锌指转录因子GKLF在子宫内膜癌中的表达及其与手术病理分期的相关性

目的:探讨锌指转录因子GKLF/KLF4 mRNA在子宫内膜癌组织及良性子宫内膜组织中的表达,分析其表达的变化与手术病理分期的相关性。方法:采用半定量逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测37例子宫内膜癌组织(研究组)和26例良性子宫内膜组织(对照组)中GKLF mRNA表达强度的变化。结果:(1)每份实验标本中均检测到GKLF mRNA表达,子宫内膜癌中的相对表达强度为0．38±0．19,良性内膜组织中的表达强度则为0．72±0．16,与良性内膜组织相比较,内膜癌组织中GKLF mRNA的表达强度降低。经统计学分析差异有统计学意义(P＜0．01);(2)子宫内膜癌组织GKLF mRNA的表达强度依次为Ⅰ期内膜癌0．56±0．12,Ⅱ期内膜癌0．35±0．09,Ⅲ期内膜癌0．17±0．08,子宫内膜癌的手术病理分期愈晚,GKLF mRNA的表达强度愈低,差异有统计学意义(P＜0．01);(3)随着病理分级的增高,GKLF mRNA的表达强度逐渐降低,差异有统计学意义(P＜0．01)。结论:在子宫内膜癌组织中,GKLF表达下调,而且GKLF mRNA的表达水平与子宫内膜癌的临床分期和病理分级呈负相关,提示GKLF可能参与了子宫内膜癌的发生和进展过程。     

米非司酮抑制人卵巢癌3AO细胞裸鼠移植瘤生长的研究

目的 :研究抗孕激素米非司酮 (mifepristone ,MIF)对人卵巢癌 3AO细胞株裸鼠移植瘤生长的抑制作用并探讨其作用机制。方法 :随机将 14只人卵巢癌细胞 3AO移植瘤荷瘤裸鼠分为两组 ,MIF组皮下注射MIF 0 .2mg/d ,对照组注射等量溶剂。观察治疗前后移植瘤的体积和重量。应用末端转移酶介导的生物素标记脱氧尿苷三磷酸缺口标记法 (TUNEL)和流式细胞术 (FCM)检测细胞凋亡率和肿瘤细胞周期时相的变化 ;免疫组织化学染色法检测移植瘤组织增殖细胞核抗原 (PCNA)和孕激素受体 (PR)的表达。光镜和电镜观察移植瘤细胞凋亡的超微结构变化。结果 :治疗 4周后 ,MIF组和对照组裸鼠移植瘤体积和重量分别为 1186 .14± 4 96 .14mm3和 1.30± 0 .4 3g ,2 199.85± 5 41.4 9mm3和 2 .30± 0 .31g(P <0 .0 1)。TUNEL测定显示 ,MIF组细胞凋亡率为 (11.33± 1.5 3) % ,对照组为(2 .6 7± 0 .5 8) % ,差异有显著性 (P <0 .0 5 )。FCM测定 ,MIF组凋亡率为 (15 .6 2±3.87) % ,也明显高于对照组的 (7.5 9± 1.4 7) % (P <0 .0 5 ) ,肿瘤细胞出现典型的细胞凋亡形态变化 ,并阻滞于G0 ～G1期 ,S期细胞显著减少 (P <0 .0 5 )。MIF组肿瘤细胞PCNA及PR表达率分别为 2 0 .5 %和 8.0 % ,明显低于对照组的 4 8.0 %和 2 2 .0 % (P <0 .0 5 )     

