垂体腺苷环化酶激活肽对缺血再灌注脑神经元凋亡的作用

目的:观察垂体腺苷环化酶激活肽(pituitaryadenylatecyclase-activatingpolypeptide,PACAP)对缺血再灌注脑神经元凋亡的防治作用。方法:利用四血管结扎法,建立老龄大鼠脑缺血再灌注模型,侧脑室注射PACAP,观察脑组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧物酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)活性,计数海马CA1区存活和凋亡神经元数目,电镜观察神经元的超微结构变化。结果:PACAP治疗后脑组织MDA含量为(1.35±0.39)nmol/mg,SOD和GSH-Px活性分别为(115±20)NU/mg、(10.3±2.0)U/mg,与缺血再灌注组有明显差异(P<0.05),海马CA1区存活和凋亡神经元数目为48.8±4.3,14.3±2.9,能促进神经元存活和减轻凋亡损伤(P<0.01),保护超微结构。结论:PACAP的保护作用可能与其降低脑组织氧自由基水平,提高抗氧化酶活性,防止神经元凋亡有关。     

胰岛素对大鼠脑缺血再灌注时神经元凋亡及其相应基因的调控

目的 观察胰岛素（insulin,RI)对缺血再灌注损伤后细胞凋亡及其相应基因的调控作用。评估RI对脑缺血再灌注损伤的保护作用。方法 将健康wistar大鼠56只，随机分为对照组、缺血再灌注盐水组(NS)、缺血再灌注胰岛素组(RI)。采用pulsinelli4血管阻塞模型，观察RI、NS在4．24，48h海马CA1区存活神经元数目，TUNEL阳性细胞数目，Bcl-2蛋白的表达，以观察比较缺血再灌注阶段细胞凋亡的变化。结果 再灌注NS组CA1区神经元数目(36&;#177;6)个／mm^2较再灌注RI组(88&;#177;9)个／mm^2少(t=3．34，P&;lt;0．01)。再灌注后CA1区细胞凋亡数：4h时再灌注NS组(12&;#177;3)个／mm^2高于再灌注RI(8&;#177;1)个／mm^2和假手术组(2&;#177;1)个／mm^2：组间比较，F=127．66，P&;lt;0．001。Bcl-2对海马CA1细胞凋亡评估4h时。再灌注NS组43．0&;#177;9．8,高于再灌注RI组24．0&;#177;5．4和假手术组2．7&;#177;0．8。结论 全脑缺血再灌注时急用RI可减轻脑缺血再灌注神经元凋亡,对脑缺血再灌注损伤引起的神经元延迟性坏死有保护作用。     

半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3对缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡的影响

背景：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3在正常细胞中以酶原形式存在，受凋亡刺激因素作用后能够被激活从而引起细胞凋亡。 目的：通过检测脑海马组织胞质S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性及海马区神经元凋亡情况，探讨全脑缺血再灌注后脑海马神经元凋亡与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的关系。 设计：随机对照实验。 单位：解放军第三军医大学西南医院急救部。 材料：实验于1999-01／04在解放军第三军医大学西南医院完成。选取雄性Wistar大鼠182只，随机分为3组：假手术组14只，脑缺血再灌注组84只，乙酰天冬氨酰谷氨酰缬氨酰天冬氨酸乙醛（acetyl-asp-glu-valasp．aldehyde，AC-DEVD-CHO）治疗组84只，后两组均设立缺血再灌注8，24。48，72，120，168h 6个时相点，每个时相点14只大鼠。 方法：脑缺血再灌注组、AC-DEVD-CHO治疗组建立大鼠全脑缺血20min再灌注模型，分别于再灌注后8，24，48，72，120，168h处死取海马组织；假手术组施行麻醉及手术，但不夹闭颈总动脉和烧灼椎动脉，术后观察72h后处死取海马组织备检。以单位质量标本于单位时间内裂解产生的氨甲基香豆素量表示标本中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的活性。各组不同时相点脑组织切片封固后在荧光显微镜下于330～350nm处观察脑海马细胞凋亡情况。 主要观察指标：①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化。②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系。 结果：实验纳入182只大鼠，脱落14只，共168只大鼠进入结果分析。①各组脑缺血再灌注后不同时相点海马组织S-100中半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性变化：假手术组术后观察72时为0。与脑缺血再灌注组比较，AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24，48，72，120，168h均明显降低[（1．71&;#177;0．03），（1．22&;#177;0．03）；（2．77&;#177;0．09），（1．59&;#177;0．7）；（5．54&;#177;0．51），（2．3&;#177;0．19）；（6．28&;#177;1．71），（3.43&;#177;0．46）；（3．11&;#177;1．21），（1．73&;#177;0．14）nkat／kg；P〈0．05或0．01]。②各组脑缺血再灌注后不同时相点海马细胞凋亡的情况：每400倍视野下，假手术组术后观察72h为（1．2&;#177;0．4）个。与脑缺血再灌注组比较，AC-DEVD-CHO治疗组于再灌注24，48，72，120，168h均明显降低[（6．4&;#177;1．7），（2．8&;#177;0．8）；（11．8&;#177;1．3），（5．8&;#177;1．9）；（19．8&;#177;3．1），（10．0&;#177;1．9）；（31．2&;#177;5．9），（16．4&;#177;2．4）；（19．8&;#177;2．3），（9．0&;#177;2．3）个／400倍视野；P〈均0．011。③半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3活性与海马区神经元凋亡的关系：脑缺血再稽注组、AC-DEVD-CHO治疗组均行直线相关分析，二者的变化呈显著正相关（r分别为0．9356及0．9800，P均〈0．01）。 结论：半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3的激活是引起海马神经元调亡的主要因素之一，在缺血再灌注大鼠脑海马神经元凋亡中起着重要作用。     

