变应性鼻炎患者血清TNF-α和NO含量的动态变化及其免疫相关性分析

目的 探讨变应性鼻炎患者血清TNF-α、NO含量的动态变化情况及其免疫机制.方法 采用双抗夹心EIISA法测定TNF-α含量以及采用硝酸还原酶法测定血清NO水平.结果 血清TNF-α和NO水平AR组较正常对照组均呈显著性升高(P<0.01).且AR发作期的TNF-α和NO水平同间歇期以及正常对照组比较(P<0.01),AR组经激素治疗后患者血清NO浓度明显低于治疗前(P<0.01).结论 TNF和NO共同参与了AR的免疫发病过程,检测血清TNF-α和NO水平可为AR的诊断、治疗提供理论参考依据.     

基因工程技术制备和鉴定抗TNF-α蛋白Fab抗体

目的 利用基因工程技术制备人源性抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白的可溶性Fab抗体,并鉴定其抗原结合活性及特异性.方法 用固相化的TNF-α蛋白从人天然Fab噬菌体抗体库中筛选出表达抗TNF-α蛋白Fab抗体的阳性克隆,经酶切及连接反应构建可溶性表达噬菌粒并转化至大肠杆菌BL21(DE3)pLysS中,IPTG高效可溶性表达,SDS-PAGE及Western blot分析鉴定抗体表达情况、ELISA鉴定其抗原结合活性和特异性.结果 成功筛选并表达了人源性抗TNF-α蛋白的Fab抗体,在非还原SDS-PAGE中形成相对分子质量47 kD的条带;Western blot分析证实表达的蛋白即Fab抗体.ELISA筛选出2株抗体(TA-04,TA-13)具有良好的抗原特异性和抗原结合活性,与小牛血清白蛋白无交叉反应.结论 成功表达并鉴定了人源性抗TNF-α蛋白的可溶性Fab抗体,构建了一种基因工程抗体的有效制备途径.为基因工程抗体在肿瘤免疫治疗方面的临床应用研究奠定了基础.     

抗TNF-α抗体对结肠炎小鼠肠黏膜免疫功能影响的研究

目的探讨抗肿瘤坏死因子α(TNF-α)抗体对葡聚糖硫酸钠(DSS)结肠炎小鼠肠黏膜免疫功能的影响。方法制备小鼠DSS结肠炎模型,实验分成正常对照组、DSS模型组、抗TNF-α抗体组,每组6只。抗TNF-α抗体5 mg/kg腹腔注射给药,正常对照组和DSS模型组用等量生理盐水腹腔注射,每周2次,注射时间共7 d。每日进行疾病活动指数(DAI)评分,实验结束后取小鼠结肠进行HE染色评分,结肠黏膜匀浆检测髓过氧化物酶(MPO)活性和TNF-α、干扰素γ(IFN-γ)、白介素13(IL-13)和白介素17(IL-17)水平。结果与正常对照组比较,DSS模型组小鼠出现明显体重减轻、便血和腹泻,DAI评分和HI评分增加(P<0.01),结肠匀浆中MPO活性、TNF-α、IFN-γ、IL-13和IL-17水平均有不同程度的增加(P<0.01)。与DSS模型组比较,抗TNF-α抗体组小鼠DAI评分和HI评分明显降低(P<0.01),结肠匀浆中MPO活性、TNF-α、IFN-γ、IL-13和IL-17水平均有不同程度的降低(P<0.01)。结论 DSS结肠炎小鼠结肠局部免疫功能紊乱,抗TNF-α抗体具有调节DSS结肠炎小鼠结肠黏膜局部免疫功能的作用。     

