应用重组哺乳动物细胞系生产疫苗

重组体DNA(rDNA)技术的问世,给疫苗生产的策略带来引人注目的变化.现已能分离编码含有病毒中和位点的特异蛋白的基因,并把它转染到培养的细菌、酵母或哺乳动物细胞中.这些转染或重组的微生物或细胞,可产生大量特异蛋白质,用这种特异蛋白质能生产高纯度的亚单位疫苗.本文讨论用于表达重组亚单位疫苗的宿主的选择问题.这种选择可归纳为五个基本问题:(1)宿主基因操作的容易度;(2)使用该宿主生产制品的费用;(3)纯化的费用;(4)效力;(5)安全性.开始,人们认为细菌(尤其是大肠杆菌)似最适于表达重组蛋白.在遗传学上,大肠杆菌最为简单,而且对其了解最充分,培养的费用也比较低廉.但是,大肠杆菌似不     

嵌合型病毒样颗粒疫苗的研究进展及药学研发思路

目的了解嵌合型病毒样颗粒(c VLP)疫苗在防治疾病等方面的研究进展,并探讨其药学研发思路。方法介绍常用病毒样颗粒(VLP)载体,总结cVLP疫苗在防治肿瘤和慢性疾病方面的应用,并从c VLP疫苗的构建与设计、VLP载体与免疫表位的连接方式、结构确证研究三方面开展c VLP疫苗的药学研究。结果与结论 cVLP作为改良型VLP,除构建自我组装VLP针对同源病毒的疫苗外,将VLP作为递呈载体还可呈现除载体外的其他病毒或肿瘤相关抗原表位,实现对多种病毒或肿瘤抗原的共同免疫。且c VLP作为一种技术平台,还可在预防病毒及治疗肿瘤和过敏性疾病中发挥重要作用。     

重组体表达的病毒样颗粒准型可作为疫苗研制的新途径

作者用表达逆转录病毒gag蛋白与单纯疱疹病毒(HSV)糖蛋白的痘苗病毒重组体共感染细胞,可产生病毒样颗粒准型(pseudotype)。这种准型颗粒是以非感染性的颗粒状态模拟天然抗原提呈过程来提呈病毒糖蛋白抗原的一种新方法。 先将猿猴免疫缺陷症病毒(SIVmac251)gag-pol区的全部4800个碱基对(bp)插入质粒pAbT4587得pAbT4660,将含2型HSV糖蛋白gD基因完整序列的1400个bp插入     

抗肿瘤重组蛋白疫苗的研究进展

肿瘤疫苗包括肽或蛋白疫苗、肿瘤细胞疫苗、抗独特型疫苗、树突状细胞疫苗、DNA疫苗及病毒载体类疫苗等。重组蛋白疫苗是通过对目的抗原基因的重组、构建、表达得到抗原蛋白,最终制备成的疫苗。随着重组技术及表达纯化技术的日益成熟,重组蛋白疫苗为肿瘤免疫治疗研究提供了一种研发思路。此文针对肿瘤抗原的重组蛋白疫苗做一综述。     

肌肉注射低剂量流感病毒DNA疫苗的保护性免疫

在许多抗病毒感染免疫中,细胞介导免疫（CMI）应答是很有益的。CMI可由减毒病毒和重组病毒或重组细菌等诱导产生,因它们在免疫宿主体内表达外源抗原。最近证明,非复制型质粒DNA表达载体经肌肉注射或粒子轰击后,可以在原位表达外源蛋白。所以,这种注射DNA的方法是产生免疫应答的有效手段。本文作者对流感病毒血凝素（HA）和核蛋白（NP）DNA疫苗的使用剂量与免疫原性及基于细胞和体液免疫的保护效     

病毒样颗粒用作轮状病毒亚单位疫苗(英)

目前正在人体中评价轮状病毒亚单位疫苗的效果，已在杆状病毒中克隆出编码各种轮状病毒结构蛋白的基因，并在杆状病毒表达系统中共表达出重组蛋白。这些表达的蛋白能自发装配成病毒样颗粒（VLP），各种不同组合结构蛋白共表达后即形成由各种不同蛋白构成的VLP。     

重组HBsAg／HCV颗粒在已免疫乙型肝炎疫苗小鼠中的免疫原性

HBsAg病毒样颗粒(VLP)的免疫原性多聚体表位提呈特性和已注册作为人用疫苗的特点使其成为理想的外源表位插入载体。但部分人群中已有的抗-HBs对这类嵌合抗原免疫效果的影响不明，作者将丙型肝炎病毒包膜蛋白E2的抗原高变区1(HVRl)插     

基因工程表达的颗粒状病毒样结构及其用作疫苗释放系统

作者用新型的杆状病毒多重基因表达载体同时表达蓝舌病病毒(BTV)的三、四或五种结构基因,表达产物可成功地组装为病毒样颗粒(VLP)及核心样颗粒(CLP).初步临床试验证明VLP是安全有效的疫苗,具有多方面的优越性.多组分的VLP还曾用作多种免疫原(包括B和T细胞表位)的疫苗释放系统.此表达系统有可能广泛用于疫苗、杀虫剂、诊断和蛋白质试剂的生产行业.     

