用优化RT-PCR高度敏感地检测血液样品中的病毒RNA基因组

聚合酶链反应（PCR）是扩增小量 DNA和RNA的最有力的工具,并广泛应用于核酸研究领域。然而RNA很容易因RNA酶的污染而降解,并且,在进行PCR扩增之前.RNA必须用逆转录酶反转录成 DNA,因此,RNA检测的敏感性一般比DNA低两个数     

唾液中HAV RNA的检测

鉴于唾液标本易于采集，甲型肝炎爆发时的血清学调查常依靠唾液检测。先前研究显示，急性感染期病人的唾液具有传染性。法国Paul Brousse医院Mackiewicz等检测了唾液中所含的甲型肝炎病毒（HAV）及其对于序列研究的可靠性。     

血清抗—HCV在乙肝病毒感染者中的检测

新近几年病毒性肝炎的研究有很大进展,尤其是非甲非乙型肝炎,已正式命名为丙型病毒性肝炎(HC)和戊型病毒性肝炎(HE)。我国是乙型病毒性肝炎(HB)的高发区,为了了解乙型肝炎病毒(HBV)感染者中丙型肝炎病毒(HCV)混合感染的状况,作者于1991～1992年对41例住院乙肝病毒感染者进行了血清抗—HCV的检测,结果报告于后。     

应用PCR检测HCV—RNA的临床意义

自95年8月至96年4月,我院通过引进的PCR 技术对丙肝患者及其它部分血检人员进行了HCV—RNA 检测,现将结果报告如下:1 材料和方法1.1 本组共2014例,其中男1210例,女804例.年     

用硅粒检测丙型肝炎病毒RNA的快速和敏感方法

丙型肝炎病毒（HCV）的传统检测法是采集血清标本,用酚-氯仿抽提核酸,再经逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）扩增。整个过程易污染且不易做大量样本,主要停留于实验室研究。本文作者报道了用硅粒从血清中提取HCV RNA的简便快速法,随后再用改进的套式聚合酶链反应（PCR）进一步简化实验过程,降低污染危险性。     

酶联免疫吸附检测HCV与荧光定量PCR检测HCV RNA对比分析

目的探讨酶联免疫吸附(ELISA)检测抗HCV联合实时荧光定量(RFQ-RT-PCR)法检测血清HCV RNA在丙型肝炎临床诊断中的意义。方法怀疑为丙型肝炎的血清标本以ELISA联合RFQ-RT-PCR法检测。结果在152例标本中,抗-HCV阳性率为77.63%(118/152),73.68%(112/152)的患者HCV RNA含量高于检测下限.两组经χ2检验没有统计学意义(χ2=0.64301,P>0.05)。抗-HCV+HCV RNA(联合)检测HCV阳性率86.84%(132/152)。联合检测阳性率明显高于单独检测组(χ2=4.41363,8.30601。P<0.05)。二者差别有统计学意义(P<0.05)。结论 ELISA联合RFQ-RT-PCR检测HCV是临床诊断丙型肝炎的有力证据,可以大大提高了丙型肝炎病毒的检出率,有利于抗病毒治疗的疗效观察。     

实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床价值

目的研究实时荧光PCR定量检测HCV RNA载量与抗-HCV、HCV抗原含量以及丙氨酸转氨酶(ALT)水平之间的相关性与符合性。方法用RFQ-RT-PCR法检测130份怀疑HCV感染的血清中的HCV RNA,同时检测ALT和抗-HCV。结果130份样本中HCV RNA阳性率为53.9%(71/130);抗-HCV阳性率为56.3%(72/130);ALT异常率为50.0%(65/130)。抗-HCV、HCV抗原滴度和ALT异常率随着HCV RNA载量升高而增加。结论用RFQ-RT-PCR-法检测HCV RNA可以确定。①长期高滴度抗-HCV血清具有传染性,并常预示患者肝硬化和肝癌的可能性加大,应该积极治疗。②抗-HCV、HCV抗原含量与HCV RNA之间呈正相关关系,且有符合性和互补性。③对慢性丙型肝炎长期抗-HCV阳性,若出现HCV RNA出现升高1lg10以上可以鉴别活动性、复制性程度。④是选择抗病毒药物和评价抗病毒治疗效果的重要指标。     

荧光聚合酶链反应定量检测丙型肝炎患者血清中的HCV RNA及其意义

目的探讨定量检测丙型肝炎患者血清中HCV RNA与急、慢性病毒性肝炎和肝纤维化等疾病之间的关系,分析其与血清丙氨酸转氨酶(ALT)水平之间的关系。方法在本组试验中,主要采用荧光聚合酶链反应(PCR)方法,以我院收治的103例不同临床类型的丙型肝炎患者为研究对象,对其血清中的HCV RNA进行定量检验。结果无症状HCV感染者血清HCV RNA含量显著低于急性丙型肝炎、慢性丙型肝炎、肝硬化患者,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论血液中HCV RNA的检测已成为HCV感染诊断,是丙型肝炎患者病毒药物治疗疗效监测及血液筛查的重要手段。在肝损害和肝脏疾病进展过程中,高水平HCV RNA发挥着重要的作用。     

