丝素蛋白人工神经导管的皮肤致敏实验

目的评价本实验室自制的丝素蛋白人工神经导管对皮肤潜在的致敏性。方法以ISO 10993-10：1995标准,采用最大剂量法,将白化豚鼠分为SF-NGC组、阳性对照（甲醛溶液）、阴性对照（生理盐水）3组,先进行预试验确定主试验各阶段的浓度,然后进行主试验。在激发阶段的敷贴物去除后24h、48h、72h,观察记录各组动物激发部位的皮肤情况,按标准进行评分,并算出致敏率。结果丝素蛋白人工神经导管的皮肤反应记分为0,致敏率为0。结论在试验条件下丝素蛋白人工神经导管无潜在的皮肤致敏性。     

丝素蛋白／羟基磷灰石复合材料细胞相容性的研究

目的了解丝素蛋白（silkfibroin,SF）表面修饰对羟基磷灰石（hydroxyapatite,HA）细胞相容性的影响。方法以骨髓基质干细胞（marrowstromalstemcells,MSCs）复合sF表面修饰的HA或单纯材料培养制备组织工程骨,观察MSCs的黏附和生长情况、检测细胞活力和碱性磷酸酶（alkalinephosphatase,A1。P）活性、流式细胞仪分析细胞周期。结果MSCs在材料表面和孔隙内均可黏附和生长,黏附于sF修饰HA的细胞活力和ALP活性明显高于未经SF修饰组。各组细胞周期未见明显变化,未见异倍体细胞。结论sF表面修饰对HA材料的细胞相容性有明显的优化作用。     

组织工程化人工神经内部支架及其生物相容性研究

目的 研制组织工程化人工神经内生长雪旺细胞的内部支架结构。方法 用６－０的生物可吸收Ｖｉｃｒｙｌ或ＰＤＳ纤维，在硅胶圈上纺织成三维立体网架，经Ｍａｔｒｉｇｅｌ蛋白胶涂层，与１０＾６／ｍｌ新生或成年鼠雪旺细胞共同培养３ｄ。Ｌｉｖｅ／Ｄｅａｄ荧光染色和扫描电镜观察细胞贴附情况。将１０根经Ｍａｔｒｉｇｅｌ蛋白胶涂层的Ｖｉｃｒｙｌ或ＰＤＳ纤维，植入１．５ｃｍ长的胶原神经管内，然后将其桥接于Ｌｅｗｉｓ鼠从骨神经缺损处。术后５周取材作组织学透射电镜观察。结果 在三维立体网架上，雪旺细胞沿纤维纵轴贴附伸展，并围绕纤维形成多条细胞链。荧光染色显示在纤维上有纵行的活细胞带，并见到多层重叠现象。组织工程倾人工神经在体内５周，含有涂层纤维的胶原神经管表面为为有丰富的新生血管和软组织所取供。神经束已沿生物纤维越过神经管中点。结论 培养     

丝素膜代人工硬脑膜的组织相容性研究

目的　探讨丝素膜为人硬脑膜修补材料的可能性。方法　取新西兰兔额顶部正中切口 ,作双侧颞顶部开颅术 ,在手术显微镜下 ,剪除兔硬脑膜和蛛网膜 1.0cm× 0 .8cm ,硬脑膜缺损处分别用牛心包和不同的丝素膜膜修补。结果　术后无伤口感染、脑膜炎及抽搐现象 ,行为及进食无异常变化。早期 ,局部炎症反应轻微。晚期 ,呈轻度慢性炎性反应 ,致密丝素膜与脑皮层之间可见薄层假膜形成。脑皮质形态正常。结论　对制作工艺加以改进 ,丝素膜有望成为一种新型的脑膜替代材料。     