促红细胞生成素对全脑缺血再灌注后神经细胞凋亡和诱导型一氧化氮合酶蛋白的影响

目的：观察促红细胞生成素(EPO)对短暂性全脑缺血再灌注后海马CA1区iNOS蛋白表达的影响，探讨其对缺血脑组织保护的可能机制。方法：应用四动脉血流阻断法制作大鼠短暂性全脑缺血再灌注模型；于再灌注开始时经腹腔注射EPO(3000U／kg)；48h灌注取脑。苏木精一伊红染色和TUNEL法染色观察海马CA1区神经细胞坏死和凋亡。应用免疫组织化学方法检测iNOS蛋白的表达。结果：短暂性全脑缺血15min再灌注后48h，苏木精一伊红染色海马CA1区存活神经元细胞数正常组(211．28&;#177;7．95)个／视野，假手术组为(209．28&;#177;11．34)个／视野，EPO治疗组海马CA1区存活神经元细胞数为(170．28&;#177;8．12)个／视野，缺血组为(146．84&;#177;8．35)个／视野。EPO治疗组与缺血组比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。TUNEL法凋亡细胞测定，正常组无阳性细胞，假手术组阳性细胞(152．48&;#177;18．52)个／视野，EPO治疗组有(1797．51&;#177;151．35)个／视野，缺血组有(2250．41&;#177;180．06)个／视野，两者比较差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。iNOS蛋白的表达测定，正常组无阳性细胞，假手术组海马CA1区阳性细胞区灰度值为5．36&;#177;1．54，EPO治疗组为31．80&;#177;6．42，缺血组为49．46&;#177;8．96。EPO治疗组与缺血组比较，两者差异有显著性意义(P&;lt;0．01)。结论：EPO可减少大鼠短暂性全脑缺血再灌注后神经元的死亡和凋亡，抑制iNOS蛋白的表达。     

氟桂利嗪对脑海马迟发性神经元死亡沙土鼠空让分辨学习能力的影响

目的：氟桂利嗪是通过血脑屏障的细胞钙超载阻滞剂。探其对迟发性神经元死亡发发生后沙上鼠空间分辨学习的影响及对脑海马CA1区神经元的保护作用。方法：实验于2004—03／06在大连医科大学基础医学院生理实验室完成。将健康雄性蒙古沙土鼠56只随机分3组：假手术组（n=8），缺血再灌注组（n=24），氟桂利嗪组（n=24），后两组又分为缺血5min后再灌注2d及7d组和Y迷宫组3个亚组，每亚组8只动物。缺血再灌注组和氟桂利嗪组夹闭双侧颈总动脉制备缺血再灌注模型，假手术仅暴露双侧颈总动脉，不夹闭。氟桂利嗪组术后胃灌氟桂利嗪5mg／kg,1次州，直至处死前1d；其他两组胃灌生理盐水0．5mL。术后第4天利用Y迷宫检测动物空间分辨学习能力，包括学习获得所需天数及条件反射次数。实验沙土鼠脑组织结构变化及细胞内显微结构变化以免疫组织化学染色法及电镜技术桧测观察。结果：经补充56只动物进入结果分析。①Y迷宫学习获得所需天数：缺血再灌注组多于假手术组和氟桂利嗪组（5．88&;#177;0.99，2．00&;#177;0．76，2．13&;#177;0．64，P〈0．01），假手术组和氟柱利嗪组比较无差异（P〉0．05）。②Y迷宫学习获得条件反射次数：3组间无差异（P〉0．05）。③术后7d脑海马CA1区存活神经元数：缺血再灌注组少于假手术组和氟桂利嗪组[（8．95&;#177;2．29），（65．04&;#177;8．09），（42．13&;#177;5．90）个／视野，P〈0．01]，氟桂利嗪组仍少于假手术组（q=10．94，P〈0．01）。④脑组织病理变化：电镜观察可见迟发性神经元死亡早期形成大量的多泡体，并广泛分布于CA1区神经元树突，是凋亡早期的特征性表观，5mg/kg氟桂利嗪可明显减少CA1区神经冗的脱失。结论：脑缺血5min造成海马CA1区神经元选择性迟发性死亡，同时产生空间分辨学习能力的可逆性损害。5mg／kg的氟桂利嗪治疗性用药在一定程度上可以阻止迟发性神经元死亡，同时对学习、记忆等高级神经功能具有保护性作用。     

葛根素对大鼠脑复苏后海马CA1区神经细胞凋亡相关基因的影响

背景：Fan及P53是重要的促进凋亡的调控基因，属于肿瘤坏死因子／神经生长因子受体家族，其表达产物具有传递凋亡信号的作用，可调控脑缺血再灌注损伤时细胞的凋亡，而葛根素则能够减轻细胞的凋亡程度。 目的：观察葛根素对大鼠脑复苏后海马CA1区神经细胞凋亡相关基因Fas及P53的影响。 设计：随机对照实验。 单位：华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科。 材料：实验于2001-09／2002-02在华中科技大学同济医学院附属同济医院急诊科实验室完成。选取清洁级3个月龄Wistar大鼠45只。随机分为假手术组、模型对照组、葛根素治疗组，15只／组。 方法：葛根素治疗组及模型对照组建立大鼠急性全脑缺血再灌注模型。假手术组只分离第一颈椎两侧翼小孔，但不电凝两侧椎动脉，只分离两侧颈总动脉，但不夹闭之。葛根素治疗组于缺血前1h给予葛根索注射液100mg／kg，模型对照组给予等量生理盐水，假手术组不给药。各组大鼠分别于脑缺血再灌注后3，6，12，24，48h即速处死，每次每组3只。分离海马组织，制备组织切片，利用免疫组化法、原位末端标记法检测各组大鼠脑缺血再灌注后不同时间点Fas及P53蛋白表达的水平及凋亡细胞数的变化。 主要观察指标：①各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区Fas及P53蛋白表达的阳性细胞数。②各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区凋亡细胞数的比较。 结果：实验纳入大鼠45只，全部进入结果分析。①各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区Fas蛋白表达的阳性细胞数：假手术组未见明显Fas基因表达。与模型对照组比较，葛根素治疗组于脑缺血再灌注后各时间点均明显降低：6，12，24，48h时差异显著[（15．0&;#177;4．3）。（13．5&;#177;4．9）；（40．7&;#177;3.4），（27．2&;#177;3．1）；（37&;#177;4．8），（22.0&;#177;2．1）；（24．7&;#177;4．1）。（18．9&;#177;5．3）个／mm；P〈0．05，P〈0．01]。②各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区P53蛋白表达的阳性细胞数：假手术组未见明显P53基因表达。与模型对照组比较，葛根索治疗组于脑缺血再灌注后24，48h均明显降低[（25．3&;#177;4．4），（12．8&;#177;2．7）；（24．3&;#177;3．6），（10．9&;#177;3．0）个／mm；P〈0．01]。④各组脑缺血再灌注后不同时间点海马CA1区凋亡细胞数的比较：与模型对照组比较，葛根素治疗组于脑缺血再灌注后12，24，48h均明显降低[（34．0&;#177;3．7），（21．0&;#177;3．7）；（41．0&;#177;4．2），（33．0&;#177;4．8）；（71．0&;#177;5.5），（41．0&;#177;3．4）个／mm；P〈0．01]。 结论：给予葛根紊治疗的大鼠缺血再灌注6-48h时Fas的表达显著降低，缺血再灌注24—48h时P53的表达亦明显减少，且凋亡细胞数也呈下降趋势，进一步证实葛根紊的脑保护作用，提示葛根素抑制脑复苏后的细胞凋亡可能与其减少促凋亡基因Fas及P53蛋白表达有关。     

