放射免疫沉淀试验在鼠疫监测中的应用与评价

在全国各省(区)鼠疫监测中,特别是多年连续检不出鼠疫菌,间接血凝(IHA)阳性血清的历史疫区及疫源地毗邻地区,放射免疫沉淀试验(RIP)作为一种高敏感性的血清学诊断技术在我国鼠疫监测中广泛应用,获得了大量有价值的资料。本文对近年来RIP的应用实践及前景进行简要综述和分析。1疫源地动物鼠疫监测1.1RIP应用概况自从RIP的诊断标准确定之后犤1犦,有16个省(区)在鼠疫监测中采用这一方法。其中有11个省(区)作为常规方法应用已十几年。从1985年以来,用RIP检测各种动物血清70余万份。1989～1999年共检出阳性血清882份,由于使用RIP检测的…     

ELISA双抗原夹心法检测鼠疫FI抗体的效果评价

目的比较ELISA双抗原夹心法与IHA法检测人血清中鼠疫FI抗体的最低检出限,符合率以及检测ELISA的特异性,以确定ELISA检测技术能否在鼠疫监测、诊断和流行病学调查中得到应用。方法分别用ELISA双抗原夹心法和IHA（间接血凝法）检测血清298份和鼠疫阳性诊断血清1份。结果ELISA双抗原夹心法检出4份阳性血清,IHA也检出4份阳性血清,2种方法阳性检出率无差别,符合率为75％,最低检出限均为1：160。结论ELISA特异性强,阳性检出率与IHA相当,结果容易判定,可以在鼠疫病例诊断及鼠疫监测中作为常规方法推广使用。     

马关县鼠疫F1抗体的发现及分析

云南省鼠疫流行历史悠久,据记载,马关县曾于1858～1904年多次发生过鼠疫大流行,属鼠疫远史流行县。在长期的鼠疫监测工作中,1984年从黄胸鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(SPA-血凝,1:40),1985年应用放射免疫沉淀试验(RIP),在同地区的黄胸鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(1:80),1996年从县城食品加工房捕获的2只褐家鼠血清中检出鼠疫F_1抗体(1只 RIP1:5120,IHA1:40~(++),另1只RIP1:2560,IHA1:20~(++))。由此认为该县近年来曾发生过动物鼠疫流行,应加强鼠疫监测工作,密切监视疫情发展态势,检测结果如下。     

应用RIP法检测小肠结肠炎耶氏菌对鼠疫F_1抗体的交叉反应性

利用放射免疫沉淀试验(RIP)检测鼠疫F_1抗体的敏感性与特异性均优于广泛应用的间接血凝试验(IHA)。本文将鼠疫抗血清用本室保存的小肠结肠炎耶氏菌抗原吸收后以RIP和IHA测定鼠疫抗血清的残留效价,观察小肠结肠炎耶氏菌对鼠疫F_1的交叉反应。现将结果报告如下。     

甘南州近年来鼠疫监测血清学检测结果分析

目的通过对甘南州近年来鼠疫监测血清学检测结果的分析,预测该疫源地旱獭鼠疫复燃的可能性。方法对1990年以来鼠疫监测中应用IHA、RIP和ELISA方法,检验该块疫源地的动物及人血清的结果进行研究,分析该地区鼠疫流行现状。结果夏河县自1991年至今用IHA方法检出22份旱獭阳性血清,用ELISA方法检出1份人阳性血清(滴度为1∶64);碌曲县用RIP方法检出2份旱獭阳性血清;历史鼠疫疫源地玛曲县用RIP方法检出1份犬阳性血清。结论该块旱獭鼠疫疫源地已渐入复燃期,应进一步加强当地旱獭鼠疫的血清学和病原学监测,开展牧羊犬血清鼠疫FI抗体检测,同时开展历史鼠疫疫源性的调查。做好群众以"三报三不"为主的宣传教育工作,进行基层医疗卫生人员的鼠疫防治全员培训,严防人间鼠疫的发生和流行。     