PPARs在子宫内膜腺癌细胞中的表达及其激动剂对子宫内膜癌细胞生长抑制的影响

目的:探讨过氧化物酶体增殖物激活受体(peroxisome proliferator-activated receptors,PPARs)在子宫内膜癌细胞中的表达及PPARγ激动剂罗格列酮(Rosiglitazone)对体外培养人子宫内膜癌细胞系HHUA、KLE生长抑制和凋亡的影响。方法:RT-PCR检测PPARs在子宫内膜癌细胞中的表达;用MTT比色法分别检测罗格列酮作用于子宫内膜癌细胞HHUA、KLE不同时间后的细胞生长抑制率;流式细胞仪分析细胞周期分布; TUNEL检测细胞凋亡。结果:RT-PCR结果显示,两种子宫内膜癌细胞中均有PPARαPPARγmRNA表达,未见到PPARβmRNA表达;罗格列酮对人子宫内膜癌细胞的生长有抑制作用,呈时间剂量依赖性;流式细胞仪(FCM)检测结果显示盐酸罗格列酮作用于人子宫内膜癌细胞24h后,细胞周期被阻滞于G_1期;荧光显微镜,TUNEL检测显示, 200μmol/L罗格列酮作用子宫内膜癌细胞24h后出现典型的凋亡现象,细胞凋亡率为(18．3±1．9)%,与对照组(2．66±0．49)%相比差异有统计学意义(P＜0．05)。结论:罗格列酮对人子宫内膜癌细胞系的生长具有明显的抑制作用,促进细胞凋亡,其抗肿瘤作用机制可能是通过活化PPARγ途径诱导了细胞凋亡。     

JAK抑制剂AG490联合DDP对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:观察JAK/STAT通路阻断剂AG490联合顺铂(Cis-diaminedichloro-platinum,DDP)对宫颈癌裸鼠移植瘤生长的影响,探讨AG490通过阻断STAT3通路对人宫颈癌裸鼠移植瘤生长抑制作用及与caspase-3蛋白表达的关系。方法:建立人子宫颈癌(HeLa)细胞裸鼠异种移植瘤模型并分组。AG490单用或联合DDP处理各组裸鼠。用药期间测量裸鼠体重和肿瘤体积,检测瘤重计算抑瘤率。流式细胞术检测肿瘤组织中细胞凋亡情况,免疫组化检测移植瘤组织中P-STAT3和caspase-3蛋白表达。数据均用SPSS10.0统计软件处理。结果:治疗第7天与DDP组(265.51±23.74)和AG490组(382.89±16.54)比,联合用药组(250.66±18.55)肿瘤体积明显缩小(P<0.05和P<0.001)。DDP组裸鼠体重与联合用药组差异有统计学意义(P<0.05)。对照组、DDP组、AG490组和联合用药组抑瘤率分别为0,51.2%,33.6%,59.2%,联合用药组的抑瘤作用比单用组更加明显(P<0.05,P<0.001)。FCM分析表明,实验组的肿瘤标本中均可见凋亡峰,凋亡率分别是(52.1±1.3)%,(39.5±0.4)%和(66.7±1.8)%,与对照组(10.2±2.4)%的差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤坏死范围与用药明显相关,联合用药组肿瘤的坏死范围最大,与单独用药组的差异有统计学意义(P<0.05)。免疫组化结果显示,联合用药组P-STAT3表达下调,caspase-3表达上调,但二者无负相关(r=-0.074,P>0.05)。结论:AG490对宫颈癌生长有一定的抑制作用,增加P-STAT3表达,但对caspase-3表达无直接作用。AG490与DDP联合应用可进一步提高治疗效果。     

阻断丝裂原活化蛋白激酶信号通路对子宫内膜癌生长抑制作用的研究

目的:研究丝裂原活化蛋白激酶(MAPK/ERK)信号通路抑制剂(PD98059)对ER阳性表达的Ishikawa和ER低表达的HEC-1A人子宫内膜癌细胞系的裸鼠体内抗增殖作用,探讨阻断MAPK/ERK信号传导通路治疗子宫内膜癌的可行性。方法:体外培养人子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞,将对数生长期的两种细胞分别接种于裸鼠背部皮下,建立子宫内膜癌裸鼠移植瘤模型。将两种细胞系成瘤阳性裸鼠随机分为对照组和实验组,每组6只,分别腹腔注射生理盐水和PD98059,每周2次,共3周,观察各组裸鼠移植瘤的生长情况,建立移植瘤生长曲线,计算抑瘤率。实验结束时取肿瘤组织切片HE染色,原位末端标记(TUNEL)法检测组织细胞的凋亡,Western blot检测各组织中ERK1/2的活化。结果:(1)PD98059能有效抑制人子宫内膜癌Ishikawa、HEC-1A细胞裸鼠皮下移植瘤的生长;(2)HE染色可见实验组瘤细胞核浆比相对较小,血管密度降低;TUNEL染色可见两种细胞移植瘤中实验组细胞凋亡率较对照组明显增加;(3)Western blot检测结果:PD98059能有效降低裸鼠移植瘤组织中p-ERK表达。结论:PD98059通过阻断MAPK/ERK信号传导通路增加Ishikawa和HEC-1A细胞裸鼠移植瘤组织中细胞凋亡,抑制肿瘤生长,抗肿瘤效果明显,可成为治疗子宫内膜癌的有效方法。     