全脑缺血再灌注损伤大鼠海马神经元凋亡调节蛋白Bel-2和Bax的表达

背景：脑缺血再灌注对中枢神经系统的影响，除了急性期的细胞坏死，还有迟发性的神经元凋亡。目的：观察大鼠全脑缺血不同再灌注阶段海马神经元凋亡率、坏死率及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的表达情况，并探讨其对全脑缺血再灌注损伤的调节作用。设计：随机对照实验。单位：首都医科大学附属北京天坛医院的神经外科和麻醉科。材料：实验于2003-01／20014-01在首都医科大学附属北京神经外科研究所完成。选择清洁级成年雄性健康Wistar大鼠33只，随机分5组，缺血再灌注24h组7只、缺血再灌注48h组7只、缺血再灌注72h组7只、缺血再灌注7d组7只和假手术对照组5只。干预：制备大鼠全脑缺血再灌注模型。分别于再灌注24，48，72h和7d取脑海马组织，用流式细胞仪检测细胞凋亡率，坏死率，Bcl-2和Bax蛋白在大鼠脑海马神经元中的表达情况。主要观察指标：①流式细胞仪检测各组大鼠脑海马组织细胞凋亡率和坏死率。②Bcl-2和Bax蛋白表达百分率。结果：33只大鼠全部进入结果分析。①缺血再灌注7d组海马神经元的凋亡率最高[（24．59&;#177;0．97）％]，坏死率峰值出现在缺血再灌注24h组[（16．67&;#177;1．04）％]，明显高于假手术对照组[（1．28&;#177;0．50）％，（0．90&;#177;0．38）％]（P〈O．01）。②假手术对照组Bcl-2表达极低[（1．07&;#177;0．27）％]，但Bax有高表达[（46．09&;#177;5．37）％]。⑧Bcl-2蛋白峰值出现在缺血再灌注后48h[（14．41&;#177;0．67）％]，而Bax蛋白峰值出现在缺血再灌注之后72h[（77．38&;#177;1．52）％]。结论：全脑缺血再灌注损伤后海马神经元凋亡率逐渐增高，凋亡调控基因Bcl-2和Bax表达异常增高，提示Bcl-2和Bax蛋白参与了全脑缺血再灌注损伤的凋亡调节。     

大鼠脑组织缺血再灌注后促红细胞生成素对神经元的保护

目的：观察促红细胞生成素对缺血再灌注大鼠脑组织海马CA1区神经元数量、凋亡细胞数量变化、脑组织匀浆一氧化氮含量、丙二醛含量及超氧化物歧化酶活性改变的影响。方法：实验于2003-03／2004-12在解放军第三军医大学附属新桥医院中心实验室完成。选择健康Wistar大鼠66只，随机分为正常对照组6只，缺血再灌注生理盐水组30只(生理盐水对照组)，缺血再灌注促红细胞生成素组30只(促红细胞生成素治疗组)。除正常对照组线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型，缺血2h后再灌注。促红细胞生成素组于再灌注开始时经腹腔按2000U／kg注入生理盐水稀释的重组人红细胞生成素(200U／mL)，生理盐水对照组经腹腔注入等量的生理盐水。再灌注后观察时相点为2．6，12，24，48h，每个时间点6只。应用苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞数量情况，应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记法检测海马CA1区神经元凋亡情况，应用硝酸还原酶法测定脑组织一氧化氮含量，羟胺法测定脑组织超氧化物歧化酶活性，硫代巴比妥酸法测定脑组织中丙二醛含量。结果：66只大鼠全部进入结果分析。①脑海马CA1区细胞计数：促红细胞生成素治疗组再灌注后12，24，48h比生理盐水对照组细胞数明显增加[(286.7&;#177;33.8)，(268.6&;#177;44.5)个／视野；(271．9&;#177;30．4)．(240．8&;#177;22，5)个／视野：(258，3&;#177;29．5)，(2018&;#177;307)个／视野；(t=3.189～5.589，P&;lt;0.01)]。②脑海马CA1区凋亡细胞计数：促红细胞生成素治疗组再灌注后6，12，24，48h比生理盐水对照组阳性细胞数明显减少[(21.5&;#177;5.8)，(28．4&;#177;6．51个／视野：(327&;#177;4．6)，(48.8&;#177;7.6)个／视野；(42.8&;#177;6.6)，(60．7&;#177;10.2)个／视野；(51.8&;#177;9.5)个／视野，(81.6&;#177;12．3)个／视野，(t=3.457～6.347,P&;lt;0.01)1。③脑组织一氧化氮含量：促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6．12，24，48h比生理盐水对照组一氧化氮含量明显降低[(48．2&;#177;5．1)，(59，4&;#177;5．5)mmol／L;(51．4&;#177;6，3)，(66，3&;#177;98)mmol／L：(59．7&;#177;6．6)，(80.7&;#177;10.2)mmol／L；(55．7&;#177;8．1)，(77．8&;#177;9.2)mmol／L：(49.3&;#177;6．7)，[67．3&;#177;7，1)mmol／L，(t=3．258～5，624，P&;lt;0．01)]。④脑组织超氧化物歧化酶活性：促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12，24，48h比生理盐水对照组超氧化物歧化酶活性明显增高[(3.78&;#177;0.74)，(3.21&;#177;0．31)μkat／L；(3．41&;#177;0.43)，(2．92&;#177;0.31)μkat／L；(3．21&;#177;0．35)，(2．51&;#177;0．27)μkat／L；(3．64&;#177;0．55)，(3.01&;#177;0.32)μkat／L；(4．10&;#177;0.56)，(3.55&;#177;0.41)μkat／L，(t=3．485～6，457，P&;lt;0．01)]。⑤脑组织丙二醛含量：促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12，24，48h比生理盐水对照组丙二醛含量明显降低[(40.7&;#177;4．4)，(54.6&;#177;6．7)μmol／L；(51.3&;#177;5.4)，(65.7&;#177;8．8)μmol／L；(61.7&;#177;7．2)，(77.4&;#177;7.5)μmol／L；(53.8&;#177;6．4)，(67．8&;#177;9.1)μmol／L；(39．7&;#177;4．0)，(53．3&;#177;4.9)μmol／L，(t=3.541～6.045，P&;lt;0．01)]。结论：促红细胞生成素可增加大鼠局灶性脑缺血再灌注组织海马cAl区细胞存活数量，对海马CA1区细胞凋亡具有阻抑作用，降低一氧化氮生成量，使脂质过氧化反应的程度减轻，起到了对神经细胞的保护作用。     