放射免疫沉淀试验检测人血清鼠疫F_1抗体诊断标准的研究

本文应用RIP(放射免疫沉淀试验),对云南2956份人血清进行鼠疫F_1抗体检测,结果表明,阳性检出率和阳性抗体几何平均滴度RIP均高于IHA(血凝试验)(P<0.005),且IHA阳性者RIP无一阴性。被检人血清与正常人血清结合率比值(B/B_O)≥3可作为阳性反应标准,阳性滴度标准为l:80(SPA法)。人血清RIP诊断标准的提出,为诊断鼠疫病人和鼠疫免疫学研究提供了一种较为先进的手段。     

鼠疫放射免疫沉淀试验在鼠疫监测中的应用及效果评价

目的：建立敏感性高、特异性强的鼠疫血清学诊断方法，应用于鼠疫血清学监测。方法：用标记的鼠疫菌FI抗原（^123I-FI）检测阳性血清、免疫黄鼠血清、实验区各种动物血清及正常血清。结果:建立鼠疫放射免疫沉淀试验（RIP），并确定其诊断标准，研制出了鼠疫抗体放免测定盒及其使用方法。RIP在鼠疫监测中的应用。结论：RIP的敏感性和特异性均明显高于IHA，是目前建立的鼠疫血清学方法中最为敏感特异的方法。     

用放射免疫沉淀试验检查几种感染鼠疫菌的试验动物F1抗体

用RIP对感染鼠疫菌的黄胸鼠等5种鼠类血清和脏器进行测定,结果表明脏器可检出F1体:一般情况,检出菌及IHA阳性标本难于查出抗体,而检出F1抗体者又难于培养出鼠疫菌:血清抗体阳性率及滴度与鼠疫菌攻击量无相关关系而与感染率有一定关系。     

富集血凝试验检测鼠疫F_1抗体的有效性

实际应用富集血凝试验(Richened-IHA)检测多种动物的鼠疫阳性血清115份。证明R—IHA和RIP两法用于检测鼠疫F_1抗体其效果基本一致。阳性率均为100%。而IHA的检出效果则明显地低,阳性率为87.82%,比R—IHA低110倍。     

RIP检出人群血清鼠疫F1抗体的调查报告

为探索和进一步验证RIP的特异性问题,我省近年来在开展鼠类标本RIP检测的同时,对人群血清F_1抗体也进行了检测,并对人群血清RIP阳性检出者进行了流行病学个案调查,同时对照测定了30岁以下年龄组的健康人群血清,结果报告如下:1 材料与方法1.1 血清来源 随机收集不同年龄、不同地区的布病监测余留血清1360份,30岁以下年龄组的从业人员体检血清465份,历史鼠疫康复者血清4份。1.2 鼠疫RIP IHA试剂盒为全国鼠布基地生产,在有效期内使用。1.3 FT-630G微机多探头r计数器,北京核仪器厂生产,效率>85%,本底<100。1.4 判定标准 RIP结合率比≥3,滴度1∶80以上为阳性。IHA凝集价1∶20(++)以上为阳性。被检血清均进行初筛试验,阳性者再作RIP确证试验及IHA复判试验。     

鼠疫菌F1抗原及抗体血清在不同保存条件下对RIP试验的影响

鼠疫抗体的放射免疫沉淀试验(RIP)已较普遍地应用于鼠疫监测工作中,为保证放免测定的准确性,我们对鼠疫菌F1抗原及抗体血清在不同保存条件下对放射免疫沉淀试验检测给果的影响进行了观察,现将结果报告于下。     

2015─2017年新疆青河县山区动物鼠疫血清学和病原学调查

目的通过鼠疫病原学和血清学的实验检测结果,了解新疆青河县山区存在鼠疫自然疫源地的潜在状况。方法采用鼠疫"四步检验"法分离青河县山区捕获的长尾黄鼠及灰旱獭脏器、自毙动物脏器及骨骼和寄生蚤中的鼠疫菌;间接血凝试验(HA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测动物脏器和寄生蚤悬液中的鼠疫F1抗原;长尾黄鼠、灰旱獭以及牧犬血清中的鼠疫F1抗体。结果经鼠疫"四步检验"和反向间接血凝(RIHA)检验长尾黄鼠脏器552份、灰旱獭脏器4份、自毙长尾黄鼠和灰旱獭脏器及骨骼13份、长尾黄鼠体外寄生蚤583只,均未检出鼠疫菌及F1抗原;检测长尾黄鼠血清552份,IHA法检出阳性1份、滴度1∶2~9,ELISA法检出阳性3份、平均滴度1∶2~8;检测牧犬血清129份,IHA法检出阳性6份、平均滴度1∶2^(3.83),ELISA法检出阳性8份、平均滴度1:26.75;其中牧犬鼠疫F1抗体阳性标本中检出鼠疫IgM抗体阳性2份,平均滴度1∶2^(5.5)。结论新疆青河县山区啮齿类动物间有鼠疫流行迹象,流行区域为花海子地区,存在潜在鼠疫自然疫源地,建议对该区域开展进一步鼠疫疫源性调查。     