survivin反义RNA对卵巢癌细胞株SKOV3生长的抑制作用

目的观察survivin反义RNA对卵巢癌细胞株SKOV3的生长抑制作用及其对裸鼠皮下种植瘤成瘤能力的影响。方法构建能在真核细胞中稳定表达survivin反义RNA的载体pcDNA3-SVVas,应用基因重组技术,将pcDNA3-SVVas经脂质体lipofectam ine 2000介导转染卵巢癌细胞株SKOV3(SKOV3/SVVas),同时以空载体pcDNA3转染SKOV3细胞(SKOV3/neo)作为对照;绘制细胞生长曲线,采用免疫组化、RT-PCR和流式细胞仪检测SKOV3/SVVas、SKOV3/neo和SKOV3细胞survivin mRNA及蛋白的表达和细胞凋亡率。将24只裸鼠随机分为3组,每组8只,分别将SKOV3/SVVas、SKOV3/neo、SKOV3细胞接种于裸鼠皮下,观察成瘤情况及肿瘤体积变化。结果与SKOV3细胞比较,SKOV3/SVVas细胞增殖能力明显降低;SKOV3/SVVas细胞survivin蛋白阳性细胞率及survivin mRNA表达量分别为(37.5±1.0)%、0.407±0.022,与SKOV3细胞的(81.2±0.4)%、0.793±0.042和SKOV3/neo细胞的(80.4±0.8)%、0.734±0.039比较,差异均有统计学意义(P<0.01);SKOV3/SVVas细胞凋亡率显著增加,为(27.4±9.6)%,与SKOV3和SKOV3/neo细胞比较,差异有统计学意义(P<0.05)。SKOV3/SVVas组裸鼠成瘤率降低,出现目检可见肿瘤的平均时间延长为(14.0±1.0)d,与SKOV3/neo组的(6.1±0.8)d和SKOV3组的(5.8±0.9)d比较,差异有统计学意义(P<0.01);与SKOV3、SKOV3/neo组比较,SKOV3/SVVas组裸鼠肿瘤生长速度缓慢,肿瘤体积的差异均有统计学意义(P<0.01)。结论稳定表达的survivin反义RNA能够有效抑制SKOV3细胞生长,降低survivin的表达,诱导SKOV3细胞凋亡;转染survivin反义RNA的SKOV3/SVVas细胞在裸鼠皮下的成瘤能力降低。     

Survivin蛋白在子宫内膜癌和子宫内膜复杂性增生中的表达及其临床意义

目的 研究凋亡抑制蛋白survivin在子宫内膜癌和子宫内膜复杂性增生中的表达差异以及在子宫内膜癌中表达与内膜癌预后相关因素的关系。方法 应用免疫组化SP法检测41例子宫内膜癌、26例子宫内膜复杂性增，丰和8例正常内膜标本中survivin蛋白的表达情况。结果 survivin蛋白在正常内膜没有表达。在子宫内膜癌中和子守内膜复杂性增生中的阳性表达率分别是85．3％和30．8％，两者的表达有明显的差异（P〈0．001），且子宫内膜癌组阳性细胞的染色强度明显比子宫内膜复杂性增生组强（P〈0．001）。41例子宫内膜癌中，survivin的表达与肿瘤细胞的组织学分级、肌层浸润及临床一病理分期呈正相关（P〈0．01、P〈0．001和P〈0．01）。结论 survivin蛋白与子宫内膜癌的发生有关，升且与子宫内膜癌的不良生物学行为有关，可为临床治疗提供有价值的信息，对估计预后有指导意义。     