雌激素对沙土鼠脑缺血再灌注后脑海马CA1区细胞凋亡的影响

目的：应用单因素设计观察雌激素对去卵巢沙土鼠脑缺血再灌注后脑海马CAI区细胞凋亡的影响。方法：实验于2004-10／2005—01在菏泽市立医院中心实验室完成，将45只雌性沙土鼠随机分为假手术组，卵巢切除纰和雌二醇组3组，每组15只。①预处理：卵巢切除组和雌二醇住实验前2周切除双侧卵巢，假手术组手术但不切除卵巢。雌二醇组自切除卵巢次日起，每天腹腔注射雌二醇（0．1mg／kg），连续2周；其他两组每日腹腔注射0．5mL的生理盐水。②模型制备：3组均采用舣侧颈动脉夹闭法制备脑缺血再灌注模型。⑧观察指标：所有动物造模后3d麻醉状态下处死取脑，测定脑组织匀浆中超氧化物歧化酶及丙二醛水平，TdT介导的原位末端标记法计量分析。结果：45只沙土鼠全部进入结果分析。①脑海马CA1区细胞凋亡密度：卵巢切除组高于假手术组和雌二醇组[（67，70&;#177;5，98），（43．46&;#177;4．66），（45，13&;#177;3盘7）个／40&;#215;10视野，F=21.32，P〈0．051。②脑组织中丙二醛浓度：卵巢切除组高于假手术组和雌二醇组[（4．67&;#177;0．56），（2，74&;#177;0．25），（2．77&;#177;0．31）μmol／L，F=23，56,P〈0．051。㈤超氧化物歧化酶活性：卵巢切除组低于假手术组和雌二醇组[（38．12&;#177;4．17），（56，22&;#177;7．80），（54．78&;#177;6．90）NU／mL，F=19．75，P〈0．05]。假手术组与雌二醇组比较上述指标均无差异（P〉0．05）。结论：雌激素可以减少自由基损伤时脑神经元中的丙二醛含量，提高超氧化物歧化酶活性，减轻沙土鼠脑缺血再灌注后脑海马CA1区神经细胞的凋亡，对沙土鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

阿魏酸钠对缺血预处理后大鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用

背景：缺血性脑损伤后，如何减少神经细胞的死亡促进神经功能的恢复？脑缺血预处理在一定程度上可减轻再次缺血导致的缺血性脑损伤。阿魏酸钠亦被证实能减少脑缺血后的神经元凋亡的发生。而阿魏酸钠是否能增强脑缺血预处理的神经保护作用？ 目的：探讨阿魏酸钠联合缺血预处理对脑缺血再灌注损伤的保护作用。 设计：随机对照动物实验。 单位：江西医学院第二附属医院神经外科，江西医学院生理教研室，江西医学院泌尿外科研究所。 材料：实验于2001—05／2002—04在江西医学院第二附属医院神经外科实验室完成。雄性Wistar大鼠85只，体质量250～300g。 方法：大鼠随机分为四组：①非缺血对照组（10只）：仅结扎双侧椎动脉而不夹闭双侧颈总动脉。②缺血对照组（25只）：结扎双侧椎动脉48h，夹闭颈总动脉10min。③缺血预处理组（25只）：结扎双侧椎动脉48h，夹闭颈总动脉2min后24h再次夹闭颈总动脉10min。④阿魏酸钠联合缺血预处理组（25只）：缺血预处理后，再次夹闭颈总动脉前30min，尾静脉注射阿魏酸钠（200mg／kg）。非缺血对照组分为再灌注后2，7d二个亚组（各5只）；缺血对照组、缺血预处理组及阿魏酸钠联合缺血预处理组又分为再灌注后6，12，24h，2，7d五个亚组（各5只）。各组在相应时点将大鼠断头取脑，于视交叉后2．2mm切取冠状脑片，观察阿魏酸钠联合缺血预处理在脑缺血再灌注时对皮层和海马CAl区神经元数及凋亡细胞数的影响。 主要观察指标：皮层和海马CA1区神经元数及凋亡细胞数。 结果：实验大鼠85只均进入结果分析。①大脑皮层及海马CA1神经元计数：缺血7d时，缺血预处理组和阿魏酸钠＋缺血预处理组高于缺血对照组（268&;#177;8．5，244&;#177;12．5，135&;#177;5．6，P〈0．01）。②大脑皮层及海马CAl区TUNEL阳性细胞计数：阿魏酸钠＋缺血预处理组低于缺血预处理组和缺血对照组（12h：1．2&;#177;0．8，15．5&;#177;2．1，39．8&;#177;3．9；24h：1．8&;#177;1．6，39．3&;#177;11．8，191.3&;#177;19．1；2d：2．8&;#177;1．2，68.3&;#177;13．6，328．4&;#177;24．0，P〈0．01）；缺血预处理组低于缺血对照组（P〈0．01）。 结论：缺血预处理可减少缺血区神经元凋亡细胞数，阿魏酸钠联合缺血预处理可以进一步加强此效应，对脑缺血再灌注损伤起保护作用。     

