将0、50、100和200μmol/L的HTL干预细胞24h,MTT法检测细胞增殖抑制率;随后以200μmol/L的HTL干预0h、3h、16h和24h,流式细胞术检测细胞周期和细胞凋亡情况,再以200μmol/L HTL刺激细胞为观察组(3、16和24h),不加HTL刺激的细胞为对照组,2组分别采用免疫组织化学染色和Western Blot法检测Caspase-12、Caspase-3和Bcl-2蛋白表达情况。结果 100和200μmol/L的HTL作用细胞24h,细胞活性分别为0.76±0.01、0.73±0.01;200μmol/L HTL对细胞的抑制作用具有时间依赖性,与0h比较,3、16和24h的细胞活性下降明显(0.87±0.04、0.83±0.04、0.78±0.01 vs 0.90±0.07,P<0.01)。与对照组比较,观察组Caspase-12蛋白、Caspase-3蛋白表达增加(P<0.05,P<0.01);Bcl-2蛋白先增高后降低(P<0.01)。结论 Caspase-12途径参与HTL致细胞凋亡的过程,Bcl-2也参与其调控。     

不同浓度5-氮胞苷对小鼠骨髓间充质干细胞的诱导作用

目的探讨5-氮胞苷（5-aza）对小鼠骨髓间充质干细胞（MSCs）的最佳诱导浓度。方法分离2周龄小鼠胫骨、股骨,冲洗出骨髓,采用Ficoll淋巴细胞分离液密度梯度离心和贴壁培养的方法获得MSCs。取传第2代MSCs培养48h后分别加入3、5、10、20、50μmol／L5-aza进行诱导,设为3、5、10、20、50μmol／L组。继续培养3周后观察细胞形态变化,免疫细胞化学法检测心肌特异性蛋白α-actin表达。结果5-aza3、5μmol／L组α-actin阳性率分别为0．88％±0．52％、2．61％±0．96％,两组细胞形态均无明显改变;10μmol／L组可见细胞突起回缩,α-actin呈强阳性表达,阳性率为30．57％±1．82％;20、50μmol／L组细胞已脱落。结论MSCs经5-aza体外诱导分化,可获得形态类似、表达心肌特异性蛋白的心肌样细胞,且以10μmol/L浓度诱导作用最佳。     

Caspase-3抑制剂联合葛根素对颈椎间盘纤维环细胞增殖活力及磷酸化信号转导与转录因子表达的影响

目的探讨含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase)-3抑制剂联合葛根素对颈椎间盘纤维环细胞增殖活力及磷酸化信号转导与转录因子(p-STAT)3表达影响。方法分离培养大鼠颈椎间盘纤维环细胞,用白细胞介素(IL)-1β诱导颈椎间盘纤维环细胞,用葛根素、Caspase-3抑制剂、葛根素联合Caspase-3抑制剂分别处理细胞,Western印迹法检测细胞中酶切Caspase-3、信号转导与转录因子(STAT)3、p-STAT3表达水平,噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖活力,流式细胞术检测细胞凋亡。结果 IL-1β作用后的颈椎间盘纤维环细胞光密度值(OD值)由原来的(1.12±0.13)降至(0.63±0.07),细胞凋亡率从(3.15±0.36)%升至(39.54±1.69)%。葛根素和Caspase-3抑制剂单独作用后的细胞OD值分别升至(0.79±0.05)、(0.85±0.07),而细胞凋亡率分别降至(22.47±1.32)%、(20.84±2.01)%;葛根素和Caspase-3抑制剂联合使用后细胞OD值升到(1.05±0.11),细胞凋亡率降为(14.32±1.12)%。葛根素、Caspase-3抑制剂单独作用或者是联合使用后细胞中p-STAT3/STAT3水平较模型组明显下降,并且二者联合使用后p-STAT3/STAT3水平下降最多。结论 Caspase-3抑制剂、葛根素能够降低IL-1β对颈椎间盘纤维环细胞增殖活力抑制作用,抑制IL-1β诱导的颈椎间盘纤维环细胞凋亡,且二者联合使用效果更明显,STAT3可能是其作用机制之一。     