米非司酮对子宫内膜癌细胞系E-钙粘素和核因子kappa B表达的影响

目的:探讨米非司酮(Mifepristone,MIF)对子宫内膜癌细胞中核因子kappaB(nuclear factor kappa B,NF-κB)与E-钙粘素表达的影响,及NF-κB与E-钙粘素之间的关系。方法:体外培养子宫内膜癌细胞系HHUA,以不同浓度MIF(0、0.1×10-6、0.1×10-5、1×10-5、5×10-5、1×10-4mol/L)分别作用细胞24h、48h和72h,用免疫组化法检测NF-κB p65与E-钙粘素的蛋白表达水平。结果:MIF显著抑制HHUA细胞生长。MIF显著降调NF-κB p65的蛋白表达水平(P<0.05),增加E-钙粘素的蛋白表达水平(P<0.05)。NF-κB p65表达与E-钙粘素表达呈显著负相关(r=-0.94)。结论:MIF可抑制子宫内膜癌细胞系HHUA的生长,其机制可能通过抑制NF-κB的表达,进而增加其靶基因E-钙粘素的表达,来达到抑制子宫内膜癌细胞生长的作用。     

华蟾素与子宫内膜癌HHUA细胞侵袭性生长的实验研究

目的：探讨华蟾素对体外培养的子宫内膜癌HHUA细胞侵袭性生长的影响和意义。方法：体外培养内膜癌HHUA细胞,以0.25、2.5和25 g/L的华蟾素干预后,四唑盐比色试验检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,反转录-聚合酶链反应检测CD44s表达,transwell小室分析细胞的体外侵袭力。结果：华蟾素对内膜癌HHUA细胞的半数抑制浓度（IC50）为华蟾素生药（0.79±0.21） g/L。对照组CD44s mRNA表达为1.31±0.25、侵袭细胞数为60.50±2.52;0.25 g/L华蟾素对内膜癌HHUA细胞CD44smRNA表达和侵袭力无影响（均P＞0.05）;2.5 g/L华蟾素干预后,内膜癌HHUA细胞CD44s mRNA表达为1.02±0.23、侵袭细胞数为30.50±3.95,与对照组比较差异有统计学意义（均P＜0.05）;25 g/L华蟾素干预后,内膜癌HHUA细胞CD44s mRNA表达为0.97±0.39、侵袭细胞数为22.50±4.22,与对照组比较差异有统计学意义（均P＜0.05）;25 g/L和2.5 g/L华蟾素2个浓度组差异无统计学意义（均P＞0.05）。结论：2.5 g/L华蟾素可抑制内膜癌HHUA细胞的侵袭性生长。     

沙立度胺对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤血管生成的影响

目的　探讨沙立度胺(Thd;商品名:反应停)对人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤生长及血管生成的影响。方法　建立 15只人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤模型,随机分成 3组: (1)Thd组:腹腔内注射Thd(200mg·kg-1·d-1,浓度为 62 5mg/L); (2 )Thd+环磷酰胺 (CTX)组:按上述Thd剂量,加入浓度为 100mg/L的CTX(100mg·kg-1·d-1 ),腹腔内注射; (3)生理盐水组:腹腔内注射 0 2ml生理盐水。观察各组裸鼠皮下移植瘤生长情况、裸鼠体重的变化,并采用RT PCR、酶联免疫吸附法、及Picture二步免疫组化法检测各组瘤组织中血管内皮生长因子 (VEGF)mRNA、外周血中VEGF含量及瘤组织中微血管密度(MVD)。结果　 ( 1 )Thd组、Thd+CTX组皮下移植瘤体积明显小于生理盐水组,差异有统计学意义(P<0.05)。(2)Thd组瘤组织中VEGFmRNA为 55±9,血中VEGF含量为(29±10)pg/ml;Thd+CTX组瘤组织中VEGFmRNA为 26±7,血中VEGF含量为(12 ±6)pg/ml;生理盐水组瘤组织中VEGFmRNA为 79±7,血中VEGF含量为(71±16)pg/ml。Thd组、Thd+CTX组瘤组织中VEGFmRNA和血中VEGF含量分别与生理盐水组比较,差异均有统计学意义 (P<0.01)。(3)Thd组MVD计数为 (12.6±3.3)条,Thd+CTX组为 (10.6±1.9)条,均明显低于生理盐水组的(19 3±2 8)条(P<0 01)。结论　Thd有抗卵巢癌皮下移植瘤血     