灯盏花素注射液对大鼠脑缺血再灌注局灶性脑损伤的保护作用

背景：灯盏花素是从中药灯盏花中提取的，具有显著抗血小板和血栓形成的活性，通过清除自由基和凋亡细胞而保护大脑。目的：观察灯盏花素对大鼠脑缺血再灌注引起脑损伤的保护作用，并以硫酸镁做标准比较。设计：随机对照的实验，方差分析。单位：孝感学院生命科学技术学院。材料：实验于2004—05／11在孝感学院生命科学技术学院完成。实验选用40只雄性Wistar大鼠，随机分成5组：假手术组、脑缺血再灌注组、硫酸镁组、灯盏花素50mg／kg组和灯盏花素75mg／kg组，每组8只。方法：自大鼠颈总动脉插入尼龙线栓塞大脑中动脉，造成大脑缺血，拔出线栓进行再灌注。假手术组、脑缺血再灌注组于脑缺血10min后给予20mL／kg生理盐水，其余3组分别给予50mg／kg和75mg／kg灯盏花素及30m异／kg硫酸镁。各组大鼠分别于脑缺血1h再灌注2，5，23h进行神经病学评分（5分制，0分为无明显神经病学症状，1分为不能完全伸展左侧前爪，2分为向左侧旋转，3分为行走时向左侧倾倒，4分为不能自行行走。积分越高，说明动物行为障碍越严重），并于脑缺血1h再灌注23h时测定脑梗死面积（以染色区与未染色区的百分比表示）。脑缺血1h再灌注2，5，23h时用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记方法检测脑海马凋亡细胞百分率（％）：（凋亡神经元&;#247;海马神经元）&;#215;100％。检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3蛋白的表达用免疫组织化学方法[胱氢酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞表达百分率（％）：（半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3表达阳性神经元&;#247;海马神经元）&;#215;100％1。主要观察指标：①各组大鼠脑缺血1h再灌注2，5，23h神经病学评分。②各组大鼠脑缺血1h再灌注23h时脑梗死面积。⑧脑缺血1h再灌注2，5，23h时脑海马凋亡细胞百分率。④脑缺血1h再灌注2，5，23h时脑海马半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞表达百分率。结果：40只大鼠全部进入结果分析。①神经病学评分：脑缺血再灌注23h时灯盏花素50mg／kg组，灯盏花素75mg／kg组和硫酸镁组明显低于脑缺血再灌注组[（1．2&;#177;0．4）分，（0．5&;#177;0．4）分，（1．3&;#177;0．4）分，（2．2&;#177;0．6）分，F=6．09，P=0．001]，但灯盏花素组明显低于硫酸镁组（P〈0．01）。②脑梗死面积：脑缺血再灌注23h时灯盏花素50mg／kg组，灯盏花素75mg／kg组和硫酸镁组大鼠大脑梗死区面积明显低于脑缺血再灌注组[（0．18&;#177;0．03）％，（0．10&;#177;0．02）％，（0．28&;#177;0．02）％，（0．43&;#177;0．05）％，F=2．3，P=0．001]，灯盏花素组明显低于硫酸镁组（P〈0．01）。⑧脑海马凋亡细胞百分率：脑缺血再灌注23h时灯盏花素50mg／kg组，灯盏花素75mg／kg组和硫酸镁组明显低于脑缺血再灌注组[（27．2&;#177;4．3）％，（20．6&;#177;3．6）％，（35．4&;#177;5．5）％，（60．4&;#177;6．2）％，F=6．17，P=0．00071，灯盏花素组明显低于硫酸镁组（P〈0．01）。④半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性细胞表达百分率：脑缺血再灌注23h时灯盏花素50mg／kg组，灯盏花素75mg/kg组和硫酸镁组明显低于脑缺血再灌注组[（2,4．2&;#177;5．3）％，（21．6&;#177;3．5）％，（47．4&;#177;4．5）％，（76．3&;#177;6．2）％，F=6．88，P=0．0001]，灯盏花素组明显低于硫酸镁组（P〈0．01），结论：灯盏花素可显著降低脑缺血再灌注大鼠神经病学评分，缩小脑梗死面积，降低脑海马凋亡细胞数，降低半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3阳性表达细胞数量，起到保护大脑缺血再灌注引起的脑损伤作用，其作用优于硫酸镁。     

促红细胞生成素对大鼠脑组织缺血再灌注海马CA1区神经元的作用

目的：观察促红细胞生成素对缺血再灌注大鼠脑组织海马CA1区神经元数量以及凋亡细胞数量变化、热休克蛋白70表达的影响。方法：实验于2003—03／2004-12在解放军第三军医大学新桥医院中心实验室完成。选择健康清洁级Wistar大鼠66只，随机分为正常对照组6只、缺血再灌注生理盐水组30只(生理盐水对照组)、缺血再灌注促红细胞生成素组30只(促红细胞生成素治疗组)。线栓法制备大鼠大脑中动脉阻断局灶性脑缺血模型，缺血2h后再灌注，促红细胞生成素治疗组经腹腔按200U／b注入生理盐水稀释的重组人红细胞生成素(200U／mL)，生理盐水对照组经腹腔注入等量的生理盐水。再灌注后观察时相点为2，6，12，24，48h，应用苏木精-伊红染色观察脑海马CA1区细胞数量情况，应用末端脱氧核苷酸转移酶缺口标记法检测海马CA1区神经元凋亡情况，应用免疫组织化学法测定热休克蛋白70表达情况。结果：66只大鼠全部进入结果分析。①脑海马CA1区细胞的计数：生理盐水对照组再灌注后12，24，48h比正常对照组细胞数明显减少[(268．6&;#177;44．5)个／视野。(240．8&;#177;22．5)个／视野，(201．8&;#177;30．7)个／视野，(337．3&;#177;45．3)个／视野，t=2．845—5．587，P&;lt;0．01]，促红细胞生成素治疗组再灌注后12，24，48h比生理盐水对照组细胞数明显增加[(286．7&;#177;33．8)个／视野，(271．9&;#177;30．4)个／视野，(258．3&;#177;29．5)个／视野，t=3．189—5．589，P&;lt;0．01]。②脑海马CA1区凋亡细胞计数：生理盐水对照组再灌注后2，6，12，24、48h比正常对照组脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞数明显增多[(16．5&;#177;3．5)个／视野，(28．4&;#177;6．5)个／视野，(48．8&;#177;7．6)个／视野，(60．7&;#177;10．2)个／视野，(81．6&;#177;12．3)个／视野，(8．8&;#177;2．1)个／视野，t=2．985—6．324，P&;lt;0．01]，促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12，24，48h比生理盐水对照组脱氧核糖核酸末端转移酶介导的缺口末端标记阳性细胞数明显减少[(12．7&;#177;3．4)个／视野，(21．5&;#177;5．8)个／视野，(32．7&;#177;4．6)个／视野，(42．8&;#177;6．6)个／视野，(51．8&;#177;9．5)个／视野，t=3．457—6．347，P&;lt;0．01]。③脑海马CA1区热休克蛋白70表达水平：生理盐水对照组再灌注后2，6，12，24，48h比正常对照组热休克蛋白70表达明显增多(0．264&;#177;0．027，0．328&;#177;0．053，0．475&;#177;0．067，0．587&;#177;0．095，0．512&;#177;0．063，0．225&;#177;0．024，t=3．254—6．028，P&;lt;0．01)，促红细胞生成素治疗组再灌注后2，6，12h比生理盐水对照组热休克蛋白70表达明显增多(0．335&;#177;0．033，0．448&;#177;0．055，0．647&;#177;0．078，t=3．262—5．483．P&;lt;0．01)。结论：促红细胞生成素治疗可增加大鼠局灶性脑缺血再灌注组织海马CA1区细胞存活数量，对海马CA1区细胞凋亡具有阻抑作用，使热休克蛋白70表达上调，从而起到了对神经细胞的保护作用。     