辛二酰苯胺异羟肟酸对人肝癌SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响

目的：探讨辛二酰苯胺异羟肟酸（SAHA）对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养SMMC-7721细胞,给予不同浓度（2.5、5.0和7.5μmol/L）SAHA处理12~72h,采用噻唑蓝（MTT）比色法检测细胞增殖;加入SAHA（5.0和7.5μmol/L）处理SMMC-7721细胞24h或48h,使用流式细胞仪检测细胞凋亡和细胞周期的变化;采用RT-PCR法检测p53、bcl-2及bax基因mRNA水平;采用分光光度法检测Caspase-3蛋白表达。结果经5.0μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时,细胞增殖率较对照下降了25.8%和28.8%,经7.5μmol/L SAHA处理细胞24h和48h时,下降了30.6%和48.6%;经5.0μmol/L或7.5μmol/L SAHA处理细胞24 h后,S期细胞从对照水平（24.33±0.17）%分别显著上升至（32.08±0.160）%和（33.96±0.20）%,（P=0.00）,早期凋亡率均由（0.19±0.04）%显著上升至（1.67±0.59）%和（8.92±0.94）%,（P=0.03）,而在48h后,S期细胞由（24.33±1.18）%分别显著上升至（32.25±0.53）%和（34.61±0.08）%,早期凋亡率由（0.19±0.04）%分别显著上升至（14.49±2.26）%和（26.23±0.55）%,（P=0.00）;SAHA能够上调p53、bax基因mRNA水平,下调bcl-2基因mRNA水平;经5.0μmol/L和7.5μmol/L SAHA处理细胞24h后,Caspase-3蛋白活性由对照水平（0.41±0.07）分别上升至（0.81±0.02）,（P=0.01）和（1.09±0.21）,（P=0.00）,而在处理48 h后,Caspase-3蛋白活性由对照水平分别上升至（1.43±0.23）和（2.01±0.01）,（P均=0.00）。结论 SAHA通过影响p53、bcl-2及bax凋亡相关基因水平及Caspase-3蛋白的活性,对人肝癌细胞株SMMC-7721细胞具有抑制增殖和促进凋亡的作用。     

白花丹素对涎腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移、凋亡的干预作用及其机制

目的 观察白花丹素（PLB）对涎腺腺样囊性癌细胞增殖、迁移、凋亡的干预作用，并探讨其作用机制。方法 取涎腺腺样囊性癌SACC-83细胞进行体外培养，将细胞分为0、12.5、25、50μmol/L PLB组，分别加入含0、12.5、25、50μmol/L PLB的DMSO培养基培养24 h。采用乳酸脱氢酶（LDH）释放法检测细胞毒性；CCK-8实验观察细胞增殖能力；Transwell试验观察细胞迁移能力；TUNEL染色法观察细胞凋亡情况；荧光探针法检测活性氧（ROS）水平，微量法检测丙二醛（MDA）含量；荧光探针法检测线粒体膜电位；Western blotting法检测细胞凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Cleaved Caspase-3、Caspase-3表达，计算Bcl-2/Bax、Cleaved Caspase-3/Caspase-3。结果 12.5、25、50μmol/L PLB组细胞LDH释放量均高于对照组，其中25、50μmol/L PLB组高于12.5μmol/L PLB组，50μmol/L PLB组高于25μmol/L PLB组（P均<0.05）。不同浓度PLB组细...     

维生素E琥珀酸酯联合化疗药物对胰腺癌细胞的体外抑制作用

目的检测维生素E琥珀酸酯(VES)联合化疗药物对胰腺癌细胞的体外抑制作用,并初步分析其机制。方法人胰腺癌细胞BxPc-3以VES联合化疗药物处理24h,VES浓度为5μg/ml、10μg/ml和20μg/ml。化疗药物的浓度分别为5-FU:100μmol/L,130μmol/L,260μmol/L和400μmol/L;丝裂霉素(MMC):0.5μmol/L,1μmol/L,3μmol/L和10μmol/L以及顺铂:5μmol/L,10μmol/L和20μmol/L,以及不同VES浓度分别与不同浓度不同化疗药物联合应用。以MTT法测定对细胞增殖的抑制作用,以流式细胞仪分析细胞凋亡率和细胞表面Fas表达。结果(1)单用不同浓度的VES和化疗药物均可显著抑制胰腺癌细胞的生长,并表现出剂量依赖关系(P<0.05)。二者合用时产生协同效应,抑制作用较单用相应浓度的药物显著增强,并且随相应药物浓度的增加而增强(P<0.05)。(2)BxPc-3细胞的自然凋亡率为0.4%,20μg/mlVES作用24h后凋亡率为21.0%,3种化疗药物最高浓度作用后的凋亡率分别为17.5%,12.4%和18.8%。VES与3种化疗药物最高浓度联合应用后的凋亡率分别为37.5%,30.6%和51.4%。(3)VES联合化疗药物作用后胰腺癌细胞表面Fas表达增强。结论VES联合化疗药物对胰腺癌细胞具有显著的凋亡诱导作用,其机制可能与细胞表面Fas表达上调有关。     