人源抗-HBs Fab与IFN-α融合蛋白的克隆与原核表达

目的:构建人源单克隆抗-HBs Fab-IFN-α表达载体,探讨该融合蛋白原核表达的可行性及其生物学活性.方法:用PCR体外扩增目的基因IFN-α,单酶点插入已含人源抗-HBsFab基因的载体,插入点位于轻链基因3‘未端,利用酶切、PCR鉴定筛选正确插入的阳性克隆,转化大肠杆菌,挑选单克隆表达、纯化目的蛋白,用ELISA方法检测融合蛋白IFN-α的抗原性及其抗体亲和性,用WISH细胞检测IFN-α生物学活性.结果:利用插入了人源抗-HBs Fab基因及IFN-α基因的pBAD/gⅢA原核表达系统,成功表达了具生物活性的λ轻链与IFN-α的融合蛋白,其既具有与抗-HBs Fab相近的HBsAg的亲和力,又具有干扰素的活性.结论:λ轻链与IFN-α融合蛋白的成功表达表明,应用原核系统能够同时表达某些特异抗体和其介导的部分生物活性因子,是一种经济、有效的方法,为特异抗体及其介导融合蛋白的制备和临床应用提供了线索.     

抗人α-synuclein多克隆抗体的制备和鉴定

制备特异性抗人α synuclein抗血清 ,用于α synuclein相关退行性疾病及病理状态的研究。用重组人α synuclein免疫BALB/C小鼠 ,Dotblot、Westernblot及免疫组化法鉴定所获抗血清。Dotblot显示该抗血清可识别高于5 0ng的重组α synuclein。Westernblot分析表明此抗血清可识别人及大鼠脑匀浆中相对分子质量为 1 .8万的蛋白质 ,与以往报道α synuclein的相对分子质量一致。免疫组化染色显示α synuclein免疫活性物质广泛分布于皮质、海马、纹状体、杏仁核和嗅球 ,主要集中于神经元核周胞质及神经末梢。提示 :所制备的抗血清可特异性识别人及大鼠脑中的α synuclein ,该抗体对α synuclein相关疾病的研究具有应用价值     

脑出血患者TNF-α的表达及其临床意义

目的观察脑出血患者TNF-α蛋白的表达情况,探讨TNF-α蛋白在脑出血患者中表达特点与脑出血时间的关系和意义。方法应用免疫组化方法检测65例脑出血患者出血灶周围脑组织TNF-α蛋白的表达。结果65例脑出血灶周边脑组织标本中,TNF-α蛋白阳性表达率为84．6％（55／65）,10例正常脑组织中TNF-α蛋白阳性表达率为0（0／10）,两者比较有显著性差异（P〈0．01）。TNF-α蛋白在脑出血后不同时问阳性表达率分别为出血后〈24h83．0％（39／47）,出血后〉24h88．9％（16／18）,出血组之间比较无差异（P〉0．05）。结论脑出血急性期血肿周围组织存在TNF-α高表达,且有大量炎性细胞浸润,以中性粒细胞、淋巴细胞为主。TNF-α参与了脑出血脑水肿的病理生理过程,从而加重血肿周围脑组织的损害。     

糖尿病大鼠TNF-α表达与大血管病变的关系

目的：通过观察糖尿病大鼠不同时间段颈动脉中肿瘤坏死因子（TNF-α）表达变化趋势及颈动脉内中膜厚度（CIMT）,探讨TNF-α与糖尿病的大血管病变之间的关系。方法：将大鼠分为正常对照组（A组n=18）、糖尿病组（B组n=18）,分别于实验的4周、8周、12周,采用酶联免疫吸附法、RT-PCR法测定血清及颈动脉中TNFα-水平,同时测定CIMT。结果：与A组比较,B组大鼠随TNF-α表达增强CIMT显著增加（P〈0.05）,大鼠颈动脉TNF-αmRNA的表达与CIMT存在明显正相关关系。结论：TNF-α参与了糖尿病大血管病变的发生发展。     