HCV RNA检测与血清病毒学的关系及临床意义分析

目的：探讨丙型肝炎病毒（HCV）RNA检测在HCV单独感染和HCV、乙型肝炎病毒（HBV）合并感染中的临床意义。方法：对129例HCV感染者检测抗-HCV、HCVRNA和总胆红素（TBiL）、谷丙转氨酶（ALT）．并对其中的HCV、HBV合并感染（HBV＋HCV组，27例）和HBV单独感染患者（HBV组，50例）检测HBVDNA。结果：129例HCV感染患者中，抗-HCV和HCVRNA同时阳性者占68．2％，抗-HCV阳性而HCVRNA阴性者占27．9％。抗-HCV阴性而HCVRNA阳性者占3．9％。肝硬化和肝癌组的HCVRNA阳性率84．2％（32／38）较慢性肝炎组的67．0％（61／91）升高（P〈0．05）。ALT和（或）TBiL均异常的HCV患者HCVRNA阳性率79．8％（71／89）较ALT和TBiL均正常者的55．0％（22／40）升高（X^2=8．42，P〈0．01）。在HCV和HBV合并感染组，HCVRNA阳性率55．6％（15／27）低于单纯HCV感染组的76．5％（78／102），差异有统计学意义（P〈0．05），HBVDNA的阳性率29．6％（8／27）低于单纯HBV感染组的76．0％（38／50），差异有统计学意义（P〈0．01）。结论：在HCVRNA检测的同时，结合多项血清病毒学和一些生化相关指标分析，对HCV感染的临床诊治有重要的指导意义。     

献血员中的HCV感染:抗HCV核心IgM抗体与血清中HCV RNA的关系

丙型肝炎病毒(HCV)是输血后散在非 甲非乙型肝炎的主要原因.作者用4种第3代HCV 酶免疫法(EIA)对47名第2代HCV EIA阳性、但丙氨酸转氨酶(ALT)水平持续正常的献血员检测血清抗HCV IgG.用Abbott抗HCV核心IgM EIA试剂盒检测抗HCV核心lgM,同时用3种市售免疫印迹试剂盒确证.另外用聚合酶链反应(PCR)检测HCV RNA.结果表明,47名经Abbott第2代试剂盒检测抗-HCV阳性的献血员,用第3代Abbott EIA检测IgG阳性率为95.7%.其他3种试剂盒的阳性率为:Sanofi 59.6%,Ortho 63.8%,Murex 72.3%.这4种试剂盒有61.7%的一致性.用免疫印迹法检测:Ri-ba3的抗体阳性率为44.7%,Deciscano为     

用PCR检测精液中的HIV DNA和RNA

作者研究了用多聚酶链反应(PCR)检测人类免疫缺陷症病毒(HIV)感染者的精子、无细胞精液和无精于单核细胞(NSMC)中的HIV核酸的可能性及效果。把23例未经抗逆转录病毒治疗的HIV感染者的精液样品通过离心、分层得到无细胞精液、NSMC和精子。再用含二硫苏糖醇(DTT)的缓冲液溶解精于细胞,用不含DTT的缓冲液溶解NSMC,然后再以酚-氯仿抽提,     

新型套式原位PCR-ISH法检测肝组织HCV RNA

丙型肝炎病毒 ( HCV)是引起慢性肝炎的主要原因 ,在发展成肝硬化的病人中 ,导致2 0 %～ 2 5%的病人死亡。由于 HCV表达量非常低 ,因此检测肝脏中的病毒 RNA有困难。为了检测和定位用福马林固定的、石蜡包埋的肝组织中的病毒 RNA,发展了原位聚合酶链反应 ( PCR) -原位杂交 ( PCR- ISH)法。　　通过使用来自病毒基因组 5′端的引物 ,采用原位套式 PCR技术检测了 1 7份已知HCV感染病人的肝组织切块 ,运用液相反转录 PCR( RT- PCR)方法从其中 1 1例病人肝中检出病毒 RNA。在这些阳性标本中 ,通过原位 PCR- ISH法检出 1 0份阳…     

