HBV病毒滴度与血清标志物关系的研究

目的探讨乙肝患者血清中乙型肝炎病毒的滴度与血清标志物及肝功能的关系。方法1584份患者血清分别用荧光定量聚合酶链反应法(FQ-PCR)、ELISA法测定HBVDNA和血清标志物(HBV-M),肝功能三项(TB、AST、ALT)用全自动生化分析仪测定。结果感染期模式组共有1525例,HBVDNA检出有1215例,阳性率为79.67%,最高拷贝数为9.61×109/ml,最低拷贝数为9.16×103/ml,HBV-M主要模式大三阳、小三阳的HBVDNA阳性率分别为97.49%和51.17%,平均拷贝数分别为2.56×108/ml和1.61×107/ml;恢复期模式组有42例,但仍可检出HBVDNA4例,阳性率为9.52%;HBV-M全阴的有17例,1例为HBVDNA阳性,阳性率为5.88%。相关分析显示血清HBVDNA含量与肝功能状态无明显的相关性(相关系数γDNA-ALT=0.3204,γDNA-AST=0.2751,γDNA-TB=0.2007)。结论FQ-PCR方法检测HBVDNA具有高检出率,能准确反映乙肝病毒感染和复制情况;血清标志物阴性患者仍可有HBVDNA阳性;HBVDNA水平不能反映肝功能状态。HBVDNA与HBV-M、肝功能同时检测,对乙肝的临床诊断、治疗方案的选择以及疗效的判断有一定的指导意义。     

生物素标记HBV DNA探针在肝石蜡切片上作原位杂交技术的研究——各型肝病时HBV DNA的定位及形态

报告用生物素标记HBV DNA探针原位杂交技术,现察75例慢性肝病者肝石蜡切片上HBV DNA定位及形态。共检出HBV DNA阳性者25/75例(33.33％)。其中:CPH2/7例、CAH10/21例、肝硬化0/3例、SS4/11例、无症状HBsAg携带者4/21例和HCC5/12例。HBVDNA在肝切片上呈棕黄色粗颗粒状,主要分布于肝细胞浆内,个别核内亦可见少数浅染棕黄色颗粒。阳性肝细胞分布有三种形式:Ⅰ型(弥漫型):25例中有4例(16％),Ⅱ型(局灶型):20例(80％),Ⅲ型(散在型):仅1例(4％)。颗粒在胞浆内亦有a型(密集)和b型(稀疏)之分。各型乙型肝炎HBV DNA在肝切片上定位与分布不完全相同,可能表示不同的病毒感染状态和复制的活跃程度。HCC只在癌旁肝组织内查见HBV DNA。     

HDV阳性乙型病毒性肝炎血清和肝内HBV DNA状态的研究

本文报告15例HDV(+)乙型肝炎患者血清和肝内HBV DNA的状态和血清中HBVM的检测结果,并与13例HDV(-)者进行比较。结果发现:血清HBsAg在HDV(+)组有8例滴度≤1:4,其中5例短暂(-),1例住院2天内始终(-),HDV(-)组未见类似现象。HDV(+)和(-)组血清和肝内HBV DNA检出率分别为7/15例(46.7％)与3/12例(25.0％)和7/15(46.7％)与8/13例(61.5％),两者无差异。但HDV(+)组肝内HBV DNA在肝细胞胞浆内分布3例呈稀疏形式,2例着色浅淡,表明HBV复制受限,HDV对HBV可能有抑制现象。本文也具有部份HDV(+)患者肝内HBV DNA复制活跃,3例肝和血清HBV DNA同时阳性,这种结果的不一致可能与HDV感染处于不同阶段有关。     

A study on the Appearance of HBV DNA in the Liver and Serum of Patients with HDV/HBV Infection

The appearance of HBV DNA in the liver and serum of 15 patients with hepatitisB conifected with HDV was observed and compared with that of 13 HDV-negative cases.Itwas found that HBsAg titer was lower than or equal to 1:4 in 8 HDV-positive patients,inwhom it was temporally negative in 5,and negative during the,two-day hospitalization in 1.No similar result could be observed in the HDV-negative cases.The detection rate of HBVDNA in both the HDV positive and negative groups was 20.0％ (3/15) and 25％ (3.12) in se-rum,and 46.7％ (7/15) and 61.5％ (8/13) in the liver rcspectively.There was no signif-icant statistical difference between the 2 groups.The HBV DNA grains detected with in situ hybridization,with biotinylated HBV DNAprobe were demonstrated in the sparse type of distribution in 3 cases and lightly stained in 2.Itis believed that HBV DNA replication activity might be suppressed by HDV.However activeHRV DNA replication was also present in some HDV-positive patients and HBV DNA was posi-tive in both the liver and serum in 3 such patients.It was concluded that the difference of the detection rate of HBV DNA in HDV-positivepatients might be related to the different stages of HDV infection.     