睡眠剥夺引起大鼠海马神经元凋亡及相关基因表达的变化

背景：睡眠剥夺是否引起细胞变性，其信号传导是否与某些基因调控有关。目的：探讨睡眠剥夺引起的神经元凋亡与相关基因表达的变化。设计：随机对照实验研究。地点和材料：实验地点：郑州大学医学院生理学实验室。成年健康SD大鼠，雌雄不限，体质量(200&;#177;20)g，由河南省实验动物中心提供。干预：采用TUNEL染色观察了快眼动睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化，应用原位杂交检测了快眼动睡眠剥夺大鼠海马bcl-2．bax mRNA表达。主要观察指标：睡眠剥夺大鼠海马神经元形态学变化；海马bcl-2和bax mRNA表达。结果：快眼动睡眠剥夺大鼠海马CA1，CA3区神经元阳性凋亡细胞数增多，异相睡眠剥夺组海马CA1～CA4区细胞凋亡率分别为(6．60&;#177;2．24)％，(1．69&;#177;0．45)％，(6．87&;#177;1．32)％，(1．74&;#177;0．98)％。CA1，CA3区细胞凋亡率和CA2，CA4区相比较差异有显著性意义(t=5．26～6．95，P&;lt;0．05)。bc1-2mRNA阳性信号表达积分值较强，四个区之间差异无显著性意义，bax mRNA表达增强[CA1为(211．12&;#177;59．85)；CA3为(205．56&;#177;56．99)]与CA2和CA4区[(123．42&;#177;22．80)。(124．21&;#177;20．47)]比较差异有显著性意义(t=3．20～4．36．P&;lt;0．05)。结论：睡眠剥夺可引起大鼠海马神经元凋亡，与凋亡相关的bc1-2。bax mRNA基因表达的变化可能涉及神经元的凋亡机制。     

黄芩苷对大鼠脑缺血再灌注脑组织超氧化物歧化酶和丙二醛的影响

目的：探讨黄芩苷对大鼠脑缺血再灌注自由基损伤的保护作用，为脑缺血再灌注损伤防治提供新的药物。方法：将大鼠随机分为假手术组、脑缺血再灌注组及黄芩苷治疗组。动物模型采用大脑中动脉缺血再灌注模型，用黄嘌呤氧化酶法和硫代巴比妥法分别测定脑组织缺血再灌注3，6h时超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛的含量及黄芩苷对其的影响。结果：脑缺血2h再灌注后3，6h时，脑组织SOD分别为(24．5&;#177;0．28)，(16．27&;#177;0．20)NU／mg，丙二醛分别为(0．66&;#177;0．32)．(1．62&;#177;0．52)μmol／g，与假手术组比较，脑组织SOD明显降低(P&;lt;0．01)，丙二醛则明显增高(P&;lt;0．01)；黄芩苷治疗后脑组织SOD分别为(30．19&;#177;0．36)，(25．74&;#177;0．28)NU／mg，丙二醛分别为(0．42&;#177;0．26)．(0．78&;#177;0．37)μmol／g，与模型组相比，脑组织SOD有所增高(P&;lt;0．01)．而丙二醛则有所降低(P&;lt;0．01)。并且，治疗组大鼠神经功能缺损评分较模型组增高(P&;lt;0．05)。结论：黄芩苷对脑缺血再灌注自由基损伤有一定保护作用。     

全脑缺血再灌注过程中人重组白细胞介素1受体拮抗剂对大鼠海马神经元代谢性谷氨酸受体5的影响

背景：白细胞介素1受体拮抗因子能显著减轻神经元的损伤具有神经保护作用。谷氨酸通过激活多种谷氨酸受体导致兴奋毒性作用，同时也可以通过其某些受体发挥神经保护作用。但二者在脑缺血再灌注过程中的联系仍不十分明了。目的：探讨脑缺血再灌注损伤过程中自细胞介素1受体拮抗因子对海马神经元的神经保护作用以及白细胞介素1受体拮抗因子与代谢性谷氨酸受体5之间的关系。设计：完全随机对照实验。单位：中国科学院武汉物理与数学研究所波谱与原子分子物理国家重点实验室，江汉大学医学与生命科学学院。材料：实验于2004-05/2005-01在中国科学院武汉物理与数学研究所波谱学与原子分子物理国家重点实验室完成。选择正常健康纯化Wis-tar大鼠32只。方法：32只大鼠按单纯随机抽样的方法分为正常组、假手术组、生理盐水组和实验组。正常组大鼠不做任何处理，假手术组大鼠仅在颈部前后方做组织分离、椎动脉暴露、颈总动脉游离手术，不结扎和夹闭双侧椎动脉和颈总动脉；生理盐水组大鼠椎动脉用电烧灼的方法永久性阻断，颈总动脉暂时性（20min）夹闭，夹闭动脉期间内将2μL生理盐水按0．4μL/min的速度注入大鼠一侧（右侧）侧脑室，拔针前滞针5min，然后松开颈总动脉的动脉夹再灌注2h；实验组大鼠操作过程相同，仅将生理盐水换成等量的人重组白细胞介素1受体拮抗剂。然后采用苏木精-伊红染色方法对大鼠皮质区域的病理变化进行观察，免疫组织化学方法对海马神经元代谢性谷氨酸受体5免疫反应性进行观察。主要观察指标：①各组大鼠脑皮质、海马的基本病理学变化。②各组大鼠脑缺血敏感区海马神经元代谢性谷氨酸受体5免疫反应变化。结果：实验组和生理盐水组各有1只在进行缺血再灌注的过程中诱发惊厥被弃用，其余30只大鼠进入结果分析。①各组大鼠脑皮质、海马的基本病理学变化：正常组、假手术组大鼠差异不明显，生理盐水组和实验组大鼠皮质、海马神经元变性，细胞周围水肿，神经元深染、核固缩或破裂。实验组神经元变性及水肿程度明显降低，深染、核固缩或破裂的神经元明显减少。②各组大鼠脑缺血敏感区海马神经元代谢性谷氨酸受体5免疫反应变化（用平均吸光度值表示）：正常组与假手术组大鼠海马CA1，CA3区神经元代谢性谷氨酸受体5免疫反应呈强阳性[CA1区：（0．54&;#177;0．12），（0．54&;#177;0．05）；CA3区：（0．57&;#177;0．02），（0．58&;#177;0．08），（P〉0．05）]。生理盐水组、实验组大鼠海马CA1，CA3区神经元免疫反应较正常组和假手术组明显减弱[CA1区：（0．30&;#177;0．03），（0．40&;#177;0．04）；CA3区：（0．30&;#177;0．04），（0．42&;#177;0．06），（P〈0．01）]，实验组较生理盐水组明显增强（P〈0．05）。结论：白细胞介素1受体拮抗因子和代谢性谷氨酸受体5均参与大鼠脑缺血再灌注损伤的病理生理过程；白细胞介素1受体拮抗因子在大鼠脑缺血再灌注损伤的病理过程中，可能调节脑海马CA1，CA3区神经元的代谢性谷氨酸受体5的表达，实现其对海马的营养和保护作用；白细胞介素1家族中除了白细胞介素1受体拮抗因子以外，还存在其他的调节因素对神经元的代谢性谷氨酸受体5的表达进行调控。     