槲皮素对卵巢癌细胞HO-8910增殖的抑制作用及机制

目的观察槲皮素体外对卵巢癌HO-8910细胞增殖的抑制作用,并探讨其机制。方法将体外培养卵巢癌HO-8910细胞用0、10、20、40、80、160μmol／L的槲皮素处理。用MTF法测定细胞增殖抑制率,流式细胞仪检测细胞周期分布及细胞凋亡率,细胞免疫化学染色法检测细胞内Fas及HSP70的表达,分光光度计法检测细胞内Caspase-3和Csapase-8的活性。结果浓度10～160μmol／L的槲皮素均能抑制人卵巢癌HO-8910细胞的增殖,并有明显的时间和剂量依赖性（P〈0．05）。不同浓度的槲皮素作用48h后各组细胞凋亡率随槲皮素浓度增高,HSP70表达下调,FAS表达增强,Caspase-3、8活性上调,均呈剂量依赖性（P均〈0．05）。结论槲皮素能抑制卵巢癌细胞的增殖。其机制可能与槲皮素通过提高细胞内Fas的表达,降低HSP70的表达及诱导Caspase-3、8的活化及诱导卵巢癌细胞凋亡有关。     

非对称性二甲基精氨酸通过Caspase-3信号转导通路诱导晚期内皮祖细胞凋亡

目的 观察非对称性二甲基精氨酸对晚期内皮祖细胞的诱导凋亡作用,通过检测Caspase-3的活性探讨其诱导凋亡的信号转导通路.方法 从脐带血中分离培养晚期内皮祖细胞.Dil-ac-LDL和FITC-UEA-I双荧光染色法鉴定其内皮属性;不同浓度非对称性二甲基精氨酸(0、1、5、10和30μmol/L)作用于细胞48h,激光共聚焦显微镜观察细胞形态变化,流式细胞仪测定细胞凋亡率;不同浓度非对称性二甲基精氨酸作用于细胞48h或10μmol/L非对称性二甲基精氨酸作用于细胞不同时间(0、3、6和9h),酶标仪测Caspase-3活性;加入Caspase-3特异性抑制剂(ac-DEVD-CHO)半小时后加入10μmol/L非对称性二甲基精氨酸作用48h,流式细胞仪测细胞凋亡率.结果 非对称性二甲基精氨酸作用于晚期内皮祖细胞后,可见典型的细胞凋亡形态学改变,且随非对称性二甲基精氨酸浓度增加细胞凋亡增加.在此过程中,Caspase-3被活化,其活化程度随非对称性二甲基精氨酸浓度增加及作用时间延长而升高.加入Caspase-3特异性抑制剂后细胞凋亡减少.结论 非对称性二甲基精氨酸可呈浓度依赖性诱导晚期内皮祖细胞凋亡,此作用可能是通过激活内源性凋亡途径Caspase-3信号转导通路实现的.     

姜黄素对人子宫肌瘤细胞增殖、凋亡的影响及机制探讨

目的观察姜黄素对人子宫肌瘤细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其机制。方法将对数生长期的人子宫肌瘤细胞分为两组,观察组加入终浓度分别为10、50、100μmol/L的姜黄素,对照组加入1‰的二甲基亚砜(DM-SO),分别于培养12、24、48、72 h后,采用MTT法测算细胞增殖抑制率,用流式细胞术检测细胞凋亡率。将对数生长期的细胞随机分为3组,A组加入终浓度100μmol/L的姜黄素,B组加入100μmol/L的线粒体ATP敏感钾通道开放剂二氮嗪及100μmol/L的姜黄素,C组加500μmol/L的线粒体ATP敏感钾通道阻断剂5-羟基癸酸脱氢酶(5-HD)及100μmol/L的姜黄素;培养48 h后,分别采用MTT法和流式细胞仪测算细胞增殖抑制率和凋亡率。结果随着姜黄素浓度的增加和作用时间的延长,细胞增殖抑制率逐渐减低(P均<0.05),而细胞凋亡率逐渐增加(P均<0.05)。A组细胞增殖抑制率和凋亡率分别为75.65%±9.42%、41.82%±6.12%,B组分别为17.66%±2.45%、32.46%±6.71%,C组分别为40.67%±5.46%、74.42%±8.47%,B组与A、C组比较,P均<0.05。结论姜黄素可抑制人子宫肌瘤细胞增殖并促进其凋亡,该作用可能与姜黄素抑制线粒体ATP敏感钾通道有关。     