1546例乙型肝炎患者血清HBV-M、HBVDNA、肝功能检测结果分析

目的探讨乙型肝炎患者血清病毒复制指标（HBVDNA）与乙肝标志物及肝功能关系。方法对1546例乙肝患者分别用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR法）检测血清样本中HBVDNA载量,酶联免疫吸附法测定血清中HBV-M,并同步检测肝功能。首先按HBV-M结果分组探讨与HBVDNA载量关系,再按HBVDNA载量高低分组探讨病毒载量与肝功能关系。结果大三阳组HBVDNA载量及阳性率显著高于其他各组（P〈0.01）,ALT水平随HBVDNA病毒载量升高而升高,AST水平在无病毒载量与有病毒载量组间存在显著性差异,并不随病毒载量的升高而升高,CHE水平与病毒载量高低无关。结论 HBeAg与HBVDNA载量关系密切,HBeAg阴转不表示病毒停止复制,HBVDNA可反映HBV在外周血的复制情况,并不能反映肝脏损伤程度及预后。     

乙肝患者肝组织中HBVcccDNA与血清中HBVDNA、HBeAg的关系

目的 探讨乙肝患者肝组织中HBVcccDNA与血清中HBVDNA、HBeAg的关系.方法 采用实时荧光定量聚合酶链反应检测乙肝患者肝组织中HBVcccDNA及血清HBVDNA,同时采用ELISA检测其血清中免疫指标HBeAg.结果 30例HBsAg、HBeAg、抗HBc阳性的乙肝患者血清中HBVDNA阳性28例阳性率93.33%,肝组织中HBVcccDNA阳性19例阳性率63.33%,两者比较差异有显著性P＜0.05.30例HBsAg、抗HBe、抗HBc阳性的乙肝患者血清中HBVDNA阳性8例阳性率26.67%,肝组织中HBVcccDNA阳性5例阳性率16.67%,两者比较差异无显著性P＞0.05.10例脂肪肝患者血清HBVDNA阴性,肝组织中未检出HBVcccDNA.结论 (1)血清HBVDNA或HBeAg阳性并不能完全确定肝内一定存在乙肝病毒正在复制.(2)HBeAg阴性抗HBe阳性不能完全确定肝内一定没有乙肝病毒复制.(3)要确定肝内病毒足否存在复制必须通过肝组织HB-VcccDNA检测来证实.     

乙肝病毒在转染细胞（z7－4）中复制的探讨

用ＨＢＶ　ＤＮＡ二聚体转染高度分化的人肝癌细胞株（ＨｅｐＧ２），筛选出具有分泌病毒抗原、核酸以及释放４２ｎｍ　Ｄａｎｅ颗粒能力的ｚ７－４细胞株。本实验结果支持３．５ＫｂｍＲＮＡ是前病毒基因，以它作模板可逆转录成１．６Ｋｂ（－）ｓｓＤＮＡ，再合成（＋）ｓｓＤＮＡ，最后装配成４．０Ｋｂ和３．２ＫｂｄｓＤＮＡ。在ＤＮＡ印迹法中位于４．０Ｋｂ（Ｄ１）和３．２Ｋｂ（Ｄ２）处是病毒的松驰环状双股ＤＮＡ（ＲＣＤＮＡ），而１．６Ｋｂ和１．２Ｋｂ处的２条ＤＮＡ带（Ｓ１和Ｓ２）均为单股ＤＮＡ，这些不同位置的ＤＮＡ带与病毒复制过程中ＤＮＡ的构型和片断大小不同有关。本实验未能发现２．０ＫｂｃｃｃＤＮＡ，但提示了负股ＤＮＡ５’端连接有蛋白质引物。     

HBV M和HBV DNA的关系探讨

目的:研究乙肝病毒血清学标志物(HBV M)与乙肝病毒脱氧核糖核酸(HBV DNA)之间的关系。方法:对497例患者同时检测HBV M和HBV DNA,HBV M检测用ELISA法,HBV DAN检测用PCR法。结果:HBV M的检测结果分为6组,每组HBV M组合都有一定的HBV DNA检出率。结论:说明HBV M只能作为乙肝病毒有无感染的一般性检测,而HBV DNA能检出复制病毒,但难以表达非复制状态的感染,所以两者关系值得进一步探讨。     