灯盏花素对缺血再灌注鼠脑海马三磷酸腺苷含量及其活性变化的干预

背景：灯盏花素作为蛋白激酶C的抑制剂，具有降低脑缺血再灌注引起的神经细胞死亡作用。目的：探讨灯盏花素对缺血再灌注沙土鼠脑海马中三磷酸腺苷的含量，以及对三磷酸腺苷酶活性的影响。设计：随机对照区组设计。单位：苏州大学附属四院麻醉科，无锡市第四人民医院麻醉科，徐州医学院附属医院麻醉科。材料：实验于2002-03/2003-05在江苏省麻醉学重点实验室完成。选取蒙古沙土鼠90只，随机分为9组：假手术组、脑缺血组、脑缺血再灌注1h组、脑缺血再灌注12h组、脑缺血再灌注24h组、灯盏花素＋脑缺血组、灯盏花素＋脑缺血再灌注1h组、灯盏花素＋脑缺血再灌注12h组、灯盏花素＋脑缺血再灌注24h组，10只／组。灯盏花素注射液（云南省生物制药厂生产，批号990103，每毫升含黄酮4．5mg）。方法：除假手术组外，其余各组均建立缺血再灌注模型。灯盏花素各组在缺血前30min腹腔注射灯盏花素10mL／kg，其余组同期注射等量生理盐水。每组抽取6只行三磷酸腺苷含量及三磷酸腺苷酶活性测定，其余4只进行海马CA1区神经细胞病理学检查。在缺血期间监测鼓膜温度（反映脑温），并维持鼓膜温度于（37&;#177;0．2）℃，以避免温度变化对实验结果的影响。组间比较采用单因素方差分析。主要观察指标：①各组实验鼠脑海马三磷酸腺苷含量和三磷酸腺苷酶活性的变化。②各组实验鼠脑海马CA1区神经细胞病理学变化。结果：实验纳入蒙古沙土鼠90只，全部进人结果分析。①各组海马三磷酸腺苷含量和三磷酸腺苷酶活性的变化：与脑缺血再灌注24h组比较．灯盏花素1，12，24h组三磷酸腺苷含量均明显提高[（0．25&;#177;0．08），（0．81&;#177;0．12），（0．58&;#177;0．07），（0．43&;#177;0．09）mmol／kg，P〈0．01]，Na^＋-K^＋-ATP酶活性均明显上升[（1．23&;#177;0．43），（5．09&;#177;0．36），（3．67&;#177;0．37），（2．71&;#177;0．42）mmol／（g&;#183;h），P〈0．01]，Ca^2＋-ATP酶活性亦明显上升[（0．58&;#177;0．35），（2．14&;#177;0．41），（1．64&;#177;0．39），（1．39&;#177;0．40）mmol／（g&;#183;h），P〈0．011。②各组海马CA1区神经细胞病理学变化：脑缺血后7d，低倍镜下见：脑缺血再灌注1，12，24h组锥体细胞带变薄、稀疏，甚至消失；而灯盏花素各组锥体细胞带明显比脑缺血再灌注各组宽厚。高倍镜下见：脑缺血再灌注1，12，24h组锥体细胞大部凝固性坏死，核膜完整、核仁清楚的存活锥体细胞数较少；而灯盏花素各组存活锥体细胞明显多于脑缺血再灌注1，12，24h组。结论：灯盏花素能够明显增加脑缺血再灌注后三磷酸腺苷含量，且再灌注初期升高尤为显著，同时三磷酸腺苷酶的活性亦呈相应提高趋势，具有减轻脑缺血再灌注损伤、保护神经细胞的作用。     

亚硒酸钠对沙土鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及谷胱甘肽过氧化物酶的影响

目的：观察亚硒酸钠对沙土鼠脑缺血再灌注损伤的保护作用并分析其机制。 方法：实验于2002-02／2003-04在泰山医学院机能实验室完成。将40只沙土鼠随机分为5组，假手术组，缺血再灌注2，4d组，亚硒酸钠处理-缺血再灌注2，4d组，各8只。假手术组及缺血再灌注2，4d组自由饮用自来水，亚硒酸钠处理-缺血再灌2，4d组自由饮用0．8mmol/L亚硒酸钠水1个月。采用夹闭双侧颈动脉法制备沙土鼠脑缺血再灌注模型，假手术组除不夹闭颈总动脉外，其余操作相同。术后各组饮水情况同术前。原位末端转移酶标记法染色光镜下观察凋亡神经元情况，计算凋亡密度。同时测定脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶的含量。 结果：实验纳入沙土鼠40只，死亡2只，模型成功38只，模型成功率95％，后补充2只沙土鼠，40只动物进行结果分析。①光镜下原位末端转移酶标记法染色显示凋亡情况：假手术组凋亡神经元少见；缺血再灌注2，4d组凋亡神经元分布较广泛，4d时更明显；亚硒酸钠处理-缺血再灌注2，4d组凋亡神经元减少，4d时更少。②各组谷胱甘肽过氧化物酶及凋亡密度比较：亚硒酸钠处理-缺血再灌注2，4d组沙土鼠与缺血再灌注2，4d组比较，谷胱甘肽过氧化物酶含量增多[分别为（317．73&;#177;50．96），（319、62&;#177;63．14），（181．16&;#177;32．06），（185．99&;#177;31．92）nkat／L]，凋亡细胞减少[分别为（44．6&;#177;3．2），（51．4&;#177;4．7），（60．8&;#177;2．5），（67．8&;#177;3、7）个]，差异有显著性意义（P〈0．01）。 结论：①亚硒酸钠可增强脑缺血再灌注早期脑组织中谷胱甘肽过氧化物酶的活性，抑制氧自由基损伤，减轻脂质过氧化反应，从而减轻脑缺血再灌注损伤后神经元的坏死和凋亡，并可能存在对脑缺血耐受的预处理机制：②亚硒酸钠对沙土鼠脑缺血再灌注损伤具有保护作用。     