放射免疫沉淀试验检测鼠疫FI抗体的研究——Ⅰ.特异性与敏感性

试验证明,用放射免疫沉淀试验(RIP)检测鼠疫抗体时,将被试血清与相应的阴性对照血清的结合比定为≥3作为反应标准是适宜的;用RIP检测假结核,小肠结肠炎菌等抗血清30份,这些抗血清在1:10到1:100的各种稀释度中与~(125)I-鼠疫FI抗原均无交叉反应,从非鼠疫疫区收集的2196份哺乳动物血清,亦未发现阳性反应,说明该法特异性强。由于RIP是用分离剂沉淀鼠疫抗原-抗体复合物,故能检出不完全抗体,检出率不仅高于常规的间接血球凝集试验(IHA)和酶联免疫吸附试验(ELISA),且滴度往往高十几倍、几十倍,乃至几百倍。所以用RIP检测潜在性鼠疫疫源地、考核灭源效果以及在科研中用于检测微量鼠疫抗体具有重要意义。加之该法自动化程度高,测试信息以数字显示,因而指标客观,容易分析,适于大规模现场调查。     

重组鼠疫菌F1抗原制备胶体金免疫层析试纸条的研制与现场应用评价

目的 表达和纯化重组鼠疫菌F1抗原(rF1),构建胶体金免疫层析试纸条(GICA),检测和评价该试纸条的现场应用效果.方法 以镍离子金属螯合(Ni-NTA)亲和层析柱和脱盐柱对rF1进行纯化并构建GICA,应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)3种方法对1份鼠疫菌免疫兔血清和1 685份现场血清样本(包括94份人、939份犬、34份猫、609份鼠和9份旱獭)进行F1抗体检测.结果 rF1得到高效表达并实现较好纯化.GICA、ELISA、IHA 3种方法检测1份鼠疫菌免疫兔血清,结果均为阳性,最低检测滴度ELISA法高于GICA法(1∶10×211比1∶10×29),GICA法高于IHA法(1∶10×29比1∶10×28).对1 685份现场血清样本进行检测,GICA法阳性89份(5.28％),IHA法阳性53份(3.15％),ELISA法阳性101份(5.99％);GICA法与IHA法的总符合率为97.3％,与ELISA法的总符合率为97.9％.配对资料x2检验结果显示,GICA法阳性检出率高于IHA法(x2=26.63,P＜0.05),但与ELISA法比较,差异无统计学意义(x2=3.36,P＞0.05).结论 rF1表达和纯化成功,用其构建的GICA特异性强,敏感性高,与IHA、ELISA法结合应用,能有效提高鼠疫检测的速度和质量.     

应用放射免疫沉淀试验方法开展鼠疫血清学监测

放射免疫沉淀试验（RIP）检测鼠设FI抗体，是一种敏感性高、特异性强、稳定和适用的血清学诊断方法。该方法已由实验转向应用。据报道：一些地区多年来一直用常规血清学方法检测，未查出鼠疫FI抗体，用RIP方法获得了阳性结果。以后均用IHA得到了证实犤１犦。为提高本省未知历史疫区的鼠疫监测技术和质量，我们在１９８８～２００１年，对河源市、陆丰市、普宁市和电白县的鼠疫监测先用IHA方法再采用RIP方法检测鼠类血清鼠疫FI抗体，检测结果如下。１材料和方法血清来源：采自本省河源市（１９８８年）、陆丰市（１９９９年）、普宁…     

四川省德格县旱獭鼠疫流行病学调查

目的证实喜马拉雅旱獭(旱獭)鼠疫在四川是否存在,为鼠疫防治提供依据。方法应用现场流行病学调查和实验室检测相结合。结果通过鼠疫间接血凝试验(IHA)检出犬阳性血清2份,从33份旱獭标本中检出鼠疫F1抗原阳性材料10份,17份旱獭检材中检获鼠疫菌4株。结论确定四川德格县为喜马拉雅旱獭鼠疫自然疫源地。     

