GDNF cDNA在神经及非神经细胞系中的表达

目的：研究重组GDNFcDNA在神经及非神经细胞系中的表达。方法：重组克隆，基因转染及RT－PCR。结果：CV1及SH－SY-5Y细胞中无GDNF内源性表达，转基因后出现GDNF表达条带。NG108－15细胞有GDNF的内源性表达，转基因后表达条带增强。结论：重组GDNFcDNA在神经及非神经细胞系中均有较强表达，提示以此制备的工程细胞在Parkinson’s病基因治疗中可能具有重要作用。     

PDGF—B基因的膜型表达产物促进血管平滑肌细胞增殖和胶原合成

考察ＰＤＧＦ－Ｂ基因的膜型表达产物对血管平滑肌细胞（ＶＳＭＣｓ）增生、胶原合成的影响。制备供转导人ＰＤＧＦ－Ｂ基因的重组逆转录病毒，感染ＮＩＨ３Ｔ３细胞，受染ＮＩＨ３Ｔ３细胞经筛选、扩增后，制备细胞膜上表达产物ＰＤＧＦ－ＢＢ以观察其对ＶＳＭＣｓ生长的影响，并以３Ｈ－ＰｒｏＬｉｎｅ掺入率评估该重组蛋白对ＶＳＭＣｓ胶原合成的影响。结果：重组逆转录病毒介导ＰＤＧＦ－Ｂ基因转移并表达出具有生物学活性的重组ＰＤＧＦ－ＢＢ，免疫荧光细胞化学染色证实其表达；该膜型重组蛋白可促进ＶＳＭＣｓ增殖和胶原合成。     

rhG-CSF cDNA高表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

目的：构建一个能在哺乳动物细胞中高表达人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ的重组质粒。方法：利用化学合成引物，进行ＰＣＲ，对人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ５＇ＡＵＧ侧翼序列进行翻译优化突变。测序确证后，重组入表达载体ｐＥＤ，构建成质粒ｐＥＤ－ＧＣＳＦ，用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，ＥＬＩＳＡ法定量测定ｒｈＧ－ＣＳＦ表达水平。结果：转染ＣＯＳ７细胞后４８ｈ收集的上清ｒｈＧ－ＣＳＦ表达量为５２ｎｇ／ｍｌ，７２ｈ为２３０ｎｇ／ｍｌ，显示ｒｈＧ－ＣＳＦ获得了暂时性高表达。结论：ｐＥＤ－ＧＣＳＦ是一个能在哺乳动物细胞中高效表达ｒｈＧ－ＣＳＦ的真核表达质粒。     

RT—PCR方法检测非神经元,类神经元,神经元细胞系中淀粉样前 …

目的与方法 根据人淀粉样前体蛋白（ａｍｙｏｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ,ＡＰＰ）基因ｃＤＮＡ序列设计的引物,提取总ＲＮＡ,利用ＲＴ－ＰＣＲ方法检测非神经,类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达。结果 利用专门设计的引物不能检测野生型ＣＯＳ－７细胞中,ＡＰＰ基因的表达,但可以检测转染人ＡＰＰ基因的非神经元类ＣＯＳ－７细胞类神经元的野生型ＰＣ１２及人神经母细胞瘤细胞,ＳＨ－ＳＹ５Ｙ细胞中ＡＰＰ     

rhG—CSF cDNA表达质粒的构建及其在COS7细胞中的表达

目的：构建一个能在哺乳动物细胞中高表达人粒细胞集落刺激因子（Ｇ－ＣＳＦ）ｃＤＮＡ的重组质粒。方法：利用化学合成引物，进行ＰＣＲ，对人Ｇ－ＣＳＦｃＤＮＡ５ＡＵＧ侧翼序列进行翻译优化突变。测序确证后，重组人表达载体ｐＥＤ，构建成质粒ＰＥＤ－ＧＣＳＦ，用ＤＥＡＥ－Ｄｅｘｔｒａｎ法转染ＣＯＳ７细胞，ＥＬＩＳＡ法定量测定ｒｈＧ－ＣＳＦ表达水平。结果：转染ＣＯＳ７细胞后４８ｈ收集的上清ｒｈＧ－ＣＳＦ表达量为５     