病毒蛋白及基因工程疫苗的展望

目前,广泛使用的疫苗有三种:减毒活疫苗、灭活疫苗和亚单位疫苗.采用DNA重组技术,可将个别基因或基因组(操纵子)克隆并表达出来.第一种生产基因工程疫苗的方法是,携带天然的或人工组建的病毒蛋白基因的重组DNA,可合成具有特定免疫原性的多肽.这种多肽能诱生保护性中和抗体.经提纯浓缩后,这种蛋白可用作亚单位疫苗.本文以3种病毒多肽疫苗为例,综述用基因工程生产第一代亚单位疫苗的成就和展望.病毒多肽的体外合成多数人认为,假定细菌中合成的病毒蛋白位于病毒表面,且该蛋白携有能诱生保护性抗体应答的主要抗原决定簇,那么,用基     

HBV核心颗粒作为B细胞／T细胞表位的载体

重组乙型肝炎病毒（HBV）核心（HBc）这个20面体病毒样颗粒（VLP）可被视为外来免疫表位的非感染性载体的基本类型。重组HBc颗粒用于展示多种病毒、细菌和原虫蛋白的免疫显性表位。HBc颗粒作为载体的运用性是由其在异源性表达系统中高水平的合成和正确的自身装配能力来实现的。HBc壳膜二聚体单位不寻常的α螺旋结构，选择包装成为T＝3和T＝4对称的二十面体，并存在长而突出刺突，这些发现增中了人们对HBc VLP的兴趣。特别是刺突的顶端似乎是展示长达236个氨基酸残在的外来序列的最佳靶应，大量关于表位展示的实验室数据与精确的结构信息结合，有可能设计出以HBc颗粒为基础的诊断，疫苗的基因治疗工具。     

疫苗发展和使用的新方向

未来疫苗和新的生物工程未来疫苗的必备成份是活的生物体或其能诱生免疫力的关键抗原。近十年来生化技术的重大成就,已使人们可用下列方法识别和制备抗原:(1)通过重组DNA生产蛋白和多肽;(2)以杂交瘤技术产生合成寡肽和抗原决定簇;(3)定向突变、选择和稳定化。至于抗原提呈和免疫力增强方面,有待继续解决的问题是:(1)在微胶粒和脂质体中的抗原提是;(2)偶联于载体的抗原;(3)免疫刺激物     

重组ORF50和ORF73融合抗原检测HHV-8病毒的探讨

目的构建高效表达重组HI-IV-8病毒ORFSO和ORF73融合蛋白原核表达载体,为诊断试剂国产化提供抗原。方法设计并合成扩增ORF50和ORF73基因引物,以HI-IV-8感染血清DNA为模板,扩增出目的基因,连接基因片段,IPTG诱导表达重组融合蛋白。包被ELISA酶标板后对无偿献血人员血清进行检测,以市售HHV-8ELISA试剂盒作对照。结果与市售人疱疹病毒8@（HHV-8）ELISA试剂盒检测结果一致。结论构建的原核表达载体可成功表达重组HHV-8病毒ORF50和ORF73融合抗原,该抗原可作为HHV-8感染检测的诊断抗原。     

基于杆状病毒表达系统的流感病毒样颗粒疫苗研究进展

流感疫苗是目前应对流感最有效的措施,传统疫苗包括全病毒灭活疫苗、裂解疫苗和减毒活疫苗,近年来逐渐成为研发趋势的有重组亚单位疫苗、核酸疫苗、活病毒载体疫苗等。病毒样颗粒(virus-like particle,VLP)疫苗作为特殊形式的亚单位疫苗,具有生产迅速、安全性高、免疫原性较高等优势。VLP可以高效地诱发体液免疫与细胞免疫,且可经多种途径接种。目前已有多种表达系统用于制备VLP,其中应用最为广泛的是杆状病毒表达系统。此文综述了流感病毒VLP的类型、组装、抗原选择、免疫途径以及流感病毒VLP疫苗在杆状病毒表达系统中的研究进展。     

基因免疫使用的腺相关病毒载体

基因免疫开创了疫苗研究的新纪元,这种免疫方法提供了稳定而且长期不断的蛋白抗原来源.DNA疫苗制备简单,没有明显的毒性或宿主免疫力并能有效诱导体液和细胞免疫.使用病毒载体的DNA疫苗在一些临床前实验模型中具有较高的基因转移效率和诱导保护性与治疗性免疫作用.本文论述了腺相关病毒在疫苗研制中的应用潜力.     