生物可降解人工胸壁的生物相容性与体内降解研究

目的对制备的人工胸壁材料的生物相容性及体内降解情况进行研究,为其应用于临床提供实验依据。方法参照医疗器械生物学评价标准和要求,对人工胸壁组分材料聚对二氧环己酮(A)、壳聚糖(B)、羟基磷灰石/胶原海绵(C)进行评价。溶血实验另设生理盐水为阴性对照组,蒸馏水为阳性对照组,各组取样本5个加抗凝兔血0.2ml,取上清测吸光度(A)值并计算溶血率。取20只小鼠行急性全身毒性实验,每组5只,分为A、B、C和阴性对照组;阴性对照注入生理盐水,A、B、C组由尾静脉注入A、B、C材料浸提液,50ml/kg,于24、48、72h时观察。热源实验取12只大白兔,每组3只,分为A、B、C组和阴性对照组(注入生理盐水),自耳静脉分别注射A、B、C材料浸提液,10ml/kg后,每隔1h测肛温1次,共3次,观察动物的体温变化,并计算各兔体温的升高度数和升高总数。体内植入及降解实验取12只大白兔,将A、B、C材料(制成10mm×10mm大小)分别植入背部肌肉内,于2、4、8、12、16、24周各时间点处死2只,行大体观察,组织学、材料降解及组织相容性观察。结果人工胸壁各组分材料的溶血率均小于国家规定的5%标准,在体外不引起溶血反应;与阴性对照组比较无统计学意义(P>0.05);不引起全身毒性反应,各材料注入后,A、B、C组动物均无死亡,活动进食正常。热源实验各组动物体温升高值均在0.6℃以下,且每组3只兔体温升高值的总数<1.4℃,无致热作用;各材料植入体内初期有轻度炎性反应,随植入时间延长逐步减轻;组分材料分期降解吸收,降解过程中未见组织变性、坏死和异常增生。结论人工胸壁各组分材料具有良好的生物相容性和适宜的降解性能,具有临床开发应用前景。     

珍珠层/聚乳酸人工骨的生物相容性研究

目的：研究珍珠层／聚乳酸人工骨在体内外的生物相容性。方法：将珍珠层／聚乳酸人工骨在体外与兔成骨细胞复合培养作实验组，以脱钙骨／聚乳酸人工骨作对照，行MTT法、组织学和扫描电镜检测，观察成骨细胞在材料表面的粘附、生长和增殖情况；将同种异体成骨细胞—珍珠层／聚乳酸人工骨复合植入体内，观察机体对细胞与材料的排斥反应。结果：肌法显示随培养时间的延长，细胞在材料表面不断增殖；组织学及电镜显示，在体外细胞于材料表面及孔隙中附着、生长良好，存在接触抑制现象；细胞与材料复合植入体内，珍珠层／聚乳酸组的炎性反应明显比对照组轻。结论：珍珠层／聚乳酸人工骨在体内外有良好的生物相容性。     

等离子喷涂钽涂层人工假体生物相容性研究

[目的]为钽(Ta)涂层人工假体临床应用的可行性提供实验依据.[方法]采用形态学脱察和四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法,通过细胞毒性检测、细胞粘附性及增殖性研究对钽(Ta)涂层材料生物相容性进行评价.[结果]细胞形态学观察显示:Ta涂层组细胞形态良好,与对照组无差异;细胞毒性实验结果表明:Ta涂层细胞相对增殖率(RGR)为(113.2±0.01)%,与羟基磷灰石(HA)涂层(110.5±0.03)%及钛(Ti)涂层(109.8±0.05)%,无统计学差异(P>0.05),毒性分级均为0级,说明三种涂层材料对L929细胞的生长无抑制作用.细胞粘附性实验和增殖性实验结果显示:Ta涂层表面细胞粘附数量明显高于Ti涂层(P<0.05),与HA涂层无统计学差异(P>0.05),说明Ta涂层与Ti涂层表面相比,更适合细胞的粘附和生长.[结论]Ta涂层具有较好的细胞生物相容性,具有作为人工假体及其他生物材料表面改性的生物学基础.     