人及大鼠胶质细胞源性神经营养因子cDNA的克隆与表达

目的：克隆与表达人及大鼠胶质细胞源性神经营养因子ｃＤＮＡ。方法和结果：用逆转录－聚酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）扩增了人及大鼠ＧＤＮＦ成熟序列的ｃＤＮＡ片段，并将人及大鼠ＧＤＮＦ ｃＤＮＡ重组到表达质粒ｐＢＰＬ中，分别在大肠杆菌中获得了较高表达。结论：人及大鼠ＧＤＮＦ ｃＤＮＡ的克隆与表达获得成功，为研究ＧＤＮＦ在神经损伤修复中的作用奠定了基础。     

转hGM－CSF基因人膀胱癌细胞株的建立及其生物学特性

采用逆转录病毒载体将ｈＧＭ－ＣＳＦ基因导入人膀胱癌细胞株ＢＩＵ－８７细胞中，建立转基因细胞株ＢＩＵ／ＧＭ。经ＰＣＲ－ＳｏｕｔｈｅｒｎＢｌｏｔ杂交证实ＧＭ－ＣＳＦ基因已整合到ＢＩＵ／ＧＭ细胞基因组中。经流式细胞仪细胞ＤＮＡ周期分析表明，转基因前后ＢＩＵ－８７细胞增殖状态无变化。免疫荧光检测发现ＧＭ－ＣＳＦ基因导入及表达不能促进ＢＩＵ－８７细胞表面ＨＬＡ－ＡＢＣ、ＤＲ、ＤＱ抗原的表达。转基因细胞经６０Ｇｙ／ｓＸ线灭活后，丧失增殖能力，但能维持一定水平的ＧＭ－ＣＳＦ分泌活性达２周。本文为进行转基因瘤苗的深入研究奠定了初步基础。     

重组丙型肝炎病毒基因载体的构建与表达

应用基因重组技术。从载体ＣＤＺ２酶切获得１．７３ｋｂＤＮＡ片段（含１６ｄ９３ｂｐ的ＨＣＶ结构区ｃＤＮＡ，其特异性已为ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ证实）。将ＨＣＶｃＵＮＡ片段插入载体ｐｃＤＮＡ３，构建ＨＣＶ重组体。经在大肠杆菌中表达，筛选、酶切分析，获得重组ＨＣＶ（ＰｃＤＮＡ３－ＨＣＶ）。以重组质粒转染Ｈ９细胞（ＣＤ淋巴细胞系），用Ｇ４１８筛选出抗性细胞。经ＲＴ－ＰＣＲ、ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ验证表明，ｐｃＤＮＡ３－ＨＣＶ能在Ｈ９细胞中进行复制、转录和表达。这为丙型肝炎发病机理的研究提供了一个有用模型。     

γ—干扰素原核高效表达体系的建立

用基因重组的方法,将γ－ＩＦＮｃＤＮＡ 片段用ＥｃｏＲＩ单酶插入到原核表达载体ｐＢＶ２２０ 中,筛选得到带有正向串联了２个γＩＦＮｃＤＮＡ 片段的阳性重组质粒,转化大肠杆菌ＤＨ５α后,建立了γ－ ＩＦＮ 的原核表达体系。经温度诱导培养,ＳＤＳ－ＰＡＧＥ、Ｗｅｓｔｅｒｎ－ ｂｌｏｔ、ＳＤＳ－ ＰＡＧＥ 光密度扫描检测证实：该体系可高效表达γ－ ＩＦＮ 蛋白,表达量占菌体可溶性蛋白的４０ ％以上。病变抑制法测活表明：表达产物具有γ－ ＩＦＮ 的抗病毒活性。这一体系的建立为大规模发酵生产γ－ ＩＦＮ 提供了可靠的工程菌株,为进一步研究其分离纯化工艺提供了重要的实验模型。     

粒—巨噬细胞集落刺激因子cDNA在造血祖细胞中的表达

目的；探讨逆转录病毒介导的ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ在造血母细胞中转移与表达。方法：采用电穿孔法将小鼠ＧＭ－ＣＳＦｃＤＮＡ重组逆转录病毒ｐＬＸＳＮ／ＧＭ和空载体ｐＬＸＳＮ转染病毒包装细胞ＰＡ３１７，再将含有ＧＭ－ＣＳＦ重组逆转录病毒的细胞培养上清液感染富含造血干祖细胞群体，采用ＰＣＲ和Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ分析培养细胞基因组中外源基因的整合，用Ｄｅｘｔｅｒ培养体系检测培养３周的各组细胞增殖数，结果：在     