固相放射免疫试验检测鼠疫F1抗体

建立了固相放射免疫试验(SPRIA)检测鼠疫F1抗体的方法。被测抗体经F1抗原两次选择结合,提高了检测特异性。检测人和5种非鼠疫疫区动物血清205份,以及假结核菌等6株非鼠疫菌免疫动物血清,全部阴性。检测鼠疫康复人和接种鼠疫苗的7种动物血清8份,IHA和SPRIA全部阳性,放射免疫沉淀(SPA—RIP)有两种动物为阴性结果;阳性反应GMT、SPRIA比IHA高,比SPA—RIP低。试验表明SPRIA检测鼠疫F1抗体,具有良好的特异性和敏感性,操作简便、快速,可检测各种标本。     

四种耶尔森氏菌的抗原抗体相关性研究

目的了解鼠疫、假结核、小肠结肠炎和中间型耶尔森氏菌抗原抗体在免疫血清学中是否存在相关性?方法用四种耶尔森氏活菌分别或混合家兔耳静脉注射4次获得高效价抗血清,用鼠疫FI抗原和其他耶尔森氏菌全菌冻溶和耐热抗原,作鼠疫RIP试验和抑制试验。结果RIP仅能检出鼠疫菌单独或混合其他菌抗血清中的特异性FI抗体,FI抗原能完全抑制EV株、A2株和A2株混合其他耶尔森氏菌抗血清中的特异性抗体,假结核、小肠结肠炎、中间型耶尔森氏菌冻溶抗原对EV株抗血清抑制2~3管,对A2株混合不同耶尔森氏菌的抗血清不能抑制,假结核耐热抗原对EV株抗血清能抑制6~7管,对A2株混合其他耶尔森氏菌抗血清抑制2管。结论FI抗原对三种耶尔森氏菌抗体没有相关性,其他3种耶尔森氏菌冻溶抗原对EV株、A2株抗体有一定的相关性,而伪F2、519、520株耐热抗原对EV株抗体有较强亲缘相关性,对A2株抗体仅有一定的相关性。     

甘南玛曲县及其周边地区鼠疫自然疫源性调查结果

目的调查玛曲及其周边地区是否存在鼠疫自然疫源地.方法对自然景观、宿主动物、传播媒介等进行现场调查,对所获材料进行血清学和细菌学检验.结果未检出IHA阳性血清,未分离出鼠疫菌,检出3份RIP阳性血清,但该地区自然景观及主要宿主动物分布和媒介蚤构成表明当地具备鼠疫自然疫源地存在的基本条件.结论玛曲及其周边地区可能存在鼠疫自然疫源地,建议加强监测,及时发现和控制疫情.     

胶体金免疫层析法检测鼠疫F1抗体技术的应用及效果评价

目的研究鼠疫胶体金免疫层析法(GICA)快速检测鼠疫F1抗体技术在鼠疫血清学诊断、监测及流行病学调查中的应用及效果评价。方法应用GICA、双抗原夹心酶联免疫吸附试验(DAgS-ELISA)和间接血球凝集试验(IHA)对比检测190份啮齿动物血清和11份鼠疫免疫血清中鼠疫F1抗体。结果190份动物血清IHA检测结果均为阴性:GICA检测出1份阳性血清,滴度1:10;DAgS-ELISA检测出3份阳性血清,滴度1:4( ) 2份和1:16( )1份。3种方法检测11份鼠疫免疫血清均为9份阳性,但GICA敏感性低于IHA和DAgS-ELISA (GICA与IHA:t=3．257,P<0．05;GICA与ELISA:t=3．625,P<0．01;IHA与ELISA:t=1.437,P>0．05)。201份血清检测结果,GICA与IHA总符合率99．50％,与DAgS-ELISA总符合率99．00％,3种方法检测结果差异无统计学意义(x2=0．5,P>0．05)。结论GICA检测鼠疫F1抗体敏感特异、简便快速,与DAgS-ELISA同样为鼠疫血清学快速诊断和鼠疫监测中有应用价值的检测技术。