Adoptive cellular immunotherapy to the endometrial carcinoma cell line xenografts in nude mice

The present study was designed to examine the immunotherapeutic properties of lymphokine-activated killer (LAK) cells against uterine endometrial cancers. Three endometrial cancer cell lines, ISHIKAWA, SNG-M, and HHUA, were shown to be specifically lysed in short-term 51Cr-release assay, although the susceptibility was different among the cell lines. The xenograft tumors of ISHIKAWA and SNG-M exhibited high susceptibility to LAK cells in the in vitro assay and responded well to the adoptive transfer of LAK cells in nude mice. On the other hand, the xenograft of HHUA showed low reactivity to LAK cells and showed no response to the adoptive immunotherapy. However, the adoptive transfer of LAK cells combined with intraperitoneal administration of both recombinant interleukin-2 (rIL-2) and lentinan markedly inhibited the growth of HHUA xenografts in nude mice, while no response was observed in nude mice treated with LAK cells plus either rIL-2 or lentinan, or treated with rIL-2 plus lentinan alone. These results suggest the clinical application of adoptive immunotherapy in association with LAK cells, rIL-2, and lentinan as a treatment of gynecologic cancers.     

种植窗期血清孕激素水平及子宫内膜整合素α_vβ_3表达对IVF-ET结局的预测价值

目的：探讨种植窗期血清雌(E_2)、孕激素(P)水平及子宫内膜整合素α_vβ_3表达与IVF-ET结局的关系。方法：对40例拟行IVF-ET妇女在IVF-ET前1周期采用磁分离酶联免疫法测定种植窗期血清E_2、P水平；采用免疫组化SP法和组织学积分H-score法对整合素α_vβ_3在种植窗期子宫内膜中的表达进行定位和半定量分析。按IVF-ET后是否妊娠将40例不孕患者分为2组：妊娠组和未妊娠组。结果：种植窗期血清P和整合素α_vβ_3水平妊娠组较未妊娠组高,差异有统计学意义(P：17．80±6．08 ng/ml vs 14．12±4．74 ng/ml,P＜0．05。整合素α_vβ_3：腺体1．73±0．18 vs 1．50±0．23,P＜0．01；腔上皮1．53±0．28 vs 1．12±0．24,P＜0．01)。结论：种植窗期血清P水平下降及子宫内膜整合素α_vβ_3的表达减弱,可导致IVF-ET妊娠失败。种植窗期血清P水平和子宫内膜整合素α_vβ_3的表达可作为预测妊娠是否成功的指标。     

5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素对人卵巢癌裸鼠移植瘤生长的影响

目的:研究5-烯丙基-7-二氟亚甲基白杨素(ADFMChR)对人卵巢癌COC1裸鼠移植瘤生长的影响。方法:建立人卵巢癌COC1裸鼠皮下移植瘤模型,随机分为5组:生理盐水组、顺铂组(2mg/kg)、低剂量ADFMChR组(6mg/kg)、中剂量ADFMChR组(18mg/kg)和高剂量ADFMChR组(54mg/kg),每组4只。观察各组裸鼠移植瘤生长情况,裸鼠体重的变化,检测裸鼠血清谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(CRE)及外周血白细胞计数;PI染色流式细胞术(FCM)测定移植瘤细胞凋亡率。结果:ADFM-ChR有明显抑制移植瘤生长的作用,低剂量组、中剂量组和高剂量组的瘤重抑制率分别为42.86%,62.76%和77.55%。ADFMChR3种剂量组处理裸鼠的外周血白细胞数和血清谷丙转氨酶(ALT)、乳酸脱氢酶(LDH)、肌酐(CRE)与生理盐水对照组的差异均无统计学意义(P>0.05)。PI流式细胞术结果显示ADFMChR诱导移植瘤细胞凋亡,呈剂量依赖性。结论:ADFMChR通过诱导细胞凋亡抑制人卵巢癌裸鼠移植瘤的生长。     