慢性乙型肝炎患者血清HBVDNA载量与肝功能指标关系研究

目的研究慢性乙型肝炎患者不同临床分型与HBVDNA载量及肝功能之间的关系。方法分别采用实时荧光定量PCR法及速率法对482例慢性乙型肝炎(CHB)进行血清HBVDNA定量和ALT、AST检测,根据其临床分型分为e--CHB、e+-CHB,分别观察其与HBVDNA载量、ALT、AST水平关系。结果 e--CHB与e+-CHB相比,前者年龄远大于后者(P<0.01),血清HBVDNA载量低于后者(P<0.01),血清ALT、AST水平高于后者(P<0.01)。e--CHB组随血清HBVDNA载量升高,其ALT、AST水平进行性升高(P<0.05),e+-CHB组血清ALT、AST水平与HBVDNA载量无关。结论 CHB不同临床分型在病毒学、生化学存在明显不同,对于e+-CHB患者HBeAg阳性是判断HBV复制的良好指标,其体内HBVDNA载量与肝脏炎症程度无关。e--CHB患者体内HBVDNA载量与肝内炎症程度相关,应重视对e--CHB患者的随访和治疗。     

乙肝DNA聚合酶在187例乙型肝炎病毒感染的各类肝病中的检测

采用免疫沉淀法对187例乙肝病毒感染患者作了DNA聚合酶(DNA--P)的测定。在各类肝炎中DNA—P的阳性检出率以慢活肝最高为66.6％,依次为急性肝炎45％,携带者33.5％,慢迁肝31.5％。本文分析了乙肝的抗原抗体系统与DNA—P检出率的关系。经统计学处理,DNA—P检出率与HBsAg滴度增高呈正相关γs=0.99,P<0.01。HBeAg阳性组DNA—P检出率为62.4％,抗—HBe阳性组DNA—P检出率为29.5％,抗—HBs阳性8例、DNA—P均为阴性。抗—HBc—IgM强阳性组DNA—P检出率为86.4％。作者认为1/3无症状携带者DNA—P活力增高表明病毒在复制,因此携带者在流行病学上的意义不可忽视。又鉴于18例抗—HBe阳性血清DNA—P活力增高,因此在判断HBeAg~-/抗—HBe~+患者病毒复制情况时,应予慎重。     

乙肝病毒携带者羊水穿刺后羊水中HBV-DNA拷贝数分析

目的 研究乙肝病毒携带者外周血HBV-DNA阳性与羊水HBV-DNA阳性的关系,以及是否经过胎盘穿刺对羊水HBV-DNA拷贝数的影响.方法 2011年10月~2012年10月有产前诊断指征需要进行羊水穿刺的乙肝病毒携带者孕妇,在离心取细胞沉淀培养后的羊水上清,测量羊水上清的HBV-DNA拷贝数;并与其外周血乙肝DNA拷贝数做统计学对比.以及比较是否经过胎盘对羊水乙肝DNA拷贝数的影响.结果 外周血HBV-DNA阳性的孕妇,其羊水HBV-DNA阳性率明显高于外周血HBV-DNA阴性的孕妇.结论 经过胎盘穿刺对羊水HBV-DNA阳性率的影响无统计学意义.     

孕妇乙肝大小三阳与血清HBVDNA浓度关系

目的探讨乙肝大小三阳传染性。以指导孕妇孕期保健。方法选择经孕期乙肝血清学五项检测诊断为乙肝大小三阳孕妇41例，其中大三阳组18例，小三阳组23例。采用荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对两组孕妇血清HBVDNA进行检测，以HBVDNA≥500copies／ml作为传染性标准。记录并分析各组孕妇血清HBVDNA浓度与大小三阳的关系。结果血清HBVDNA〈500copies／ml时，大三阳组1例，小三阳组17例，P〈0．01；血清HBVDNA浓度为500～1e％opies／ml时，大三阳组3例，小三阳组5例，P〉0．05；血清HBVDNA浓度为≥le6copies／ml时，大三阳组14例，小三阳组2例，P〈0．01。大三阳组17例传染性，占94．4％，小三阳组7例有传染性，占30．4％，P〈0．01。结论大三阳孕妇94．4％有传染性，且传染性强；小三阳孕妇30．4％有传染性，且传染性弱。     