哮喘病患者TNF-α基因多态性及表达与内皮损伤的研究

目的 探讨哮喘病患者TNF-α-308位点基因型分布及mRNA表达对其血管内皮损伤的影响.方法 选择3个月内未全身使用过激素及茶碱的哮喘病患者112例,根据病情严重程度分为轻度哮喘组和中重度哮喘组,健康志愿者60例为对照组.采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性分析方法测定TNF-α-308位点多态性,实时荧光定量PCR法检测其外周血单个核细胞中TNF-αmRNA表达水平.同时测定血清中总IgE、TNF-α、CRP、PAI-1、ET-1及一氧化氮水平,测定颈动脉内中膜厚度(CIMT)和肺功能.结果 ①172名研究对象G-308A TNF-α基因型分布符合Hardy-Weinberg平衡;②中重度哮喘组A等位基因频率与对照组比较有显著性差异(P＜0.05);③哮喘组GA+AA基因型组与GG基因型组比较,HOMA-IR、IgE、CRP、TNF-α、PAI-1和ET-1水平明显升高(P＜0.01),TNF-αmRNA表达、CIMT明显增加(P＜0.01),一氧化氮水平、FEV1占预计值(％)和FEV1/FVC(％)明显下降(P＜0.01);④Pearson相关分析结果显示,TNF-α mRNA与TNF-α、CRP、HOMA-IR、PAI-1、ET-1、CIMT呈正相关(r分别为0.631、0.367、0.338、0.243、0.327、0.347,P＜0.01),与FEV1占预计值(％)、FEV1/FVC、NO呈负相关(r为-0.326、-0.393、-0.199,P ＜0.05～0.01);⑤多因素回归分析显示CIMT与ET-1、HOMA-IR、TNF-α mRNA表达、PAI-1呈正相关(t =1.966～3.788,P＜0.05～0.01),与FEV1占预计值(％)呈负相关(t=3.181,P＜0.01).结论 哮喘病患者TNF-α 308 A携带者的基因型与哮喘及血管内皮损伤相关.提示TNF-α 308 A携带可能与哮喘伴发心脑血管危险因素有关.     

TNF-α基因多态性与食管癌相关性的研究

目的研究TNF-α单核苷酸多态性与食管癌发生、发展和转移的关系。方法以PCR-RFL方法分析了食管癌病例（n=202）和按性别、年龄频数对照的正常对照者（n=317）TNF-α-308G/A多态,并比较不同基因型与食管癌发生风险、分化程度以及淋巴结转移的关系。结果TNF-α-308G/A基因频率在病例组与对照组中的分布无显著性差异（p〉0.05）,与食管癌发生风险无关。携带有A（G/A or A/A）等位基因的食管癌患者,其肿瘤恶性程度显著高于G/G基因型（79.8%＆56.1%;OR=2.948,95%CI=1.468～5.920;p〈0.05）,而且,发生淋巴结转移的风险性显著增加（54.0%＆34.5%;OR=2.223,95%CI=1.212～4.076;p〈0.05）。结论TNF-α-308G/A多态性可能在食管癌的发展和转移中起一定作用。     

油酸型ARDS大鼠肾组织TNF-α和IL-10的表达

目的:观察油酸致大鼠ARDS过程中肾组织TNF-α、IL-10在基因及蛋白水平表达的变化。方法:采用油酸(Oleic Acid,OA)法将16只Wister大鼠复制ARDS模型,随机分为对照组和实验组(油酸6 h组),测定肾功能,解剖取肺、肾脏同时测定肺湿/干(W/D)。应用逆转录-聚合酶链反应法(RT-PCR)检测大鼠肾组织TNF-α、IL-10基因的表达;采用放射免疫法检测大鼠血、肾脏组织TNF-α及IL-10蛋白的表达;光镜观察肾组织病理学改变。结果:实验组较对照组肾功能检测值增高;TNF-α、IL-10 mRNA的表达在血清及肾脏增强;TNF-α、IL-10蛋白的表达在血浆及肾脏增强;病理切片肾组织有结构改变。结论:TNF-α、IL-10可能参与ARDS致肾功能障碍的发病机理。     