RT-PCR方法检测非神经元、类神经元、神经元细胞系中淀粉样前体蛋白基因表达

目的与方法：根据人淀粉样前体蛋白（ａｍｙｌｏｉｄｐｒｅｃｕｒｓｏｒｐｒｏｔｅｉｎ，ＡＰＰ）基因ｃＤＮＡ序列设计的引物，提取总ＲＮＡ，利用ＲＴＰＣＲ方法检测非神经、类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达。结果：利用专门设计的引物不能检测野生型ＣＯＳ７细胞中ＡＰＰ基因的表达，但可以检测转染人ＡＰＰ基因的非神经元类ＣＯＳ７细胞，类神经元的野生型ＰＣ１２及人神经母细胞瘤细胞ＳＨＳＹ５Ｙ细胞中ＡＰＰ基因的表达。结论：利用特异设计的人ＡＰＰ基因引物及ＲＴＰＣＲ方法可以检测类神经及神经细胞系ＡＰＰ基因的表达     

EFFECTS OF GYPENOSIDES ON CELLULAR IMMUNITY OF γ-RAY-IRRADIATED MICE

ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＧＹＰＥＮＯＳＩＤＥＳＯＮＣＥＬＬＵＬＡＲＩＭＭＵＮＩＴＹＯＦγ┐ＲＡＹ┐ＩＲＲＡＤＩＡＴＥＤＭＩＣＥＤｏｕ－ＭｏｎｇＨａｕ郝道猛，ＹｕａｎＦｅｎｇ袁烽，Ｗａｎｇ－ＣｈｉＣｈｅｎ陈望吉，Ｉ－ＨｓｉｎＬｉｎ林宜信Ｋｕｎｇ－ＴｕｎｇＣｈ...     

逆转录病毒介导的TNFa基因在胶质瘤细胞系（C6）中的表达及对肿瘤细胞恶性生长的影响

利用逆转录病毒载体ＬＸＳＮ构建了含有完整编码ＴＮＦｃＤＮＡ的重组逆转录病毒质粒ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ，用Ｌｉｐｏｆｅｃｔａｍｉｎｅ将重组质粒导入病毒包装细胞ｐＡ３１７，经Ｇ４１８筛选培养获得抗性克隆，用ＮＩＨ３Ｔ３细胞测定病毒滴度，获得滴度为５×１０５ＣＦＵ／ｍｌ的细胞克隆。利用病毒上清液感染大鼠胶质瘤细胞系Ｃ６，得到Ｇ４１８抗性克隆细胞Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ，经ＰＣＲ检测，ＴＮＦｃＤＮＡ完整地整合在细胞基因组中。测定Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ细胞上清中ＴＮＦ的生物活性，结果显示ＴＮＦ有相对稳定的表达（４８～１８０Ｕ／ｍｌ１０６ｃｅｌｌｓ／２４ｈ）。实验还显示经ＴＮＦ基因转导的Ｃ６ｐＬＸＳＮ－ｔｎｆ细胞生长速度较之亲本肿瘤细胞Ｃ６明显下降，基因修饰后的肿瘤细胞在Ｗｉｓｔａｒ大鼠体内形成肿瘤的能力明显受到抑制。进一步用超离心法浓缩病毒对胶质瘤移植模型进行了体内治疗研究。     

反义N—ras1DNA片段部分抑制人膀胱癌BIU—87细胞VEGF基因的表达

本文报道将载有反义人Ｎ－ｒａｓｌ（ｅｘｏｎｌ）ＤＮＡ片段的重组表达质粒ｆＰＧＶ１－ＭＴ－Ｎｒａｓｌ（Ａ）导入人膀胱移行细胞癌ＢＩＵ－８７细胞系，可以部分抑制ＢＩＵ－８７细胞中ＶＥＧＦｍＲ－ＮＡ的表达。提示ＶＥＧＦ基因的表达可受到反义Ｎ－ｒａｓ１ＤＮＡ片段的调控。本研究不仅增加了从分子水平对ＢＩＵ－８７细胞的认识，有助于进一步确定该细胞的生物学特征，还为以后具有Ｎ－ｒａｓ癌基因及ＶＥＧＦ基因表达的膀胱癌进行反义癌基因治疗提供一定的理论和实验依据。     

Detection and Significance of HCV RNA in Saliva，Seminal Fluid or Vaginal Discharge of Patients with Hepatitis C

ＤｅｔｅｃｔｉｏｎａｎｄＳｉｇｎｉｆｉｃａｎｃｅｏｆＨＣＶＲＮＡｉｎＳａｌｉｖａ，ＳｅｍｉｎａｌＦｌｕｉｄｏｒＶａｇｉｎａｌＤｉｓｃｈａｒｇｅｏｆＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＨｅｐａｔｉｔｉｓＣＴＡＮＧＺｈｅｎｙａ；ＹＡＮＧＤｏｎｇｌｉａｎｇ；ＨＡＯＬｉ...     