胸腺肽对HBV转基因小鼠表达HBV DNA的影响

应用胸腺肽对ＨＢＶ转基因小鼠进行腹腔内注射（３ｍｇ／只）连续３个月，同时设促肝细胞生长素及生理盐水对照组，定期取血检测ＨＢＶＤＮＡ，结果发现胸腺肽组ＨＢＶＤＮＡ阴转率为２２％～５５％，停药２２ｄ后阴转率为２２％，而对照组小鼠ＨＢＶＤＮＡ无阴转，结果提示胸腺肽对ＨＢＶ转基因小鼠表达ＨＢＶＤＮＡ有抑制作用。     

381例HBV感染者HBV DNA前C区基因突变的研究

目的：研究乙肝病毒前C区基因变异株感染在乙肝病毒感染者中的分布情况,探讨其临床意义。方法：采用PCR－SSCP分析技术对381例HBV感染者进行HBV DNA前C区基因突变检测。结果：在不同临床类型的感染者中,检出率以肝癌患者最高（66．7％）,其次为慢重肝（50．00％）、肝硬化（43．75％）和慢性肝炎（35．35％）,它们与无症状HBV感染者和急性肝炎患者比较,差异均有显著性（P＜0．05）;在ALT明显升高的患者中,前C突变的检出率（34．86％）明显高于ALT正常者（21．71％）。结论：HBV DNA前C区基因突变可能与乙型肝炎病变的病程和严重程度有关;SSCP方法是检测HBV DNA前C区基因突变较为简便、快速、经济的方法,适合于对大样本进行研究。     

PCR检测HBV DNA对乙肝疫苗应答反应的研究

儿童全程接种乙肝疫苗后的应答反应率高（为９６％）［１］；而成人接种乙肝疫苗后免疫应答比较低（为６５．１２％）。本文对成人组接种乙肝疫苗无应答反应１５例（３４．８８％），进一步探索了乙肝疫苗接种后不产生抗－ＨＢｓ的原因，采用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术检测了１５例正常成人经乙肝疫苗接种后无应答反应者和３例乙型肝炎患者的血清，结果发现１５例不产生抗－ＨＢｓ者，经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ均为阴性；仅３例为阳性。本文作者在ＰＣＲ检测指导下，对１５例成人采用乙型肝炎免疫球蛋白（ＨＢＩＧ）和３０微克乙肝疫苗联合应用１０５天后，有１２例产生抗－ＨＢｓ。提示对于接种乙肝疫苗的正常人群，凡经ＰＣＲ扩增ＨＢＶＤＮＡ阴性者，经过重复大剂量注射乙肝疫苗后可使绝大多数得到可靠的保护。     

轻度转氨酶升高的慢乙肝患者血清HBeAg及HBVDNA与肝组织病理改变的关系

目的探讨ALT正常值1～2倍慢性HBV感染患者肝组织病理特征,分析血清HBeAg、HBVDNA定量与肝组织病理关系。方法选取ALT正常值1～2倍慢性HBV感染者90例,行肝穿刺,比较HBeAg阳性、阴性组及不同HBVDNA定量患者肝组织炎症分级、纤维化分期。结果90例患者均存肝损,病理诊断肝硬化7例,83例病理诊断慢乙肝患者,G≥2者27例（32．53％）,S≥2者25例（30．12％）。HBeAg阴性组病理炎症分级、纤维化分期均重于阳性组,不同HBVDNA定量组肝组织炎症分级、纤维化分期差异无统计学意义。结论ALT正常值1～2倍慢性HBV感染者,肝组织病理皆存异常,血清HBeAg、HBVDNA不能反映肝脏受损情况。     