可溶性抗原与ISCOM相结合:HIVgp120 ISCOM诱导病毒中和抗体

免疫刺激复合物(ISCOM)是一种稳定的蛋白抗原颗粒复合体,可作为病毒外膜两歧性糖蛋白的提呈系统。与微团或病毒颗粒中的抗原相比,它能显著提高病毒抗原诱导抗体应答的免疫原性,并刺激免疫动物产生抗原特异性细胞毒性T淋巴细胞应答。本文     

HBV核心颗粒作为B细胞/T细胞表位的载体

重组乙型肝炎病毒 (HBV)核心 (HBc)这个 2 0面体病毒样颗粒 (VLP)可被视为外来免疫表位的非感染性载体的基本类型。重组 HBc颗粒用于展示多种病毒、细菌和原虫蛋白的免疫显性表位。 HBc颗粒作为载体的实际运用性是由其在异源性表达系统中高水平的合成和正确的自身装配能力来实现的。HBc壳膜二聚体单位不寻常的 α螺旋结构 ,选择包装成为 T=3和 T=4对称的二十面体 ,并存在长而突出的刺突。这些发现增强了人们对 HBc VLP的兴趣。特别是刺突的顶端似乎是展示长达 2 36个氨基酸残基的外来序列的最佳靶位。大量关于表位展示的实验室数据与精确的结构信息相结合 ,有可能设计出以 HBc颗粒为基础的诊断、疫苗和基因治疗工具。     

基因免疫使用的腺相关病毒载体

基因免疫开创了疫苗研究的新纪元，这种免疫方法提供了稳定而且长期不断的蛋白抗原来源。DNA疫苗制备简单，没有明显的毒性或宿主免疫力并能有效诱导体液和细胞免疫。使用病毒载体的DNA疫苗在一些临床前实验模型中具有较高的基因转移效率和诱导保护性与治疗性免疫作用。本文论述了腺相关病毒在疫苗研制中的应用潜力。     

含前S1和前S2抗原的重组乙型肝炎疫苗在小鼠中的免疫原性

作者对由乙型肝炎病毒DNA转染的中国仓鼠卵巢（CHO）细胞分泌的重组乙型肝炎病毒表面（HBs）蛋白20nm颗粒的免疫原性作了评价,并与两种酵母重组疫苗进行了比较。该CHO细胞重组疫苗（Bio-Hep-B）的主要成份是小分子HBs（SHBs）蛋白,还含有中分子HBs（MHBs,即前S2）和大分子HBs（LHBs,即前S1）抗原。两种酵母重组疫苗（Engerix-B和H-B-VaxⅡ）仅含有非糖基化     

治疗进行性自身破坏性疾病的免疫方法

美国国立癌症研究所 ( NCI)的一项疫苗研究结果表明 ,不久将可采用免疫疗法治疗炎性疾病、变态反应、哮喘及 Alzheimer病。迄今的问题是 ,尽管实际上这些疾病是天然蛋白过量产生的结果 ,但是正常情况下免疫系统不会攻击视为自身的任何物质。　　研究者通过将“自身”肽连到乳头状瘤病毒样颗粒 ( VLP,无感染性活病毒类似物 )而使机体的免疫系统能对抗自身免疫反应。 VLP能诱导免疫系统 ,而免疫系统也能将连接肽看作外源物质 ,从而产生针对它们的抗体。具体的方法是将抗原连到似能诱导免疫系统的 VL P上。在小鼠中连有α肿瘤坏死因子表…     

重组卡介苗的研究与应用

重组卡介苗可同时表达多种病原体抗原，已成为新的疫苗载体。对重组卡介苗的研究方法和进展，包括重组卡介苗疫苗载体、启动子、电转化方法、绿色荧光蛋白的作用、重组耻垢分枝杆菌疫苗及重组卡介苗的作用机制等进行综述，并介绍了重组卡介苗在表达病毒、细菌及寄生虫抗原和表达细胞因子及抗肿瘤等方面的应用。