氯氮平对大鼠局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用

目的：观察氯氮平对局灶性脑缺血再灌注损伤的保护作用，并与尼莫地平进行阳性对照。 方法：实验于1999年在郑州大学医学院药理教研室实验室进行，取Wistar大鼠240只，单纯随机分成缺血再灌注组，氯氮平24，12，6mg／kg组，尼莫地平组和假手术组6组，每组40只。氯氮平24，12，6mg／kg组腹腔注射相应剂量的氯氮平，尼莫地平组腹腔注射0．2mg／kg尼莫地平，缺血再灌注组和假手术组腹腔注射等体积生理盐水，均为1次／d，连续7d。给药7d后除假手术组外其他5组大鼠栓塞法建立大脑中动脉局灶性缺血再灌注模型。测定再灌注2h缺血侧脑组织含水量、丙二醛含量和超氧化物歧化酶活性；流式细胞仪定量分析细胞凋亡率；Fura-2负载，以荧光分光光度计测定细胞内游离钙的变化。 结果：经补充后240只大鼠进入结果分析。①脑组织含水量：缺血再灌注组高于假手术组[（81．62&;#177;0．15）％，（75．81&;#177;0．23）％，P〈0．01]．其他4组均低于缺血再灌注组（P〈0．01）。②丙二醛含量：缺血再灌注组高于假手术组[（10．85&;#177;0．38），（4．07&;#177;0．63）μmol／g，P〈0．01]，其他4组均低于缺血再灌注组（P〈0．01）。③超氧化物歧化酶活性：缺血再灌注组低于假手术组[（82．47&;#177;10．73），（280．15&;#177;10．32）Nu／mg，P〈0．01]，其他4组均高于缺血再灌注组（P〈0．01）。④细胞内游离钙浓度：缺血再灌注组高于假手术组[（574．87&;#177;14．56），（215．76&;#177;10．84）nmol／L，P〈0．01]，其他4组均低于缺血再灌注组（P〈0．01）。⑤细胞凋亡率：假手术组为0，缺血再灌注组为28％，氯氮平6，12，24mg／kg组及尼莫地平组分别为19％，12％，5％，13％。 结论：①6-24mg／kg氯氮平可显著降低细胞内游离钙含量，抑制缺血再灌注诱导的神经细胞凋亡，提示氯氮平对缺血再灌注所致神经细胞损伤的保护作用可能与其钙拮抗以及抗脂质过氧化有关。②氯氮平的神经保护作用与尼莫地平相似。     

胰岛素对大鼠脑缺血后记忆力损害的保护

目的：观察胰岛素对大鼠脑缺血后酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达及学习记忆能力的影响。方法：实验于2001-01／2003—05在解放军第四军医大学完成。①选用纯种健康雄性SD大鼠54只，随机数字表法分为3组：假手术组6只、缺血对照组24只、胰岛素治疗组24只。Y型迷宫箱（张家港生物医学仪器厂制造，MGM-2型）。②缺血对照组、胰岛素治疗组采用改良四血管闭塞法建立大鼠全脑缺血模型。假手术组仅暴露双侧翼孔及颈动脉，各血管不行闭塞。⑧各组大鼠在麻醉状态下钻开颅骨，于前囟后1．2mm、左旁1．5—nm处用微量加样器进针3．5mm穿刺脑室。成功后胰岛素治疗组于开放动脉夹行再灌注后立即注入1&;#215;10^5U／L的速效基因合成人胰岛素10μL，假手术组、缺血对照组注入等量生理盐水。④分别于全脑缺血再灌注1，3，5d，假手术组（1只／时相点）、缺血对照组（6只／时相点）、胰岛素治疗组（6只／时相点）大鼠断头取脑，行免疫组化染色，光镜下观察海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达的变化。⑤全脑缺血再灌注8周后，用Y型迷宫箱对假手术组（3只）、缺血对照组（6只）、胰岛素治疗组（6只）大鼠的学习记忆能力进行检测，以其测试时达到连续lO次中9次正确反应所需的电击次数表示。并计数海马CA1区正常神经元。结果：实验选用纯种健康雄性SD大鼠54只，全部进入结果分析。①全脑缺血再灌注后不同时间点各组脑海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶的表达：假手术组海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶呈阴性表达。缺血对照组于缺血再灌注1d海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达阴性；3，5d时均呈阳性表达。而胰岛素治疗组于缺血再灌注1，3，5d海马CA1区神经元酪氨酸羟化酶和多巴胺-β-羟化酶表达均呈阴性。②全脑缺血再灌注8周后各组大鼠学习记忆能力的变化：胰岛素治疗组记忆力损害较轻，达到9／10正确反应所需电击次数明显少于缺血对照组（9．43&;#177;1.8），（18．6&;#177;2．7）次，P〈0.01]。③全脑缺血再灌注8周后各组大鼠脑海马CA1区正常神经元计数结果：假手术组神经元形态正常，细胞核无固缩或溶解，正常神经元计数为（174.6&;#177;10．7）个／mm。缺血对照组神经元大部分死亡，正常神经元计数为（10．6&;#177;0．6）个／mm。胰岛素治疗组可见部分神经元死亡，死亡神经元胞体缩小或脱失，正常神经元计数为（113．4&;#177;9．1）个／mm，明显高于缺血对照组（P〈0，01）。结论：胰岛素可通过调节儿茶酚胺合成与分解酶系的活性及含量来影响脑组织中单胺类神经递质的成分，纠正其代谢紊乱，减少神经元的凋亡，减轻脑缺血造成的学习记忆能力损害，从而发挥中枢的直接保护作用。     

前脑缺血再灌注海马CA1区神经元死亡与一氧化氮的关系

目的：深入研究一氧化氮在迟发性神经元死亡的发生中的作用。方法：四血管闭塞复制大鼠前脑缺血／再灌注模型，观察不同类型一氧化氮合酶(nitrie-oxide synthase，NOS)抑制剂治疗组及对照组海马CA1区一氧化氮浓度及CA1区锥体细胞密度的变化。结果：缺血／再灌注后6h海马CA1区一氧化氮浓度[(3．83&;#177;0．90)μmol／L]即开始升高[缺血前为（0．93&;#177;0．08)μmol／L]，至3d达到高峰[(8．99&;#177;0．90)μmol／L]；左旋硝基精氨酸甲脂(L-NAME)能降低各时相点的一氧化氮水平，氨基胍能降低再灌注后6—24h的一氧化氮水平；但两种NOS抑制剂均不能防止再灌注后3d发生的迟发性神经元死亡，其中L-NAME加重了神经元的损害，而氨基胍可明显地减轻神经元损害，有神经保护作用。结论：前脑缺血海马CA1区的迟发性神经元死亡与缺血／再灌注后的一氧化氮水平增高有关，特别是选择性诱导性NOS的作用可能更为重要。