人干细胞因子在大肠杆菌中的表达研究

目的 经过改造重组人干细胞因子（ｈｕｍａｎ ｓｔｅｍ ｃｅｌｌ ｆａｃｔｏｒ,ｈＳＣＦ）,提高其表达量。方法 应用人工合成寡核苷酸引物及ＰＣＲ技术,改变人工干细胞因子ｈＳＣＦ ｃＤＮＡ起始密码子ＡＴＧ与ＳＤ序列之间的距离及在翻译起始区（即Ｎ端氨基酸）部分采用大肠杆菌（Ｅ．ｃｏｌｉ）喜用型密码子的策略,使重组表达质粒ｐＢＶ２２０－ｈＳＣＦ在Ｅ．ｃｏｌｉ中获得高效稳定表达。结果 ＤＮＡ序列测量证明基因     

Clinical Study on Jiang Tang San（降糖散）in Treating Non－Insulin Dependent Diabetes Mellitus Patiente

ＣｌｉｎｉｃａｌＳｔｕｄｙｏｎＪｉａｎｇＴａｎｇＳａｎ（降糖散）ｉｎＴｒｅａｔｉｎｇＮｏｎ－ＩｎｓｕｌｉｎＤｅｐｅｎｄｅｎｔＤｉａｂｅｔｅｓＭｅｌｌｉｔｕｓＰａｔｉｅｎｔｅＮＩＹａｎ－ｘｉａ（倪艳霞）；ＹＡＮＧＪｕｎ（杨军）；ＦＡＮＳｏｎｇ（樊嵩）ａ...     

Study of HCV Infection and Viremia in Patients with Posttransfusion Hepatitis in China

ＳｔｕｄｙｏｆＨＣＶＩｎｆｅｃｔｉｏｎａｎｄＶｉｒｅｍｉａｉｎＰａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＰｏｓｔｔｒａｎｓｆｕｓｉｏｎＨｅｐａｔｉｔｉｓｉｎＣｈｉｎａＴＡＮＧＺｈｅｎ－ｙａ；ＹＡＮＧＤｏｎｇ－ｌｉａｎｇ；ＹＵＺｈｉ－ｑｕｎ；ＨＡＯＬｉａｎ－ｊｉｅ（Ｃｌ...     

EFFECT OF HYPOXIA ON DNA SYNTHESIS AND C－MYC GENE EXPRESSION OF PULMONARY ARTERY SMOOTH MUSCLE CELLS

ＥＦＦＥＣＴＯＦＨＹＰＯＸＩＡＯＮＤＮＡＳＹＮＴＨＥＳＩＳＡＮＤＣ－ＭＹＣＧＥＮＥＥＸＰＲＥＳＳＩＯＮＯＦＰＵＬＭＯＮＡＲＹＡＲＴＥＲＹＳＭＯＯＴＨＭＵＳＣＬＥＣＥＬＬＳＬｕｏＬａｎ（罗兰）；ＬｉＳｈｉｑｉａｎｇ（李世强）ａｎｄＣａｉＹｉｎｇｎｉａｎ...     

EFFECTS OF GLYCYRRHIZAE AND GLYCYRRHIZICACID ON CELLULAR IMMUNOCOMPETENCE OF γ-RAY-IRRADIATED MICE

ＥＦＦＥＣＴＳＯＦＧＬＹＣＹＲＲＨＩＺＡＥＡＮＤＧＬＹＣＹＲＲＨＩＺＩＣＡＣＩＤＯＮＣＥＬＬＵＬＡＲＩＭＭＵＮＯＣＯＭＰＥＴＥＮＣＥＯＦγ－ＲＡＹ－ＩＲＲＡＤＩＡＴＥＤＭＩＣＥＩ－ＨｓｉｎＬｉｎ林宜信，Ｄｏｕ－ＭｏｎｇＨａｕ郝道猛，Ｗａｎｇ－ＣｈｉＣ...