TNF-α基因多态性与食管癌相关性的研究

目的 研究TNF-α单核苷酸多态性与食管癌发生、发展和转移的关系.方法 以PCR-RFL方法分析了食管癌病例(n=202)和按性别、年龄频数对照的正常对照者(n=317)TNF-α-308G/A多态,并比较不同基因型与食管癌发生风险、分化程度以及淋巴结转移的关系.结果 TNF-α-308G/A基因频率在病例组与对照组中的分布无显著性差异(p＞0.05),与食管癌发生风险无关.携带有A(G/A or A/A)等位基因的食管癌患者,其肿瘤恶性程度显著高于G/G基因型(79.8%&56.1%;OR=2.948,95%CI=1.468～5.920;P＜0.05),而且,发生淋巴结转移的风险性显著增加(54.0% &34.5%:OR=2.223,95%CI=1.212～4.076;p＜0.05).结论 TNF-α-308G/A多态性可能在食管癌的发展和转移中起一定作用.     

TNF-α和IL-13基因多态性与儿童哮喘的关系

目的：通过研究TNF-α和IL-13基因的多态性为哮喘的诊断提供基础。方法：选择105例哮喘患儿和正常儿童80例。采集外周静脉血,采用多聚酶链反应-限制性片段长度多态性（PCR-RFLP）技术检测TNF-α和IL-13基因多态性。结果：病例组等位基因TNF-αA的分布频率均显著高于对照组（P〈0.05）。IL-13位点病例组等位基因A的分布频率远高于对照组（P〈0.05）。结论：TNF-α和IL-13多态性可能做为确定哮喘易感人群的一个重要指标。     

抗人TNF-α单克隆抗体对银屑病患者血清TNF-α的中和研究

目的:研究抗人TNF-α单克隆抗体对寻常型银屑病患者血清TNF-α的中和效应。方法:应用双抗体夹心ELISA方法检测正常人及患者血清应用单克隆抗体中和前后TNF-α的浓度改变。应用L929细胞检测正常人和患者血清抗体中和前后的生物学活性变化情况。结果:正常人与银屑病患者血清TNF-α的浓度分别为:(3.146±6.184)pg/ml及(62.723±38.379)pg/ml;其生物学活性分别为:(6.817±5.086)%及(57.498±9.125)%。抗体中和后患者血清TNF-α的浓度为:(0.503±1.178)pg/ml;中和后的生物学活性为:(25.378±14.863)%。结论:寻常型银屑病患者血清中TNF-α的浓度及生物学活性均高于正常对照,而抗人TNF-α单克隆抗体在体外可以很好地中和患者血清中TNFα的浓度及其生物学活性。     

TNF-α的表达与激素性股骨头缺血性坏死关系的研究进展

长期使用或短期大量使用肾上腺皮质激素,引起的股骨头缺血坏死,已引起医学界的广泛关注。目前股骨头坏死病人大部分早期得不到明确诊断,临床上亦缺乏行之有效的防治方法。虽然通过多年的研究,对激素性股骨头坏死机制已经提出许多分散的理论,但均未能完全阐明激素性股骨头缺血坏死的发病机理,至今仍有许多需要解决的问题。近年随着研究不断深入,发现激素性股骨头坏死的机制与血清中TNF-α的浓度有密切关系,本文对TNF-α与激素性股骨头坏死关系的研究作一综述。     

电针对ApoE-/-小鼠肝脏PPARα与TNF-α蛋白表达的影响

目的 探讨电针对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠肝脏过氧化物酶体增殖剂激活受体α(peroxisome proliferator-activated receptor alpha, PPARα)、肿瘤坏死因子α（tumor necrosis factor alpha, TNF-α）蛋白表达的影响。方法 将30只ApoE-/-小鼠随机分为模型组、药物组及电针组,每组10只。采用高脂饲料喂养14周的方法复制高脂血症模型。电针组小鼠接受单侧神门、内关、足三里、三阴交电针,药物组小鼠每日接受40 mg/kg辛伐他汀灌胃。免疫组织化学法检测肝脏中PPARα、TNF-α的表达,采用Western blot检测肝脏PPARα的蛋白表达。结果 电针组小鼠肝脏中PPARα的蛋白表达水平高于模型组,但差异无统计学意义（P>0.05）,肝脏TNF-α表达水平显著低于模型组（P<0.05）。与模型组比较,电针组小鼠肝细胞内小颗粒脂滴减少,肝细胞凋亡和坏死减少,且肝细胞保存相对完整。结论 电针通过抑制炎性因子的表达而减少脂质沉积,治疗动脉硬化。     