用检测唾液的方法诊断甲型肝炎和乙型肝炎

作者报道了用唾液标本诊断急性病毒性肝炎的研究结果.为进一步证实甲型肝炎(HA)的临床诊断,还从一些黄疸患者中采集血液标本进行血清IgM抗-HAV测定.检测方法有3种:(1)竞争性的放射免疫法(RIA)检测血清中总抗-HAV或抗-HBc.(2)IgG抗体捕获RIA检测血清或唾液中的抗-HAV和抗-HBc.(3)IgM抗体捕获RIA检测唾液中的抗-HAV和抗-HBc.结果表明,用唾液标本诊断HA时,从29例因黄疸住院、血清学证实为急性期HA     

應用Pooled HIV RNA RT-PCR方法診斷急性HIV感染

P24抗原檢測、HIV RNA PCR、病毒分離、第四代HIV抗原抗體診斷試劑盒等方法都不同程度地用于診斷急性HIV感染，但由于各種方法在價格、技術、敏感性等方面存在制約其被廣泛應用的因素，所以還不能用于在高危人群中進行篩查急性HIV感染者．本文主要綜述了Pooled HIV RNA RT-PCR一種實驗室診斷方法，其是將大量樣本混合后檢測HIVRNA，可節约成本用于篩查急性HIV感染者，以及它在高危人群中作為篩查方法的意義。     

检测HCV核心抗原的简便、高度灵敏的酶免疫试验

作者使用 0 .3% Triton X- 1 0 0、1 .5 % 3-〔(3-胆酰胺丙基 ) -二乙铵〕-丙磺酸 (CHAPS)和 1 5 %十二烷基硫酸钠 (SDS)作为预处理液 ,取 5 0 μl与 1 0 0 μl标本混合 ,5 6℃作用 30分钟进行预处理。同时 ,在大肠杆菌中表达重组丙型肝炎病毒 (HCV)核心抗原融合蛋白(HCV基因型 2 a分离株的 1～ 1 6 0氨基酸 )。经过提取纯化得到重组丙型肝炎病毒核心抗原 (HCVc Ag) ,用其制备单克隆抗体(Mc Ab)。在得到的 32株杂交瘤细胞中选择c1 1 - 3和 c1 1 - 7两株 Mc Ab作为包被抗体 ;选择 c1 1 - 1 0和 c1 1 - 1 4两株 Mc Ab与碱性磷酸酶 …     

肝炎患者血清HCV—RNA与抗-HCV检测的相关性研究

目的：探讨抗-HCV与HCV—RNA及ALT的相关性及临床应用价值。方法：ELISA方法检测抗-HCV,实时荧光定量PCR检测HCV—RNA。结果：检测可疑HCV感染者200例,其中152例抗-HCV阳性．124例HCV—RNA阳性。HCV—RNA阳性患者中抗-HCV的阳性率显著高于抗-HCV阳性患者中HCV-RNA的阳性率（P〈0．05）。ALT水平与HCV病毒载量呈正相关（r=0．996,P〈0．01）。结论：同时检测抗-HCV和HCV-RNA可提高HCV感染诊断的阳性率,检测HCV-RNA及ALT对抗病毒治疗的疗效评价及治疗时间有重要意义。     

阻止异源双链形成的定量检测GBV-C/HGV RNA的竞争性RT-PCR

为研究ＧＢ病毒Ｃ（ＧＢＶ－Ｃ）／庚型肝炎病毒（ＨＧＶ）可能的致病性及复制位点,本文作者采用竞争性逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）法检测病毒ＲＮＡ的正链及负链。共选择研究对象２３７人：第１组为６２例慢性丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）感染者;第２组为５０例无肝炎及ＨＣＶ感染证据的患者;第３组为１２５名正常人作为对照。从血清中分离ＲＮＡ,主要采用病毒ＲＮＡ基因组的５’端非编码区（５‘ＮＣ）及非结构５（ＮＳ５）区序列作为引物。４２４及４２５引物的扩增产物（Ｐ４２４－４２５）为５’ＮＣ区核昔酸（ｎｔ）２９－３…     

一种新的定量检测HIV-1 RNA的超敏感试验

精确检测和定量测定 1型人类免疫缺陷病毒 (ＨＩＶ 1 )ＲＮＡ水平对于评估抗逆转录病毒药物的疗效以及监测感染病人的病程进展都很重要。定量测定ＨＩＶ 1ＲＮＡ水平的试验必需具备至少为 50拷贝 ｍｌ的测定低限以及能够定量病毒负荷浓度的线性范围。作者叙述了ＬＣｘ○ＲＨＩＶＲＮＡ定量试验的测定低限、线性范围、交叉反应性、特异性、精确性等主要特性。　　ＬＣｘ○ＲＨＩＶＲＮＡ定量试验是一种竞争性逆转录聚合酶链反应 (ＲＴ ＰＣＲ)测定 ,即在ＬＣｘ○Ｒ分析仪上进行微粒免疫测定。ＨＩＶ 1引物和探针序列被靶向ｐｏｌ基因的保守序…