构建生物人工神经修复周围神经缺损的实验研究

目的：探讨生物人工神经对周围神经再生的作用。方法：用自体雪旺氏细胞、Ⅳ型胶原及可降解的聚乳酸导管构建生物人工神经，桥接10mm缺损的鼠坐骨神经，对照组行自体神经移植，术后8周，2组行大体观察、组织学检查及神经电生理检查。结果：实验组再生神经纤维数、再生轴突恢复率、运动神经传导速度及复合肌肉动作电位振幅均同对照组相近。结论：实验构建的生物人工神经能有效的促进周围神经再生。     

聚己内酯／丝素蛋白／胶原电纺纤维的制备及其细胞相容性研究

目的：制备聚己内酯j丝素蛋白／胶原电纺纳米纤维支架,检测其对口腔黏膜j：皮细胞生长和增殖的影响。方法：将冉生丝素膜、水溶性胶原蛋白粉末及聚已内酯按质量比1：1：4;1：l：8;1：1：10共同溶于六氟异丙醇中。采用静电纺丝法制备制备聚己内酯/胶原／丝素蛋白电纺纳米纤维支架。将体外培养的口腔黏膜上皮细胞接种至材料表面,采用MTT法和扫描电镜研究口腔黏膜上皮细胞在材料表面的生长和增殖情况,评价聚己内酯／丝素蛋白/胶原电纺纳米纤维的细胞相容性。结果：MTT结果表明,口腔黏膜上皮细胞在聚己内酯/丝素蛋门／胶原电纺纳米纤维支架生长良好。电镜观察显示所制备的电纺纤维直径均一,呈相互连通的多孔网状结构。口腔黏膜上皮细胞在改性后的材料表面具有良好的生长形态。结论：聚己内酯/丝素蛋白/胶原电纺纳米纤维支架,具备合适的孔径和孔隙率,适合口腔黏膜。上皮细胞生长,细胞相容性良好,是一种组织工程尿道重建良好的支架载体。     

人工组织神经移植物辅加神经生长因子修复大鼠坐骨神经缺损

目的 探索壳聚糖与聚乙醇酸联合制成的人工组织神经移植物辅加神经生长因子（NGF）修复大鼠外周神经缺损的可能性。方法 壳聚糖套管和聚乙醇酸纤维制备成人工组织神经移植物并辅加NGF，修复大鼠的坐骨神经10mm缺失。术后24周，进行足迹试验，电生理学测试，形态学观察。用自体神经，硅胶管以及壳聚糖套管与聚乙醇酸纤维等分别作为对照组，结果 术后24周内，实验动物均未出现明显炎症及排斥反应。实验组的各检测指标均优于除自体神经组外的各对照。结论 壳聚糖和聚乙醇酸与外周神经组织有良好的生物相容性；辅加NGF的人工组织神经移植物对修复缺损的神经具有良好的桥梁作用和促神经生长作用。     

可溶性丝素粉末的制备

研究了较大规模制备丝素粉末的方法 .以废蚕丝为原料 ,经 0 .5g/dL的Na2 CO3溶液精炼后 ,用质量分数为 4 0 %的CaCl2 溶液溶解丝素 ,采用中空纤维超滤器脱盐 ,丝素溶液经冷冻干燥或喷雾干燥后即制成白色的丝素粉末 .从丝素的SephacrylS 2 0 0凝胶过滤图谱中可以看出 :用氯化钙溶液溶解丝素 ,煮沸时间延长 ,丝素相对分子质量呈下降趋势 ;在超滤浓缩过程中 ,丝素发生了部分缔合 .     

脱盐过程中丝素蛋白缔合机理

采用透射电子显微镜(TEM)、X 射线衍射(X ray)、红外光谱(IR)、圆二色谱(CD)等测定了在脱盐过程中丝素蛋白分子构象的变化.随着丝素蛋白盐溶液脱盐率的增加,丝素蛋白分子从无规线团结构慢慢向β 折叠结构转变,导致丝素蛋白分子间发生缔合.     