牙周炎、冠心病与TNF-α的关系

目的通过研究TNF-α在血清中的分布及与牙周临床指标的关系,探讨TNF-α在两种疾病相互关系中可能的作用,进一步揭示牙周炎与冠心病之间病理机制的联系。方法选取冠心病组(P-CHD+)19例,牙周炎组(P+CHD-)21例,冠心病牙周炎组(P+CHD+)19例,健康对照组(P-CHD-)20例。对所有研究对象进行详细的牙周检查,收集病人血清,ELISA法测定血清中TNF-α的水平结果P+CHD-、P-CHD+、P+CHD+、P-CHD-四组血清TNF-α浓度分别为:(34.71±11.60)pg/ml、(19.23±5.12)pg/ml、(12.21±3.26)pg/ml、(47.19±17.51)pg/ml。四组之间差异性显著。结论TNF-α可能参与了牙周炎症的发生发展,并在牙周炎和冠心病的相互关系中发挥作用。     

TNF-α与INF-γ在肠结核患者血清中的表达研究

目的 研究肠结核患者血清INF-γ和TNF-α的表达变化.方法 采集肠结核患者不同治疗阶段及健康志愿者的血清,采用ELISA检测其INF-γ表达水平,RAA检测TNF-α表达水平.结果 肠结核患者血清INF-γ和TNF-α的表达均显著高于健康对照组,并且随着患者病情变化而变化.结论 测定INF-γ和TNF-α的表达可以反映和预测肠结核患者的病情变化.     

大鼠酒精性脑损伤组织中TNF-α的表达

目的探讨酒精致大鼠脑损伤合并内毒素血症过程中,脑组织TNF-α的水平变化及相互关系。方法采用SD大鼠进行酒精灌胃,建立酒精性脑损害的动物模型,用光镜观察各组大鼠脑组织的病理改变,采用偶氮显色法定量检测模型组与对照组血浆中内毒素(ET)的水平;用ELISA法检测各组脑组织匀浆中的TNF-α的水平。结果脑组织病理切片显示,模型组脑组织有严重损伤;模型组血浆中的ET以及脑组织匀浆中的TNF-α水平明显高于对照组(P<0.05)。结论TNF-α在脑组织中的含量增高可能与酒精所致的大鼠脑组织损伤有密切联系。     

中药对巨噬细胞源TNF-α干预作用的研究概述

中药可通过多靶点、多途径、多机制刺激巨噬细胞而发挥免疫调节等药理效应。TNF—α主要由巨噬细胞等产生。是介导多向性炎症反应和免疫调节反应等生物作用的关键介质之一。研究资料显示,许多中药可通过调节巨噬细胞源TNF-α的水平而发挥复杂的药理效应。本文综述了国内外有关中药对巨噬细胞源TNF-α干预作用的研究概况。     

牙周炎、冠心病与TNF-α的关系

目的通过研究TNF-α在血清中的分布及与牙周临床指标的关系,探讨TNF-α在两种疾病相互关系中可能的作用,进一步揭示牙周炎与冠心病之间病理机制的联系。方法选取冠心病组(P-CHD+)19例,牙周炎组(P+CHD-)21例,冠心病牙周炎组(P+CHD+)19例,健康对照组(P-CHD-)20例。对所有研究对象进行详细的牙周检查,收集病人血清,ELISA法测定血清中TNF-α的水平结果P+CHD-、P-CHD+、P+CHD+、P-CHD-四组血清TNF-α浓度分别为:(34.71±11.60)pg/ml、(19.23±5.12)pg/ml、(12.21±3.26)pg/ml、(47.19±17.51)pg/ml。四组之间差异性显著。结论TNF-α可能参与了牙周炎症的发生发展,并在牙周炎和冠心病的相互关系中发挥作用。