建立去势雌性裸小鼠人子宫内膜癌皮下移植瘤动物模型的探讨

目的:探讨全身外照射对建立切除卵巢后雌性裸小鼠子宫内膜癌皮下移植瘤模型成瘤率的影响。方法:将切除卵巢后1周的裸小鼠随机分为两组,一组全身外照射(4 Gy)3 h后皮下注射子宫内膜癌细胞悬液,另一组未予照射同时间皮下注射子宫内膜癌细胞悬液,观察裸小鼠体质量变化、存活情况和肿瘤的生长情况,测量肿瘤径线并计算体积。结果:2组成瘤率100%;各组肿瘤体积差异无统计学意义(P>0.05),但存活率差异有统计学意义(P<0.05)。结论:全身外照射不影响切除卵巢的裸小鼠的成瘤率,但增加裸小鼠的死亡率。     

A human ovarian carcinoma murine xenograft model useful for preclinical trials

OBJECTIVE: To establish a murine xenograft model of human ovarian carcinoma. METHODS: A slurry of fresh human tumor from patients with intraperitoneal malignancies was heterotransplanted intraperitoneally into nude (nu/nu) and severely combined immunodeficient mice (CB-17, SCID). Xenograft growth was assessed by serial examination and necropsy. The xenografts were passaged to new animals when tumors were palpably greater than 1 cm(3). Histopathologic analysis of the xenografts was performed at each passage as well as immunohistochemical staining for p53 mutations. Persistent expression of human genes by the xenografts at higher passages was assessed by RT-PCR amplification of the human beta-globin gene. This xenograft model was used in the preclinical evaluation of an adenoviral vector containing a beta-galactosidase reporter gene and a wild-type p53 gene. RESULTS: Tumor growth was not established in any of the nude mice heterotransplanted with tissue from six different ovarian cancer patients. Eleven of 13 specimens established xenograft growth when injected in SCID mice. Nine xenografts have been subsequently passaged between 6 and 24 animal generations to date. All xenografts retained histopathologic similarities to their original human tumors and the p53 expression patterns remained stable through higher passages. Within 24 h after intraperitoneal administration of an adenoviral vector, transduction of the reporter gene was evident in the xenografts. In addition, administration of an adenoviral vector containing a wild-type p53 gene significantly decreased the tumor burden compared to controls (P < 0.04). CONCLUSIONS: This murine xenograft model of human ovarian carcinoma appears to be reliable and reproducible and has utility for the study of novel therapeutics.     

丁酸钠诱导人子宫内膜癌细胞凋亡的机制

目的 :探讨丁酸钠 (NaB)诱导人子宫内膜腺癌细胞 (HHUA)凋亡的机制。方法 :用终浓度 10mol L丁酸钠诱导HHUA细胞 ,以DNA荧光染色、琼脂糖凝胶电泳、流式细胞术 (FACS)等检测细胞凋亡的发生情况 ;用Westernblot分析细胞凋亡相关蛋白的表达以及caspase - 3及其抑制剂Ac -DEVD -CHO在NaB诱导细胞凋亡中的作用。结果 :NaB处理后 2 4hHHUA细胞即发生凋亡 ,Fas过度表达、caspase - 3激活及PARP被切割始于用药后 2 4h ,至 72h达高峰 ;Ac -DEVD -CHO能部分抑制NaB诱导的细胞凋亡。结论 :NaB诱导HHUA细胞凋亡与Fas过度表达和caspase - 3的激活有关。NaB可能成为一种新的抗子宫内膜癌药物