乙肝病毒DNA和前S1抗原及其标记物三者相关性分析

目的探讨乙肝病毒前S1抗原(PreS1)与乙肝病毒DNA(HBV DNA)、乙肝病毒标志物(HBVM)之间的相关性,为拉米夫定(Lamivudine)治疗提供新的监测指标。方法收集慢性乙型病毒性肝炎患者500例,其中HBV DNA阳性400例(拷贝数>500/ml),按HBV-DNA含量由低到高分8组;其余为HBVDNA阴性对照100例。同步以酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测PreS1;以电化学免疫发光法检测乙肝病毒e抗原(HBeAg)、乙肝病毒e抗体(HBeAb)、乙肝病毒表面抗原(HBsAg);以荧光定量PCR法检测HBV DNA(以HBV DNA拷贝数>500/ml为阳性)。结果(1)在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,PreS1的阳性率比HBeAg高(P<0.05);在HBV DNA拷贝数1×106/ml以上,二者阳性率无显著性差异(P>0.05);(2)PreS1的灵敏度为90%(360/400),高于HBeAg的68.5%(274/400)(P<0.05);PreS1的阴性预示值为55.6%(50/90),高于HBeAg的43.2%(96/222)(P<0.05);PreS1的检测有效率为82.0%(410/500),高于HBeAg的64.8%(324/500)(P<0.05)。(3)在HBVDNA拷贝数500~1×104/ml之间,HBsAg的阳性率比PreS1高(P<0.05),在HBVDNA拷贝数1×104/ml以上,HBsAg的阳性率与PreS1的阳性率无显著性差异(P>0.05)。在HBVDNA拷贝数500~1×106/ml之间,HBeAb有较高的阳性率。结论PreS1与HBVDNA具有较好的相关性,其检测灵敏度和阴性预示值、检测有效率都优于HBeAg检测。PreS1可作为拉米夫定等抗病毒药物疗效观察指标之一。HBeAg阴性、HBeAb阳性不是传染性消失的可靠指标。     

HBV感染者血清标志物模式与HBVDNA的水平

目的：探讨乙型肝炎病毒（HBV）感染者血清标志物模式与HBVDNA水平的关系。方法：采用时间分辨荧光免疫定量分析法（TRFIA）和荧光定量PCR技术（FQ—PCR）分别检测542例乙型肝炎感染者血清HBVM和HBVDNA。结果：542例乙型肝炎感染者血清标本HBVM模式有10种,HBVDNA检出总阳性率83．39％（452／542）,各种模式HBVDNA的阳性率存在显著差异性,高拷贝数的HBVDNA主要存在于HBeAg阳性的各种模式中,与其它模式比较有显著差异（P〈0．05）。结论：动态监测HBVM和HBVDNA含量有利于对乙肝患者的诊断及疗效提供客观依据。     

HBV宫内感染的危险因素及与HBV DNA的关系

目的 探讨乙型肝炎病毒（HBV）宫内感染的危险因素及HBV DNA含量对HBV宫内感染的影响。方法 分别用酶联免疫吸附法及荧光定量PCR法检测230例HBsAg阳性孕妇及其新生儿外周血HBV血清标志物和HBV DNA含量,发生宫内感染的为病例组,余为对照组,运用非条件Logistic回归模型对宫内感染的危险因素进行分析。结果 （1）230例HBsAg阳性孕妇分娩的新生儿中,有22例发生宫内感染。其中HBsAg阳性7例,HBV DNA阳性18例,HBsAg和HBV DNA均阳性的3例,总的HBV宫内感染率为9．6％（22／230）。（2）非条件Logistic多元回归分析表明,仅HBV DNA浓度分级有统计学意义,OR为1．57（1．12．2．21）。（3）230例HBsAg阳性孕妇中HBV DNA阳性者119例,发生宫内感染18例,感染率为15．1％（18／119）,并且当孕妇血清HBV DNA浓度≥10^7copies／ml时,HBV宫内感染率显著增加,（χ^2=-7．92,P〈0．05）。结论 孕妇血清HBV DNA浓度分级是HBV宫内感染的危险因素,并且当HBV DNA浓度≥10^7copies／ml时,其宫内感染率显著增加。     

乙型肝炎病毒滴度与血清标志物的关系

目的探讨乙型肝炎病毒的滴度与血清标志物及肝功能的关系。方法采用荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)和ELISA法同时检测420份血清的HBV-DNA和血清标志物(HBV-M),并用全自动生化分析仪测定其肝功能ALT,对结果进行分析。结果105例HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组的血清HBV-DNA平均拷贝数为3.16×1010/m l,检出率为95.23%,显著高于其他组(P<0.01);HBsAg+、HBeAg+、HBcAb+组ALT异常率为64.76%(68/105),显著高于HBsAg+、HBeAb+、HBcAb+组ALT异常率36.96%(34/92)(P<0.01)。45例HBsAb+组血清HBV-DNA检出率为0,38例HBV-M全阴性组血清HBV-DNA检出率为7.89%。HBV-DNA阳性组ALT异常率为57.84%(107/185),显著高于HBV-DNA阴性组ALT异常率31.06%(73/235)(P<0.01)。结论定量PCR方法可以作为确认乙肝病毒感染不同状态的一种有效手段,血清标志物HBV-M阴性患者仍可有HBV-DNA阳性,HBV-DNA与HBV-M、肝功能同时检测,对乙肝的临床诊断、治疗方案的选择以及疗效判断有一定的指导意义。