丝素的功能性质

丝素在pH3～10范围内具有较好的乳化能力和优良的乳化稳定性；氯化钠的添加使丝素的乳化能力和乳化稳定性略微下降；随着丝素质量浓度的增加，丝素的乳化能力和乳化稳定性均增强，当丝素质量浓度高于0.5g/dL时，乳化能力的增幅变缓。丝素的表面疏水性低于酪蛋白酸钠，经高速剪切作用后，表面疏水性显著增加。以丝素为壁材的微胶囊化薄荷油缓释性能良好。     

Enhanced Fibroblast Cellular Ligamentization Process to Polyethylene Terepthalate Artificial Ligament by Silk Fibroin Coating

Artificial ligaments utilized in reconstruction of anterior cruciate ligament (ACL) are usually made of polyethylene terepthalate (PET) because of its good mechanical properties in vivo. However, it was found that the deficiencies in hydrophilicity and biocompatibility of PET hindered the process of ligamentization. Therefore, surface modification of the PET is deemed as a solution in resolving such problem. Silk fibroin (SF), which is characterized by good biocompatibility and low immunogenicity in clinical applications, was utilized to prepare a coating on the PET ligament (PET+SF) in this work. At first, decrease of hydrophobicity and appearance of amino groups were found on the surface of artificial PET ligament after coating with SF. Second, mouse fibroblasts were cultured on the two different kinds of ligament in order to clarify the possible effect of SF coating. It was proved that mouse fibroblasts display better adhesion and proliferation on PET+SF than PET ligament according to the results of several technical methods including SEM observation, cell adhesive force and spread area test, and mRNA analysis. Meanwhile, methylthiazolyldiphenyl‐tetrazolium bromide and DNA content tests showed that biocompatibility of PET+SF is better than PET ligament. In addition, collagen deposition tests also indicated that the quantity of collagen in PET+SF is higher than PET ligament. Based on these results, it can be concluded that SF coating is suggested to be an effective approach to modify the surface of PET ligament and enhance the “ligamentization” process in vivo accordingly.     

丝素的发泡性和胶凝性

丝素的起泡能力低于酪蛋白酸钠,但泡沫稳定性明显优于酪蛋白酸钠.丝素溶液直接或经剪切后放置均易形成凝胶,经高速剪切作用后形成凝胶的速度明显加快;随着丝素浓度增加,丝素凝胶的弹性增加;丝素经复合风味蛋白酶水解后形成凝胶,动态实验结果表明,其胶凝点在酶解进行至9min左右.用SEM和TEM观察丝素凝胶的超微结构发现,直接放置形成的丝素凝胶的网孔小于剪切作用后形成的凝胶.     

可溶性丝素蛋白溶液脱盐技术

利用超滤和平衡渗析两种技术脱除溶丝液中的CaCl2,结果表明,溶丝液经中空纤维超滤脱盐,其脱盐率达86.57%,回收率达74.20%,氮溶解指数(NSI)达3.40%;而经平衡渗析脱盐,其脱盐率达98.5%,回收率达83.13%,氮溶解指数(NSI)达97.85%.因此,平衡渗析是适合制备可溶性丝素蛋白技术.     

皮下预制膀胱脱细胞基质-丝素蛋白双层支架修复大鼠膀胱的实验研究

目的观察膀胱脱细胞基质-丝素蛋白(Bladder acellular matrix graft-silk fibroin,BAMG-SF)双层支架经皮下预制处理后,修复大鼠膀胱扩大术后膀胱缺损的效果。方法取BAMG-SF置于大鼠皮下,分别经1 d、3 d、7 d和14 d后,行组织学染色,评价其体内情况;实验分4组:单纯BAMG-SF组,BAMG-SF皮下预制3 d组、预制7 d组、预制自体组织组(BAMG-SF皮下预制7 d后去除BAMG-SF,保留周围结缔组织),分别修复大鼠膀胱扩大术模型,术后4周行HE、Masson及相关免疫组化染色,评价其修复情况。结果皮下预制7 d,即有大量细胞长入;皮下预制14 d,材料可被自身组织包裹;皮下预制3 d组的血管及肌肉修复程度均优于其他组,自体组织组未见结石形成。结论 BAMG-SF双层支架材料可用于膀胱缺损修复,皮下预制3 d组织修复效果最好,而自体组织组可以避免结石形成。