淫羊藿提取物IC163对K562白血病细胞增殖抑制和凋亡诱导效应观察

目的:观察淫羊藿提取物IC163对K562白血病细胞是否具有增殖抑制和诱导凋亡作用。方法:用MTT实验观察不同浓度的IC163对K562细胞增殖抑制率的影响,用Hochest33258染色法和Annexin V-FITC和PI染色法检测凋亡细胞的百分率,用Western印迹检测药物干预下的K562细胞Caspase-3蛋白表达。结果:IC163以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖,其抑制K562细胞增殖的IC50为18.1μmol/L;IC163以浓度依赖性方式诱导K562细胞凋亡并伴有Caspase-3蛋白表达上调和裂解激活。结论:IC163能够以浓度依赖性方式有效地抑制K562细胞增殖并诱导K562细胞凋亡,其诱导K562细胞的机制可能与Caspase-3凋亡信号启动有关。     

帕瑞昔布对人胰腺癌细胞株BxPC-3、AsPC-1增殖凋亡的影响及其机制

目的:研究帕瑞昔布(parecoxib,PCB)对人胰腺癌细胞株BxPC-3和AsPC-1的增殖、凋亡及其可能的分子机制.方法:BxPC-3、AsPC-1细胞用不同浓度PCB的培养液孵育后,利用MTT法测定细胞活性,计算IC50值,TUNEL法检测处理后细胞的凋亡情况,RT-PCR验证相关蛋白的变化表达.结果:PCB对两种细胞生长呈时间和计量依赖性抑制;PCB处理后BxPC-3、AsPC-1两种细胞IC50值为:400.98μmol/L±10.78μmol/L、256.3μmol/L±2.98μmol/L;TUNEL法检测证明凋亡率增加;RT-PCR显示COX-2表达明显降低.结论:PCB可以抑制胰腺癌细胞增殖,并诱导其凋亡生长,其可能机制是通过抑制COX-2表达来实现的.     

卡维地洛对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的观察卡维地洛对肝星状细胞增殖与凋亡的影响。方法以不同剂量卡维地洛(CVD)作用于肝星状细胞(HSC-T6)。CCK-8法检测CVD对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测CVD对细胞凋亡的影响。统计学处理采用t检验。结果 CVD作用于HSC-T6后,CCK-8法检测模拟对照组细胞增殖抑制率为2.18±0.60,CVD10μmol/L组细胞增殖抑制率为6.30±1.44,CVD20μmol/L组细胞增殖抑制率为7.75±1.33。提示细胞增殖抑制率随CVD浓度的增高而增高。CVD10μmol/L组及CVD20μmol/L组与模拟对照组相比,差异有统计学意义。流式细胞术检测模拟对照组细胞凋亡率为(2.30±0.08)%,CVD10μmol/L组细胞凋亡率为(3.54±0.50)%,CVD20μmol/L组细胞凋亡率为(4.25±0.13)%,提示细胞凋亡率随药物浓度的增大而增加。CVD10μmol/L组及CVD20μmol/L组与模拟对照组相比,差异有统计学意义。结论 CVD可以抑制HSC-T6的增殖,促进HSC-T6的凋亡。     

和厚朴酚对肺癌细胞紫杉醇耐药的逆转作用及对Notch信号通路的影响

目的 探究和厚朴酚对肺癌细胞紫杉醇耐药的逆转作用及对Notch信号通路的影响。方法 以不同浓度和厚朴酚(0、10、20、30、40、50μmol/L)联合5 nmol/L紫杉醇处理紫杉醇耐药的肺癌细胞(A549/Taxol),采用MTT检测细胞存活率,筛选试验浓度。再将A450/Taxol细胞分为对照组、紫杉醇组、和厚朴酚+紫杉醇组和Notch信号通路激活剂(Jagged1/FC)组,检测各组细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡,划痕实验检测细胞迁移,并采用Western Blotting法检测细胞增殖、凋亡、迁移相关蛋白及Notch信号通路蛋白表达。结果 5 nmol/L紫杉醇与20、30、40、50μmol/L和厚朴酚联用时,细胞存活率明显降低,其中30μmol/L和厚朴酚抑制效果最佳,选用此浓度进行后续实验;与紫杉醇组比较,和厚朴酚+紫杉醇组细胞存活率、细胞迁移能力降低,细胞凋亡率升高,c-Myc、Cyclin D1、N-cadherin、Vimentin、Notch1、Jagged1和Hes1表达下调,cleaved Caspase-3、cleaved Caspase-9和E-c...     

阿托伐他汀对人肺腺癌细胞的凋亡作用及其调控机制研究

目的研究阿托伐他汀对人肺腺癌(A549)细胞的抑制作用,并探讨可能的作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度(0、10、20、40μmol/L)阿托伐他汀对A549细胞增殖的影响; AnnexinV-FITC/PI双染后流式细胞术检测不同浓度阿托伐他汀(0、10、20、40μmol/L)对A549细胞凋亡的影响;分光光度法检测不同浓度阿托伐他汀(0、10、20、40μmol/L)对A549细胞caspase-3活性的影响。结果阿托伐他汀抑制A549细胞的增殖,随着浓度的增加,时间的延长,其抑制作用逐渐增强(P0.01)。阿托伐他汀能有效地诱导A549细胞的凋亡,随着浓度的增加,凋亡率增加。阿托伐他汀显著增加A549细胞的caspase-3酶的活性,且呈剂量相关性。结论阿托伐他汀抑制人肺癌A549细胞增殖,促进其凋亡,并且呈明显的时间和剂量依赖,阿托伐他汀通过增加细胞Caspase-3的活性诱导A549细胞凋亡。     

SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞凋亡的影响及可能机制

目的观察SIRT1抑制剂sirtinol对前列腺癌DU145细胞系细胞凋亡和细胞凋亡关键调控因子(Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3)表达变化的影响,探讨SIRT1在前列腺癌发生的可能机制。方法体外培养DU145细胞,实验分对照组(DMSO组)和sirtinol组(终浓度为10,25和50μmol/L),Western印迹检测DU145细胞SIRT1蛋白表达水平;流式细胞术检测细胞凋亡;Western印迹检测DU145细胞中细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达。结果与对照组相比,随着sirtinol浓度的增加,SIRT1蛋白表达水平逐渐降低,细胞凋亡比例增加,诱导细胞发生凋亡。不同浓度sirtinol作用DU145细胞后Bcl-2蛋白表达减少,且随剂量增加表达越低;Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比率降低;伴随Cytochrome C的释放和Caspase-3的激活。结论下调SIRT1表达诱导前列腺癌细胞DU145细胞凋亡,其机制可能与改变细胞凋亡关键调控因子Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3的蛋白表达相关。     

5-Aza-CdR对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及抑癌基因RUNX3表达的影响

目的:研究抑癌基因RUNX3在人结肠癌细胞中的表达情况,探讨5-氮-2′-脱氧胞苷 (5-Aza-CdR)对人结肠癌Lovo细胞增殖凋亡及 RUNX3表达的影响．方法:用特异性甲基转移酶抑制剂5-Aza-CdR 0．4,4,40μmol/L处理人结肠癌细胞株Lovo 3 d,继续常规培养5d后,采用四唑盐(MTT) 比色观察细胞经药物处理前后的生长活性．以半定量RT-PCR检测细胞处理前后抑癌基因 RUNX3 mRNA的表达,应用流式细胞仪进行细胞凋亡率的检测结果:人结肠癌细胞Lovo经处理后,与对照组比较,5-Aza-CdR 0．4,4,40 μmol/L均能明显抑制肿瘤细胞生长,随5-Aza-CdR浓度增加,细胞生长速率下降;对照组Lovo细胞未见 RUNX3 mRNA表达．经药物处理后的细胞均检出该种mRNA的重新表达,其mRNA的表达相对量分别为0．46±0．06,0．71±0．06,0．84 ±0．07,与药物存在剂量依赖性(F=168．4, P<0．01):对照组细胞凋亡率为2．92％±0．93％, 5-Aza-CdR 0．4,4,40 μmol／L处理后Lovo细胞凋亡率分别为10．95％±2．09％,17．61％± 1．51％,26．60％±1．89％,与对照组相比较均有统计学意义(P<0．01),且凋亡率与5-Aza-CdR 剂量呈正相关(F=145．7,P<0．01)．结论:在人结肠癌细胞株Lovo中,基因 RUNX3可能因过甲基化而导致转录失活, RUNX3基因重新表达能抑制细胞生长,并能诱导部分细胞凋亡．